本发明涉及一种用于降血糖降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的复方组合物及其在制备降血糖及降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的药物或保健品中的应用。
背景技术：
糖尿病(diabetes)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点。
糖尿病主要分1型糖尿病和2型糖尿病，其中在糖尿病患者中，2型糖尿病所占的比例约为95％，并且2型糖尿病随着生活水平的提高和生活方式的改变，愈来愈高发和年轻化。由于血糖持续升高，引起全身代谢紊乱，可隐匿性导致心脏、血管、肾、神经等多组织和器官的慢性并发症，以致最终因功能衰竭而危及生命。
现有技术中，用于治疗糖尿病的药物主要为西药和一些中西药复方制剂。这些药物虽然能有效降低血糖，但由于持久使用会导致药物对机体的损害，因而其使用被严格限制。目前也出现用于治疗糖尿病的中药制剂，虽然能一定程度降低血糖，但其治疗价值仍然有限。本发明通过合理组合不同中药、并借助于统计学原理、均匀设计等数学方法、对其进行降血糖作用以及其它重要作用的深入研究，为其开发成为新型降血糖药物提供依据。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术的不足提供一种效果显著的降血糖降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的复方组合物。
本发明同时还要提供本发明降血糖降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的复方组合物在制备用于预防和/或治疗糖尿病的药物中的应用以及在制备用于预防糖尿病及其并发症的保健品中的应用。
为解决以上技术问题，本发明采取的一种技术方案是:
一种降血糖降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的复方组合物，以重量百分比计，其原料配方包括鱼腥草20％-75％，桃花15-70％，黄柏10％-30％。
优选地，所述复方组合物为所述原料的提取物的混合物，所述原料的提取物为利用溶媒对所述原料进行提取得到的提取物，该过程可采用中药提取领域常规的方法和条件来实施，提取的溶剂可采用常用的那些，例如水、乙醇等醇类溶剂，丙酮等，提取温度可以为例如45℃～100℃，没有特别限制。根据本发明的一个具体方面，所述溶媒为选自水、甲醇、乙醇、丙酮中的一种或多种的组合。在一个具体实施方式中，所述溶媒是体积分数为30％～80％的乙醇水溶液。
根据本发明，所述原料的提取物可以为液体形式(溶媒为水时)或固体形式。根据本发明的一个优选方面，所述原料的提取物为固体形式，且该固体形式通过将液体形式的提取物进行真空干燥、喷雾干燥或微波干燥制备。提取物可以是初提物或者由初提物经过进一步分离操作所得保留活性成分的提取物。
根据本发明，复方组合物还可进一步包括除所述鱼腥草、桃花和黄柏之外的其他具有降血糖、降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症功能的活性物质。所述活性物质可以是本领域已知的那些，例如双胍类药物二甲双胍或噻唑烷二酮类药物匹格列酮或Glut2抑制剂卡格列净等，例如桑椹及其它中药材初提物等。
本发明采取的又一技术方案是：一种如上所述的降血糖降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的复方组合物的制备方法，其包括分别采用溶媒对鱼腥草、桃花、黄柏进行提取获得各自的提取液，然后混合提取液，干燥制得所述组合物；或者，将鱼腥草、桃花、黄柏原料混合后，采用溶媒进行提取，提取液经喷雾干燥制得所述组合物。
