用于抑制肠道内乳杆菌属乳酸菌减少的组合物的制作方法

本专利申请主张基于申请日为2016年10月14日的日本专利申请2016-202465号的优先权，该在先专利申请中的全部公开内容通过引用而作为本说明书的一部分。

发明的背景

本发明涉及用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少的组合物。

背景技术：

以感染症治疗、细菌感染防止等为目的而大量使用了抗菌药。作为由抗菌药的使用引起的弊病，可举出由抗菌药的服用引起的肠内环境的恶化。可以认为这是因为，通过抗菌药的服用，不仅病原微生物减少，而且作为所谓有益细菌的双歧杆菌、乳酸菌等有用的细菌也减少，肠内菌群(肠内细菌群)、即肠内细菌的生态系统受到不良影响。其结果发生便秘、腹泻、恶心、头痛等症状。作为这样的弊病的对策，推荐在摄取抗菌药时，同时摄取活的有益细菌本身(益生菌)和/或同时摄取增加有益细菌的成分(益生元)。作为益生元的代表例，可举出将寡糖、食物纤维等肠道内有益细菌的增殖因子、乳酸菌、双歧杆菌等有益细菌本身通过胶囊等形态而制成补充剂的例子等。

有益细菌之中，作为乳酸菌的一种的lactobacillus(乳杆菌属)的细菌其本身作为益生菌的菌体而被广泛利用。然而报导了，乳杆菌属乳酸菌为革兰氏阳性的杆菌，抗菌药的敏感性高，因此如果施与抗菌药则显著减少(例如，非专利文献1)。因此，在抗菌药施与对象中，抑制肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少是重要的课题。

另一方面，近年来，作为新的益生元的成分，有双歧杆菌增殖促进物质(bgs：bifidogenicgrowthstimulator)的报导(非专利文献2)。具体而言，在非专利文献2中报导了费氏丙酸杆菌培养物的上清滤液使双歧杆菌特异性增殖。然而，也报导了双歧杆菌增殖促进物质对以乳酸菌为代表的双歧杆菌以外的肠内细菌实质上不显示增殖促进作用(参照非专利文献2的表1)。此外，报导了使用了含有双歧杆菌增殖促进物质的饲料组合物的、仔畜中的肠内菌群改善作用(专利文献1)。具体而言，在专利文献1中，报导了如果使仔畜摄取作为由丙酸菌产生的乳清发酵物的profec(商标)，则肠道内的双歧杆菌显著增加，相对于总菌数的占有率显著增加。另一方面，对于乳杆菌属乳酸菌显示不发生显著的增加(参照专利文献1的实施例1的表1)。这样，关于使肠道内乳杆菌属乳酸菌显著增殖的成分，迄今为止并未报导。此外，关于用于抑制由抗菌药引起的乳杆菌属乳酸菌的减少的尝试、其有效的方法和组合物，迄今为止未见报导。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第4073922号公报

非专利文献

非专利文献1：ヤクルト研究所研究報告集，第30号，1-6，2012

非专利文献2：biosciencemicrofloravol.18(2),73-80,1999

技术实现要素：

本发明的目的是提供可以抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少的组合物及其抑制方法。

本发明者们这次在人的临床试验中，使抗菌药施与前或施与中的患者摄取由丙酸菌产生的乳清发酵物，结果发现，与不摄取由丙酸菌产生的乳清发酵物的患者相比，可以显著抑制肠道内的乳杆菌属乳酸菌的减少。本发明是基于这样的认识而做出的。

根据本发明，提供以下发明。

(1)一种用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少的组合物，其包含由丙酸菌产生的乳清发酵物。

(2)根据(1)所述的组合物，上述丙酸菌为费氏丙酸杆菌(propionibacteriumfreudenreichii)。

(3)根据(1)或(2)所述的组合物，上述抗菌药为选自青霉素系抗菌药、头孢烯(cephem)系抗菌药、头孢菌素系抗菌药、碳青霉烯系抗菌药、β-内酰胺酶抑制剂、唑烷酮系抗菌药、新喹诺酮系抗菌药和大环内酯系抗菌药中的至少1种抗菌药。

