壳聚糖-海藻酸钠载药微囊制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊制备方法,它是由下列重量组份的原料制成：油酸：4－6份，司盘-80：4－6份，吐温-80：8－12份，1,2-丙二醇：4－6份，2％海藻酸钠溶液：78－82份，1.5％氯化钙溶液：148－152份，1.5％壳聚糖溶液中：98－102份。其制备方法的步骤是：（1）按比例将油酸、司盘-80、吐温-80、丙二醇依次混匀，然后加入2％海藻酸钠溶液，应用乳化器以800 r/min搅拌速度乳化3－5min，制成乳胶。（2）将胶乳加入1.5％氯化钙溶液中，制成80～60μm微小乳胶颗粒；（3）取凝粒加入1.5％壳聚糖溶液中，发生聚电解质络合反应，经过3－4小时聚合反应后，形成壳聚糖-海藻酸钠微囊。
【专利说明】壳聚糖-海藻酸钠载药微囊制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊制备方法，属于中草药制剂【技术领域】。
【背景技术】
[0002]微囊载药技术是目前医药界重点研发的高新技术之一。微囊是应用高分子成膜材料，将固态或液态药物包裹成大小为I?100ym的微小囊膜粒子。微囊作为药物的一种优良的载药系统，不仅具有缓释、控释和靶向释药的特性，而且还可以改变药物的给药途径，提高药物稳定性，增加药物的吸收，提高药物的生物利用度，降低药物的毒副作用，保护药物免受环境因素的影响，其应用前景较为广阔。
[0003]壳聚糖和海藻酸钠是天然的高分子多糖，生物相容性好，具有良好的成膜性，是目前制备载药微囊最为理想的高分子可降解材料。目前，微囊制备方法主要有喷雾法和乳化法两类。喷雾法需要特殊的生产设备，乳化法需要使用化学交联剂或有机溶剂。这些方法不仅生产工艺复杂，生产量较低，反应条件激烈，而且使用的化学试剂还存在一定的毒性，污染环境，并影响包载药物的稳定性，因此，现有微囊制备技术严重制约了微囊药物的产业化进程。研究创新微囊生产工艺，是近年来医药领域新兴的研究课题。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是提供一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊制备方法，本方法不需要特殊的仪器设备，生产成本低，工艺简单，易于实现产业化。
[0005]本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:它是由下列重量组份的原料制成: 油酸:4 —6份，司盘-80: 4 —6份，吐温-80:8 —12份，1，2-丙二醇:4 —6份，2%
海藻酸钠溶液:78 - 82份，1.5%氯化钙溶液:148 — 152份，1.5%壳聚糖溶液中:98 — 102份。
[0006]其制备方法的步骤是:
(I)按比例将油酸、司盘-80、吐温-80、丙二醇依次混匀，然后加入2 %海藻酸钠溶液，在20 — 25°C室温环境，应用乳化器以800 r/min搅拌速度乳化3 — 5min，制成乳胶。
[0007](2)将胶乳加入1.5%氯化钙溶液中，在20 - 25°C室温环境，应用乳化器以10000r/min速度搅拌3 — 5min,制成80?60 μ m微小乳胶颗粒；在20 — 25°C室温环境静置条件下，经海藻酸钠分子链中古罗糖醛酸片段的5-C00-和2-0H与I个钙离子通过4个配位键螯合反应20 - 24小时，形成具有2个六元环结构的稳定螯合物颗粒。
[0008](3)取凝粒加入1.5%壳聚糖溶液中，在20 - 25°C室温环境静置条件下，海藻酸钠分子链上游离的羧基与壳聚糖分子上游离的氨基通过静电作用，发生聚电解质络合反应，形成壳聚糖-海藻酸钠聚电解质复合膜。经过3 — 4小时聚合反应后，形成壳聚糖-海藻酸钠微囊。微囊液经2000r/min离心1min,用蒸懼水洗漆,然后经2000r/min离心1min,收集微囊，经干燥器55°C干燥12小时后即得微囊成品。
[0009]本发明的有益效果是:本发明采用把丙二醇作为辅助乳化剂组分加入到油酸、司盘-80、吐温_80、2%海藻酸钠溶液组成的体系中，制成稳定的乳胶，然后把该胶乳依次加入到氯化钙溶液和壳聚糖溶液中，经搅拌和交联后，干燥制成载药微囊。本发明的载药微囊制备方法不需要特殊的仪器设备，生产工艺简单，而且还不需要使用化学交联剂或有机溶齐U，减少了环境污染。利用微囊包载药物后，能够提高药物的生物利用度，延长药物的疗效，增强药物的稳定性。
【具体实施方式】
[0010]本发明壳聚糖-海藻酸钠载药微囊，它是由下列重量组份的原料制成:
