一种地克珠利脂质体及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种地克珠利脂质体，由以下重量份的原料制成：地克珠利3-4份，α-吡咯烷酮10-20份，大豆卵磷脂30-50份，甘油缩甲醛1-10份，胆固醇10-20份。相对于现有技术，本发明提供一种地克珠利脂质体，具有良好的稳定性、溶解性、缓释性，解决地克珠利的使用方式问题，可以有效的利用地克珠利药物药性和减少临床使用量，保证药物在机体内的安全转换。
【专利说明】-种地克珠利脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于兽药【技术领域】，具体涉及一种地克珠利脂质体及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 地克珠利是一种防治鸡球虫药物，在市场上主要有预混剂、混息型粉剂等，此类产 品溶解度极低，药物发生沉降，导致药物在机体内的药量不足，效果不显著，生物利用度低， 浪费成本；如混料使用，临床用量低，不易混匀，影响防治球虫效果。
[0003] 地克珠利属于H嗦苯己膳化合物，为新型、高效、低毒抗球虫药，广泛用于鸡球虫 病，能够对鸡柔嫩、堆型、毒害、布氏、巨型艾美耳球虫等具有极佳的杀灭作用，针对上述五 种球虫的抗菌素指数分别是200、200、197、193、183。用药后除能有效地控制盲肠球虫的发 生和死亡外，甚至能使病鸡球虫卵囊全部消失，为理想的杀球虫药，药物作用可干扰虫体体 细胞核的分裂和线粒体呼吸代谢的功能，作用于球虫子抱子和第一代裂殖体的早期阶段， 杀灭球虫卵囊，对球虫的主要作用峰期随球虫的不同种属而异，如对柔嫩艾美尔球虫主要 作用点在第2代裂殖体球虫的有性周期；但对巨型、布氏艾美尔球虫裂殖体无效，对巨型艾 美尔球虫作用点在球虫的合子阶段，对布氏艾美尔球虫小配子体阶段有高效。地克珠利对 形成抱子化卵囊有抑制作用，而且临床试验表明，地克珠利对鸡球虫的防治效果优于其他 常规应用的抗球虫药和莫能菌素等离子载体抗球虫药。
[0004] 而在地克珠利的口服给药制剂中，片剂具有配药方便、含量准确、容易掩盖药物苦 味等优点，应用范围广泛，但是由于不同工艺的差异，导致不同工艺制得的地克珠利片剂生 物利用度不相同。
【发明内容】
[0005] 本发明要解决的技术问题是目前，地克珠利在市场上主要有预混剂、混息型粉剂 等，但是此类产品溶解度极低，药物发生沉降，导致药物在机体内的药量不足，效果不显著， 生物利用度低，浪费成本；如混料使用，临床用量低，不易混匀，影响防治球虫效果，为解决 上述问题，提供一种地克珠利脂质体及其制备方法。
[0006] 本发明的目的是W下述方式实现的： 一种地克珠利脂质体，由W下重量份的原料制成：地克珠利3-4份，a-化咯焼丽10-20 份，大豆卵磯脂30-50份，甘油缩甲酵1-10份，胆固醇10-20份。
[0007] 具体步骤如下： 1) 称取3-4份地克珠利原粉，使其溶于丙二醇和己醇的混合液中，再加入PBS缓冲液， 使其充分溶解，制成浓度为3mg/mL的水相，备用； 2) 按比例称取a -化咯焼丽、大豆卵磯脂、甘油缩甲酵和胆固醇，经常温超声波破碎仪 作用2-5S，间隔2-5S，使其充分溶解，得到油相； 3) 将油相经旋转减压蒸发制成空白磯脂膜，对空白磯脂膜采用硫酸馈溶液冲洗、水化 得到空白脂质体，经过滤膜过滤处理，备用； 4) 将步骤3)得到的空白脂质体放入透析袋中，利用生理盐水37°C恒温透析3-化，然 后将透析后的空白脂质体加入到步骤1)制备的水相中，加热至40-50°C，赔化20-30min，经 60-7(TC旋转蒸发除去丙二醇和己醇，得到地克珠利脂质体粗品； 5) 将步骤4)得到的地克珠利脂质体粗品进行离也处理，将离也后的沉淀物冻干，即可 得到地克珠利脂质体精品。