(4)根据(1)～(3)中任一项所述的组合物，其每一天的施与量以由丙酸菌产生的乳清发酵物的干燥质量换算为0.15～200mg/kg体重。

(5)根据(1)～(4)中任一项所述的组合物，其为食品组合物或药品组合物。

(6)根据(1)～(5)中任一项所述的组合物，其为粉末状、液状、或片剂状的形态。

(7)一种由丙酸菌产生的乳清发酵物的使用，用于制造用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少的组合物。

(8)抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少的方法，其包含使上述对象摄取有效量的由丙酸菌产生的乳清发酵物的步骤。

(9)根据(8)所述的方法，其为与由抗菌药施与产生的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少相关的疾病或状态的改善方法。

(10)一种由丙酸菌产生的乳清发酵物，其用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少。

(11)一种由丙酸菌产生的乳清发酵物的使用，用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少。

根据本发明，使用由丙酸菌产生的乳清发酵物，能够有效地抑制抗菌药施与对象中的肠道内的乳杆菌属乳酸菌的减少。

附图说明

图1是显示施与抗菌药的经管营养患者(对照组)的粪便中的总菌数与乳杆菌属菌数的变化(对照组的试验)的图。＊：p＜0.05(与施与后第0天比较)。

图2是显示施与抗菌药的经管营养患者(组合物施与组)的粪便中的总菌数与乳杆菌属菌数的变化(组合物施与组的试验)的图。＊：p＜0.05(与施与后第0天比较)。

图3是将对照组和组合物施与组的粪便中的总菌数与乳杆菌属菌数进行比较的图。＊：p＜0.05。

图4是将对照组和组合物施与组的粪便中的双歧杆菌数进行比较的图。

具体实施方式

乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物

本发明的组合物是用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少的组合物，其包含由丙酸菌产生的乳清发酵物。如果使用由丙酸菌产生的乳清发酵物作为有效成分，则虽然不会抑制肠道内双歧杆菌的减少，但是可以显著抑制抗菌药施与前、施与中、或施与后的对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少是出乎意料的事实。

所谓“抗菌药施与对象”，是指施与抗菌药的预定(施与前)的对象、正在施与的(施与中的)对象或已施与的(施与后的)对象，优选是指通过抗菌药而肠道内的乳杆菌属乳酸菌处于被减少的预定、正在减少或已减少的对象。对象优选为人，但也可以为人以外(例如，马、牛等家畜、啮齿类、犬、猫等宠物、动物园等中饲养的鉴赏动物)，本发明中也包含这样的形态。

本发明的抗菌药只要是乳杆菌属乳酸菌显示敏感性的抗菌药，就没有特别限定，优选为乳杆菌属乳酸菌显示敏感性的抗生素。作为更具体的例子，可举出青霉素系抗菌药(例如，阿莫西林(ampc)、氨苄西林(abpc))、头孢烯系抗菌药(例如，头孢匹罗(cpr))、头孢菌素系抗菌药(例如，头孢他啶(caz))、碳青霉烯系抗菌药(例如，美罗培南(mepm))、β-内酰胺酶抑制剂、唑烷酮系抗菌药(例如，利奈唑胺(lzd))、新喹诺酮系抗菌药(例如，左氧氟沙星(lvfx)、帕珠沙星(pzfx))和大环内酯系抗菌药(例如，阿奇霉素(azm))、以及林可霉素系抗菌药、氨基糖苷系抗菌药、四环素系抗菌药、氯霉素系抗菌药、肽系抗菌药、磺胺剂、抗结核药、喹诺酮系抗菌药、抗病毒药、抗真菌药。抗菌药优选为青霉素系抗菌药(例如，阿莫西林(ampc)、氨苄西林(abpc))、头孢烯系抗菌药(例如，头孢匹罗(cpr))、头孢菌素系抗菌药(例如，头孢他啶(caz))、碳青霉烯系抗菌药(例如，美罗培南(mepm))、β-内酰胺酶抑制剂、唑烷酮系抗菌药(例如，利奈唑胺(lzd))、新喹诺酮系抗菌药(例如，左氧氟沙星(lvfx)、帕珠沙星(pzfx))和大环内酯系抗菌药(例如，阿奇霉素(azm))。

