用于预防或治疗血管生成或mmp活性介导的疾病的包含香蜂草叶片提取物的片剂的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于预防和治疗血管生成和基质金属蛋白酶(MMP)活性介导的疾病的片剂，该片剂包含具有迷迭香酸、咖啡酸和芸香苷作为主要活性成分的香蜂草(Melissa officinalis)叶片提取物以及药学上可接受的崩解剂。其中迷迭香酸或咖啡酸的溶出度是在30分钟内80％或更多的片剂具有优异的释放速率并且在加速条件下是稳定的，并且因此可以有效使用该片剂用于预防或治疗血管生成或MMP活性介导的疾病，特别是肥胖症。
【专利说明】用于预防或治疗血管生成或MMP活性介导的疾病的包含香 蜂草叶片提取物的片剂
【技术领域】
[0001] 本发明涉及用于预防或治疗血管生成（angiogenesis)或基质金属蛋白酶 (matrix metalloproteinase，MMP)活性介导的疾病的片剂，该片剂包含香蜂草（Melissa officinalis)叶片提取物（其中，迷迭香酸、咖啡酸和芸香苷（芦丁，rutin)是主要的活性 成分）以及药学上可接受的崩解剂。
【背景技术】
[0002] 香蜂草（Melissa，Melissa officinalis)，唇形花科家族的多年生草本植物，也被 称为蜜蜂花（lemon balm)。
[0003] 香蜂草叶片提取物包含黄酮类（flavonoids)、猫酸类（terpene acids)、挥发油 类、醇和酚类化合物的苷和咖啡酸衍生物。特别地，香蜂草叶片中大量包含的黄酮类包括木 庫草苷、秋英戒（cosmosin)、鼠李梓檬素（rhamnocitrin)和异槲皮苷；并且包括乌苏酸作 为萜酸。这些非挥发的成分中，包括迷迭香酸，并且以约4. 7%的量包括咖啡酸衍生物。挥 发油中包括香叶醇、橙花醛、香茅醛和丁子香酚。除此之外，香蜂草叶片提取物中包含香豆 酸、多酚类和具有弱芳香性的肉桂酸等。
[0004] 香蜂草叶片提取物中的主要的药理学成分的作用如以下描述：
[0005] 迷迭香酸具有强烈的抗炎性和退热作用，并且包括在叶中的精油已经用于治疗疾 病，特别是抑郁症、神经性头痛、记忆丧失、神经痛、发热等。除此之外，还已知迷迭香酸具有 镇静、抗菌、抗病毒和抗激素作用。当前，已经将已知包含大量迷迭香酸的干燥的（无水的， dry)香蜂草叶片提取物用作血液循环增强剂组分。
[0006] 咖啡酸包含在咖啡和诸如水果、蔬菜、草本植物等植物中。已知它是作为癌症抑 制剂和作为体内和体外的优异的抗氧化剂起作用。当它的氯原酸形式被酯化为奎宁酸 时，咖啡酸的吸收受限，并且在大鼠中口服给予高剂量的咖啡酸引起胃乳头状瘤（Stomach papillomas)，并且认为咖啡酸在这些大鼠中是致癌物。给予与抗氧化剂组合的高剂量的咖 啡酸显示结肠肿瘤的生长下降。
[0007] 芸香苷是黄酮醇苷物质，并且广泛分布于自然界。它的主要的生理学活性是毛细 管收缩作用，并且已经用作止血剂；然而，该作用并不是很强烈而且是暂时的。它还具有毛 细血管强化作用，并且可以用于预防和治疗脑出血、福射呕吐（radiation sickness)、出血 性疾病等。
[0008] 同时，血管生成是指从先前存在的血管形成新的毛细血管的过程。在正常情况下， 血管生成发生在胚胎发育、组织再生和伤口愈合以及黄体发育、女性生殖系统的周期性变 化期间，并且在这些过程中受到严格调节。
[0009] 对于成年人，血管内皮细胞生长非常缓慢，并且与其他类型的细胞相比，在相对意 义上分裂得并不是很好。然而，必要时，通过激素信号响应、来自炎症细胞的促血管生成因 子的释放、将分离的促血管生成调节子（mediator)释放至细胞外基质的水解酶的活化或 血管生成因子（factor)的刺激诱导成年人血管生成。血管生成的过程通常由以下组成：由 蛋白酶诱导的血管上的基膜的降解、血管内皮细胞的迀移、通过增殖内腔形成和血管内皮 细胞分化以重构血管以及新毛细血管的形成。血管生成过程中最重要的事件之一是围绕血 管内皮细胞的血管上的基膜的酶降解。在其中起到重要的作用的酶是属于基质金属蛋白酶 (MMP)的酶。
