基于天然高分子多层复合医用敷料及其制备方法与流程

本发明属于医用技术领域，具体涉及基于天然高分子多层复合医用敷料及其制备方法和应用。

技术背景

目前医用敷料在使用上有诸多的不便，有的敷料使用不可降解的聚丙烯腈材料作为支架，造成医源性污染，同时，敷料吸收渗出液同时和创面发生粘连，造成揭除时损伤新生组织。另一方面多以棉纤维制成的纱布，棉球等，虽然有一定的吸湿和保护作用，但在愈合过程中易粘连伤口，从而造成二次损伤，给患者造成极大的痛苦。随着各国医学界对止血材料止血性能要求的提高，开发性能优异的止血敷料成为一种趋势。由于天然高分子具有无毒、生物相容性好和可降解性等特性，从而在止血敷料的研究中得到高度重视。据文献报道，Tang N等人(Tang N,Cai WZ,Deng L,Li SJ,Wang XJ,Li C.Preparation and property of closed dressing intelligent scaffolds.Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu yu Linchuang Kangfu.2010；14(29):5325-5328.)用壳聚糖、明胶、聚乙烯醇通过共混之后冻干制备了密闭性伤口敷料用于伤口愈合，结果表明可明显的增强敷料的吸水性、含水量和透气性，但对于高分子材料的选择、高分子材料的复合方式以及材料的生物毒性都值得进一步研究和探讨。

常见的天然高分子主要有：海藻酸钠、壳聚糖、透明质酸、明胶、和羧甲基纤维素钠等。海藻酸钠(Sodium Algenate，SA)是存在于褐藻类中的天然高分子，是从褐藻或细菌中提取出来的天然多糖，其生物相容性好、毒性低、具有止血、抑菌、促进创面愈合的作用。壳聚糖(Chitosan，CS)在大自然中广泛存在，是天然多糖脱乙酰的衍生物，由葡萄糖胺(脱去乙醜基部分)和乙醜基葡萄糖胺(乙醜化的部分)组成，它是一种环境友好型的天然高分子。壳聚糖不仅具有无毒无害、良好生物相容性，生物可降解性等优点，还具有抗癌性、抗菌性、止血性和增强人体免疫能力等诸多优点，被广泛应用于组织工程、药物载体材料以及伤口敷料等方面。透明质酸(Hyaluronic acid，HA)又名玻尿酸，是存在于生物组织中细胞外基质中的一种酸性粘多糖。由β-D-N-乙酰胺基葡萄糖和β-D-葡萄糖磺酸为结构单元的以β-1,4-糖苷链连成的一种链状高分子。由于其良好的生物相容性和生物降解性而被广泛的应用于组织工程等领域。明胶(Gelatin，GE)是一种可溶性的多肽混合物，通过酸或碱提取，由牛或猪皮肤所含胶原部分水解制的。和胶原的三螺旋结构不同，明胶由单链分子组成。明胶，由于其生物相容性和随温度改变取凝胶化的特性，广泛应用在生物医学方面。羧甲基纤维素钠(CMC)是纤维素醚类中产量最大的、用途最广的、使用最为方便的产品。其无臭、无味、无毒以及吸湿性，具有优良的水溶性、粘胶性、乳合性、扩散性、抗酶性及稳定性，被广泛应用于食品医药行业。

本发明通过配置不同的天然高分子溶液，用多步冷冻干燥法制备出多层复合天然高分子医用敷料，其具有柔性好、生物相容性优、较好的吸水性、透气性、黏附性和抗菌作用。它既能吸收创面渗液，保证充分引流，又能将渗液部分保留在敷料中，维持一个仿效创面生理性愈合的局部湿润环境，有利于伤口肉芽组织和上皮细胞再生，加速创面愈合。

技术实现要素：

本发明的目的是基于天然高分子多层复合医用敷料及其制备方法，采用上述的制备方法得到的敷料具有天然高分子基、层层复合以及互穿网络结构并且具有很好的生物相容性、透气性、透湿性、吸液性和保液性能。