油酸:4 — 6份，司盘-80: 4-6份，吐温-80:8 — 12份，
I, 2-丙二醇:4 一 6份，2%海藻酸钠溶液78 - 82份，
1.5%氯化钙溶液:148 - 152份，1.5%壳聚糖溶液中:98 — 102份。
[0011]实施例1
一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊，由下列重量份的原料制成:油酸:6份，司盘-80:4份，吐温-80:10份，1，2_丙二醇:4份，2%海藻酸钠溶液82份，1.5%氯化钙溶液:152份，1.5%壳聚糖溶液中:98份。
[0012]实施例2
所述的一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊，由下列重量份的原料制成:油酸:5份，司盘-80: 6份，吐温-80: 12份，1,2-丙二醇:6份，2%海藻酸钠溶液78份，1.5%氯化钙溶液:150份，1.5%壳聚糖溶液中:100份。
[0013]实施例3
所述的一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊，由下列重量份的原料制成:油酸:6份，司盘-80: 5份，吐温-80:8份，1,2-丙二醇:5份，2%海藻酸钠溶液80份，1.5%氯化钙溶液:148，1.5%壳聚糖溶液中:102份。
[0014]实施例4
上述实施例1-3壳聚糖-海藻酸钠载药微囊的制备方法，其制备步骤是:(I)按重量组分比例将油酸、司盘-80、吐温-80、丙二醇依次混匀，然后加入2%海藻酸钠溶液，在20 -25°C室温环境，应用乳化器以800 r/min搅拌速度乳化3 — 5min，制成乳胶。
[0015](2)将胶乳加入1.5%氯化钙溶液中，在20 - 25°C室温环境，应用乳化器以10000r/min速度搅拌3 — 5min,制成80?60 μ m微小乳胶颗粒；在20 — 25°C室温环境静置条件下，经海藻酸钠分子链中古罗糖醛酸片段的5-C00-和2-0H与I个钙离子通过4个配位键螯合反应20 - 24小时，形成具有2个六元环结构的稳定螯合物颗粒。
[0016](3)取凝粒加入1.5%壳聚糖溶液中，在20 - 25°C室温环境静置条件下，海藻酸钠分子链上游离的羧基与壳聚糖分子上游离的氨基通过静电作用，发生聚电解质络合反应，形成壳聚糖-海藻酸钠聚电解质复合膜。经过3 — 4小时聚合反应后，形成壳聚糖-海藻酸钠微囊。微囊液经2000r/min离心1min,用蒸懼水洗漆,然后经2000r/min离心1min,收集微囊，经干燥器55°C干燥12小时后即得微囊成品。
[0017]本发明壳聚糖-海藻酸钠载药微囊以加入牛血清白蛋白为模型药物，对其体外释药特性进行了实验: (I)取油酸5mL、司盘-80 5mL、吐温-80 10mL、丙二醇5mL，依次混合均匀，然后加入2%海藻酸钠溶液(含2%牛血清白蛋白)80mL，室温条件下以800 r/min搅拌速度乳化3 —5min，制成油包水型胶乳。
[0018](2)取胶乳加入1.5%氯化钙溶液中，室温环境10000r/min搅拌3 — 5min，制成凝胶微粒，螯合反应20 - 24小时。
[0019](3)取凝胶微粒沉淀加入1.5%壳聚糖溶液中(pH5.0),交联成膜3 — 4小时，然后经2000r/min离心1min,用蒸懼水洗漆,收集微囊,经55°C干燥，即得微囊成品。
[0020]为进一步验证本发明的具体应用效果，在加入牛血清白蛋白为模型药物制出的微囊检测其理化指标为:
1、物理性状
本发明的壳聚糖-海藻酸钠微囊为表面光整的圆形微囊，平均粒径为60±12 μ m，微囊无粘连，分散度、均匀度良好。
[0021]2、载药含量测定
(I)蛋白含量测定
应用BCA方法测定蛋白含量。用PBS溶解适量的蛋白标准品，使蛋白溶液终浓度为
0.5mg/mL。取配制的蛋白标准品溶液O、1、2、4、8、12、16、20 μ L，分别加入96孔微量板孔中，然后再补加PBS溶液，使各标准品孔中的液量均为20 μ L。取待测样品适当稀释，每样品孔加样品20 μ L。然后各孔加入双缩脲试剂200μ L，37°C放置15 — 30min，用酶标仪测定562nm波长下的吸收值，根据标准曲线计算蛋白浓度。结果蛋白浓度在I 一 8Pg/mL范围内，吸收度与浓度呈良好的线性关系，以吸光值A值对浓度C值进行回归，得回归方程C =18.0904 A + 0.2406，r = 0.9998。
[0022](2)微球载药量和包封率测定