[0010] 已知当血管生成不是自主调节或血管生成中起重要作用的MMP被过度活化时， 血管不正常地生长，并且因此引起各种疾病，如癌症的生长和转移；心血管疾病如血管瘤、 血管纤维瘤、血管畸形、动脉粥样硬化、血管狭窄、特发性硬化（edemic sclerosis)和再 狭窄；眼科疾病如糖尿病性视网膜病变、黄斑变性（包括衰老相关的黄斑变性，如年龄相 关的黄斑变性）、翼状胬肉、视网膜变性、与角膜移植相关的血管生成、血管生成性青光眼、 血管生成性角膜病变、晶状体后（retrolental)纤维组织增生、粒状结膜炎、角膜溃疡、 增殖性玻璃体视网膜病变、未成熟视网膜病变（immature retinopathy)、眼睛发炎、圆锥 形角膜、舍格伦氏综合征（Sjogren's syndrome)、近视、眼肿瘤、角膜移植中的排斥；肥胖 症等（参见 Polverini PJ，Critical Reviews in Oral Biology, 6 (3) ,1995,230-247; Arup Das, et al. , Progress in Retinal and Eye Research, 22,2003,721-748 ;Nick Di Girolamo, et al. , I0VS, Vol. 42, No. 9, August 2001, 1963-1968 ；Patricia Lee, et al., Survey of ophthalmology, vol 43,No. 3, Nov-Dec 1998,245-269 ；D.B.Holland, et al., British Journal of Dermatology, 150, 2004, 72-81 ；Anthony H Vagnucci Jr, et al. , The Lancet, vol 361,Feb. 15,2003,605-608 ；Berislav V.Zlokovic, Trends in Neuroscience,Vol. 28, No. 4, April 2005, 202-208 ；Jaap G. Neels, et al., The FASEB Journal express articlel0.1096/fj.03-1101fje. 2004 年 4 月 14 日网络出版； D. L. Crandall, et al., Microcirculation, 4, 1997, 211-232 ；G. Voros, et al. , Endoc rinology, 146, 2005, 4545-4554；M. A. Rupnick, et al.,PNAS,99, 2002, 10730-10735 ； E. Brakenhielm, et al. , Circ. Res. , 94, 2004, 1579-1588 ；H. R. Lijnen, et al.,Arterioscler Thromb Vase Biol. , 22, 2002, 374-379 ；and D.Demeulemeester, et al. , Biochem. Biophys. Res. Commun.，329, 2005, 105-110) 〇
[0011] 因此，血管生成抑制剂或MMP活性抑制剂的开发可以获得这些疾病的治疗。
[0012] 关于此，韩国专利第10-550298号通过使用人脐静脉内皮细胞（HUVEC)抑制血管 (tube)(如毛细血管）形成的实验和使用小鼠 Matrigel (基质胶）模型和鸡胚的绒毛尿囊 膜（chorioallantoic membrane)实验的体内试验，公开了香蜂草叶片提取物具有抗血管生 成作用。