实现上述目的，本发明采用的如下技术方案：

(1)海藻酸钠溶液的制备：将海藻酸钠溶解于蒸馏水中，配置成质量分数为1～4％的海藻酸钠溶液，用电动搅拌器搅拌至完全溶解，真空脱泡24h，放置待用。

(2)天然高分子溶液的制备：将天然高分子分别进行溶解，配置成质量分数为1～4％的天然高分子溶液，用电动搅拌器搅拌至完全溶解，真空脱泡24h，放置待用。

(3)海藻酸钙冻干海绵的制备：将配置好的海藻酸钠溶液注入模具中，-20～-70℃低温预冷冻1～5h，然后在-80～-10℃温度内，1～600Pa真空度内，将冻结的海藻酸钠溶液在冷冻干燥机中冷冻干燥24～48h，得到海藻酸钠冻干海绵，然后在1～5％交联剂溶液中浸泡1-5h进行交联，蒸馏水清洗，然后50～80℃烘箱中干燥至横重，得到海藻酸钙海绵。

(4)基于天然高分子多层复合医用敷料的制备：将预先准备好的天然高分子溶液涂覆于海藻酸钙冻干海绵一侧，-20～-70℃低温预冷冻1～5h，然后在-80～-10℃温度内，1～600Pa真空度内，将涂覆有天然高分子溶液的海藻酸钙海绵在冷冻干燥机中冷冻干燥24～48h，得到冻干复合海绵其第一层为海藻酸钙层，第二层为单层或多层天然高分子，然后将海藻酸钠溶液再次涂覆于天然高分子层一侧，-20～-70℃低温预冷冻1～5h，然后在-80～-10℃温度内，1～600Pa真空度内，将多层复合海绵在冷冻干燥机中冷冻干燥24～48h后在1～5％交联剂溶液中浸泡1-5h进行交联，蒸馏水清洗，然后50～80℃烘箱中干燥至横重，得到第一层为海藻酸钙，第二层为单层或多层天然高分子，第三层为海藻酸钙的多层复合医用敷料。

具体地，所述天然高分子为壳聚糖、透明质酸、明胶和羧甲基纤维素钠中的一种或几种。

具体地，所述第二层天然高分子层为壳聚糖、透明质酸、明胶和羧甲基纤维素钠中单一一种或几种层层复合。

具体地，所述的冷冻温度-80～-10℃，真空度1～600Pa，冷冻时间12～48h。

具体地，所述海藻酸钠分子量Mw＝2×10³-40×10³g·mol^-1，壳聚糖分子量Mw＝1×10⁴-3×10⁴g·mol^-1，透明质酸分子量Mw＝8×10⁵-12×10⁵g·mol^-1，明胶分子量Mw＝6×10⁴-30×10⁴g·mol^-1，羧甲基纤维素钠分子量Mw＝1.8×10⁴-2.8×10⁴g·mol^-1。

具体地，所述的冷冻温度-80～-10℃，真空度1～600Pa，冷冻时间12～48h。

具体地，所述交联剂溶液为氯化钙的水溶液、氯化钙的乙醇溶液中的一种或几种。

具体地，所述制备的医用敷料为多层天然高分子复合海绵，该敷料可用于生物医药技术领域。

本发明具有以下优点：

1.本发明的多层复合海绵医用敷料的制备方法采用天然高分子为原料，通过冷冻干燥的技术，以氯化钙为交联剂，制备出第一层为海藻酸钙，第二层为单层或多层天然高分子，第三层为海藻酸钙的医用敷料海绵。该敷料全部采用天然高分子为基材，具有无毒、生物降解、生物相容性以及容易获得性且采用多层复合的方法，制备工艺新颖、简便、生产成本低，便于天然高分子制备的医用敷料的推广使用。

2.该方法制备的多层复合敷料海绵优于单纯的天然高分子敷料海绵以及简单共混的敷料海绵，可对传统的伤口敷料进行有效的替代，用于治疗手术伤口、烧烫伤创面等各种类型的皮肤创伤。

附图说明

图1是多层复合医用敷料的结构示意图；

图中：海藻酸钙层1、单层或多层天然高分子层2、海藻酸钙层3.

