本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种纳米雄黄的生物炮制方法。
背景技术：
雄黄作为是一种富砷硫化矿物，在中国医药史上的应用已经有2000年的历史。对于它的记载最早见于《神农本草经》，在传统中医中雄黄用以治疗各种皮肤病，杀虫截虐，解毒祛痰。由于它具有一定的毒性，因此在此书中雄黄被列为中品，其化学式为As4S4，我国药用雄黄的晶型为α-As4S。
雄黄的毒性主要是由于砷离子的存在，可溶性砷离子的含量在1.696mg/g，因此长期大剂量地服用雄黄会导致砷的累积性中毒，甚至可以引发染色体变异，但通过控制它的入药剂量，雄黄也可以口服。中成药中很多复方制剂都含有雄黄的成分如：牛黄解毒片、安宫牛黄丸、复方黄黛片等。研究表明在正常剂量内短期服用这些中成药是相对安全的，因此只用总砷的含量去评价这些药物毒性往往有失公允，多项研究表明，雄黄在这些药物中确实是不可或缺的成分。研究表明，当雄黄颗粒达到纳米级的时候，雄黄的生物利用度、溶解度和胃肠吸收度都有很大的提高，其在体内的药代动力学也发生了相应的改变，吸收相增加消除相减低，毒性与传统方法炮制的雄黄相比也大大减小。
而生物浸出是一种通过微生物从矿石上提取有用金属的选矿方法，利用微生物在生命活动中自身的氧化和还原特性，使资源中的有用成分氧化或还原，以水溶液中离子态或沉淀的形式与原物质分离；研究表明利用嗜酸氧化硫杆菌对雄黄进行生物浸出，其雄黄的生物浸出液同雄黄一样具有良好的抗肿瘤效果。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单、成本低、低毒性及高效性的纳米雄黄的生物炮制方法。
为解决上述问题，本发明所述的一种纳米雄黄的生物炮制方法，包括以下步骤：
⑴制备纳米雄黄：
①在微米雄黄颗粒中加入其质量1~2倍的蒸馏水，混合均匀后即得雄黄-水混合物；
②将质地为二氧化锆（ZrO2）5mm粒径的研磨球、3mm粒径的研磨球、1mm粒径的研磨球按1：2：7的质量比混合，即得混合研磨球；
③将所述雄黄-水混合物与所述混合研磨球按1:1~25的质量比混合后，置于刚玉球磨罐中研磨，研磨结束后分离所述雄黄-水混合物和所述研磨球，该研磨后的所述雄黄-水混合物经真空干燥至恒重后即得纳米雄黄；
⑵纳米雄黄的生物炮制：
ⅰ制备浸出剂：将培养至对数期的菌株嗜酸氧化亚铁硫杆菌DLC-5（Acidithiobacillus ferrooxidans DLC-5）8000r/min离心10min，得到淡黄色菌泥，该淡黄色菌泥中加入其质量1~2倍的蒸馏水悬浮制成细菌混悬液，即得浸出剂母液；按照5%~20%的质量比将所述浸出剂母液加入到蒸馏水中，搅拌均匀，即得浸出剂；所述嗜酸氧化亚铁硫杆菌DLC-5在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2014362（保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2014年7月28日）；
ⅱ将所述纳米雄黄按照0.1%~1%的质量比加入所述浸出剂中，同时采用硫酸亚铁调整溶液的铁离子浓度为0g/L~9g/L，搅拌均匀后即得浸出液；
ⅲ所述浸出液采用体积浓度为20%的硫酸溶液或体积浓度为10%的氢氧化钠溶液调pH= 1.5~3.0后，于温度为25℃~ 40℃、转速为50~200转/min的条件下炮制24~120h，即得炮制后的纳米雄黄。
所述步骤③中刚玉球磨罐的容积为250mL，直径90mm，高度78mm，厚度7mm。
所述步骤③中研磨条件是指转速为200r/min~600r/min，时间为30min~150min。
所述步骤③中真空干燥条件是指温度为25~60℃。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明利用微生物对雄黄进行生物炮制，不会影响雄黄的药性，相对于传统雄黄炮制方法制得的雄黄，可以改善雄黄在水中溶解度低、毒性高、胃肠道吸收差、生物利用度低、临床治疗剂型单一、使用剂量大等缺点。
2、本发明操作简单、成本低。
具体实施方式
实施例1 一种纳米雄黄的生物炮制方法，包括以下步骤：
⑴制备纳米雄黄：
①在微米雄黄颗粒中加入其质量1倍的蒸馏水，混合均匀后即得雄黄-水混合物；
②将质地为二氧化锆（ZrO2）5mm粒径的研磨球、3mm粒径的研磨球、1mm粒径的研磨球按1：2：7的质量比混合，即得混合研磨球；
③将雄黄-水混合物与混合研磨球按1：1的质量比混合后，置于容积为250mL、直径90mm、高度78mm、厚度7mm的刚玉球磨罐中，在转速为200r/min的条件下研磨150min。研磨结束后分离雄黄-水混合物和研磨球，该研磨后的雄黄-水混合物于25℃经真空干燥至恒重后即得纳米雄黄。