[0008] 所述丙二醇和己醇的体积比为2:1。
[0009] 所述PBS缓冲液的抑值为6. 8-7. 2。
[0010] 步骤3)所述硫酸馈溶液的浓度为300mmol/l，用量为25-30份。
[0011] 步骤3)所述经过滤膜过滤处理为用1. 0 y m和0. 45 y m滤膜过滤处理。
[0012] 步骤5)所述离也处理的条件为；4°C，10000-12000r/min，离也20-40min。
[0013] 将步骤5)制得的地克珠利脂质体精品溶于PBS缓冲液中，得到精制地克珠利脂质 体溶液，再将精制地克珠利脂质体溶液进一步浓缩，经真空冻干，得到地克珠利脂质体冻干 制剂。
[0014] 相对于现有技术，本发明提供一种地克珠利脂质体，具有良好的稳定性、溶解性、 缓释性，解决地克珠利的使用方式问题，可W有效的利用地克珠利药物药性和减少临床使 用量，保证药物在机体内的安全转换。
【具体实施方式】 [001引 实施例1 : 一种地克珠利脂质体，由W下重量份的原料制成：地克珠利3-4份，a -化咯焼丽10-20 份，大豆卵磯脂30-50份，甘油缩甲酵1-10份，胆固醇10-20份。
[001引具体步骤如下： 1) 称取3-4份地克珠利原粉，使其溶于丙二醇和己醇的混合液中，再加入PBS缓冲液， 使其充分溶解，制成浓度为3mg/mL的水相，备用； 2) 按比例称取a -化咯焼丽、大豆卵磯脂、甘油缩甲酵和胆固醇，经常温超声波破碎仪 作用2-5S，间隔2-5S，使其充分溶解，得到油相； 3) 将油相经旋转减压蒸发制成空白磯脂膜，对空白磯脂膜采用硫酸馈溶液冲洗、水化 得到空白脂质体，经过滤膜过滤处理，备用； 4) 将步骤3)得到的空白脂质体放入透析袋中，利用生理盐水37C恒温透析3-化，然 后将透析后的空白脂质体加入到步骤1)制备的水相中，加热至40-50°C，赔化20-30min，经 60-7(TC旋转蒸发除去丙二醇和己醇，得到地克珠利脂质体粗品； 5) 将步骤4)得到的地克珠利脂质体粗品进行离也处理，将离也后的沉淀物冻干，即可 得到地克珠利脂质体精品。
[0017] 所述PBS缓冲液的抑值为6. 8-7. 2。
[0018] 步骤3)所述硫酸馈溶液的浓度为300mmol/l，用量为25-30份。
[0019] 步骤3)所述经过滤膜过滤处理为用1. 0 y m和0. 45 y m滤膜过滤处理。
[0020] 步骤5)所述离也处理的条件为；4°C，10000-12000r/min，离也20-40min。
[0021] 将步骤5)制得的地克珠利脂质体精品溶于PBS缓冲液中，得到精制地克珠利脂质 体溶液，再将精制地克珠利脂质体溶液进一步浓缩，经真空冻干，得到地克珠利脂质体冻干 制剂。
[002引 实施例2 : 一种地克珠利脂质体，由W下重量份的原料制成：地克珠利30g，a -化咯焼丽lOOg，大 豆卵磯脂300g，甘油缩甲酵lOg，胆固醇lOOg。
