本发明属于营养保健品领域，涉及一种增强免疫力的中药组合物及其制备方法。
背景技术
免疫力是指人体对各种疾病的抵抗能力，这种抵抗力来自人体内的免疫系统，而疫系统由免疫器官、免疫细胞及免疫因子组成。免疫细胞、免疫因子分布在人体全身，川流不息，形成一个相互制约的网络，主宰人体的免疫功能——抵抗细菌、病毒的入侵，清除体内损伤变性及衰老的细胞及代谢废物，维持机体内环境的稳定。当由于各种原因使免疫系统不能正常发挥生理防御作用时，就极易招致细菌、病毒、真菌等的感染，很多疾病发生的深层原因是免疫力低下或免疫力不健全，其解决的根源就是提高机体的免疫力。
公开号为cn1634224a的中国发明专利申请《一种配制保健药酒的中药组合物》公开了一种中药组合物，其包括神曲、杜仲、川芎、牛膝、熟地、肉桂、木瓜、防风、玉竹、枸杞、灵芝、当归、黄芪、何首乌、甘草、陈皮、白芍、羌活、茯神、前胡、秦艽、沙参、灵仙、枣仁、大茴香、大枣、黄精、桑椹。虽然上述中药组合物中包含了多种具有润肠通便、改善睡眠、增强免疫力功能的中药组分，但是其使用方法为直接泡酒食用，这就导致中药中的有效成分无法最大限度的得到利用，在一定程度上降低了药材的利用率，效果不明显。
公开号为cn104998083b公开的一种增强免疫力的中药组合物由西洋参、马鹿茸、红景天、枸杞子、铁皮石斛组成，做成口服剂，效果理想，但是成本高，市场推广受阻。
化学药品和生物制品如咖啡因、甲氯芬酯、莫达菲尼、苯丙胺、匹多莫德、多抗甲素、胸腺五肽等在消除疲劳和增强免疫力方面有较好的效果，但该类药物大多为大脑皮层兴奋药，通过预防或治疗中枢抑制，从而发挥抗疲劳作用，但该类药物往往具有成瘾性，长期服用副作用大，造成临床应用局限。
技术实现要素：
本发明的目的之一是提供一种增强免疫力的中药组合物，对免疫力增强效果明显，吸收快、质量标准较高、具有较高的食用安全性、可长期服用，成本低，利于市场推广。
本发明的目的之二是提供前述一种增强免疫力的中药组合物的制备方法，该方法能有效融合各组分中药的优势，达到更好的增强免疫力功能，且能较好的保存药材的有效成分，有效提高药材的利用率。
对于目的之一，本发明采用如下的技术方案：一种增强免疫力的中药组合物，由下列组分组成：浙麦冬、五味子、石菖蒲、银杏叶提取物、栀子、赋形剂。
作为优选，由浙麦冬15-30重量份、五味子8-12重量份、石菖蒲10-15重量份、银杏叶提取物5-12重量份、栀子3-6重量份、添加剂10-20重量份组成。
浙麦冬药用价值很高。据《本草纲目》记载：“主治心腹结气，伤中伤饱，胃络脉绝，强阴益精，定肺气，安五脏，止烦热，久服轻身明目不老不饥。”具有养阴、生津、润肺、止咳、清心、除烦之功效。用于肺燥干咳、津少口渴、心烦、便秘等症。还可提高耐缺氧能力，缓解冠心病和心绞痛，是中医治病不可或缺的常用药。
五味子：敛肺，滋肾，生津，收汗，涩精。治肺虚喘咳，口干作渴，自汗，盗汗，劳伤羸瘦，梦遗滑精，久泻久痢。
石菖蒲：性味归经：温；辛、苦；归心、胃经。化湿开胃，开窍豁痰，醒神益智。用于腕痞不饥，噤口下痢，神昏癫痫、健忘耳聋。
银杏叶提取物作为治疗高血压、高血脂、缺血性脑血管疾病、缺血性心脏病、冠心病、心绞痛疾病的常用药。
上述组分在中药中虽常用，但是目前还没有用于增强免疫力方面。本发明根据中药配伍关系，精选上述几种组分，更好的增强免疫力功能，且吸收快、质量标准较高、具有较高的食用安全性、可长期服用。
作为优选，所述银杏叶提取物的银杏叶采用7月份采摘的银杏叶。
作为优选，所述添加剂包括玉米淀粉、微晶纤维素、海藻多糖、交联聚维酮。该配方添加剂与药物活性成分无配伍禁忌和反应，且溶解性好、流动性好，能够使得药物活性成分分散均匀并对药物活性成分有较大吸附力、粘合力高，成型度好、润滑度好和脱模性好。
作为优选，银杏叶提取物通过如下方法得到：a.银杏叶烘干至含水率低于3%，粉碎至200-250目，得银杏叶粉；b.将所述银杏叶粉采用乙醇浸提，过滤，收集浸提液；c.向所述浸提液中加入乳酸菌，在28-30℃下维持12-24小时，再加入葡萄糖苷酶，酶解得酶解液，浓缩、干燥，得银杏叶提取物。
作为优选，乳酸菌的添加量为1-3×106cfu/ml。
通过实施上述技术方案，本发明提供的中药组合物，对免疫力增强效果明显，吸收快、质量标准较高、具有较高的食用安全性、可长期服用，成本低，利于市场推广。
