本发明属于水产动物药理学实验技术领域，更具体涉及一种中华鳖生物药饵的制备方法，同时还涉及一种生物药饵在中华鳖中的用途，它适用于以活体生物为药物载体,诱导中华鳖摄食生物药饵研究药物在中华鳖体内的药理学规律。
背景技术：
中华鳖(Trionyx sinensis)又名水鱼、甲鱼、团鱼等，肉食性，以鱼、虾、软体动物等为主食，多夜间觅食，是我国主要的龟鳖类养殖品种。2013年全国中华鳖养殖产量约有33万吨，采用的养殖模型有温室养殖模型、温室+外塘养殖模式等。在人工养殖条件下，养殖户为了提高中华鳖的产量，不断增加中华鳖的养殖密度，中华鳖的疾病也随之增多，养殖户为了防治中华鳖的疾病也不得不使用药物，而目前由于缺乏药物在中华鳖体内的处置过程和药理学作用研究，无法对中华鳖进行合理用药。而中华鳖因具有牙齿，且咬劲大，传统的口灌给药方法研究药物的药理学作用不易开展是中华鳖药理学研究的技术难点。
技术实现要素：
本发明目的是在于提供了一种中华鳖生物药饵的制备方法。制备过程简单，操作方便，在药物溶液中添加诱食剂一方面可以诱导中华鳖摄食生物药饵，另一方面可以掩蔽药物的特殊气味，使中华鳖更易接受生物药饵；以中华鳖喜食的生物为载体，使药物在中华鳖胃肠道中的吸收更接近实际情况。
本发明的另一个目的是在于提供了一种生物药饵在中华鳖药理学研究中的应用，采用生物药饵喂食中华鳖避免了对中华鳖直接强行口灌药物溶液给中华鳖带来的损伤；使用生物药饵更接近中华鳖胃内的实际情况(药物与中华鳖摄食的食物共存的状态)，更有利于揭示药物在中华鳖胃肠道中吸收的真实状态。适于通过生物载体给中华鳖给药，研究药物在中华鳖体内的药理学作用。
为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：
一种中华鳖生物药饵的制备方法，其步骤是：
A、选取适宜规格(8－12cm)的生物载体A；
B、称取一定量(0.2g～5g)的药物B(用公式(1)计算出称取的药量)，用溶剂C将药物溶解；
C、向药物溶液中加入0.1～0.5g诱食剂D，用蒸馏水稀释该混合液至100mL；
D、用1～2mL玻璃注射器抽取0.5～1.5mL药物溶液，(本发明以平均体重为300g的中华鳖为例，按20mg/kg中华鳖体重的给药剂量计算抽取的体积)；
E、将药物溶液缓慢注射到生物载体A的体内制成了一种生物药饵。
所述的生物载体A是蚯蚓、小虾、黄粉虫、蝇蛆、蚌类、螺类、大型水潘中的任意一种生物载体；
所述的药物B是盐酸强力霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、硫酸新霉素、盐酸氯苯胍、甲苯咪唑、阿苯哒唑、替米考星中的任意一种溶剂；
所述的溶剂C是乙腈、甲醇、N,N–二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、蒸馏水中的任意一种溶剂；
所述的诱食剂D是L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸(L-氨基琥珀酸)、甘氨酸(氨基乙酸)、L-组氨酸、L-异亮氨酸、二甲基-β-丙酸噻亭、硫代甜菜碱、鱼肝油、丙酸、核苷酸、酰胺、三甲基胺内脂中的任意一种诱食剂；
其中：称取的药量单位为g；给药剂量的单位为mg/kg中华鳖体重；中华鳖平均体重的单位为kg；配制药液的定容体积的数值。
一种生物药饵在中华鳖药理学研究中的应用，其步骤是：