[002引具体步骤如下： 1) 称取30g地克珠利原粉，使其溶于丙二醇和己醇的混合液中，丙二醇和己醇的体积 比为2: 1，再加入抑值为6. 8-7. 2的PBS缓冲液，使其充分溶解，制成浓度为3mg/mL的水 相，备用； 2) 按比例称取a -化咯焼丽、大豆卵磯脂、甘油缩甲酵和胆固醇，经常温超声波破碎仪 短时间作用，作用时间2s，间隔时间2s，使其充分溶解，得到油相； 3) 将油相经旋转减压蒸发制成空白磯脂膜，对空白磯脂膜采用浓度为300mmol/L的硫 酸馈溶液冲洗，用量为250g，再水化得到空白脂质体，经过用1. Oym和0. 45 ym滤膜过滤处 理，备用； 4) 将步骤3)得到的空白脂质体放入透析袋中，利用生理盐水37C恒温透析化，然后将 透析后的空白脂质体加入到步骤1)制备的水相中，加热至40°C，赔化20min，经60°C旋转蒸 发除去丙二醇和己醇，得到地克珠利脂质体粗品； 5) 将步骤4)得到的地克珠利脂质体粗品进行离也处理，将离也后的沉淀物冻干，即可 得到地克珠利脂质体精品。离也处理的条件为；4°C，10000r/min，离也20min。
[0024] 实施例3 : 一种地克珠利脂质体，由W下重量份的原料制成：地克珠利32g，a -化咯焼丽120g，大 豆卵磯脂340g，甘油缩甲酵30g，胆固醇120g。
[00幼具体步骤如下： 1) 称取32g地克珠利原粉，使其溶于丙二醇和己醇的混合液中，丙二醇和己醇的体积 比为1: 1，再加入抑值为6. 8-7. 2的PBS缓冲液，使其充分溶解，制成浓度为3mg/mL的水 相，备用； 2) 按比例称取a -化咯焼丽、大豆卵磯脂、甘油缩甲酵和胆固醇，经常温超声波破碎仪 短时间作用，作用时间3s，间隔时间3s，使其充分溶解，得到油相； 3) 将油相经旋转减压蒸发制成空白磯脂膜，对空白磯脂膜采用浓度为300mmol/L的硫 酸馈溶液冲洗，用量为260g，再水化得到空白脂质体，经过用1. 0 y m和0. 45 y m滤膜过滤处 理，备用； 4) 将步骤3)得到的空白脂质体放入透析袋中，利用生理盐水37C恒温透析3.化，然后 将透析后的空白脂质体加入到步骤1)制备的水相中，加热至42C，赔化22min，经62C旋转 蒸发除去丙二醇和己醇，得到地克珠利脂质体粗品； 5) 将步骤4)得到的地克珠利脂质体粗品进行离也处理，将离也后的沉淀物冻干，即可 得到地克珠利脂质体精品。离也处理的条件为；4°C，10500r/min，离也25min。
[002引 实施例4 : 一种地克珠利脂质体，由W下重量份的原料制成：地克珠利34g，a -化咯焼丽140g，大 豆卵磯脂380g，甘油缩甲酵50g，胆固醇140g。
[0027] 具体步骤如下： 1) 称取34g地克珠利原粉，使其溶于丙二醇和己醇的混合液中，丙二醇和己醇的体积 比为1:2,再加入抑值为6. 8-7. 2的PBS缓冲液，使其充分溶解，制成浓度为3mg/mL的水 相，备用； 2) 按比例称取a -化咯焼丽、大豆卵磯脂、甘油缩甲酵和胆固醇，经常温超声波破碎仪 短时间作用，作用时间4s，间隔时间4s，使其充分溶解，得到油相； 3) 将油相经旋转减压蒸发制成空白磯脂膜，对空白磯脂膜采用浓度为300mmol/L的硫 酸馈溶液冲洗，用量为270g，再水化得到空白脂质体，经过用1. 0 y m和0. 45 y m滤膜过滤处 理，备用； 4) 将步骤3)得到的空白脂质体放入透析袋中，利用生理盐水37C恒温透析化，然后将 透析后的空白脂质体加入到步骤1)制备的水相中，加热至44C，赔化24min，经64C旋转蒸 发除去丙二醇和己醇，得到地克珠利脂质体粗品； 5) 将步骤4)得到的地克珠利脂质体粗品进行离也处理，将离也后的沉淀物冻干，即可 得到地克珠利脂质体精品。离也处理的条件为；4°C，11000r/min，离也30min。