进一步地，上述方法可采用中药提取领域常规的方法和条件来实施，提取的溶剂可采用常用的那些，例如水、乙醇等醇类溶剂，丙酮等，提取温度可以为例如45℃～100℃，没有特别限制。根据本发明的一个具体方面，所述溶媒为选自水、甲醇、乙醇、丙酮中的一种或多种的组合。在一个具体实施方式中，所述溶媒是体积分数为30％～80％的乙醇水溶液。
根据本发明，所述干燥的方式可以为真空干燥、喷雾干燥、微波干燥等，没有特别限制。
本发明还涉及如上所述的降血糖降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的复方组合物在制备降血糖及降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的药物中的应用。
本发明还涉及如上所述的降血糖降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的复方组合物在制备降血糖及降血脂、预防糖尿病及其并发症的保健品中的应用。
本发明所述药物或保健品通常由本发明的复方组合物与药学可接受的药物载体制成的各种类型的制剂。其中，所述载体是指药学领域常规的满足制剂要求而选用的任何药物载体，包括稀释剂如淀粉、糊精、微晶纤维素等；湿润剂如水、甘油、聚乙烯吡咯烷酮等；润滑剂如硬脂酸镁、微粉硅胶等。优选地，药物或保健品为口服制剂，进一步地，所述口服制剂可以是胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、散剂、液体制剂、缓释制剂等。
本发明所述药物或保健品，不仅可以包含本发明的复方组合物，还可以包含用于降血糖、降血脂的其它活性成分而不会降低复方组合物的功效，其它活性成分可以是本领域已知的那些，例如双胍类药物二甲双胍或噻唑烷二酮类药物匹格列酮或Glut2抑制剂卡格列净等，例如桑椹及其它中药材初提物。如此，可从不同作用环节、不同作用机制来协同治疗高血脂、糖尿病及其并发症和相关的其它代谢性疾病。
实验证明，本发明的复方组合物用于治疗糖尿病尤其是2型糖尿病取得了良好的效果。本领域的一般技术人员应当理解，治疗时的给药剂量取决于包括相关疾病的性质和严重程度，患者的年龄、体重及个体反应，给药途径及给药次数在内的众多因素。剂量给药可以是单一剂量形式或多剂量形式。对于具体的个体而言，剂量和用药方式依赖于症状和病人的自身情况，并且可以由医生根据具体的需要进行调整。
由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：
本发明复方组合物通过将鱼腥草，桃花和黄柏按特定比例组合，取得了协同增效作用，既保留组合中各中药基本的有益作用，稳定降血糖，优势互补，又明显降低单味中药长期用药或高剂量用药时可能带来的潜在损害。本发明复方组合物可用于促进胰岛组织修复，逐渐恢复胰岛功能，以及逐渐纠正代谢紊乱、抑制高血糖和高血脂引发的系列代谢紊乱、抑制微炎症，抑制糖尿病心血管并发症，可用于制备预防和/或治疗糖尿病及其并发症的药物或者保健品。
附图说明
图1为实施例6中主动脉病理检查结果示意图，其中A：正常对照组；B：模型对照组；C：组合物四高剂量组；D：组合物四低剂量组；E：脂必妥组。
具体实施方式
研究表明，鱼腥草抗菌、抗病毒、抗炎作用明确，也能改善糖尿病脂质代谢。鱼腥草含有多种酚类物质，对不同有害物质具有抗损伤作用，也常用于肾脏疾病；黄柏具有抗菌、降压、抗溃疡、免疫抑制以及降血糖等功效，黄柏生物碱具有抗心衰、降低血压以及保护血管内皮、对心血管系统有一定保护作用。在《随息居饮食谱》描述桃花“补血活血,生津涤热,令人肥健”，现代研究表明桃花黄酮、多糖具有显著地抗氧化活性，对氧化应激引起的组织损伤有良好的抑制作用，桃花黄酮也能调节中枢神经系统功能，改善神经系统功能，调节糖代谢。将三者有机组合，达到对糖尿病及其心血管、肾脏、神经等多种并发症的切实有效治疗。
