评估急性肾损伤等级的方法和试剂的制作方法

评估急性肾损伤等级的方法和试剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供诊断和预后哪些表现正常水平的尿钠肽的主体是否具有心衰和肾衰。本发明也提供一种评估具有AKI的主体是否敏感为AKI阶段的方法。本发明也提供一种评估具有CKD的主体是否敏感为CKD阶段的方法.?本发明部分涉及到：基于，至少部分基于从主体中体液样本中的WAP4C的测定结果来评估心衰和或肾衰和或危险的结果（例如心或肾功能的恶化或者死亡的危险）。
【专利说明】评估急性肾损伤等级的方法和试剂
[0001]本申请要求了申请号为61/504，844，2011年7月6日申请的美国临时专利申请的优先权，其完整的内容作为参考被包含在本申请中。
【技术领域】
[0002]本发明涉及与心脏衰竭和或肾衰竭有关的检测方法、检测组分、诊断试剂盒、预后和监测。本方法也涉及一种方法、组分，和试剂用于评估具有急性肾损伤(AKI)的主体具有容易发展为更恶化级别AKI的可能性。
【背景技术】
[0003]接下去讨论的本发明的背景仅仅用来帮助读者理解，而不是本发明的描述或组成本发明的现有技术。
[0004]心力衰竭
[0005]充血性心力衰竭(CHF)是一种致命的疾病，它具有5年死亡率，是死亡率最高的恶性疾病。例如，在心脏研究的危险评分中，心力衰竭发作后的生存中值是，男人1.7年，女人
3.2年。总的来说，第一年和第5年的存活率分别是男人57%和25%，女人64%和38%。此外，40岁或更大年纪的人在1/5的生命时间内有机会患上充血性心力衰竭。心力衰竭典型的发生在其他损失心脏的情况发生后。冠状动脉疾病、特别是心肌梗死是最普遍的心脏疾病，也最常见的引起心力衰竭的疾病。
[0006]对患有心力衰竭病人的适当的治疗方式是多种多样的。如:利尿剂常用来监视心力衰竭增加的流体负载特性；血管紧张肽转化酶(ACE)抑制剂是一类血管扩张药用来降低血压，促进血液流动和减少心脏工作负荷；血管紧张素II受体阻断剂(ARBs)与ACE抑制剂一样有很多相同的作用；β阻断剂可以减少心力衰竭症状并改善心脏功能。
[0007]近些年，利尿钠肽测定已经戏剧性的改变了心脏疾病的诊断和管理方式，包括心力衰竭和急性冠状动脉综合症。特别是B型钠尿肽(ΒΝΡ，人类前体Swiss-Prot P16S60)，各种起源于共同前体ProBNP (如NT-ProBNP)相关多肽，和ProBNP本身已经被用于诊断心力衰竭，确诊严重程度，预测病情。另外，BNP和它的相关多肽也被用来展示对不稳定型心绞痛、非ST升高的心肌梗死和ST-升高的心肌梗死的诊断和预测。
[0008]BNP和它的相关多肽也被用于其他心脏状态的检测，如纽约心脏协会。然而很多具有慢性稳定无症状心力衰竭病人的钠尿肽水平会在正常诊断范围内(如BNP水平少于约100pg/mL ；NT-proBNP水平少于约400pg/mL)。对这些标记有一个权衡选择诊断临界水平，因为降低临界值虽然减少了假阴性率(如，增加敏感性和减少漏诊率)但却增加了假阳性率(如减少特异性和增加误诊率)。
[0009]肾衰竭和肾病
[0010]肾脏的衰竭或肾衰(有时被称为肾功能不全)指一种医学上的身体状态的描述，在此状态下，肾脏不能有效地过滤来自血液的毒素和废物。肾衰竭分为急性(急性肾损伤)和慢性(慢性肾病)两种；很多其他疾病或健 康问题可以引起2种肾衰竭中的任意一种发生。[0011]肾衰竭被描述为肾小球滤过率减少。从生物化学角度，肾衰竭通常可以通过血清肌酐水平的升高来进行检测。在肾功能不全经常遇到的问题包括不正常的体液水平，失调的酸水平，非正常钾、钙、磷酸盐，和(长期)的贫血，也包括骨折的延期愈合。不同情况下，可以会发生血尿(血液流失在尿里)和蛋白尿(蛋白流失在尿里)。长期肾问题会对其他疾病发生严重的影响，如心血管疾病。