关于抗菌药的施与方法，只要肠道内乳杆菌属乳酸菌显示敏感性，就没有特别限定，例如，可以根据抗菌药施与对象和用途(例如，治疗目的或预防目的)，从经口摄取(或经口施与)、经肠施与、胃瘘、皮下施与、经静脉施与等适当选择。关于抗菌药的使用方法，只要是本领域技术人员就可以根据对象所具有的疾病、状态、用途来适当选择，例如，按照jaid/jas感染症治療ガイド2014(jaid/jas感染症治療ガイド·ガイドライン作成委員会编集)所记载的方法，只要是本领域技术人员，就可以适当选择。

乳杆菌属乳酸菌是革兰氏阳性的杆菌，作为有益细菌的一种是已知的。作为优选的乳杆菌属乳酸菌的具体例，根据人临床试验的结果，可举出保加利亚乳杆菌(lactobacillusbulgaricus)、约氏乳杆菌(l.johnsonii)、干酪乳杆菌(l.casei)、类干酪乳杆菌(l.paracasei)、加氏乳杆菌(l.gasseri)、瑞士乳杆菌(l.helveticus)、鼠李糖乳杆菌(l.rhamnosus)、嗜酸乳杆菌(l.acidophilus)、唾液乳杆菌(l.salivarius)、戊糖乳杆菌(l.pentosus)、植物乳杆菌(l.plantarum)、短乳杆菌(l.brevis)、路氏乳杆菌(l.reuteri)、生孢乳杆菌(l.sporogenes)等。已知乳杆菌属乳酸菌例如具有整肠作用(例如，对腹泻症、便秘、过敏性肠综合征的整肠作用)、免疫活化作用、幽门螺旋杆菌的除菌作用、过敏症、花粉症、哮喘等变态反应抑制作用、过敏性肠综合征(ibs)的改善作用、脂质代谢或内脏脂肪蓄积的改善作用、呼吸器疾病等感染症风险抑制作用、炎症性大肠炎的改善作用、子宫内膜症的改善作用、癌抑制作用、压力和qol的改善作用、糖尿病改善作用、氧化应激改善作用等生理活性。从具有上述生理活性方面考虑，期望乳杆菌属乳酸菌在肠道内存在一定数量的菌数。

肠道内乳杆菌属乳酸菌是指肠内细菌群所包含的乳杆菌属乳酸菌，优选为具有使肠内环境保持良好平衡的功能的乳酸菌。肠道内乳杆菌属乳酸菌数优选为每1g人粪便存在log10⁴个以上，更优选为log10⁵个以上，进一步优选为log10⁶个以上，进一步优选为log10⁷个以上。

本发明所使用的由丙酸菌产生的乳清发酵物通过将丙酸菌使用含有乳清的培养基进行培养来获得。

所谓丙酸菌，是指作为属于丙酸杆菌属(propionibacterium)的革兰氏阳性的厌氧性细菌，从糖类无氧地生成丙酸的微生物，自古以来被作为埃曼塔尔干酪等的起子来利用，其安全性被确认。本发明所使用的丙酸菌可举出例如，费氏丙酸杆菌(propionibacteriumfreudenreichii)、特氏丙酸杆菌(p.thoenii)、产丙酸丙酸杆菌(p.acidipropionici)、詹氏乳杆菌(p.jensenii)、贪婪丙酸杆菌(p.avidum)、疮疱丙酸杆菌(p.acnes)、嗜淋巴丙酸杆菌(p.lymphophilum)、颗粒丙酸杆菌(p.granulosam)，优选为费氏丙酸杆菌。它们可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

丙酸菌更优选为属于费氏丙酸杆菌的双歧杆菌增殖促进物质(bgs)产生菌，可举出例如，费氏丙酸杆菌et-3(保藏号：ferm-bp-8115)、费氏丙酸杆菌atcc6207、费氏丙酸杆菌atcc8262、费氏丙酸杆菌ifo12424、费氏丙酸杆菌ifo12426、费氏丙酸杆菌ifo12391，进一步优选为费氏丙酸杆菌et-3(保藏号：ferm-bp-8115)。