[002引 实施例5 : 一种地克珠利脂质体，由W下重量份的原料制成：地克珠利36g，a -化咯焼丽160g，大 豆卵磯脂420g，甘油缩甲酵70g，胆固醇160g。
[002引具体步骤如下： 1) 称取36g地克珠利原粉，使其溶于丙二醇和己醇的混合液中，丙二醇和己醇的体积 比为3: 1，再加入抑值为6. 8-7. 2的PBS缓冲液，使其充分溶解，制成浓度为3mg/mL的水 相，备用； 2) 按比例称取a -化咯焼丽、大豆卵磯脂、甘油缩甲酵和胆固醇，经常温超声波破碎仪 短时间作用，作用时间5s，间隔时间5s，使其充分溶解，得到油相； 3) 将油相经旋转减压蒸发制成空白磯脂膜，对空白磯脂膜采用浓度为300mmol/L的硫 酸馈溶液冲洗，用量为280g，再水化得到空白脂质体，经过用1. 0 y m和0. 45 y m滤膜过滤处 理，备用； 4) 将步骤3)得到的空白脂质体放入透析袋中，利用生理盐水37C恒温透析4.化，然后 将透析后的空白脂质体加入到步骤1)制备的水相中，加热至46C，赔化26min，经66C旋转 蒸发除去丙二醇和己醇，得到地克珠利脂质体粗品； 5) 将步骤4)得到的地克珠利脂质体粗品进行离也处理，将离也后的沉淀物冻干，即可 得到地克珠利脂质体精品。离也处理的条件为；4°C，11500r/min，离也35min。
[0030] 实施例6 : 一种地克珠利脂质体，由W下重量份的原料制成：地克珠利38g，a -化咯焼丽180g，大 豆卵磯脂460g，甘油缩甲酵85g，胆固醇180g。
[0031] 具体步骤如下： 1) 称取38g地克珠利原粉，使其溶于丙二醇和己醇的混合液中，丙二醇和己醇的体积 比为4:1，再加入抑值为6. 8-7. 2的PBS缓冲液，使其充分溶解，制成浓度为3mg/mL的水 相，备用； 2) 按比例称取a -化咯焼丽、大豆卵磯脂、甘油缩甲酵和胆固醇，经常温超声波破碎仪 短时间作用，作用时间5s，间隔时间5s，使其充分溶解，得到油相； 3) 将油相经旋转减压蒸发制成空白磯脂膜，对空白磯脂膜采用浓度为300mmol/L的硫 酸馈溶液冲洗，用量为290g，再水化得到空白脂质体，经过用1. 0 y m和0. 45 y m滤膜过滤处 理，备用； 4) 将步骤3)得到的空白脂质体放入透析袋中，利用生理盐水37C恒温透析化，然后将 透析后的空白脂质体加入到步骤1)制备的水相中，加热至48°C，赔化28min，经68°C旋转蒸 发除去丙二醇和己醇，得到地克珠利脂质体粗品； 5) 将步骤4)得到的地克珠利脂质体粗品进行离也处理，将离也后的沉淀物冻干，即可 得到地克珠利脂质体精品。离也处理的条件为；4°C，12000r/min，离也40min。
[003引 实施例7 : 一种地克珠利脂质体，由W下重量份的原料制成：地克珠利40g，a -化咯焼丽200g，大 豆卵磯脂500g，甘油缩甲酵lOOg，胆固醇200g。