[0012]最近，慢性肾衰竭(CKD)已经被认为是一种美国重要公共健康问题。直到过去几年，肾衰竭，渐进式发展为肾脏疾病的晚期，已经成为CKD的最明显的结果。美国肾脏数据服务(USRDS)对进行透析和移植的肾病晚期，又称为肾病晚期(ESRD)的肾衰竭病人持续统计分析。结果显示，自1990年开始，在美国ESRD的发病率已经翻了一倍。虽然以较低的速度发展，但是这一趋势很可能继续下去。更早阶段的慢性肾衰竭(CKD)的发生率被推断出来。基于第三次全国健康和营养调查(NHANES III)的数据，在美国有8，000，000人的肾功能显著下降，他们被估计肾小球滤过率(GFR)小于60毫升/分钟/1.73平方米。
[0013]更多有肾损伤临床表现(特别是蛋白尿)的人没有明显的肾功能下降。按照目前每年100，000个E新SRD病例的发病率，显然大多数有CKD的病人没有发展成为ESRD，但很多却变成心血管病人，这也是哪些处于晚期肾病(ESRD)患者持续透析后死亡的主要原因。
[0014]目前还没有治愈慢性肾病的方法。治疗的目标是:减缓疾病的进展；治疗潜在的诱因和诱发因素，治疗疾病的并发症，并进行肾脏的移植能。减缓慢性肾病的进展和诱因的策略包括:控制血糖，高血压控制，和饮食。
[0015]在肾脏病终末晚期，肾功能只能靠透析或肾移植来替代，透析和移植计划，通常开始于慢性肾脏病的第4阶段。大多数患者都是采用血液透析和腹膜透析。
[0016]最近，基于估计的肾小球滤过率以及尿蛋白与肌酸酐的比率，并结合慢性肾病标记物肌酸酐与具有生物标志物半胱氨酸蛋白酶抑制剂C相结合，用来提供末晚期肾病和其他全因死亡的预测预报。
[0017]目前，基于被估算的肾小球滤过率(eGFR)或尿白蛋白与肌酐的比率(ACR)上的肌酸酐，慢性肾病(CKD)被定义为5个独立阶段。尽管因为这几个因素，血清肌酐可能会对个体产生误判，但是临床检验会定期报告估计的GFR值和电子病案也会单独提醒临床医生在估计的GFR中的CKD的存在。因为，常规的ACR的评估只是对糖尿病的人采用，在常规的操作规程中，初步的CKD的检测也局限于对血清肌酸酐的测试。作为肾功能的标记物质的血清中半胱氨酸蛋白酶抑制剂C (cystatin C)也不是临床实践中常规使用的标记物质。
[0018]根据肾脏词义上理解的作用和表观功能，CKD被CKD执行委员会定义为几个阶段(见《美国肾病杂志》39 (2)增刊1 (2 月)2002，S17-S31)(见=American Journal of KidneyDiseases, Vol39, No2, Suppll (February) 2002，ppS17_S31)。其全部内容作为本发明的参考。
[0019]一些
【发明者】已经识别了一些标记物质，这些标记物质可以被用来对患有或被怀疑可能患有心脏和/或肾衰竭病人的进行诊断和风险分级；进一步对被诊断为CKD的病人进行CKD恶化等级的风险评估。

【发明内容】

[0020]本发明包括对患有或估计可能正在发展为心脏和/或肾衰竭的主体提供诊断、预后和治疗方案确定的方法、提供诊断、预后和治疗方案确的检测组分和试剂盒。在另一方面，本发明提供评估心脏衰弱和/或肾衰竭恶化风险等级的方法；评估与心脏和/或肾衰竭情况下再次住院的风险的方法；评估与心脏和/或肾衰竭的情况下死亡率的风险的方法，监控心脏和/或肾衰竭的方法；和适用于这些方法的各种装置和试剂盒。
[0021 ] 在第一个具体的实施例中，本发明包括对主体风险分级的方法(如评估出一个风险结果)。这些方法包括进行从主体获得的体液样品中的WAP四二硫化物核心域蛋白2 (又称为“WAP4C”和” HE4”；人类前体Swiss-Prot entry Q14508)的测试分析，然后提供一种或多种检测结果；基于获得的检测结果获得一个风险结果。
[0022]在某个实施例中，每一个检测结果与相应的基线水平进行比较(例如，一个诊断的或预后的“临界值”)，基线水平被作为得出“阳性”或“阴性”结果的水平。本领域的熟练技术人员可以使用各种方法获得期望的基线水平值。在进一步的优选的实施例中，基线检测结果是可以从同一个主体更早的检测结果中获得。也就是说，即经过一段时间，生物标记浓度会改变，和，浓度的增加表示主体心脏和/或肾衰竭的发作或恶化的开始。