所谓乳清，也被称为乳清(whey)，是指从牛乳除去脂肪成分、酪蛋白、脂溶性维生素等后的剩下的透明的黄绿色水溶性成分。作为本发明所使用的乳清，可举出例如，乳清的原液(甜性乳清、酸性乳清等)、其浓缩物、其干燥物(乳清粉)、其冷冻物等、和它们的还原溶液、以及脱盐乳清、乳清蛋白质浓缩物(wpc)、乳清蛋白质精制物(wpi)、α-乳清蛋白(α-la)、β-乳球蛋白(β-lg)、免疫球蛋白、乳铁蛋白等、和它们的还原溶液、它们的乳清蛋白质分解物。乳清优选选自乳清的原液、乳清粉、wpc、wpi和它们的还原溶液、以及它们的蛋白酶分解物。它们可以使用1种，也可以组合使用2种以上。

乳清相对于培养基，作为蛋白质的量，优选含有1～5质量％，更优选含有1.5～4.0质量％。此外，糖质相对于培养基含有1～4质量％，更优选含有1.5～3.0质量％。可以使用以成为这样的培养基的组成的方式调节了乳清的添加量(配合量)的物质。糖质优选为将葡萄糖或乳糖用乳糖酶进行处理而得的单糖。培养基只要是能够对革兰氏阳性的厌氧性细菌进行培养的培养基，就可以包含乳清以外的成分。这里，蛋白质的量可以通过凯氏定氮法、劳里法测定而算出。在凯氏定氮法的情况下，可以测定各种蛋白质所包含的氮，对该值乘以氮-蛋白质换算系数(通常为6.25)而算出。

本发明所使用的培养基优选为由10质量％乳清粉还原液的蛋白酶分解物形成的ph5～8(适合地为5.5～7.5)的培养基。蛋白酶只要能够将乳清蛋白质适度分解就没有特别限定。作为培养基，例如，可以使用将10质量％乳清粉还原液用蛋白酶アマノa(天野制药株式会社)在50℃、ph7.0进行分解而得的培养基。

丙酸菌的培养除了使用含有乳清的培养基以外，可以按照常规方法，进行需氧或厌氧(例如n2气体加压下(0.5kg/cm²))培养。通常，只要将培养基的温度调节为20～40℃，ph6～8左右，以活菌数成为10⁷～10⁸cfu/ml的方式，摄取作为起子的丙酸菌，进行3～4天液体培养即可。这样操作而获得的培养物所含有的丙酸菌的浓度达到起子的约5倍。

本发明的由丙酸菌产生的乳清发酵物可以使用通过丙酸菌的培养而获得的培养物、离析出的细菌本身、培养液(培养上清液)、或它们的混合物中的至少一种，由丙酸菌产生的乳清发酵物可以为它们的提取物、冷冻干燥物、或稀释物。进一步，由丙酸菌产生的乳清发酵物可以为实施了杀菌处理的乳清发酵物。作为杀菌工序，可举出例如低温保持杀菌、高温保持杀菌、高温短时间杀菌、超高温瞬间杀菌。

根据本发明的一个优选方式，作为本发明的由丙酸菌产生的乳清发酵物，可以使用将费氏丙酸杆菌et-3(propionibacteriumfreudenreichiiet-3)(保藏号：fermbp-8115)用10质量％乳清粉还原液培养而获得的由丙酸菌产生的乳清发酵物，更优选可以使用将费氏丙酸杆菌et-3在由将10质量％乳清粉还原液用蛋白酶アマノa(天野制药株式会社)在50℃、ph7.0下进行分解而得的分解物形成的培养基中在35℃、ph6.0下培养75小时而获得的由丙酸菌产生的乳清发酵物。这样的由丙酸菌产生的乳清发酵物可以合成，也可以使用市售品。作为市售品，例如，作为原料可举出プロフェック(“profec”(商标)，株式会社明治制)，其作为主要在肠内细菌中具有特别是双歧杆菌的增殖促进作用的、特定保健用食品的相关成分而被认可。