图2是多层复合医用敷料的俯视图数码照片；

图3是多层复合医用敷料的表面形态扫描电镜图；

图4是多层复合医用敷料的正视图数码照片；

图5是多层复合医用敷料的表面形态扫描电镜图；

图6是多层复合医用敷料的横截面扫描电镜图。

具体实施例

实施例一

将1g海藻酸钠溶解于100g蒸馏水中，配置成质量分数为1％的海藻酸钠溶液，用电动搅拌器搅拌至完全溶解，真空脱泡24h，备用。将1g壳聚糖溶于100g 1％(v/v)甲酸溶液中，配置成1％的壳聚糖溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将海藻酸钠溶液分装到模具中，将模具置于低温冰箱中预冻，-20℃预冻1h，然后将模具置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，干燥后脱模得到干燥的海藻酸钠海绵，然后在1％氯化钙乙醇溶液中交联固化2h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重，得到海藻酸钙冻干海绵，备用。将壳聚糖溶液涂覆于海藻酸该冻干海绵一侧，-20℃低温预冷冻1h，，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到冻干复合海绵其第一表层为海藻酸钙层，第二层为壳聚糖层。然后海藻酸钠溶液涂覆于壳聚糖一侧，-20℃低温预冷冻1h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，在1％氯化钙乙醇溶液中交联固化2h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重，得到第一层为海藻酸钙、第二层为壳聚糖、第三层为海藻酸钙的多层复合医用敷料海绵(图1)。数码相机进行实物图拍摄俯视图(图2)。通过扫描电镜观察利用实施案例1所制备的医用敷料表明微观形貌(图3)。

实施例二

将2g海藻酸钠溶解于100g蒸馏水中，配置成质量分数为2％的海藻酸钠溶液，用电动搅拌器搅拌至完全溶解，真空脱泡24h，备用。将2g明胶溶于100g蒸馏水中，配置成2％的明胶溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将海藻酸钠溶液分装到模具中，将模具置于低温冰箱中预冻，-30℃预冻2h，然后将模具置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于20Pa以下，于-40℃处理28h，干燥后脱模得到干燥的海藻酸钠海绵，然后在2％氯化钙水溶液中交联固化1h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重得到海藻酸钙海绵。将明胶溶液涂覆于海藻酸钙冻干海绵一侧，-30℃低温预冷冻2h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于20Pa以下，于-40℃处理28h，得到冻干复合海绵其第一表层为海藻酸钙层，第二层为明胶层。最后将海藻酸钠溶液涂覆于明胶一侧，-30℃低温预冷冻2h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于20Pa以下，于-40℃处理28h，在2％氯化钙水溶液中交联固化1h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重，得到第一层为海藻酸钙、第二层为明胶、第三层为海藻酸钙的多层复合医用敷料海绵。数码相机进行实物图拍摄正视图(图4)。通过扫描电镜观察利用实施案例2所制备的医用敷料表明微观形貌(图5)。通过扫描电镜观察利用实施案例所制备医用敷料的横截面微观形貌(图6)。

实施例三

将3g海藻酸钠溶解于100g蒸馏水中，配置成质量分数为3％的海藻酸钠溶液，用电动搅拌器搅拌至完全溶解，真空脱泡24h，备用。将3g壳聚糖溶于100g 1％(v/v)甲酸溶液中，配置成3％的壳聚糖溶液，充分搅拌使其均匀备用。将3g羧甲基纤维素钠溶于100g蒸馏水中，配置成3％的羧甲基纤维素钠溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将海藻酸钠溶液分装到模具中，将模具置于低温冰箱中预冻，-40℃预冻3h，然后将模具置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于30Pa以下，于-60℃处理30h，干燥后脱模得到干燥的海藻酸钠海绵，然后在3％氯化钙水溶液中交联固化3h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重，得到海藻酸钙冻干海绵。将壳聚糖溶液涂覆于海藻酸钙冻干海绵一侧，-40℃低温预冷冻3h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于30Pa以下，于-60℃处理30h，得到冻干复合海绵其第一表层为海藻酸钠层，第二层为壳聚糖层。然后将羧甲基纤维素钠溶液涂覆于壳聚糖一侧，-40℃低温预冷冻3h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于30Pa以下，于-60℃处理30h，得到第一层为海藻酸钠、第二层为壳聚糖-羧甲基纤维素钠的复合海绵。最后将海藻酸钠溶液涂覆于羧甲基纤维素钠一侧，-40℃低温预冷冻3h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于30Pa以下，于-60℃处理30h，在3％氯化钙水溶液中交联固化3h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重，得到第一层为海藻酸钙、第二层为壳聚糖-羧甲基纤维钠、第三层为海藻酸钙的多层复合医用敷料海绵。