a、将中华鳖翻过来，腹甲朝天，背甲朝下，中华鳖会将脖子会从甲壳中伸出；
b、用镊子夹起生物药饵放到中华鳖的口边，中华鳖会主动咬食生物药饵；
c、按照中华鳖的用药剂量给中华鳖喂食了生物药饵后，将中华鳖翻过来；
d、用药后，按照设计的时间点0.5h～2h、3h～9h、10h～24h、36h～72h、96h～144h、168h～196h等进行采样，将中华鳖翻过来，腹甲朝天，背甲朝下，将中华鳖的头部抵在竖直的平板上，避免中华鳖伸头出来咬伤操作者，一手按住中华鳖的腹部，一手将中华鳖的一条腿拉出，用注射器吸取中华鳖的血液，3500r/min，离心4－6min，取上层血浆，置-20℃冰箱中冷冻保存备用；
e、取中华鳖的肌肉、裙边、肝脏、肾脏等组织，用匀质器将组织匀浆，置-20℃冰箱中冷冻保存备用。
本发明从中华鳖的食性考虑以喜食的生物饵料做药物载体，通过诱食的方式让中华鳖主动采食生物药饵，此方式更接近中华鳖胃肠内食物和药物共存的实际情况，因此，获得的中华鳖的药理学数据更接近于药物在中华鳖体内真实的吸收、分布和排泄规律，获得的具体药理学参数如吸收速率(Ka)、达峰时间(Tpeak)、峰浓度(Cmax)、消除半衰期(T1/2)等。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：
(1)该发明针对难以对中华鳖进行口灌的技术难点，提供了一种药物生物载体诱导中华鳖摄食的方法；
(2)本发明从中华鳖的食性考虑以喜食的生物饵料做药物载体较以往采用药物溶液或在饲料中添加药物的给药方式更接近药物在中华鳖体内的实际情况；
(3)本发明在药物溶液中添加诱食剂或避味剂避免了药物本身的异味对中华鳖摄食的影响。
(4)本发明采用生物药饵对药物在中华鳖体内起到了缓释的作用，使药物的吸收速率变小、达峰时间变长、峰浓度变小、消除半衰期变长，例如生物药饵中药物的吸收速率(Ka)为药物溶液的1/5～1/3倍，达峰时间(Tpeak)是1～8倍，峰浓度(Cmax)是3/5～1倍，消除半衰期(T1/2)为1～3倍。
(5)中华鳖生物药饵的给药的操作时间短约是强行口灌药物溶液操作时间的1/5。
(6)生物药饵的制备时间短约是制备饲料药饵时间的1/10。
具体实施方式
实施例1：
一种中华鳖生物药饵的制备方法，其步骤是：
A、取10cm长活体生物载体A用作药物的载体；
B、按照公式(1)计算出称取的药物量，如中华鳖强力霉素的给药剂量为20mg/kg体重时，应称取0.6g盐酸强力霉素，并用蒸馏水对盐酸强力霉素进行溶解；
C、向药物溶液中加入0.1g诱食剂D二甲基-β-丙酸噻亭，用蒸馏水稀释并定容至100mL，配制成含盐酸强力霉素为6mg/mL，诱食剂D的浓度二甲基-β-丙酸噻亭为1mg/mL的药物溶液；
D、用玻璃注射器抽取1mL药物溶液，(本发明以平均体重为300g的中华鳖为例，按20mg/kg中华鳖体重的给药剂量计算抽取的体积)；
E、将药物溶液缓慢注射到生物载体A的蚯蚓体内制成了一种生物药饵。
采用该方法制备的生物药饵充分考虑了中华鳖的食性，避免了药物的异味，诱导中华鳖主动摄食，克服了对中华鳖口灌药物的技术难点，使药物在中华鳖体内的药理学过程更接近实际。本发明采用生物药饵对药物在中华鳖体内起到了缓释的作用，使药物的吸收速率(Ka)变小、达峰时间(Tpeak)变长、峰浓度(Cmax)变小、消除半衰期(T1/2)变长，例如生物药饵中药物的吸收速率(Ka)为药物溶液的1/5～1/3倍，达峰时间(Tpeak)是1～8倍，峰浓度(Cmax)是3/5～1倍，消除半衰期(T1/2)为1～3倍；中华鳖生物药饵的给药的操作时间短约是强行口灌药物溶液操作时间的1/5；生物药饵的制备时间短约是制备饲料药饵时间的1/10。