根据本发明的一个方式，本发明的由丙酸菌产生的乳清发酵物可以包含双歧杆菌增殖促进物质(bgs)。作为双歧杆菌增殖促进物质，可举出例如，1,4-二羟基-2-萘甲酸(1,4-dihydroxy-2-naphthoicacid、dhna)、2-氨基-3-羧基-1,4-萘醌(2-amino-3-carboxy-1,4-naphthoquinone、acnq)和它们的类似物，该类似物中包含1,4-萘醌、2-甲基-1,4-萘醌、4-氨基-2-甲基-1-萘酚和2-氨基-3-氯-1,4-萘醌。根据本发明的优选方式，在本发明的由丙酸菌产生的乳清发酵物中包含1,4-二羟基-2-萘甲酸。

本发明所使用的由丙酸菌产生的乳清发酵物可以将其直接作为乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物。

本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物，除了由丙酸菌产生的乳清发酵物以外，还可以包含经口上可容许的其它成分。作为其它成分，只要不妨碍本发明的效果，就没有特别限定，可举出赋形剂、稳定剂、防腐剂、湿润剂、乳化剂、滑润剂、甜味料、着色剂、香料、缓冲剂、抗氧化剂、ph调节剂等添加剂等。

根据本发明的优选方式，本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物包含成为乳杆菌属乳酸菌的饵料的功能性糖质(例如，寡糖、食物纤维)。通过包含成为乳杆菌属乳酸菌的饵料的功能性糖质，可以成为在肠道内残留的乳杆菌属乳酸菌的饵料，促进增殖。

此外，对本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物的形态没有特别限定，可以为固体状(粉末状、片剂状等)、液状(饮剂状等)、半液状中的任一种，但优选为粉末状、片剂状或液状。作为这样的形态的市售品，可举出粉末状的明治b.g.s.powder(ビー·ジー·エス·パウダー)(株式会社明治制)、片剂状的腹活力片(おなか活力タブレット)(株式会社明治制)、液状的yhフローレ(株式会社明治制)等。

根据本发明的优选方式，在本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物中包含1,4-二羟基-2-萘甲酸、蛋白质、碳水化合物(例如，糖质、食物纤维)，根据情况包含维生素和/或矿物(例如，钠、钙、磷、镁、钾)。根据优选方式，在本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物1.5g中，包含1,4-二羟基-2-萘甲酸0.01～1000μg，更优选包含0.1～100μg，进一步优选包含0.5～50μg。

如果摄取本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物，则可以有效地抑制抗菌药施与对象中的肠道内的乳杆菌属乳酸菌的减少。

肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少抑制效果如实施例的例1所记载的那样，可以将抗菌药施与对象中的肠道内的乳杆菌属菌数定量，通过摄取了本发明的组合物的组与未摄取的组中的、以菌数作为指标的比较试验进行评价。这样的比较试验中，与未摄取的组相比摄取了本发明的组合物的组中乳杆菌属菌数显著高，并且，在与抗菌药施与前相比乳杆菌属菌数增加的情况下，认为本发明的组合物具有强的乳杆菌属乳酸菌的减少抑制活性。

此外，本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物包含由丙酸菌产生的乳清发酵物，因此与各种食材相合性好，可以安全并且简易地摄取。

根据本发明的一个方式，本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物优选与乳杆菌属的活菌同时或依次施与。如果将本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物、与作为益生菌的乳杆菌属的活菌同时或依次摄取，则可以增加抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌的菌数，可以使肠内细菌群的平衡更良好。

根据本发明的一个方式，本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物，为了使由丙酸菌产生的乳清发酵物成为用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少的有效量，优选由1天的摄取量单位的形态构成。关于本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物中的上述单位，期望以每一天的摄取量(施与量)以由丙酸菌产生的乳清发酵物的干燥质量换算成为0.15～200mg/kg体重的方式摄取，优选以成为0.65～120mg/kg体重，更优选以成为1.15～70mg/kg体重，进一步优选以成为1.5～20mg/kg体重的方式摄取。这里，对象的代表性的体重估计为60kg。