实施例四

将4g海藻酸钠溶解于100g蒸馏水中，配置成质量分数为4％的海藻酸钠溶液，用电动搅拌器搅拌至完全溶解，真空脱泡24h，备用。将4g透明质酸溶于100g蒸馏水中，配置成4％的透明质酸溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将4g明胶溶于100g蒸馏水中，配置成4％的明胶溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将海藻酸钠溶液分装到模具中，将模具置于低温冰箱中预冻，-50℃低温预冷冻4h，，然后将模具置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，干燥后脱模得到干燥的海藻酸钠海绵，然后在1％氯化钙乙醇溶液中交联固化2h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，得到海藻酸钙冻干海绵。到将透明质酸溶液涂覆于海藻酸钙冻干海绵一侧，-50℃低温预冷冻4h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到冻干复合海绵其第一表层为海藻酸钠层，第二层为透明质酸层。然后将明胶溶液涂覆于透明质酸一侧，-50℃低温预冷冻4h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到第一层为海藻酸钠、第二层为透明质酸-明胶的复合海绵。最后将海藻酸钠溶液涂覆于明胶一侧，-50℃低温预冷冻4h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，在1％氯化钙乙醇溶液中交联固化2h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，得到第一层为海藻酸钙、第二层为透明质酸-明胶、第三层为海藻酸钙的多层复合医用敷料海绵。

实施例五

将1g海藻酸钠溶解于100g蒸馏水中，配置成质量分数为1％的海藻酸钠溶液，用电动搅拌器搅拌至完全溶解，真空脱泡24h，备用。将1g羧甲基纤维素钠溶于100g蒸馏水中，配置成1％的羧甲基纤维素钠溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将1g明胶溶于100g蒸馏水中，配置成1％的明胶溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将海藻酸钠溶液分装到模具中，将模具置于低温冰箱中预冻，-60℃低温预冷冻5h，，然后将模具置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，干燥后脱模得到干燥的海藻酸钠海绵，然后在1％氯化钙乙醇溶液中交联固化2h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重，得到海藻酸钙冻干海绵。将羧甲基纤维素钠溶液涂覆于海藻酸该冻干海绵一侧，-60℃低温预冷冻5h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到冻干复合海绵其第一表层为海藻酸钠层，第二层为羧甲基纤维素钠层。然后将明胶溶液涂覆于羧甲基纤维素钠一侧，-60℃低温预冷冻5h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到第一层为海藻酸钠、第二层为羧甲基纤维素钠-明胶的复合海绵。最后将海藻酸钠溶液涂覆于明胶一侧，-60℃低温预冷冻5h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，在1％氯化钙乙醇溶液中交联固化2h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重，得到第一层为海藻酸钙、第二层为羧甲基纤维素钠-明胶、第三层为海藻酸钙的多层复合医用敷料海绵。

实施例六

将1g海藻酸钠溶解于100g蒸馏水中，配置成质量分数为1％的海藻酸钠溶液，用电动搅拌器搅拌至完全溶解，真空脱泡24h，备用。将1g壳聚糖溶于100g 1％(v/v)甲酸溶液中，配置成1％的壳聚糖溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将1g羧甲基纤维素钠溶于100g蒸馏水中，配置成1％的羧甲基纤维素钠溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将1g明胶溶于100g蒸馏水中，配置成1％的明胶溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将海藻酸钠溶液分装到模具中，将模具置于低温冰箱中预冻，-70℃预冻1h，然后将模具置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，干燥后脱模得到干燥的海藻酸钠海绵，然后在1％氯化钙乙醇溶液中交联固化2h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重，得到海藻酸钙冻干海绵，备用。将壳聚糖溶液涂覆于海藻酸该冻干海绵一侧，-70℃低温预冷冻1h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到冻干复合海绵其第一表层为海藻酸钙层，第二层为壳聚糖层。然后羧甲基纤维素钠溶液涂覆于壳聚糖一侧，-70℃低温预冷冻1h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到第一层为海藻酸钙、第二层-羧甲基纤维素钠的多层复合海绵。将明胶溶液涂覆于羧甲基纤维素钠一侧，-70℃低温预冷冻1h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到第一层为海藻酸钙、第二层-羧甲基纤维素钠-明胶的多层复合海绵。最后将海藻酸钠溶液涂覆于明胶一侧，-70℃低温预冷冻1h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，在1％氯化钙乙醇溶液中交联固化2h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重，得到第一层为海藻酸钙、第二层为壳聚糖-羧甲基纤维素钠-明胶、第三层为海藻酸钙的多层复合医用敷料海绵。