[0023]在可选择的实施例中，基线检测结果是从很多主体人群中测定获得的。在使用本发明标记物质作为诊断的情况下，这些人群可以包括许多患有心脏和/或肾衰竭的主体，和许多不患有心脏和/或肾衰竭的主体；在利用标记进行预后测试的时候，这些人群可能包含患有很多结果(如心脏和/或肾死亡；心脏和/或肾衰竭恶化；心脏和/或肾衰竭改善等结果)的主体，但是有些主体却没有这些结果。如下面所述，被选定的临界值是一个特异性和灵敏性的可接受值，相对于没有表现出这些属性的“第二”类亚群，用这个值可以把人群区分为展现具有特定属性的“第一”类亚群(如心脏和/或肾衰竭恶化风险增加)。正如下的描述，通过一次或多次精度测试，一个优选的临界值能够区分出第一和第二亚群:
[0024]让步比(odds ratio)至少约2或更大,或约0.5或更小，更优选的至少约3或更大，或约0.33或更小，更优选的，至少约4或更大，或约0.25或更小，甚至更优选的至少约5或更大或约0.2或更小，最优选`的至少约10或更大，或约0.1或更小；
[0025]至少75%的敏感性，并结合至少75%的特异性；
[0026]ROC曲线面积至少是0.6，更优选的是0.7，还更优选的是至少0.8，甚至更优选的是至少0.9，最优选的至少是0，95，和/或，
[0027]阳性似然比(likelihood ratio)(计算方式为:灵敏度/ (1-特异性))至少为5,更优选的至少为10，并且最优选的至少为20，或阴性似然比(计算方式为(1-灵敏度)/特异性)小于或等于0.3，更优选小于或等于0.2，最优选的小于或等于0.1。术语“大约”一词在此上下文中是指给定测量的正负5%。
[0028]当前所述的风险分级方法更优选的是评估心脏衰竭和/或肾衰竭或心血管死亡率的“近期”风险。“近期”指30天内。下面所描述的方法更优选的是设定7天内的风险，更优选的是在5天内，甚至更优选的是在3天内。
[0029]优选的检测方法包括用来检测靶生物标记的免疫测定。在检测过程中使用的抗体可以特异结合靶标记物，如下面所述的与相关的标记物有关，抗体可以随意的结合一个或多个与标记物“相关”的多肽。本领域里的一般技术人员知晓，虽然并不要求用固相形式来进行检测，但是免疫测定可以包括让体液样品与包含抗体的固相接触用来检测靶标记物，和，检测与抗体的结合。虽然本发明是在免疫测定方面进行了一般性地描述，但是不是基于免疫结合的方式的其它结合方式(例如，核苷酸适配体)也可以用来代替抗体结合方式进行检测。优选地，所述体液样品从尿，血液，血清和血浆组合中进行选择。
[0030]这里所述的，在单独使用WAP四硫化物核心域蛋白2的时候，不是有意限制预后评估必须唯一根据WAP四硫化物核心域蛋白2的检测结果来进行。相反，本领域技术人员将会理解，诊断，预后，监控等等也会考虑是很多其他的临床变量，可如下文所述，如果在诊断过程中检测结果被认为是变化的；即，这些测定结果被用于评估受试主体具有增加或减少患有心脏和/或肾衰竭的概率。如下文的详细描述，组合检测各种标记(均包括源于主体和物理特性)的测定方法，包括:检测各种利尿钠肽如B N F，NT-proBNP，和proBNP ;炎症相关的标记物，如髓过氧化物酶，可溶性FLT-1，C-反应蛋白和胎盘生长因子；相关的心肌损伤标记，如心脏肌钙蛋白和CK-MB ;肾损伤标记，如血清肌酸酐，肌酸酐清除率，胱抑素C，和肾小球滤过率；和其他变量，如尿输出水平，年龄，存在或不存在各种心血管疾病的危险因素，如糖尿病，高血压，体重，吸烟状况，等等。
[0031]在另一个实施例中，本发明包括用于监测心脏和/或肾脏疾病的方法，特别是针对一个患有心脏和/或肾功能的衰竭的患者。这些方法包括用于检测从受试者获得的连续采集的体液样品中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的测试，从而提供了多个测定结果。如果这些一个或多个检测结果随着时间的增加而增加，患者可能会被评估为心脏和/或肾脏疾病状态的恶化。可选择的，如果这些一个或多个测定结果是随时间下降，患者可能会被评估为心脏和/或肾脏疾病状态的改善。