进一步，本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物，优选以1次的摄取量单位包装的形态提供。作为每1次的摄取量的单位包装形态，可举出用包(pack)、容器等规定一定量的形态，可以在它们的表面附上1次的摄取量的成分标示、和肠道内乳杆菌属乳酸菌减少抑制等用途标示。作为这样的单位包装形态的适合例，可举出补充剂、医药制剂等。

使对象摄取本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物的方法(或施与方法)，只要不妨碍本发明的效果就没有特别限定，可以根据其对象和用途从经口摄取(或经口施与)、经管施与、经肠施与、胃瘘等来适当选择。

本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物可以使抗菌药施与前的对象摄取，也可以使抗菌药施与中的对象摄取，也可以使抗菌药施与后的对象摄取。优选本发明的组合物使抗菌药施与前的对象摄取。关于抗菌药施与前的时间，如果考虑到本发明的组合物的摄取时间越长，则肠内细菌群的平衡越通过由丙酸菌产生的乳清发酵物被改良，则优选为施与前1天，更优选为3天，进一步优选为施与前5天。此外，在使施与中的对象摄取本发明的组合物的情况下，本发明的组合物可以与抗菌药同时使对象摄取，也可以优选在72小时以内，更优选在24小时以内依次摄取。

此外，本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物的摄取计划没有特别限定，本领域技术人员可以根据对象的年龄、性别、症状和状态适当设定。例如，相对于对象，可以每1天1～10次施与1次的经口摄取量单位，但优选地，优选每1天摄取1～3次，更优选摄取1次。此外，本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物可以与饭食一起摄取。

根据本发明的一个实施方式，本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物可以直接单独使用，但只要发挥抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少抑制功能，也可以相对于食品、药品等各种经口摄取用(经口施与用)的组合物，作为原料(原材料)、添加剂等而包含，可以获得具有抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少抑制效果的组合物(例如，药物组合物、食品组合物)。本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物即使添加于饭食也不损害味道，因此可以添加于通常的饭食、或添加于饮料，简易地摄取。

根据本发明的优选方式，提供包含由丙酸菌产生的乳清发酵物的、抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少抑制用食品。

“食品”(食品组合物)的形态只要是溶液、悬浮液、乳浊液、粉末、固体成形物等能够经口摄取的形态即可，没有特别限定。具体而言，可举出快餐面、杀菌袋装食品、罐头、微波炉食品、快餐汤/味增汁类、冷冻干燥食品等快餐食品类；清凉饮料、果汁饮料、蔬菜饮料、豆乳饮料、咖啡饮料、茶饮料、粉末饮料、浓缩饮料、酒精饮料等饮料类；面包、面食、面条、蛋糕粉、面包粉等小麦粉制品；饴糖、焦糖、口香糖、巧克力、小甜饼、饼干、蛋糕、馅饼、袋装点心、薄脆饼干、日本点心、餐后甜点等点心类；调味汁、番茄加工调味料、风味调味料、烹调混合料、作料汁类、调味汁类、高汤类、咖喱/煨炖料类等调味料；加工油脂、黄油、人造奶油、蛋黄酱等油脂类；乳饮料、发酵乳(酸奶等)、乳酸菌饮料、天然干酪、加工干酪类、冰淇淋类、奶油类等乳制品；农产罐头、果酱/甜果酱类、谷类食物等农产加工品；冷冻食品、流食等。

此外，食品中，也包含健康食品、功能性食品、营养辅助食品、特定保健用食品、病人用的食品、婴幼儿用的调整粉乳、孕产妇用或哺乳妇用的粉乳、或附上了是为了抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少而使用的物质的意思标示的食品那样的分类的食品。

根据本发明的其它方式，提供包含由丙酸菌产生的乳清发酵物的、抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少抑制用药品。所谓“药品”(药物组合物)，是并用为了制剂化而能够容许的添加剂，按照常规方法，作为经口制剂或非经口制剂而制备出的物质。在药品为经口制剂的情况下，可以采用片剂、散剂、细粒剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、缓释剂等固体制剂、溶液、悬浮液、乳浊液等液状制剂的形态。此外，在药品为非经口制剂的情况下，可以采用注射剂、栓剂的形态。另外，从对患者的摄取(施与)的简易性方面考虑，对于药品，优选为经口制剂。这里，为了制剂化而能够容许的添加剂中，可举出例如，赋形剂、稳定剂、防腐剂、湿润剂、乳化剂、滑润剂、甜味料、着色剂、香料、缓冲剂、抗氧化剂、ph调节剂等。本发明的药品可以用于需要抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少的疾病、具体为由抗菌药施与引起的便秘、腹泻、恶心、头痛等副作用的症状的治疗或预防。