取制备BSA-壳聚糖-海藻酸钠微囊液，应用BCA蛋白含量测定法，测定微囊液中游离的白蛋白浓度，计算游离白蛋白含量，进而计算微囊中包含的白蛋白含量，试验重复5次。包封率(％)=(白蛋白投药量一乳液游离白蛋白量)/白蛋白投药量X100%。结果测得微囊载药量为81.32±5μ g/mg，包封率为63% ±2.8%。
[0023](3)体外释放实验
取BSA-壳聚糖-海藻酸钠微囊适量，加入PBS (pH7.4)中，室温环境静置，间隔一定时间吸取上清液4ml，重新加入4ml PBS(pH7.4)，以BCA法测定562nm波长下的吸光值，计算药物累积释放百分率，试验重复5次。结果测得24h的蛋白释放率为71% ±2.8%。
[0024]本发明的壳聚糖-海藻酸钠微囊是应用乳化凝胶法制备的一种载药微囊。由于药物被包裹在可生物降解的微囊中，能够缓慢释放药物的有效成分，延缓药物的吸收，维持机体长时间的有效血药浓度，可显著延长药剂疗效。
[0025]由于微囊能够缓慢释放药物的有效成分，所以能降低用药成本，减少用药次数，并为临床用药带来许多方便。因此，应用本发明的壳聚糖-海藻酸钠微囊作为载药系统，制备的缓释药剂还具有良好的治疗效果，而且使用方便，用药次数少，节省人力和物力。本发明的壳聚糖-海藻酸钠微囊药剂是目前临床治疗畜禽疾病的较为理想的一种新型制剂。
【权利要求】
1.一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊，其特征是:它是由下列重量组份的原料制成: 油酸:4 — 6份，司盘-80: 4-6份，吐温-80:8 — 12份， I,2-丙二醇:4 一 6份，2%海藻酸钠溶液78 - 82份， 1.5%氯化钙溶液:148 - 152份，1.5%壳聚糖溶液中:98 — 102份。
2.根据权利要求1所述的一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊，其特征是:由下列重量份的原料制成: 油酸:6份，司盘-80: 4份，吐温-80:10份，1，2_丙二醇:4份，2%海藻酸钠溶液82份，1.5%氯化钙溶液:152份，1.5%壳聚糖溶液中:98份。
3.根据权利要求1所述的一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊，其特征是:由下列重量份的原料制成: 油酸:5份，司盘-80: 6份，吐温-80: 12份，1，2-丙二醇:6份，2%海藻酸钠溶液78份，1.5%氯化钙溶液:150份，1.5%壳聚糖溶液中:100份。
4.根据权利要求1所述的一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊，其特征是:由下列重量份的原料制成: 油酸:6份，司盘-80: 5份，吐温-80:8份，1，2_丙二醇:5份，2%海藻酸钠溶液80份，1.5%氯化钙溶液:148，1.5%壳聚糖溶液中:102份。
5.根据权利要求1、2、3、4所述的任意一种壳聚糖-海藻酸钠载药微囊的制备方法，其特征是:其制备步骤是: (1)按重量组分比例将油酸、司盘-80、吐温-80、丙二醇依次混匀，然后加入2%海藻酸钠溶液，在20 - 25 °C室温环境，应用乳化器以800 r/min搅拌速度乳化3 — 5min，制成乳胶； (2)将胶乳加入1.5%氯化钙溶液中，在20 - 25°C室温环境，应用乳化器以10000r/min速度搅拌3 - 5min，制成80?60 μ m微小乳胶颗粒；在20 — 25°C室温环境静置条件下，经海藻酸钠分子链中古罗糖醛酸片段的5-C00-和2-0H与I个钙离子通过4个配位键螯合反应20 — 24小时，形成具有2个六元环结构的稳定螯合物颗粒； (3)取凝粒加入1.5%壳聚糖溶液中，在20 - 25°C室温环境静置条件下，海藻酸钠分子链上游离的羧基与壳聚糖分子上游离的氨基通过静电作用，发生聚电解质络合反应，形成壳聚糖-海藻酸钠聚电解质复合膜；经过3 - 4小时聚合反应后，形成壳聚糖-海藻酸钠微囊；微囊液经2000r/min离心1min,用蒸懼水洗漆,然后经2000r/min离心1min,收集微囊，经干燥器55°C干燥12小时后即得微囊成品。
【文档编号】A61K9/50GK104434879SQ201410650189
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月17日 优先权日:2014年11月17日
【发明者】史同瑞, 王岩, 张代玉, 刘宇, 王爽, 高峰, 杨淑萍, 苏永福, 陈亮, 王丽坤, 张鹏宇, 王刚 申请人:黑龙江省兽医科学研究所