[0032]在一些实施例中，在检测装置中提供执行该检测的试剂，该检测装置也被包括在一个试剂盒中。优选的试剂包括一种或多种固相的抗体，该固相抗体包括检测被捕获到固体支撑物上的靶标记物质的抗体。在三联体免疫检测中，该试剂可以包括一种或多种可检测的带有标记的抗体，可检测的带有标记的抗体包括一抗体，该抗体可以检测结合到可被检测标记物上的靶标记物质。在检测装置中提供的其他可选元素如下文所述。
[0033]在其他一些实施例`中，本发明包括评估主体肾功能的方法，该方法包括检测从主体中获得体液样品中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2，然后提供一个检测结果；让检测结果与主体或患者的肾功能相关联。
[0034]在另一个实施例中，本发明包括对怀疑具有肾损伤的主体进行肾功能评估的方法；包括:从所述的主体中获得的生物样品中进行检测WAP四二硫化物核心域的蛋白2的数量；和让WAP四二硫化物核心域的蛋白2的数量与主体的肾功能相关联。
[0035]在一些实施例中，相关的或相关联的步骤包括确定WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度和让所述浓度与主体的急性肾损伤的出现或不出现相关联。在实施例中，相关联的步骤包括当WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度大于WAP四二硫化物核心域的蛋白2的预设值或临界值时，给出主体会发生急性肾损伤的结果，或，当WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度小于WAP四二硫化物核心域的蛋白2的预设基线时，给出主体没有发生急性肾损伤的结果。在其他实施例中，预设的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的基线浓度是通过一个检测方法来决定的，这个检测方法就是检测从上述患者中获得液体样品中WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度，但是基线检测结果所使用的体液样品要比提供检测结果的液体样品采集时间要更早。在一些实施例中，预设的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的基线浓度是从患有急性肾损伤的第一主体人群和不患有急性肾损伤的第二主体人群中获得的。[0036]在一些实施例中，使用至少为2或更多，或，0.5或更少的让步比，预设的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的基线浓度能把第一人群从第二人群中区分出来。
[0037]在一些实施例中，使用至少为3或更多，或0.33或更少的让步比，预设的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的基线浓度能把第一人群从第二人群中区分出来。
[0038]在一些实施例中，使用至少为70%的特异性，预设的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的基线浓度能把第一人群从第二人群中区分出来。
[0039]在一些实施例中，使用至少为70%的灵敏度，预设的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的基线浓度能把第一人群从第二人群中区分出来。
[0040]在一些实施例中，体液样品选自尿液、血液、血清和血浆。
[0041]在某些实施方案中，WAP四二硫化物核心域的蛋白2极限值浓度为约15钠克/毫升至约25钠克/毫升之间。在其它实施例中，WAP四二硫化物核心域的蛋白2极限的浓度为约20.2钠克/毫升。