本发明的乳杆菌属乳酸菌减少抑制用组合物可以将由丙酸菌产生的乳清发酵物与根据需要经口上容许的其它成分一起混合而简易地制造。因此，根据本发明的其它方式，提供用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少的组合物的制造方法，其特征在于，使组合物中含有有效量的由丙酸菌产生的乳清发酵物。

此外，根据本发明的其它方式，提供抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少的方法，其包含使上述对象摄取有效量的由丙酸菌产生的乳清发酵物的步骤。这里，根据本发明的其它的优选方式，肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少抑制方法为是除了对人的医疗行为以外的方法。这里，所谓“对人的医疗行为”，是指需要医师等的处方，使人摄取(施与)药品的行为等。此外，在上述实施方式中，对象优选为健康者。

此外，本发明的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少抑制方法可以用于与抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少相关的疾病或状态的改善。因此，本发明的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少抑制方法是与由抗菌药施与产生的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少相关的疾病或状态的改善方法，更优选为便秘、腹泻、恶心和与此相伴的头痛的改善方法。这里，所谓“改善”，不仅包含治疗已确立的疾病或状态，而且包含预防可能将来确立的疾病或状态。

在抑制方法中，由丙酸菌产生的乳清发酵物的有效量可以与上述的组合物中的1次的摄取量单位同样。

根据本发明的一个实施方式，提供用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少的、由丙酸菌产生的乳清发酵物的使用。根据本发明的一个优选实施方式，本发明的使用被认为是非治疗的使用。

根据本发明的一个实施方式，提供用于制造用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌减少的组合物的、由丙酸菌产生的乳清发酵物的使用。根据本发明的一个优选实施方式，该使用是用于制造乳杆菌属乳酸菌减少抑制用食品或药品的使用。

根据本发明的一个实施方式，提供用于抑制抗菌药施与对象中的肠道内乳杆菌属乳酸菌的减少的、由丙酸菌产生的乳清发酵物。

实施例

通过以下例子详细说明本发明，但本发明不限定于此。

例1：组合物的制备(由丙酸得到的乳清发酵物的制备)

作为起子，以活菌数成为10⁷～10⁸cfu/ml的方式，将费氏丙酸杆菌et-3(propionibacteriumfreudenreichiiet-3)(保藏号：fermbp-8115)摄取到由将10质量％乳清粉还原液用蛋白酶アマノa(天野制药株式会社)在50℃、ph7.0下分解而获得的分解物形成的培养基中，在35℃、ph6.0下培养75小时。将所得的培养上清液杀菌，冷冻干燥。相对于冷冻干燥物0.2g，添加葡萄糖、含有食物纤维的糊精，制成总量1.5g的制备物。该组合物中，包含蛋白质0.03g、脂质0g、作为碳水化合物的糖质0.6g、食物纤维0.8g、钠2.6mg、钙1.0mg、磷1.3mg、镁0.2mg、钾15.8mg。

使用所得的制备物作为本发明的组合物。制备物制成1.5g单位的铝分装。

例2：临床试验

(1)试验对象

临床试验分成对照组和组合物施与组这2组来实施。两组试验的受检者都是搬入到大阪府三岛救命急救中心的重症患者(脑出血、外伤、脑梗死的患者)。受检者原则上在入院时以经管营养管理，由鼻腔插入管而留置于胃。此外，原则上，抗菌药在试验开始后1周以内开始施与。另外，抗菌药根据患者所具有的疾病、状态，按照jaid/jas感染症治療ガイド2014(jaid/jas感染症治療ガイド·ガイドライン作成委員会编集)所记载的方法，从下述表1中举出的抗菌药选择进行施与。