所述的生物载体A是蚯蚓、小虾、黄粉虫、蝇蛆、蚌类、螺类、大型水潘中的任意一种生物载体；
所述的药物B是盐酸强力霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、硫酸新霉素、盐酸氯苯胍、甲苯咪唑、阿苯哒唑、替米考星中的任意一种溶剂；
所述的溶剂C是乙腈、甲醇、N,N–二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、蒸馏水中的任意一种溶剂；
所述的诱食剂D是L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸(L-氨基琥珀酸)、甘氨酸(氨基乙酸)、L-组氨酸、L-异亮氨酸、二甲基-β-丙酸噻亭、硫代甜菜碱、鱼肝油、丙酸、核苷酸、酰胺、三甲基胺内脂中的任意一种诱食剂；
其中：称取的药量单位为g；给药剂量的单位为mg/kg；中华鳖平均体重的单位为kg；配制药液的定容体积的数值。例如药物的给药剂量为20mg/kg，中华鳖的平均体重为0.3kg，药液的体积的数值为100，按照公式(1)计算的称取的药量应为0.6g。
实施例2：
一种生物药饵在中华鳖药理学研究中的应用，其步骤是：
a、将中华鳖翻过来，腹甲朝天，背甲朝下，中华鳖会将脖子会从甲壳中伸出，这时我们用镊子夹住的含药物的蚯蚓放到中华鳖嘴边，中华鳖会很快咬住含药饵的蚯蚓，松开镊子让中华鳖将药饵吞下；
b、给中华鳖喂食生物药饵后，将中华鳖翻过来，腹甲朝下，背甲朝上；
c、中华鳖被诱食生物药饵后于0.5h或1或2h、3h或4或6或9h、10h或14或18或20或24h、36h或45或64或68或72h、96h或115或133或138或144h、168h或172或180或196h分别采集其血液、肌肉、裙边、肝脏、肾脏等组织；
d、中华鳖血浆和组织的采集方法：将中华鳖翻过来，腹甲朝天，背甲朝下，将中华鳖的头部抵在竖直的平板上，避免中华鳖伸头出来咬伤操作者，一手按住中华鳖的腹部，一手将中华鳖的一条腿拉出，用注射器吸取中华鳖的血液，3500r/min，离心4或5或6min，取上层血浆，置-20℃冰箱中冷冻保存备用；
e、取中华鳖的肌肉、裙边、肝脏、肾脏等组织，用匀质器将组织匀浆，置-20℃冰箱中冷冻保存备用；
本发明从中华鳖的食性考虑以喜食的生物饵料做药物载体较以往采用药物溶液或在饲料中添加药物的给药方式更接近药物在中华鳖体内的实际情况；生物药饵对药物在中华鳖体内起到了缓释的作用，使药物的吸收速率(Ka)变小、达峰时间(Tpeak)变长、峰浓度(Cmax)变小、消除半衰期(T1/2)变长，例如生物药饵中药物的吸收速率(Ka)为药物溶液的1/5～1/3倍，达峰时间(Tpeak)是1～8倍，峰浓度(Cmax)是6/10～1倍，消除半衰期(T1/2)为1～3倍。
实施例3：
一种中华鳖生物药饵的制备方法，其步骤是：
A、取10cm长活体生物载体A用作药物的载体；
B、按照公式(1)计算出称取的药物量，如中华甲砜霉素的给药剂量为17.5mg/kg体重时，应称取0.525g甲砜霉素，用溶剂C溶解；