[0042]在某些实施方案中，WAP四二硫化物核心域的蛋白2极限值浓度通过测定生物样品中的蛋白浓度来进行测定的。在某些【具体实施方式】中，蛋白的水平通过ELISA的方法进行测定。
[0043]在某些实施方案中，WAP四二硫化物核心域的蛋白2极限值浓度通过测定生物样品中的编码WAP四二硫化物核心域的蛋白的mRNA来进行测定的。在某些【具体实施方式】中，mRNA的水平通过RT-PCR的方法进行测定。
[0044]在另外的一些实施方式中，本发明提供评估主体肾功能的方法，该方法包括:`[0045]a.从主体上获得生物样本；
[0046]b.测定生物样本中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度；
[0047]c.把测定的样本中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度与WAP四二硫化物核心域的蛋白2的极限浓度进行比较；
[0048]d.如果样本中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度在某种极限浓度范围内，则确定主体是否具有肾损伤的可能性。
[0049]在另外的一些实施方式中，本发明提供检测主体WAP四二硫化物核心域的蛋白2的极限值浓度的方法，该方法包括:
[0050]a.从主体上获得生物样本；
[0051]b.测定生物样本中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度；
[0052]c.把测定的样本中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度与WAP四二硫化物核心域的蛋白2的极限值浓度进行比较；
[0053]d.如果样本中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度在某种极
[0054]限浓度范围内，则确定主体是否具有肾损伤的可能性。
[0055]在一些实施例中，本方法进一步包括对上述患者测定BNP, NT-proBNP, proBNP,髓过氧物酶，可溶性FLT-1，C反应蛋白，心肌肌钙蛋白，NGAL，血清肌酸酐，肌酐清除率，半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，和肾小球滤过率组合中的一个或多个标记物质的变量。
[0056]在一些实施例中，本方法还进一步包括测定上述患者的尿排出量，年龄，存在或不存在糖尿病，和存在或不存在高血压中一个或多个附加的变量。
[0057]在某些实施方案中，急性肾损伤的标记物的浓度为约15钠克/毫升至约25钠克/毫升之间，或，约17钠克/毫升至约22钠克/毫升之间。在其它实施例中，急性肾损伤的标记物的浓度为约20.2钠克/毫升。
[0058]另一个方面，本发明包含一个试剂盒，该试剂盒中包含用于测试WAP四二硫化物核心域的蛋白2的试剂，和一个装置，该装置包括用于校正上述测试结果为WAP四二硫化物核心域的蛋白2浓度的编码的校正曲线，其中上述校正曲线的浓度范围包含正常的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度和用于诊断急性肾损伤的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的临界值浓度。
[0059]在另一些实施例中，本发明提供一种用来对患有CKD的主体评估达到CKD更高级别的可能性增加的方法，该方法包括:从上述主体获得体液样品；对上述样品进行一种或多种检测，测定与CKD等级有关的一个或多个生物标记，从而提供一个或多个检测结果；基于检测结果评估出上述主体具有CKD级别的增加或减少的可能性。
[0060]在一些实施例中，与⑶K级别有关的一个或多个生物标记物从下列组中进行选择，这些标记物质为 TNFRla, Troy, NT-proCNP, NGAL1621-99741, RAGE,半乳糖凝集素-3，WAP4C,血管生成素，ESAM,和PIGR。