[003引具体步骤如下： 1) 称取40g地克珠利原粉，使其溶于丙二醇和己醇的混合液中，丙二醇和己醇的体积 比为5: 1，再加入抑值为6. 8-7. 2的PBS缓冲液，使其充分溶解，制成浓度为3mg/mL的水 相，备用； 2) 按比例称取a -化咯焼丽、大豆卵磯脂、甘油缩甲酵和胆固醇，经常温超声波破碎仪 短时间作用，作用时间5s，间隔时间5s，使其充分溶解，得到油相； 3) 将油相经旋转减压蒸发制成空白磯脂膜，对空白磯脂膜采用浓度为300mmol/L的硫 酸馈溶液冲洗，用量为300g，再水化得到空白脂质体，经过用1. 0 y m和0. 45 y m滤膜过滤处 理，备用； 4) 将步骤3)得到的空白脂质体放入透析袋中，利用生理盐水37C恒温透析化，然后将 透析后的空白脂质体加入到步骤1)制备的水相中，加热至5(TC，赔化30min，经7(TC旋转蒸 发除去丙二醇和己醇，得到地克珠利脂质体粗品； 5) 将步骤4)得到的地克珠利脂质体粗品进行离也处理，将离也后的沉淀物冻干，即可 得到地克珠利脂质体精品。离也处理的条件为；4°C，12000r/min，离也40min。
[0034] 实施例8 : 1)水相的制备，取3g精制地克珠利原粉，溶于丙二醇和己醇中，然后加入P册.8-7. 2的 PBS缓冲液中充分溶解，制成终浓度为3mg/mL的水化备用。
[003引 2)取大豆卵磯脂4g、a -化咯焼丽1血、胆固醇Ig、甘油缩甲酵适量混合溶解，经过 常温超声波细胞破碎仪短时间作用，作用时间3s，间隔时间3s，使其充分溶解，得到油相。
[0036] 3)将油相经过水温55C旋转减压蒸发作用10 min制得空白磯脂膜，然后加入 300mmol/L硫酸馈溶液充分冲洗，水化得到空白脂质载体，经1. 0 y m和0. 45 y m滤膜两层过 滤处理，备用。
[0037] 4)将上述步骤中的空白脂质体放入透析袋中，利用0. 85%生理盐水37。直温化， 透析后加入到水相中，加热至45C，赔化20 min,即制成地克珠利脂质体粗品。
[0038] 5)再经过4°C低温100(K)r/min高速离也25min处理4)中的粗品，留其沉淀加入 PBS缓冲液制得精制地克珠利脂质体溶液。
[003引 6)可W将5)步骤中的精制的地克珠利脂质体进一步浓缩，经真空冻干，可W制得 地克珠利脂质体冻干制剂，冻干制剂不仅保存时间长，而且便于运输。
[0040] 精制地克珠利脂质体经过无菌处理之后，4°C保存，而冻干制剂可W常温保存。
[0041] 包封率检测；将精制的地克珠利脂质体溶液取1ml于离也管中，经过4C低温 1500化/min离也50min处理之后，取0. 5ml上清液，进行高效液相测定，作为游离的地克珠 利C游；另0. 5ml沉淀作为总的地克珠利C总，然后包封率=(C总-C游/C总）100%，结果 见表1。
[0042] 动物试验1 ; 100只5周龄的健康鸡进行随机分成对照、试验、空白、市售药组4 组，25只/组，4组试验鸡在新的饲养环境中适应一周后，对照、试验组、市售药组中每只鸡 人工感染鸡只球虫，空白接种生理盐水，自由饮水和采食。
[0043] 病鸡表现出的临床症状为；精神沉郁，食欲减退，下痴等；对照组不喂药，试验组 饲喂实施例8制得的地克珠利脂质体，注射用量0. 5ml/kg直至全愈；空白组不喂药，市售药 组饲喂市售地克珠利，直至全愈；同时试验组和市售药组定点采血，测定药动学，试验结果 见表2。
[0044] 实施例9 : 1)水相的制备，取4g精制地克珠利原粉，溶于丙二醇和己醇中，然后加入P册.8-7. 2的 PBS缓冲液中充分溶解，制成终浓度为3mg/mL的水化备用。
[004引 2)取大豆卵磯脂5g、a -化咯焼丽1血、胆固醇Ig、甘油缩甲酵适量混合溶解，经过 常温超声波细胞破碎仪短时间作用，作用时间3s，间隔时间3s，使其充分溶解，得到油相。