[0013] 韩国专利第10-473688号进一步公开了香蜂草叶片提取物具有对MMP (基质金属 蛋白酶）的抑制作用，MMP在围绕血管内皮细胞的基膜的降解中（血管生成的重要过程）起 重要作用。
[0014] 韩国专利第10-903030号公开了用于增加香蜂草叶片提取物的效力的方法，其包 括以下步骤：（i)用50%至100%乙醇或甲醇提取香蜂草，随后干燥；（ii)在水中悬浮醇提 取物，用乙酸乙酯分馏，然后干燥；以及（iii)在水中重悬乙酸乙酯馏分，随后干燥以获得 香蜂草叶片的乙酸乙酯馏分。此外，其中公开了包含香蜂草叶片提取物的硬胶囊的实例；然 而，当香蜂草叶片提取物是以胶囊制剂制备时，由于胶囊基础化合物，活性成分并不容易释 放，并且由于与胶囊基础化合物结块，药物的释放是不利的。当包含香蜂草叶片提取物的胶 囊制剂置于高温和高湿度的条件下时，活性成分的释放速率变得缓慢，并且因此，对于包含 香蜂草叶片提取物的胶囊表现出期望的药用效果是不适合的。
[0015] 然而，上述现有技术并没有充分考虑表现出源自香蜂草叶片提取物的表现出药用 效果的活性成分以及给予至人体的合适的制剂。
[0016] 因此，本发明的发明人已经研宄了取决于源自香蜂草叶片提取物的主要活性成分 的释放速率的药物代谢的效果，并且观察到取决于溶出曲线以及包含香蜂草叶片提取物的 药物组合物的制剂的效力变化，从而完成本发明。
【发明内容】
[0017] 因此，本发明的目的是提供包含香蜂草叶片提取物的药物制剂，其中，迷迭香酸、 咖啡酸和芸香苷是主要活性成分，并且其具有血管生成抑制和腹部肥胖治疗效果，并且表 现出优异的药物代谢。
[0018] 为了实现上面的目的，本发明提供了用于预防或治疗血管生成或MMP活性介导的 疾病的片剂，其中，片剂包含香蜂草叶片提取物，其中，迷迭香酸、咖啡酸和芸香苷是主要的 活性成分以及药学上可接受的崩解剂，并且迷迭香酸或咖啡酸溶出度是在30分钟内80% 或更多。
[0019] 由于根据本发明的片剂即使在加速的（accelerated)条件下也是稳定的、具有活 性成分的优异的释放速率并且表现出其可以最大化治疗或者预防血管生成或MMP活性介 导的疾病的效果的溶解曲线，因此，可以有效地使用片剂用于预防或治疗以上疾病。
【专利附图】
【附图说明】
[0020] 当结合随附的附图时，由本发明的下列说明，本发明的上述和其他的目的以及特 征将变得明显，附图分别示出：
[0021] 图1和图2分别示出了分别在实施例2和实施例3以及比较例1中迷迭香酸和咖 啡酸从制剂中溶出的试验结果。
[0022] 图3至图5分别示出了根据在加速条件下的保存期，对于来自实施例2和实施例 3以及比较例1制剂中的迷迭香酸、咖啡酸以及芸香苷的含量稳定性试验的结果；
[0023] 图6和图7中分别示出了根据在加速条件下的保存期，对于来自实施例2和实施 例3以及比较例1的制剂中的迷迭香酸、咖啡酸以及芸香苷的溶解稳定性定性试验的结果； 以及
[0024] 图8示出了在比较例2和3以及实施例4中，通过给予制剂的大鼠体重的变化。
【具体实施方式】
[0025] 本发明提供了用于预防或治疗血管生成或MMP活性介导的疾病的片剂，其中，该 片剂包含具有迷迭香酸、咖啡酸和芸香苷作为主要活性成分的香蜂草叶片提取物以及药学 上可接受的崩解剂，并且迷迭香酸或咖啡酸的溶出度是在30分钟内80%或更多。
[0026] 在本发明中，"溶出度（溶出速率，溶解速率，dissolution rate) "是指如下测定 的值：使用900毫升的纯净水作为溶出试验液，并且根据韩国药典的一般试验方法中的方 法2,衆板法（Paddle method)，在37±0. 5°C，50rpm的转速进行溶出试验。在具体的时间之 后，用0.45 μπι的过滤器过滤溶出液。使用韩国药典的一般试验方法中的液相色谱（HPLC) 分析法，根据以下描述的流动相Α(5%甲酸水溶液）和流动相B(甲醇）的浓度梯度条件， 以Iml/分钟的速度操作流动相。将10 yL的样品注入分析柱，例如Zorbax Eclipse Plus C18柱（150x 4. 6毫米）柱，并在285nm的波长下分析有效成分以测定。