C、向药物溶液中加入0.1g诱食剂D二甲基-β-丙酸噻亭，用蒸馏水稀释并定容至100mL，配制成含甲砜霉素为5.25mg/mL的药物溶液，诱食剂D的浓度二甲基-β-丙酸噻亭为1mg/mL的溶液；
D、玻璃注射器抽取1mL药物溶液，(本发明以平均体重为300g的中华鳖为例，按17.5mg/kg中华鳖体重的给药剂量计算抽取的体积)；
E、将药物溶液缓慢注射到生物载体A蚯蚓体内制成生物药饵；
采用该方法制备的生物药饵充分考虑了中华鳖的食性，避免了药物的异味，诱导中华鳖主动摄食，克服了对中华鳖口灌药物的技术难点，使药物在中华鳖体内的药理学过程更接近实际。
所述的生物载体A是蚯蚓、小虾、黄粉虫、蝇蛆、蚌类、螺类、大型水潘中的任意一种生物载体；
所述的药物B是盐酸强力霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、硫酸新霉素、盐酸氯苯胍、甲苯咪唑、阿苯哒唑、替米考星中的任意一种溶剂；
所述的溶剂C是乙腈、甲醇、N,N–二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、蒸馏水中的任意一种溶剂；
所述的诱食剂D是L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸(L-氨基琥珀酸)、甘氨酸(氨基乙酸)、L-组氨酸、L-异亮氨酸、二甲基-β-丙酸噻亭、硫代甜菜碱、鱼肝油、丙酸、核苷酸、酰胺、三甲基胺内脂中的任意一种诱食剂；
其中：称取的药量单位为g；给药剂量的单位为mg/kg中华鳖体重；中华鳖平均体重的单位为kg；配制药液的定容体积的数值。例如药物的给药剂量为17.5mg/kg，中华鳖的平均体重为0.3kg，药液的体积的数值为100，按照公式(1)计算的称取的药量应为0.525g。
实施例4：
一种生物药饵在中华鳖药理学研究中的应用，其步骤是：
a、将中华鳖翻过来，腹甲朝天，背甲朝下，中华鳖会将脖子会从甲壳中伸出，这时用镊子夹住的含药物的蚯蚓放到中华鳖嘴边，中华鳖会很快咬住含药饵的蚯蚓，松开镊子让中华鳖将含药饵的蚯蚓吞下；
b、给中华鳖喂食生物药饵后，将中华鳖翻过来；
c、中华鳖被诱食生物药饵后于0.5h或1或3h、3h或4.5或6.5或9h、10h或15或19或22或24h、36h或46或65或69或72h、96h或116或135或140或144h、168h或171或185或196h分别采集其血液、肌肉、裙边、肝脏、肾脏等组织；
d、中华鳖血浆和组织的采集方法：将中华鳖翻过来，腹甲朝天，背甲朝下，将中华鳖的头部抵在竖直的平板上，避免中华鳖伸头出来咬伤操作者，一手按住中华鳖的腹部，一手将中华鳖的一条腿拉出，用注射器吸取中华鳖的血液，3500r/min，离心4或5或6min，取上层血浆，置-20℃冰箱中冷冻保存备用；
e、取中华鳖的肌肉、裙边、肝脏、肾脏等组织，用匀质器将组织匀浆，置-20℃冰箱中冷冻保存备用。
本发明从中华鳖的食性考虑以喜食的生物饵料做药物载体较以往采用药物溶液或在饲料中添加药物的给药方式更接近药物在中华鳖体内的实际情况；生物药饵对药物在中华鳖体内起到了缓释的作用，使药物的吸收速率(Ka)变小、达峰时间(Tpeak)变长、峰浓度(Cmax)变小、消除半衰期(T1/2)变长，例如生物药饵中药物的吸收速率(Ka)为药物溶液的1/5～1/3倍，达峰时间(Tpeak)是1～8倍，峰浓度(Cmax)是3/5～1倍，消除半衰期(T1/2)为1～3倍。