本发明借助于相关数学研究方法和应用，对这些中药进行科学组合、配比，体现组合的特点和优势，使得对糖尿病以及与糖尿病相关的代谢性疾病的预防和治疗相得益彰，并较好避免各自的不良作用或弱点。
本发明与已有技术比较具有下列优点：
1)保留组合中各中药基本的有益作用，稳定降血糖，优势互补，并明显降低单味中药长期用药或高剂量用药时可能带来的潜在损害。
2)促进胰岛组织修复，逐渐恢复胰岛功能，
3)逐渐纠正代谢紊乱、抑制高血糖和高血脂引发的系列代谢紊乱、抑制微炎症，抑制糖尿病心血管并发症。
以下结合具体的实施例对本发明作进一步详细的説明，但本发明并不限于这些实施例。
实施例一、不同组合物的乙醇提取物对正常小鼠血糖和甘油三酯的影响
1.受试药材：鱼腥草，来源江苏，经鉴定为三白草科蕺菜属植物干燥地上部分；黄柏，来源四川，经鉴定为芸香科黄檗属植物干燥树皮；桃花，来源山东，经鉴定为蔷薇科桃亚属植物的花。
2.组成：
组合一：鱼腥草75％，桃花15％，黄柏10％；
组合二：鱼腥草40％，桃花30％，黄柏30％；
组合三：鱼腥草20％，桃花70％，黄柏10％。
组合四：鱼腥草44％，桃花38％，黄柏18％。
3.受试药物制备：以上各组合按重量百分比例，各取200g，用60％乙醇作为溶媒，料液比首次提取1:15、二次1:10，在80度下回流提取2次，每次1小时，回收乙醇并浓缩至1g/ml(按生药总量计)冷冻备用，临用时用蒸馏水适当稀释至应用浓度。
4.效果测定：正常ICR小鼠，18-20g，雌雄各半，适应性饲养三天后，按要求随机分为如表5组(10只/组，雌雄各半)，改换高糖高脂饲料喂饲(在常规饲料加工中掺入8％蔗糖、15％猪油、0.5％胆固醇、0.25％胆酸钠)，开始给药(8g/kg体重,以生药总量计，灌胃给药；空白对照组给予等体积蒸馏水，0.1ml/10g)，每天一次，给药19天当晚禁食，次日经小鼠眼眶静脉丛釆血，检测小鼠空腹血糖和血脂，常规给药并给予葡萄糖负荷(2g/kg，ig)，经小鼠眼眶静脉丛釆血，分别测定血清糖负荷前和后不同时间点血糖和空腹甘油三酯。结果表明，各组合对正常小鼠空腹血脂、餐后血糖升高具有明显的抑制作用，但作用特点有一定差别，见表1。
表1.不同组合物的乙醇提取物对正常小鼠血糖和甘油三脂的影响(mean±SEM)
n＝10，与空白对照比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例二、不同组合物的乙醇提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖和甘油三酯的影响
参照实施例一的组成和提取方法，同量制备各组合浓缩液冷冻备用。另加设一组实验为组合药物组(组合二+匹)：组合二与10mg/kg吡格列酮联合给药。
效果测定：正常ICR小鼠，22-26g，雄性，适应性饲养三天后，改换高脂饲料喂饲一周，空腹12小时，静脉注射四氧嘧啶55mg/kg(Sigma，alloxan,Lot&Filling code:143780112609058),72小时后进行口服葡萄糖耐量试验(葡萄糖2g/kg，ig)，将葡萄糖负荷2h血糖≥11mmol/L的小鼠按要求随机分成如下6组(10只/组)。各组按要求给药(参照实施例一，8g/kg,ig)，模型对照组给予等体积蒸馏水，每天一次，给药19天当晚禁食，次日经小鼠眼眶静脉丛釆血，检测小鼠空腹血糖和甘油三酯，常规给药并给予葡萄糖负荷(2g/kg，ig)，检测糖负荷后各时间点血糖变化。结果表明，各组合对四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖、血脂、餐后血糖升高均有良好的抑制作用，见表2。