⑵纳米雄黄的生物炮制：
ⅰ制备浸出剂：将培养至对数期的菌株嗜酸氧化亚铁硫杆菌DLC-5（Acidithiobacillus ferrooxidans DLC-5；嗜酸氧化亚铁硫杆菌DLC-5在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2014362，保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2014年7月28日）8000r/min离心10min，得到淡黄色菌泥，该淡黄色菌泥中加入其质量1倍的蒸馏水悬浮制成细菌混悬液，即得浸出剂母液；按照5%的质量比将浸出剂母液加入到蒸馏水中，搅拌均匀，即得浸出剂。
ⅱ将纳米雄黄按照0.1%的质量比加入所述浸出剂中，同时采用硫酸亚铁调整溶液的铁离子浓度为0g/L~9g/L，搅拌均匀后即得浸出液；
ⅲ浸出液采用体积浓度为20%的硫酸溶液调pH= 1.5~3.0后，于温度为25℃、转速为50转/min的条件下炮制120h，即得炮制后的纳米雄黄。
实施例2 一种纳米雄黄的生物炮制方法，包括以下步骤：
⑴制备纳米雄黄：
①在微米雄黄颗粒中加入其质量2倍的蒸馏水，混合均匀后即得雄黄-水混合物；
②将质地为二氧化锆（ZrO2）5mm粒径的研磨球、3mm粒径的研磨球、1mm粒径的研磨球按1：2：7的质量比混合，即得混合研磨球；
③将雄黄-水混合物与混合研磨球按1：25的质量比混合后，置于容积为250mL、直径90mm、高度78mm、厚度7mm的刚玉球磨罐中，在转速为600r/min的条件下研磨30min。研磨结束后分离雄黄-水混合物和研磨球，该研磨后的雄黄-水混合物于60℃经真空干燥至恒重后即得纳米雄黄。
⑵纳米雄黄的生物炮制：
ⅰ制备浸出剂：将培养至对数期的菌株嗜酸氧化亚铁硫杆菌DLC-5（Acidithiobacillus ferrooxidans DLC-5；嗜酸氧化亚铁硫杆菌DLC-5在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2014362，保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2014年7月28日）8000r/min离心10min，得到淡黄色菌泥，该淡黄色菌泥中加入其质量2倍的蒸馏水悬浮制成细菌混悬液，即得浸出剂母液；按照20%的质量比将浸出剂母液加入到蒸馏水中，搅拌均匀，即得浸出剂。
ⅱ将纳米雄黄按照1%的质量比加入所述浸出剂中，同时采用硫酸亚铁调整溶液的铁离子浓度为0g/L~9g/L，搅拌均匀后即得浸出液；
ⅲ浸出液采用体积浓度为10%的氢氧化钠溶液调pH= 1.5~3.0后，于温度为40℃、转速为200转/min的条件下炮制24h，即得炮制后的纳米雄黄。
实施例3 一种纳米雄黄的生物炮制方法，包括以下步骤：
⑴制备纳米雄黄：
①在微米雄黄颗粒中加入其质量1.5倍的蒸馏水，混合均匀后即得雄黄-水混合物；
②将质地为二氧化锆（ZrO2）5mm粒径的研磨球、3mm粒径的研磨球、1mm粒径的研磨球按1：2：7的质量比混合，即得混合研磨球；
③将雄黄-水混合物与混合研磨球按1：15的质量比混合后，置于容积为250mL、直径90mm、高度78mm、厚度7mm的刚玉球磨罐中，在转速为:400r/min的条件下研磨90min。研磨结束后分离雄黄-水混合物和研磨球，该研磨后的雄黄-水混合物于45℃经真空干燥至恒重后即得纳米雄黄。
⑵纳米雄黄的生物炮制：
ⅰ制备浸出剂：将培养至对数期的菌株嗜酸氧化亚铁硫杆菌DLC-5（Acidithiobacillus ferrooxidans DLC-5；嗜酸氧化亚铁硫杆菌DLC-5在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC NO：M 2014362，保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2014年7月28日）8000r/min离心10min，得到淡黄色菌泥，该淡黄色菌泥中加入其质量1.5倍的蒸馏水悬浮制成细菌混悬液，即得浸出剂母液；按照13%的质量比将浸出剂母液加入到蒸馏水中，搅拌均匀，即得浸出剂。
ⅱ将纳米雄黄按照0.5%的质量比加入所述浸出剂中，同时采用硫酸亚铁调整溶液的铁离子浓度为0g/L~9g/L，搅拌均匀后即得浸出液；
ⅲ浸出液采用体积浓度为20%的硫酸溶液调pH= 1.5~3.0后，于温度为30℃、转速为120转/min的条件下炮制80h，即得炮制后的纳米雄黄。