表1：

sbt：舒巴坦，abpc：氨苄西林，cez：头孢唑林，caz：头孢他啶，mepm：美罗培南，taz：三唑巴坦，pipc：哌拉西林，lzd：利奈唑胺，pzfx：帕珠沙星，azm：阿奇霉素，pcg：青霉素g，cpr：头孢匹罗，lvfx：左氧氟沙星

对照组和组合物施与组

对照组中，施与2周流食。作为流食，使用了选自メイバランスhp或mein(株式会社明治)的2种中的至少1种。它们中不包含对肠道内细菌群带来影响的成分、特别是使乳杆菌属乳酸菌减少的成分。另一方面，组合物施与组中，施与2周在流食中添加例1中获得的组合物(2包/天(3g/天))的食物。对照组为46名，组合物施与组为14名。另外，对照组内1名在2周的试验期间中不施与抗菌药，因此将该1名除外进行分析。因此，分析人数是，对照组为45名，组合物施与组为14名。

将分析的对照组与组合物施与组的患者背景和抗菌药施与天数的结果示于下述表2中。

表2患者背景和抗菌药施与天数

﹡1：apache(acutephysiologyandchronichealthevaluation)ii评分

是由apache评分和计算入院预测死亡率的部分构成的、为了客观地评价集中治疗入院患者中的病态的重症度而作出的预后预测法，分数越高则判定为重症度越高。

如表2所示，抗菌药施与天数是，对照组11.5±3.2天，组合物施与组11.8±2.9天，在两组间几乎没有差别。此外，男女比和apacheii也几乎未见差别。

(2)粪便中的菌群的分析

粪便采集

对照组和组合物施与组中，分别在试验开始(流食施与)前(第0天)、试验开始后第3天、试验开始后第7天(1周)、试验开始后第14天(2周)实施粪便采集。

粪便中的菌群的分析

采集的粪便在采集后迅速保存在-20℃以下。从患者的粪便将粪便中的菌群dna，使用multi-beadsshocker(安井机械株式会社)按照qiaampdnastoolminikit(qiagen社)的方法提取。此外，实时pcr的反应使用quantitectsybrgreenrt-pcr(qiagen社)，使用下述表3所记载的引物，利用95℃，15秒→(94℃，15秒→各引物的退火温度，30秒→72℃，30秒)×30～55个循环，通过abi7300realtimepcrsystem(appliedbiosystems社)定量乳杆菌属乳酸菌数、双歧杆菌数和总菌数(totalbacteria)。菌数由每1g粪便的菌数的对数值表述。

表3

实时pcr引物

各组内的前后比较通过有对应的t检验来分析。此外，对照组与组合物施与组的2组间的分析通过将对照组与组合物施与组的试验结果进行比较来评价，通过学生t检验(等方差)或welch检验(非等方差)分析。

将结果示于图1～4中。

图1是表示对照组的粪便中的总菌数与乳杆菌属菌数的变化的图。图1的对照组中，在试验开始后第3天以后总菌数和乳杆菌属的菌数与试验开始时相比都显著减少。

图2表示组合物施与组的粪便中的总菌数与乳杆菌属菌数的变化。图2的组合物施与组中，与试验开始前相比试验期间中乳杆菌属菌数未见显著的减少。另一方面，总菌数与试验开始前相比在试验开始后第7天显著减少了，但第3天和第14天没有显著性差异。

图3中，将对照组和组合物施与组的粪便中的总菌数与乳杆菌属菌数进行比较。观察图3的乳杆菌属菌数，对照组和组合物施与在试验开始时几乎没有不同，但试验开始后第3天以后与组合物施与组相比对照组显著减少。另一方面，试验期间中的总菌数在两组间未见显著的变化(图3)。这样，如果施与抗菌药则肠道内的乳杆菌属菌数减少，但如果在抗菌药施与前或施与中施与本发明的组合物，则确认到肠道内的乳杆菌属菌数的减少被抑制。

图4是将对象组和组合物施与组的粪便中的双歧杆菌数进行了比较的图。关于图4的双歧杆菌数，对照组和组合物施与组都在试验开始后第3天以后，与试验开始时相比显著减少了。此外，将对照组和组合物施与组的双歧杆菌数进行了比较，结果在两组间未见显著的变化。