本发明属于生物提取技术领域，具体涉及一种无回苦味罗汉果甜甙的提取方法。
背景技术：
罗汉果Siraitia grosvenorii，属双子叶植物纲葫芦科罗汉果属植物的果实，主要产于广西、广东、湖南、江西等地。罗汉果的干燥果实为椭圆或圆形，外壳棕褐色或烟熏色，附有大量细小黑色柔毛，比鹅蛋略大。干果较轻，种子、果皮和果肉均可入药。罗汉果的营养价值极高，含有大量的糖类、蛋白质、维生素、脂肪酸、多种人体必需的氨基酸和微量元素。
罗汉果果实中分离并鉴定出了赛门甙Ⅰ(sianenosideⅠ)、罗汉果甜甙ⅡE(eogrosideⅡE)、罗汉果甜甙Ⅲ(mogrosideⅢ)、罗汉果甜甙ⅢE(mogrosideⅢE)、罗汉果甜甙Ⅳ(ogrosideⅣ)、罗汉果甜甙Ⅴ(mogrosideⅤ)、罗汉果甜甙A、罗汉果新甙等葫芦烷素三萜甙类物质，除罗汉果甜甙Ⅳ无甜味，罗汉果新甙为苦味外，均为甜味物质，其中罗汉果甜甙Ⅴ的甜度最高，相当于蔗糖的300倍，且甜味纯正、无异味、回味感强、热稳定性好，可作为食品、菜肴的甜味剂，是糖尿病人的理想糖代品。罗汉果甜甙Ⅴ热稳定性好，在100℃水溶液中稳定，在120℃连续加热12h以上仍不会被破坏，属非发酵物质，利于加工贮存。
目前，从罗汉果中获得甜甙的方法主要有以下两种，一是水提加树脂分离法，将罗汉果破碎后装入提取罐中，加水提取，多次提取后，合并提取液，过滤，上树脂进行吸附分离，用乙醇或甲醇洗脱，洗脱液去醇后，喷雾干燥而成；二是醇提膜分离法，其工艺是将罗汉果破碎，装入提取罐中，加入乙醇进行提取，多次提取后，合并提取液，过滤，将滤液通过膜分离浓缩，浓缩液真空干燥而成。然而上述方法提取的罗汉果甜甙中含有罗汉果新甙，导致罗汉果甜甙中有强烈的后苦味，影响了罗汉果提甜甙的口感并限制了其作为天然甜味剂的应用。
技术实现要素：
本发明解决的技术问题是克服现有技术提取的罗汉果甜甙中带有强烈的后苦味，提供一种无回苦味罗汉果甜甙的提取方法。
本发明提供的技术方案是无回苦味罗汉果甜甙的提取方法，包括以下步骤：
1)将罗汉果甜甙加水溶解后，上DM130大孔树脂，先用水洗脱至无色，然后用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，将洗脱液回收乙醇，得到浸膏；
2)将浸膏加水溶解，上D101+大孔树脂，用水洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，即得。
所述罗汉果甜甙的制备方法如下：将罗汉果加入其重量5～10倍的乙醇回流提取3次，每次提取1～2h，合并提取液，过滤，收集滤液，回收乙醇，干燥，即为罗汉果甜甙。罗汉果中含有大量的蛋白质、葡萄糖和果糖，采用乙醇为溶媒，乙醇不利于蛋白质和果糖的溶解，可以减少杂质的溶出，对后续纯化有益。乙醇体积浓度为40～50％为佳，乙醇浓度过高会对蛋白质产生凝聚作用，使得蛋白质滞留在颗粒的内部孔道中，反而增加罗汉果甜甙的扩散阻力，降低终产品的收率。乙醇浓度过低则杂质含量较大，影响终产品的纯度。
步骤1)中，水的用量为罗汉果甜甙重量的8～15倍。第一次上DM130大孔吸附树脂柱，可吸附溶液中的罗汉果甜甙以及少量色素类成分，溶液上柱流速为0.3～0.5BV/h，水的洗脱流速为1～2BV/h，用水洗脱可优先将色素洗脱下来，乙醇的洗脱速度为0.5～0.6BV/h，可将树脂中吸附的罗汉果甜甙洗脱下来。乙醇体积浓度为75～80％为宜。
步骤2)中，根据罗汉果新甙的分子质量、大小以及极性，对D101大孔树脂进行改进，使其对罗汉果新甙的吸附力增强，而对其他甜甙的吸附力减弱，当采用水进行洗脱时，除罗汉果新甙之外的其他皂苷与大孔树脂的吸附力较弱，优先洗脱出来，而罗汉果新甙则留在树脂中，从而达到脱去罗汉果新甙的作用。
所述D101+树脂为苯乙烯型非极性共聚体，其技术参数为：
1)外观：乳白色不透明球状颗粒；
2)粒径范围0.3～1.25mm≥95％；