[0027] 〈流动相中的浓度梯度〉
[0028]
【权利要求】
1. 一种用于预防或治疗血管生成或基质金属蛋白酶（MM巧活性介导的疾病的片剂， 其中，所述片剂包含具有迷迭香酸、咖啡酸和芸香巧作为主要活性成分的香蜂草（Melissa officinalis)叶片提取物W及药学上可接受的崩解剂，并且所述片剂的迷迭香酸或咖啡酸 的溶出度是在30分钟内80%或更多。
2. 根据权利要求1所述的片剂，其中，所述迷迭香酸或所述咖啡酸的溶出度是在15分 钟内80%或更多。
3. 根据权利要求1所述的片剂，其中，通过W下制备所述香蜂草叶片提取物：用50%至 100%的己醇回流提取香蜂草叶片，随后过滤并浓缩；收集将用己酸己醋和水分馈获得的浓 缩物的步骤重复两次产生的己酸己醋层；并且随后，浓缩、干燥并粉碎所述己酸己醋层。
4. 根据权利要求1所述的片剂，其中，基于所述香蜂草叶片提取物的总重量，所述香蜂 草叶片提取物包含按重量计5 %至10 %的所述迷迭香酸、按重量计0. 5 %至1 %的所述咖啡 酸W及按重量计1 %至2%的所述芸香巧。
5. 根据权利要求1所述的片剂，其中，所述香蜂草叶片提取物包含重量比为1:0. 1至 1:0. 2的所述迷迭香酸和所述咖啡酸。
6. 根据权利要求1所述的片剂，其中，所述香蜂草叶片提取物包含重量比为1:1至1:4 的所述咖啡酸和所述芸香巧。
7. 根据权利要求1所述的片剂，其中，所述香蜂草叶片提取物包含重量比为1:0. 1至 1:0. 3的所述迷迭香酸和所述芸香巧。
8. 根据权利要求1所述的片剂，其中，所述药学上可接受的崩解剂选自由W下组成的 组：哲基己酸淀粉钢、交聚维酬、交联駿甲基纤维素钢、低取代哲丙基纤维素W及它们的混 合物。
9. 根据权利要求1所述的片剂，其中，基于所述片剂的总重量，W按重量计1%至10% 的量包含所述药学上可接受的崩解剂。
10.根据权利要求1所述的片剂，所述片剂进一步包含选自由W下组成的组的药学上 可接受的添加剂；赋形剂、润滑剂、粘合剂W及它们的混合物。
11. 根据权利要求10所述的片剂，基于所述片剂的总重量，所述片剂包含按重量计 10 %至90 %的所述香蜂草叶片提取物、按重量计1 %至10 %的所述崩解剂、按重量计7 %至 87 %的所述赋形剂、按重量计0. 2至5 %的所述润滑剂W及按重量计1 %至10 %的所述粘合 剂。
12. 根据权利要求1所述的片剂，其中，所述血管生成或MMP活性介导的疾病是选自由 W下组成的组的疾病；癌症的生长和转移；血管瘤、血管纤维瘤、血管崎形、动脉粥样硬化、 血管狭窄、特发性硬化和再狭窄；糖尿病性视网膜病变、黄斑变性、翼状爵肉、视网膜变性、 与角膜移植相关的血管生成、血管生成性青光眼、血管生成性角膜病变、晶状体后纤维组织 增生、粒状结膜炎、角膜溃瘍、增殖性玻璃体视网膜病变、未成熟视网膜病变、眼睛发炎、圆 锥形角膜、舍格伦氏综合征、近视、目削巾瘤和角膜移植中的排斥；W及肥胖症。
13. 根据权利要求12所述的片剂，其中，所述血管生成或MMP活性介导的疾病是肥胖 症。
14. 一种用于预防和治疗受试者中血管生成或基质金属蛋白酶（MM巧活性介导的疾病 的方法，包括将权利要求1所述的片剂给予至需要其的受试者。
【文档编号】A61P3/04GK104470507SQ201380037668
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2013年7月17日 优先权日:2012年7月18日
【发明者】尹银镇, 金京洙, 金用镒, 朴宰贤, 禹钟守 申请人:韩美药品株式会社