一种尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体及其制备方法
【专利摘要】本发明属于药物制剂领域。本发明涉及尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体及其制备方法。本发明制备得到的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体可以实现增加药物尿酸酶贮存稳定性，提高药物尿酸酶的活性，同时降低过氧化氢的浓度。
【专利说明】一种尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医药制剂领域，涉及尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002]高尿酸血症是嘌呤代谢紊乱导致尿酸生成过多或肾脏排泄障碍所致。人体缺乏尿酸酶，可以运用外源性的尿酸酶来治疗高尿酸血症。尿酸酶以分子氧为受体催化尿酸分解为尿囊素、CO2和H2O2，尿囊素能通过肾脏直接排出体外，但是过氧化氢具有细胞毒性。而过氧化氢酶能催化过氧化氢生成氧气和水。将尿酸酶和过氧化氢酶合用不仅能降低尿酸酶分解尿酸产生的过氧化氢的毒副作用，而且还能为尿酸酶分解尿酸提供氧气。但是尿酸酶和过氧化氢酶自身存在半衰期短、稳定性差、易被酶降解及口服难以吸收等缺点。为了克服这些问题，将脂质体(Liposomes)作为尿酸酶和过氧化氢酶的载体。脂质体的双分子层结构具有良好与生物膜的相似性，又可达到控制药物释放的目的，同时具有良好的给药靶向性等特点，从而提高药物的治疗指数，减少药物的治疗剂量和降低药物的毒性。本发明制备得到的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体(Uricase and catalase liposomes, UCLP),可增加尿酸酶的贮存稳定性和尿酸酶的体内活性，同时降低副产物过氧化氢的浓度。为了减少给药次数，提高患者的顺应性，增加尿酸酶的贮存稳定性和尿酸酶的体内活性，保持较长时间的有效血药浓度，同时降低副产物过氧化氢的浓度，有必要研制尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体。
[0003]经查询专利及文献，目前尚无尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体的任何研究报道。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体及其制备方法。尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体具有贮存稳定性好，体内尿酸酶活性高和过氧化氢浓度低等优点。本发明制备得到的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体可用于治疗高尿酸血症。本发明制备得到的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体能克服游离尿酸酶半衰期短、稳定性差、易被酶降解及口服难以吸收等缺点；其贮存稳定性比游离尿酸酶和单一尿酸酶脂质体好，静脉注射后体内降尿酸能力更强和体内过氧化氢浓度更低等优点。本发明制备得到的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体可缓慢释放尿酸酶，保持较长时间的有效血药浓度，可以减少给药次数，提高患者的顺应性，降低峰浓度过高引起的副作用。本发明提供的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体制备工艺简单，成本较低，易于控制，易于工业化生产。 [0005]本发明提供的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体，其特征在:制剂中尿酸酶含量为
0.2-0.8U/mL、过氧化氢酶含量为100-1000U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂1_3份，胆固醇1-3份，其中使用的缓冲液4种分别为:硼酸-硼砂缓冲液、Tris缓冲液、Tricine缓冲液Bicine缓冲液，缓冲液pH8~9，缓冲液离子强度25_150mM。本发明提供的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体，可以采用逆向蒸发法制备，步骤如下:称取磷脂、胆固醇溶于三氯甲烷，待其充分溶解，在旋转蒸发仪上挥干氯仿，即得均匀的薄膜；取适量乙醚将薄膜溶解，然后加入含有尿酸酶和过氧化氢酶的缓冲液，再超声直至形成带乳光的均匀分散体系，旋转挥干乙醚，即得。
[0006]本发明提供的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体的贮存稳定性比游离尿酸酶和单一尿酸酶脂质体的稳定性好(图1)。本发明提供的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体的药效实验结果表明尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体在治疗高尿酸血症方面比游离尿酸酶和单一尿酸酶脂质体的效果好(图2)，同时能降低尿酸酶分解尿酸产生的过氧化氢浓度(图3)。