3)含水量：60～75％；
4)湿真密度：1.05～1.15g/ml；
5)湿视密度：0.60～0.65g/ml；
6)比表面积：520～550㎡/g；
7)平均孔径：
8)孔隙率：42～46％；
9)孔容：1.18～1.24ml/g。
步骤2)中，水的用量为浸膏重量的10～15倍。溶液上柱流速为0.3～0.5BV/h，水的洗脱流速为0.5～0.6BV/h。
与现有技术相比，本发明提取的罗汉果甜甙中不含有罗汉果新甙，甜味纯正，无回苦味。
具体实施方式
以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。
实施例1
1)将罗汉果粉碎，加入其重量5倍的体积浓度为40％的乙醇回流提取3次，每次提取1h，合并提取液，过滤，取滤液回收乙醇，干燥，即为罗汉果甜甙；
2)向罗汉果甜甙中加入其重量8倍的水溶解后上DM130大孔树脂，溶液上柱流速为0.3BV/h，先用水洗脱至无色，水的洗脱流速为1BV/h，然后用体积浓度为75％的乙醇洗脱，乙醇的洗脱速度为0.5BV/h，收集乙醇洗脱液，将洗脱液回收乙醇，得到浸膏；
3)将浸膏加入其重量10倍的水溶解，上D101+大孔树脂，溶液上柱流速为0.3BV/h，用水洗脱，水的洗脱流速为0.5BV/h，收集水洗脱液，浓缩，干燥，即得罗汉果甜甙。经品尝，罗汉果甜甙甜味纯正，无回苦味。将罗汉果甜甙进行HPLC分析，其中罗汉果新甙的含量为0.001％。
实施例2
1)将罗汉果粉碎，加入其重量10倍的体积浓度为50％的乙醇回流提取3次，每次提取2h，合并提取液，过滤，取滤液回收乙醇，干燥，即为罗汉果甜甙；
2)向罗汉果甜甙中加入其重量15倍的水溶解后上DM130大孔树脂，溶液上柱流速为0.5BV/h，先用水洗脱至无色，水的洗脱流速为2BV/h，然后用体积浓度为80％的乙醇洗脱，乙醇的洗脱速度为0.6BV/h，收集乙醇洗脱液，将洗脱液回收乙醇，得到浸膏；
3)将浸膏加入其重量15倍的水溶解，上D101+大孔树脂，溶液上柱流速为0.5BV/h，用水洗脱，水的洗脱流速为0.6BV/h，收集水洗脱液，浓缩，干燥，即得罗汉果甜甙。经品尝，罗汉果甜甙甜味纯正，无回苦味。将罗汉果甜甙进行HPLC分析，其中罗汉果新甙的含量为0.002％。
实施例3
1)将罗汉果粉碎，加入其重量8倍的体积浓度为45％的乙醇回流提取3次，每次提取1.5h，合并提取液，过滤，取滤液回收乙醇，干燥，即为罗汉果甜甙；
2)向罗汉果甜甙中加入其重量10倍的水溶解后上DM130大孔树脂，溶液上柱流速为0.4BV/h，先用水洗脱至无色，水的洗脱流速为1.5BV/h，然后用体积浓度为78％的乙醇洗脱，乙醇的洗脱速度为0.55BV/h，收集乙醇洗脱液，将洗脱液回收乙醇，得到浸膏；
3)将浸膏加入其重量12倍的水溶解，上D101+大孔树脂，溶液上柱流速为0.4BV/h，用水洗脱，水的洗脱流速为0.55BV/h，收集水洗脱液，浓缩，干燥，即得罗汉果甜甙。经品尝，罗汉果甜甙甜味纯正，无回苦味。将罗汉果甜甙进行HPLC分析，其中罗汉果新甙的含量为0.0018％。
实施例4
1)将罗汉果粉碎，加入其重量5倍的体积浓度为50％的乙醇回流提取3次，每次提取1h，合并提取液，过滤，取滤液回收乙醇，干燥，即为罗汉果甜甙；
2)向罗汉果甜甙中加入其重量15倍的水溶解后上DM130大孔树脂，溶液上柱流速为0.3BV/h，先用水洗脱至无色，水的洗脱流速为2BV/h，然后用体积浓度为75％的乙醇洗脱，乙醇的洗脱速度为0.6BV/h，收集乙醇洗脱液，将洗脱液回收乙醇，得到浸膏；
3)将浸膏加入其重量10倍的水溶解，上D101+大孔树脂，溶液上柱流速为0.5BV/h，用水洗脱，水的洗脱流速为0.5BV/h，收集水洗脱液，浓缩，干燥，即得罗汉果甜甙。经品尝，罗汉果甜甙甜味纯正，无回苦味。将罗汉果甜甙进行HPLC分析，其中罗汉果新甙的含量为0.0014％。