表2.不同组合物的乙醇提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖
和甘油三酯的影响(mean±SEM)
组合一和组合四n＝9，余n＝10；与模型对照比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例三、不同组合物的水提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖和甘油三酯的影响
同实施例二的各组成和使用量，用水作溶媒，料液比首次1:15、二次1:10，在90度下回流提取2次，每次1小时，同量制备各复方浓缩液冷冻备用。另
加设一组实验为组合药物组(组合二+匹)：组合二与10mg/kg吡格列酮联合给药。
取ICR小鼠，参照实施例二方法，制备四氧嘧啶糖尿病小鼠，将葡萄糖负荷(2g/kg,ig)2h血糖≥11mmol/L的小鼠按要求随机分成如下6组(10只/组)。各组按要求给药(参照实施例二，0.1ml/10g,ig)，模型对照组给予等体积蒸馏水，每天一次，给药19天当晚禁食，次日经小鼠眼眶静脉丛釆血，检测小鼠空腹血糖和甘油三酯，常规给药并给予葡萄糖负荷(2g/kg，ig)，检测糖负荷后各时间点血糖变化。结果表明，各组合水提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖、血脂、餐后血糖升高也有良好的抑制作用，见表3。
表3.不同组合物的水提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖和甘油三酯的影响(mean±SEM)
n＝10，与模型对照比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例四、组合四与各中药不同组合对四氧嘧啶糖尿病小鼠的作用比较
1.参照实施例一,制备组合物四浓缩液；另外，同法制备系列对照物(第4组～第9组)浓缩液备用，系列对照物组成详见表4附注说明。
2.取ICR小鼠，同实施例二，制备四氧嘧啶糖尿病小鼠，将葡萄糖负荷(2g/kg,ig)2h血糖≥11mmol/L的小鼠按要求随机分成如下1～9组(10只/组)。各组按要求给药(0.1ml/10g体重,ig)，每天一次，模型对照组给予等体积蒸馏水，给药19天当晚禁食，次日经小鼠眼眶静脉丛釆血，检测小鼠空腹血糖和血脂，常规给药并给与葡萄糖负荷(2g/kg，ig)，同上测定各时间点血糖变化。至给药24天当晚禁食，次日取血测定血清β2-微球蛋白(β2-微球蛋白放免试剂盒，北京北方生物技术研究所有限公司)、NLRP3、BTC、GLP-1、PYY以及糖化血清蛋白(NLRP3ELISA试剂盒，BTC ELISA试剂盒，GLP-1ELISA试剂盒，PYYELISA试剂盒，南京雨桐生物科技有限公司；糖化血清蛋白试剂盒，南京建成生物技术公司)。
3.结果表明，组合四对高血糖小鼠的空腹血糖、餐后血糖和空腹血脂升高具有良好的抑制作用；鱼腥草单独应用对血糖无明显影响；黄柏单独应用，对空腹血糖和餐后血糖的作用明显弱于组合四，对甘油三酯影响不明显；桃花、鱼腥草/桃花组合、鱼腥草/黄柏组合或桃花/黄柏各组合，对空腹血糖和餐后血糖以及甘油三酯的作用也均明显弱于组合四。即组合四，能更有效的抑制血糖和血脂的升高，见表4。
表4.组合四与各中药不同组合对四氧嘧啶糖尿病小鼠的作用比较(mean±SEM，mmol/L)与空白对照比较，*P<0.05，**P<0.01；与2组比较，aP<0.05，bP<0.01,与3组比较，cP<0.05。
注二：本表n是指给药20天后各组生存的小鼠数。