[0061]在实施例中，评估步骤包括:把获得的每一检测结果与相应的临界水平比较；当检测结果大于临界水平时，相对于当检测结果小于临界水平时，被评估的风险性来讲，给出主体具有CDK级别增加的可能性，或者，当检测结果小于临界水平时，相对于当检测结果大于临界水平时候，被评估的风险性来讲，给出主体具有CDK级别降低的可能性。
[0062]在一些实施例中，临界值水平是从诊断患有⑶K和哪些怀疑可能达到⑶K更高级别的第一主体人群中获得，和，临界水平是被选择可以从未患有CDK的第二人群中区分出上述人群。
[0063]在实施例中，从所述的第二人群中区分出所述的第一人群的临近值的让步比值比至少为2或更多或0.5或更少。
[0064]在实施例中，从上述第二人群中区分出上述第一人群的临界值的让步比的比值比至少为3或更多或0.33或更少。
[0065]在实施例中，体液样品选自尿液、血液、血清和血浆组合。
[0066]在另一个实施例中，本发明提供一种评估以前就诊断出患有⑶K的主体具有⑶K等级增加的可能性的方法，该方法包括:对从上述主体中获得的体液样品进行一个或多个CDK等级相关的生物标记的检测，然后提供检测结果；让检测结果与主体可能的CDK等级相关联。
[0067]在实施例中，与CDK等级相关的一个或多个生物标记是选自TNFRla，Troy, NT-proCNP,NGAL1621-99741,RAGE,半乳糖凝集素_3，WAP4C，和血管生成素中的一种或几种。
[0068]在另外的一些 实施例中，相关联的步骤包括:测定一个或多个与CKD等级关联的生物标记浓度，和让上述浓度与主体的CKD等级的可能性相关联。
[0069]在实施例中，相关联步骤包括:当与CKD等级有关的一个或多个生物标记浓度大于预设置的CKD等级的生物标记基线值时，评估为CKD等级增加的可能性。
[0070]在实施例中，CKD等级有关的生物标记的基线值是采用从体液样品中检测一个或多个CKD等级有关的生物标记物质决定的，所述用于检测基线值的体液样品的采集时间比用于提供检测结果的体液样品采集时间要早。[0071]在一些实施例中，CKD等级的生物标记的预测基线值是由诊断出CKD的第一主体人群和未诊断出CKD的第二主体人群获得的。
[0072]在实施例中，体液样品选自尿液、血液、血清和血浆组合。
[0073]在实施例中，大于基线值2倍的CKD等级的生物标记水平表示CKD等级增加的可能性。
[0074]在实施例中，大于基线值4倍的CKD等级生物标记水平表示CKD等级增加。
[0075]在实施例中，从后来样品中获得的上述主体的CKD级别相关的生物标记水平比之前样品中的CKD生物标记水平的增加，说明CKD等级增加的可能性。
[0076]在另一个实施例中，本发明提供试剂盒，包括:用于测试与CKD等级相关的一个或多个生物标记物质水平的试剂，和一个装置，该装置包括用于校正上述测试结果为校正结果的编码的校正曲线，其中，上述校正曲线的浓度范围包含正常的与CKD等级相关的一个或多个生物标记物质的浓度和用于评估CKD等级增加的可能性的生物标记物的临界值浓度。
【专利附图】

【附图说明】
[0077]图1示例说明了一个Basel V AKI (连续性)的ROC (工作特征曲线)曲线，DOt=O:特异性和敏感性与入院(admission) [WAP4C]的比较，其中，ROC曲线的水平轴代表1_特异性(它的值随假阳性率而增加)，曲线的纵轴代表敏感性(值随真阳性率二增加)，ROC曲线下面的区域是一种概率性的测定，就是被测定的标记水平能够正确识别疾病或状态的概率性，根据此结果可以测定检测的效果。
[0078]详细描述`
[0079]本发明包括对患有肾衰竭的主体进行诊断、预后和确定治疗方案的方法和组分。
[0080]这里所述，本发明部分涉及，基于，至少部分基于，对采自主体的体液样本进行WAP四二硫化物核心域的蛋白2的检测结果来对主体设定或评估一种结果风险(如，肾功能恶化的风险，重住院的风险，和/或死亡的风险)