[0007]本专利不同于通常研究报道的单一尿酸酶脂质体的配方。本发明首次在单一尿酸酶脂质体的配方中加入了过氧化氢酶，使尿酸酶和过氧化氢酶同时包载于脂质体内。将用本发明制备得到的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体静脉注射入体内后，体内降尿酸能力比游离尿酸酶和单一尿酸酶脂质体明显。分析原因可能如下:尿酸酶催化尿酸时需要氧气，而过氧化氢酶分解过氧化氢会产生氧气，不仅能降低过氧化氢的浓度，使反应向正向进行，而且还能为尿酸酶分解尿酸提供氧气，形成一个循环反应体系。本发明制备得到的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体比较于单一尿酸酶脂质体，由于加入过氧化氢酶，使得过氧化氢浓度降低，继而降低了由过氧化氢引起的毒副作用。
【专利附图】
【附图说明】
[0008]图1为本发明制得的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体的贮存稳定性
[0009]试验条件:分别将游离尿酸酶、尿酸酶脂质体和尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体样品放置于4°C的冰箱中，分别于第0，1，2，4，7，10，14，20，28天时测定样品溶液中的尿酸酶的活性。[0010]图2为本发明制得的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体治疗高尿酸血症时体内尿酸浓度
[0011]试验条件:建立高尿酸血症模型后，立即分别给予游离尿酸酶、单一尿酸酶脂质体和尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体治疗，然后用尿酸试剂盒测定血清中尿酸浓度。
[0012]图3为本发明制得的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体治疗高尿酸血症时体内过氧化氢浓度
[0013]试验条件:建立高尿酸血症模型后，立即分别给予游离尿酸酶、单一尿酸酶脂质体和尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体治疗，然后用过氧化氢试剂盒测定血清中过氧化氢浓度。
【具体实施方式】
[0014]为了进一步说明本发明及其优点，给出了下列特定的实施例，应理解这些实施例仅有于具体说明而不是作为本发明范围的限制。
[0015]实施例1:
[0016]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.25U/mL、过氧化氢酶含量为100U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂1.1份，胆固醇1份，三氯甲烷IOmL和乙醚10mL，使用的缓冲液为硼酸-硼砂缓冲液，缓冲液pH8.0,缓冲液离子强度25mM，缓冲液IOmL0
[0017]制备方法包括下列步骤:称取磷脂、胆固醇溶于三氯甲烷，待其充分溶解，在旋转蒸发仪上挥干氯仿，即得均匀的薄膜；取适量乙醚将薄膜溶解，然后加入含有尿酸酶和过氧化氢酶的缓冲液，再超声直至形成带乳光的均匀分散体系，旋转挥干乙醚，即得。
[0018]实施例2:
[0019]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.5U/mL、过氧化氢酶含量为500U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂2份，胆固醇2.3份，三氯甲烷30mL和乙醚30mL，使用的缓冲液为硼酸-硼砂缓冲液，缓冲液pH8.5，缓冲液离子强度90mM，缓冲液20mLo
[0020]制备方法基本同实施例1。
[0021]实施例3:
[0022]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.75U/mL、过氧化氢酶含量为900U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂2.8份，胆固醇3份，三氯甲烷12mL和乙醚9mL，使用的缓冲液为硼酸-硼砂缓冲液，缓冲液pH9.0,缓冲液离子强度140mM，缓冲液IOmL0
[0023]制备方法基本同实施例1。
[0024]实施例4:
[0025]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.24U/mL、过氧化氢酶含量为550U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂1.2份，胆固醇2.2份，三氯甲烷24mL和乙醚15mL，其中使用的缓冲液为硼酸-硼砂缓冲液，缓冲液pH8.1，缓冲液离子强度IOOmM,缓冲液IOmL0
[0026]制备方法基本同实施例1。
[0027]实施例5:
[0028]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.49U/mL、过氧化氢酶含量为950U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂2份，胆固醇3份，三氯甲烷23mL和乙醚15mL,使用的缓冲液为Bicine缓冲液，缓冲液pH8.6，缓冲液离子强度150mM，缓冲液15mL。
[0029]制备方法基本同实施例1。
[0030]实施例6:
[0031]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.5U/mL、过氧化氢酶含量为200U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂2.2份，胆固醇1.3份，三氯甲烷30mL和乙醚30mL，使用的缓冲液为硼酸-硼砂缓冲液，缓冲液pH8.5，缓冲液离子强度50mM，缓冲液20mLo
[0032]制备方法基本同实施例1。
[0033]实施例7:
[0034]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.78U/mL、过氧化氢酶含量为800U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂1.1份，胆固醇1.1份，三氯甲烷IOmL和乙醚10mL，使用的缓冲液为Bicine缓冲液，缓冲液pH8.5，缓冲液离子强度IlOmM,缓冲液IOmL0
[0035]制备方法基本同实施例1。
[0036]实施例8:
[0037]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.5U/mL、过氧化氢酶含量为850U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂1.1份，胆固醇1.2份，三氯甲烷20mL和乙醚20mL，使用的缓冲液为Tris缓冲液，缓冲液pH8.9，缓冲液离子强度145mM，缓冲液10mL。
[0038]制备方法基本同实施例1。
[0039]实施例9:
[0040]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.3U/mL、过氧化氢酶含量为300U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂2.1份，胆固醇2.2份，三氯甲烷IOmL和乙醚30mL，使用的缓冲液为硼酸-硼砂缓冲液，缓冲液pH9，缓冲液离子强度150mM，缓冲液IOmL0
[0041]制备方法基本同实施例1。
[0042]实施例10:
[0043]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.74U/mL、过氧化氢酶含量为1000U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂2份，胆固醇2.3份，三氯甲烷30mL和乙醚10mL，其中使用 的缓冲液为Bicine缓冲液，缓冲液pH8，缓冲液离子强度55mM，缓冲液20mLo
[0044]制备方法基本同实施例1。
[0045]实施例11:
[0046]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.5U/mL、过氧化氢酶含量为500U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂2.7份，胆固醇3份，三氯甲烷12mL和乙醚30mL，其中使用的缓冲液为Tricine缓冲液，缓冲液pH8.5，缓冲液离子强度lOOmM，缓冲液 20mL。
[0047]制备方法基本同实施例1。
[0048]实施例12:
[0049]配方中含有的各组分的重量组成比为:尿酸酶含量为0.5U/mL、过氧化氢酶含量为600U/mL，制剂中其余组分重量百分比为:磷脂2.8份，胆固醇2.9份，三氯甲烷SmL和乙醚20mL，其中使用的缓冲液为Bicine缓冲液，缓冲液pH8.1，缓冲液离子强度35mM，缓冲液20mLo
[0050]制备方法基本同实施例1。
【权利要求】
1.一种尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体，其特征在于:制剂中尿酸酶含量为0.2-0.8U/mL,过氧化氢酶含量为100-1000U/mL，制备制剂所用的缓冲液pH为8~9，离子强度为25~150mM，其余组分重量配比为:磷脂成分为I~3份，胆固醇为I~3份。
2.根据权利要求1所述的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体，其特征在于制备制剂所用的缓冲液是硼酸-硼砂缓冲液、Tris缓冲液、Bicine缓冲液，离子强度为25~150mM，pH值范围在8~9。
3.根据权利要求1所述的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤:称取磷脂、胆固醇溶于三氯甲烷，待其充分溶解，在旋转蒸发仪上挥干氯仿，即得均匀的薄膜；取乙醚将薄膜溶解，然后加入含有尿酸酶和过氧化氢酶的缓冲液，再超声直至形成带乳光的均匀分散体系，旋转挥干乙醚，即得。
4.根据权利要求1所述的尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体，其特征在于:平均粒径小于I μ m,比较于天然尿酸酶和单一尿酸酶脂质体，尿酸酶复合过氧化氢酶脂质体中尿酸酶贮存稳定性增加，尿酸 酶体内催化活性增加，分解尿酸时产生的过氧化氢含量降低。
【文档编号】A61K38/44GK103977396SQ201410242161
【公开日】2014年8月13日 申请日期:2014年5月26日 优先权日:2014年5月26日
【发明者】张景勍, 周云莉, 张敉, 胡雪原, 何丹, 张永红 申请人:重庆医科大学