注二：1.模型对照(蒸馏水0.1ml/10g)；2.组合四高剂量(10g/kg,以生药计)3.组合四低剂量(5g/kg)；4.桃花4.6g/kg+鱼腥草5.4g/kg；5.鱼腥草7g/kg+黄柏3g/kg；6.桃花6.8g/kg+黄柏3.2g/kg；7.鱼腥草为10g/kg；8.桃花10g/kg；9.黄柏10g/kg
β2-微球蛋白浓度的相对高低，提示糖尿病肾损伤的存在。试验结果表明，
组合四高、低剂量组和桃+鱼组合组能明显降低血清β2-微球蛋白，鱼腥草也有降低作用，提示对糖尿病肾病有一定的改善作用。
NLRP3炎性小体是调控炎症产生的分子开关，参与诸多慢性疾病体内非感染性炎性反应，与糖尿病微炎症、动脉粥样硬化等关系极为密切，胰腺组织自身可NLRP3炎症小体依赖性产生IL-1β而造成对胰岛细胞的持续损害。试验结果表明，组合四高、低剂量组，桃+鱼组合组和鱼腥草组对血清NLRP3炎症小体浓度升高有较明显抑制作用，提示可降低因炎症造成的对胰岛组织的损伤和保护胰岛正常组织结构及功能。
β细胞素(BTC)可调节多种不同胰腺分泌前体细胞的生长或分化、将不同种类前体细胞转化为胰岛素分泌细胞，增加胰岛β细胞数。对改善糖尿病机体胰岛的组织结构和功能、提高外周组织对胰岛素敏感性，使机体血糖维持在稳定水平具有重要意义。试验结果表明，仅组合四高、低剂量组对β细胞素的产生有较明显的增强作用，其它各组均未见有显著影响，提示组合四对糖尿病恢复具有良好的治疗价值，见表5。
表5.组合四与各中药不同组合对四氧嘧啶糖尿病小鼠的作用比较(mean±SEM，mmol/L)
注：此表n是指给药25天后各组生存的小鼠数。与模型对照比较，*P<0.05，**P<0.01；与2组比较，a P<0.05，bP<0.01。
另外，组合四高、低剂量对肠道激素也有良好的调节作用，尤其是显著提高血清GLP-1的浓度，其它各组虽有一定作用但不显著。组合四高、低剂量也能显著降低血清尿酸水平，提示对其它代谢异常性疾病也有一定的益处。各组对PYY的作用均无明显影响。见表6。
表6.组合四与各中药不同组合对四氧嘧啶糖尿病小鼠的作用比较(mean±SEM，mmol/L)
注：此表n是指给药25天后各组生存的小鼠数。
与模型对照比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例五、组合四与其它各中药对正常小鼠肝肾功能的影响
参照实施例四,制备组合四浓缩液和系列对照浓缩液备用(系列对照物组成详见表7附注说明)
效果测定：正常ICR小鼠，18-20g，雌雄各半，适应性饲养三天后，按要求随机分为如表7组(10只/组，雌雄各半)，各组按要求开始给药(空白对照组给予等体积蒸馏水)，每天一次，连续给药20天，禁食12小时，摘眼球釆血，常规制备血清，检测小鼠肝、肾功能相关指标，见表7。
结果表明：在本实验条件下，与空白对照比较，以黄柏和黄柏/桃花合用对肝肾功能有潜在影响，尤其是黄柏对血清白蛋白(Alb.)的抑制作用较为明显，组合四高、低剂量对肝肾功能影响不明显，其它用药各组与空白对照相比，均无明显影响。表明，适当比例联合应用此三种中药，不会明显改变组合的安全性。
表7.组合四与与其它各中药对正常小鼠肝肾功能的影响(mean±SEM)
注一：除黄柏n＝9，其余n＝10。与空白对照比较，*P<0.05，**P<0.01。
注二：1.模型对照(蒸馏水0.1ml/10g)；2.组合四高剂量(10g/kg,以生药计)3.组合四低剂量(5g/kg)；4.黄柏3.2g/kg+桃花6.8g/kg；5.鱼腥草7g/kg+黄柏3g/kg；6.鱼腥草5.4g/kg+桃花4.6g/kg；7.黄柏10g/kg。
鉴于以上各种不同作用的比较，包括对血糖、甘油三酯、糖化血清蛋白、血清β-2微球蛋白、炎症小体NLRP3以及β-细胞素等等的综合作用，表明以鱼腥草、黄柏、桃花适当比例联合应用，其主要作用较各中药单独或其它组合应用，作用明显增强、优势突出，而且联合用药毒性并无明显升高，提示其临床潜在治疗作用具有优势。