[0081]如果检测的样品是在t时间时从主体上获得的，术语“短期风险”指从t时间开始的7天(168小时)内的时间。这样，风险是指，从t时间开始到168小时结束的窗口时间内，主体将会遭受有一种或多种可测量的肾功能恶化，需要重新住院，或将死亡的可能性。可测量的心脏功能包括以下的一种或多种:呼吸困难(在休息或劳动)，端坐呼吸，肺水肿，血氧饱和度水平，头晕或晕厥，胸痛，收缩压，低灌注，水肿，补偿状态(即，从补偿到完全补偿，或反之亦然的变化)，倾向-舒张功能，最终收缩功能，心室充盈，流过的MIRAL阀，左室射血分数(LVEF)，压力测试，成像的研究成果，如心脏CT，超声，或MRI，纽约心脏协会或美国的结果心内科心脏衰竭的分类等。对这些特征和方法的评议是本领域所熟知的，例《哈里森的内科学》，第 16 版.麦格劳希尔集团，005，1361-1377 (Harrison’s Principles of InternalMedicine, 16th ed., McGraw-Hill, 2005, pages 1361-1377)，其被完整的列入参考文献中。本条例并不限于此。
[0082]更优选的，风险是指，从t时间开始的96小时窗口时间内，主体将会遭受有一种或多种可测量的肾功能恶化，需要重住院，或将死亡的可能。最优选的，风险是，从t时间开始的48到84小时内的窗口时间内，主体将会有遭受一种或多种可测量的肾功能恶化的可能性，或者将死亡的可能性。这里所说的术语“恶化”指，相对于同一主体相同参数以前的测量结果来讲，在之后时间里，该参数的变坏的改变，与“改善”的意思相反。例如，这里所述的“肾功能恶化”指主体从无症状到之后的变化。
[0083]这里所述的“标记物”和“生物标记物”指蛋白、多肽、糖蛋白、蛋白多糖、脂肪、脂蛋白、糖脂、磷脂，核酸，碳水化合物，等；或用来从主体上获得样本进行靶标筛查的小分子。本发明作为标记物的“蛋白或多肽”假设可以包括任何片段，特别，是免疫可检测的片段。标记物可以包括临床“指数”如，验前概率评估，肺动脉高压“丹尼尔”(Daniel)指数、NIH中风指数、Elebute和Stoner败血症指数(Elebue and Stoner)、杜克标准感染性心内膜炎、曼海姆腹膜炎指数、阿帕切指数等。
[0084]这里所用的术语“WAP四二硫化物核心域蛋白2”、“WAP4C”或“HE4”指来存在于生物样本中来自WAP四二硫化物核心域蛋白2前体的一种或多种多肽。WAP四二硫化物核心域蛋白2的人类前体(Swiss-Prot entry Q14508)具有下列序列(SEQ ID NO:1):
[0085]102030405060
[0086]PACRLGPLA AALLLSLLLF GFTLVSGTGA EKTGVCPELQ ADQNCTQECV SDSECADNLK
[0087]708090100110120
[0088]CCSAGCATFC SLPNDKEGSC PQVNINFPQL GLCRDQCQVD SQCPGQMKCC RNGCGKVSCV
[0089]以下的域被识别为WAP四二硫化物核心域的蛋白2:
[0090]残基长度域名(Domain ID)
[0091]1- 30 30信号序列
[0092]31 - 124 94WAP四二硫化物核心域蛋白2
[0093]来自WAP四二硫化物核心域蛋白2前体的下列的可选择形式如下:
[0094]
【权利要求】
1.评估怀疑具有肾损伤主体的肾脏功能的方法，该方法包括: 执行检测的方法，该方法包括对来自主体的体液样本中的WAP4C进行检测，从而提供一个分析结果； 把分析结果与主体的肾脏功能进行关联。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，关联步骤包括:检测WAP4C的浓度，和，把所述的浓度与主体发生或不发生急性肾损伤进行关联。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，关联步骤包括:当WAP4C的浓度大于预先设置的WAP4C的基线浓度的时候，就把主体评估为要发生急性肾损伤；或者当WAP4C的浓度小于预先设置的WAP4C的基线浓度的时候，就把主体评估为不发生急性肾损伤。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，预先设置的WAP4C的基线浓度是通过测定来自于主体的体液样本中的WAP4C浓度获得的,其中，所述的用来测定基线水平浓度的样本要早于提供分析结果所用的体液样本。