实施例七

将2g海藻酸钠溶解于100g蒸馏水中，配置成质量分数为2％的海藻酸钠溶液，用电动搅拌器搅拌至完全溶解，真空脱泡24h，备用。将2g明胶溶于100g蒸馏水中，配置成2％的明胶溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将2g透明质酸溶于100g蒸馏水中，配置成2％的透明质酸溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将2g羧甲基纤维素钠溶于100g蒸馏水中，配置成2％的羧甲基纤维素钠溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将海藻酸钠溶液分装到模具中，将模具置于低温冰箱中预冻，-30℃预冻2h，然后将模具置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于20Pa以下，于-40℃处理28h，干燥后脱模得到干燥的海藻酸钠海绵，然后在2％氯化钙水溶液中交联固化1h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重得到海藻酸钙海绵。将明胶溶液涂覆于海藻酸钙冻干海绵一侧，-30℃预冻2h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于20Pa以下，于-40℃处理28h，得到冻干复合海绵其第一表层为海藻酸钙层，第二层为明胶层。然后透明质酸溶液涂覆于明胶一侧，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到第一层为海藻酸钙、第二层为明胶-透明质酸的多层复合海绵。将羧甲基纤维素钠溶液涂覆于羧甲基纤维素钠一侧，-30℃预冻2h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到第一层为海藻酸钙、第二层为明胶-透明质酸-羧甲基纤维素钠的多层复合海绵。最后将海藻酸钠溶液涂覆于明胶一侧，-30℃预冻2h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于20Pa以下，于-40℃处理28h，在2％氯化钙水溶液中交联固化1h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，蒸馏水清洗多次后于50℃真空干燥箱中干燥至恒重，得到第一层为海藻酸钙、第二层为明胶-透明质酸-羧甲基纤维素钠、第三层为海藻酸钙的多层复合医用敷料海绵。

实施例八

将4g海藻酸钠溶解于100g蒸馏水中，配置成质量分数为4％的海藻酸钠溶液，用电动搅拌器搅拌至完全溶解，真空脱泡24h，备用。将4g壳聚糖溶于100g 1％(v/v)甲酸溶液中，配置成4％的壳聚糖溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将4g透明质酸溶于100g蒸馏水中，配置成4％的透明质酸溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将4g明胶溶于100g蒸馏水中，配置成4％的明胶溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将4g羧甲基纤维素钠溶于100g蒸馏水中，配置成4％的羧甲基纤维素钠溶液，充分搅拌使其均匀，备用。将海藻酸钠溶液分装到模具中，将模具置于低温冰箱中预冻，-50℃低温预冷冻4h，，然后将模具置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，干燥后脱模得到干燥的海藻酸钠海绵，然后在1％氯化钙乙醇溶液中交联固化2h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，得海藻酸钙冻干海绵。将壳聚糖溶液涂覆于海藻酸钙冻干海绵一侧，-50℃低温预冷冻4h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到冻干复合海绵其第一表层为海藻酸钠层，第二层为壳聚糖层。然后将透明质酸溶液涂覆于壳聚糖一侧，-50℃低温预冷冻4h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到第一层为海藻酸钠、第二层为壳聚糖-透明质酸的复合海绵。然后将明胶溶液涂覆于透明质酸一侧，-50℃低温预冷冻4h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到第一层为海藻酸钠、第二层为壳聚糖-透明质酸-明胶的复合海绵。然后将羧甲基纤维素钠溶液涂覆于明胶一侧，-50℃低温预冷冻4h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，得到第一层为海藻酸钠、第二层为壳聚糖-透明质酸-明胶-羧甲基纤维素钠的复合海绵。最后将海藻酸钠溶液涂覆于羧甲基纤维素钠一侧，-50℃低温预冷冻4h，置于冷冻干燥机中，控制干燥过程中真空度低于15Pa以下，于-50℃处理24h，在1％氯化钙乙醇溶液中交联固化2h，固化完成后将海绵放在50℃真空烘箱中干燥至恒重，得到第一层为海藻酸钙、第二层为壳聚糖-透明质酸-明胶-羧甲基纤维素钠、第三层为海藻酸钙的多层复合医用敷料海绵。