实施例六、组合四对鹌鹑动脉粥样硬化的影响
参照实施例一,制备组合四浓缩液冻存备用。
雄性朝鲜黑羽鹌鹑，5周龄，46只，90-110g，适应性饲养3d后，随机取6只继续予以普通饲料用作正常对照，其余用高脂饲料喂养30天后，(每天饲料分2次给予，每只约16-20g/天)。禁食12h，翼静脉采血，分离血清测甘油三酯(TG)含量，按TG值相近原则随机分为5组，每组8只。
1)正常对照组；2)高脂对照组；3)组合四高剂量组6g/kg；4)组合四低剂量组3g/kg；5)脂必妥组400mg/kg(用0.5％CMC-Na混悬)。
各组每天按剂量分别灌胃给予相应的药物，正常对照组和高脂组给予相对体积溶媒(0.5％CMC-Na,0.5ml/100g,ig)，并按体重调整给药量，给药期间继续高脂饲料喂养。
各组连续灌胃给药30天，禁食12h，颈静脉取血，常规分离血清，测定血清中甘油三酯(TG)，总胆固醇(TC)，高密度脂蛋白(HDL)，低密度脂蛋白(LDL)浓度(各均购与中生北控生物科技股份有限公司)。取血后再取主动脉，10％中性甲醛保存，用于病理观察。
结果，相对于模型组，复方提取物高、低剂量均可不同程度降低血清中TG，TC，LDL，升高HDL/LDL比例，脂必妥显著降低TC，TG，LDL，见表8。
表8.组合四对动脉粥样硬化鹌鹑血脂的影响(mean±SEM，mmol)
与正常组比较，**P<0.01；与模型组比较，*P<0.05。
参见图1，主动脉病理检查表明，正常对照组鹌鹑主动脉内膜偶见少量脂质，无明显内膜增厚、内皮肿胀等病变，模型组鹌鹑主动脉内膜增厚，内皮肿胀、增生，内皮下脂质沉积，围绕部分动脉壁或大部分区域，中膜脂质沉积明显，可见泡沫细胞。与模型组鹌鹑主动脉病变比较，组合物四提取物可使动脉壁脂质沉积减少、内膜病变减轻、泡沫细胞减少，组合物四高、低剂量组作用相近，提示对糖尿病血管并发症具有潜在的抑制作用，脂必妥组主动脉脂质沉积程度也均较轻，内膜病变多数为轻微或轻度。
实施例七
一种降血糖降血脂、预防和/或治疗糖尿病及其并发症的复方组合物，可通过如下方法获得：取实施例4所得的浓缩液200ml，置于负压0.1MP、温度75度、24小时的真空干燥条件，可得干燥提取物(浸膏)约45.6—47.65g，其中干燥方法也可采用喷雾干燥、微波干燥等。本实施例的复方组合物可用作降血糖血脂、预防糖尿病及其并发症的保健品。
实施例八
一种药物制剂，为片剂，其可通过如下方法制备：取实施例一中组合一所得的复方组合物15g，加入可压性淀粉6g，糊精4g，混匀，采用40％乙醇湿法来制粒，降温至60℃以下进行干燥，整粒，加入滑石粉0.6g，混匀，压制成100片，复方组合物含量为0.15g/片。
本实施例的药物制剂可用于降血糖血脂、预防/治疗糖尿病及其并发症。
实施例九
一种药物制剂，为口服液，其可通过如下方法制备：取实施例三组合二所得的复方组合物5g，溶于400ml蒸馏水，制备溶液，用活性炭部分脱色，滤过，加蒸馏水制成1％的水溶液500ml，用微孔滤膜(Φ0.450μm)滤过，灭菌，无菌分装，每瓶10ml，封口。
本实施例的药物制剂可用于降血糖血脂、预防/治疗糖尿病及其并发症。
实施例十
一种本发明复方组合物与二甲双胍的复方制剂，其可通过如下方法制备：取实施例二组合二所得的复方组合物10g，二甲双胍10g，糊精5g，微晶纤维素15g，混匀，采用50％乙醇湿法来制粒，降温至60℃以下进行干燥，整粒，加入硬脂酸镁0.4g，混匀，灌制胶囊100粒，平均每粒胶囊含提取物0.1g，二甲双胍0.1g。本实施例的药物制剂可用于降血糖血脂、预防/治疗糖尿病及其并发症。
以上对本发明做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的范围内。