5.根据权利要求4所述的方法，其中，预先设置的WAP4C的基线浓度是从第一和第二人群的样本中获得的，其中，第一人群个人具有急性肾损伤；第二人群主体不具有急性肾损伤。
6.根据权利要求5所述的方法，其中，预先设置的WAP4C的基线浓度从第二人群中分离出的第一人群的让步比至少为2或更多，或者为0.5或者更少。
7.根据权利要求5所述的方法，其中，预先设置的WAP4C的基线浓度从第二人群中分离出的第一人群的让步比至少为3或更多，或者为0.33或者更少。
8.根据权利要求5所述的方法，其中，预先设置的WAP4C的基线浓度从第二人群中分离出的第一人群具有至少大约70%的特异性。`
9.根据权利要求5所述的方法，其中，预先设置的WAP4C的基线浓度从第二人群中分离出的第一人群具有至少大约70%的灵敏度。
10.根据权利要求1所述的方法,其中，体液样本选自如下组中的尿液、血液、血清和血浆。
11.根据权利要求1所述的方法，其中，该方法进一步包括: 测定主体中如下组中的一个或多个指标:BNP水平，NT-proBNP水平， proBNP水平；髓过氧物酶或绿过氧物酶水平，可溶性的FLT-1水平，C-反应蛋白水平；心脏肌钙蛋白水平，NGAL水平；血清肌氨酸酐水平，肌氨酸酐清除率，半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，和肾小球滤过率。
12.根据权利要求1所述的方法，其中，该方法进一步包括:测定所述主体中一个或多个如下变量:尿排出量，年龄，存在或不存在糖尿病，和存在或不存在高血压。
13.根据权利要求1所述的方法，其中，WAP4C的极限值浓度在大约15ng/mL至大约25ng/mL 之间。
14.根据权利要求1所述的方法，其中，WAP4C的极限值浓度在为大约20.2ng/mL。
15.根据权利要求1所述的方法，其中，WAP4C的极限值浓度通过测定生物样本中的蛋白水平来进行测定。
16.根据权利要求14所述的方法，其中，蛋白水平的测定通过ELISA来进行测定。
17.根据权利要求1所述的方法，其中，WAP4C的极限值浓度通过测定生物样本中的编码WAP4C的mRNA进行测定.
18.根据权利要求17所述的方法，其中，mRNA的测定通过RT-PCR测定。
19.评估主体肾功能的方法，该方法包括: a.从主体上获得生物样本； b.测定生物样本中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度； c.把测定的样本中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度与WAP四二硫化物核心域的蛋白2的极限值浓度进行比较； d.如果样本中的WAP四二硫化物核心域的蛋白2的浓度在某种极限浓度范围内，则确定主体是否具有肾损伤的可能性。
20.试剂盒子包括: 用于检测WAP4C的试剂；和装置，该装置带有编号的标准曲线，该标准曲线被用来校正对所述的检测结果获得WAP4C浓度的结果，其中，该标准曲线的浓度范围包括正常的WAP4C浓度和用来诊断急性肾损伤的WAP4C的极限浓度。
【文档编号】A61K48/00GK103826662SQ201280031908
【公开日】2014年5月28日 申请日期:2012年7月3日 优先权日:2011年7月6日
【发明者】威廉·度·阿诺德, 克里斯·约斯特, 柏林诺·兰德, 乔纳森·加里, 约瑟夫·布鲁切尔, 瓦斯·王, 斯科特·哈瑞德·荣吉尔, 犹地·坤麻·威尔路德, 科林第·马瑞·蒙斯 申请人:美艾利尔圣地亚哥公司