[0046] 3)将油相经过水温6(TC旋转减压蒸发作用20 min制得空白磯脂膜，然后加入 300mmol/L硫酸馈溶液充分冲洗，水化得到空白脂质载体，经1. 0 y m和0. 45 y m滤膜两层过 滤处理，备用。
[0047] 4)将上述步骤中的空白脂质体放入透析袋中，利用0. 85%生理盐水37C恒温化， 透析后加入到水相中，加热至5(TC，赔化30 min,即制成地克珠利脂质体粗品。
[0048] 5)再经过4C低温120(K)r/min高速离也30min处理4)中的粗品，留其沉淀加入 PBS缓冲液制得精制地克珠利脂质体溶液。
[004引 6)可W将5)步骤中的精制的地克珠利脂质体进一步浓缩，经真空冻干，可W制得 地克珠利脂质体冻干制剂，冻干制剂不仅保存时间长，而且便于运输。 包封率检测和动物试验同实例5,结果见表1和表3。
[0050] 表1实施例5和6包封率统计表
【权利要求】
1. 一种地克珠利脂质体，其特征在于：由以下重量份的原料制成：地克珠利3-4份， a _吡咯烷酮10-20份，大豆卵磷脂30-50份，甘油缩甲醛1-10份，胆固醇10-20份。
2. 根据权利要求1所述的一种地克珠利脂质体的制备方法，其特征在于：具体步骤如 下： 1) 称取3-4份地克珠利原粉，使其溶于丙二醇和乙醇的混合液中，再加入PBS缓冲液， 使其充分溶解，制成浓度为3mg/mL的水相，备用； 2) 按比例称取a -吡咯烷酮、大豆卵磷脂、甘油缩甲醛和胆固醇，经常温超声波破碎仪 作用2-5s，间隔2-5s，使其充分溶解，得到油相； 3) 将油相经旋转减压蒸发制成空白磷脂膜，对空白磷脂膜采用硫酸铵溶液冲洗、水化 得到空白脂质体，经过滤膜过滤处理，备用； 4) 将步骤3)得到的空白脂质体放入透析袋中，利用生理盐水37°C恒温透析3-5h，然 后将透析后的空白脂质体加入到步骤1)制备的水相中，加热至40-50°C，孵化20-30min，经 60-70°C旋转蒸发除去丙二醇和乙醇，得到地克珠利脂质体粗品； 5) 将步骤4)得到的地克珠利脂质体粗品进行离心处理，将离心后的沉淀物冻干，即可 得到地克珠利脂质体精品。
3. 根据权利要求2所述的一种地克珠利脂质体的制备方法，其特征在于：所述丙二醇 和乙醇的体积比为2:1。
4. 根据权利要求2所述的一种地克珠利脂质体的制备方法，其特征在于：所述PBS缓 冲液的pH值为6. 8-7. 2。
5. 根据权利要求2所述的一种地克珠利脂质体的制备方法，其特征在于：步骤3)所述 硫酸铵溶液的浓度为300mmol/L，用量为25-30份。
6. 根据权利要求2所述的一种地克珠利脂质体的制备方法，其特征在于：步骤3)所述 经过滤膜过滤处理为用1. 0 U m和0. 45 y m滤膜过滤处理。
7. 根据权利要求2所述的一种地克珠利脂质体的制备方法，其特征在于：步骤5)所述 离心处理的条件为：4°C，10000_12000r/min，离心 20-40min。
8. 根据权利要求2所述的一种地克珠利脂质体的制备方法，其特征在于：将步骤5)制 得的地克珠利脂质体精品溶于PBS缓冲液中，得到精制地克珠利脂质体溶液，再将精制地 克珠利脂质体溶液进一步浓缩，经真空冻干，得到地克珠利脂质体冻干制剂。
【文档编号】A61K9/19GK104398479SQ201410744939
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月9日 优先权日:2014年12月9日
【发明者】李建正, 徐进, 郭俊清 申请人:郑州后羿制药有限公司