对于目的之二，本发明采用如下的技术方案：一种增强免疫力的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：（1）取浙麦冬、栀子，分别粉碎，过筛，混合，得粉末混合物；（2）取五味子和石菖蒲，分别加水、文火煎煮，收集煎煮液，混合、浓缩，得浓缩膏；（3）将所述粉末混合物与浓缩膏、银杏叶提取物、赋形剂混合，得中药组合物。
上述中药组合物，可以制成片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、丸剂等形式。本发明中药组合物的具体形态不应受特别的限制。
通过实施上述技术方案，能有效融合各组分中药的优势，达到更好的增强免疫力功能，且能较好的保存药材的有效成分，有效提高药材的利用率。
具体实施方式
通过以下实例对本发明做进一步具体说明，进一步描述本发明的各个方面，但应该理解，以下实例并不用于限制本发明的范围。
实施例1：
一种增强免疫力的中药组合物，由下列组分组成：浙麦冬30重量份、五味子12重量份、石菖蒲10重量份、银杏叶提取物10重量份、栀子3重量份、添加剂10重量份，其中，添加剂包括玉米淀粉1重量份、微晶纤维素1重量份、海藻多糖3重量份、交联聚维酮2重量份。
实施例2：
一种增强免疫力的中药组合物，由下列组分组成：浙麦冬20重量份、五味子8重量份、石菖蒲12重量份、银杏叶提取物12重量份、栀子6重量份、添加剂20重量份，其中，7月份采摘的银杏叶，添加剂包括玉米淀粉2重量份、微晶纤维素1重量份、海藻多糖2重量份、交联聚维酮1重量份。
银杏叶提取物通过如下方法得到：a.银杏叶烘干至含水率低于2%，粉碎至200-250目，得银杏叶粉；b.将所述银杏叶粉采用乙醇浸提，过滤，收集浸提液；c.向所述浸提液中加入乳酸菌，在30℃下维持16小时，再加入葡萄糖苷酶，酶解得酶解液，浓缩、干燥，得银杏叶提取物。
实施例3：
一种增强免疫力的中药组合物，由下列组分组成：浙麦冬15重量份、五味子10重量份、石菖蒲15重量份、银杏叶提取物5重量份、栀子4重量份、添加剂15重量份，其中，7月份采摘的银杏叶，添加剂包括玉米淀粉1重量份、微晶纤维素2重量份、海藻多糖3重量份、交联聚维酮1重量份。
银杏叶提取物通过如下方法得到：a.银杏叶烘干至含水率低于2%，粉碎至200-250目，得银杏叶粉；b.将所述银杏叶粉采用乙醇浸提，过滤，收集浸提液；c.向所述浸提液中加入乳酸菌，在28℃下维持12小时，再加入葡萄糖苷酶，酶解得酶解液，浓缩、干燥，得银杏叶提取物。
实施例4：
一种增强免疫力的中药组合物，由下列组分组成：浙麦冬20重量份、五味子8重量份、石菖蒲12重量份、银杏叶提取物12重量份、栀子6重量份、添加剂20重量份，其中，7月份采摘的银杏叶，添加剂包括玉米淀粉2重量份、微晶纤维素1重量份、海藻多糖2重量份、交联聚维酮1重量份。
银杏叶提取物通过如下方法得到：a.银杏叶烘干至含水率低于3%，粉碎至220-250目，得银杏叶粉；b.将所述银杏叶粉采用乙醇浸提，过滤，收集浸提液；c.向所述浸提液中加入乳酸菌，在30℃下维持12小时，再加入葡萄糖苷酶，酶解得酶解液，浓缩、干燥，得银杏叶提取物。
实验验证：
下面对实施例3所得到的组合物进行增强免疫实验：
1本发明实施例3组合物增强免疫力功能动物试验
2实验目的：验证本发明实施例3组合物是否具有增强免疫力的功能。依据卫生部《保健品检验与评价技术规范》中增强免疫力功能检测方法进行。
3实验材料：
3.1样品：（本发明组合物人体口服推荐量为每日2次，每次0.2g。成人体重按照60kg，折小鼠合剂量约0.6mg/次。）
3.2实验动物：spf级健康昆明种雄性小鼠，体重（20±2）g，相对湿度为50~70%，温度为25±5℃，各12小时明暗周期的饲养室，用颗粒饲料喂养，自由饮水。
3.4实验仪器：医用型洁净工作台、二氧化碳培养箱、电子天平、723分光光度仪、酶标仪、离心机、显微镜、恒温水浴箱、微量注射器、手术器械、琼脂糖、sa缓冲液、na2co3、印度墨汁等。
4实验方法
4.1样品配置和剂量选择：取本发明组合物，配置成剂量分别为300mg/kg.bw、600mg/kg.bw、900mg/kg.bw（分别相当于人体推荐摄入量的20倍）的受试样品（规范要求其中一个剂量应相当于人体推荐摄入量的10倍，且最高剂量不得超过人体推荐摄入量的30倍）。灌胃容量为0.2ml/20g.bw。
4.2受试动物给予方式：将上述健康小鼠随机分成4组，分别为a组、b组、c组、d组，每组60只动物，其中a组用于迟发性变态反应、抗体生成细胞实验；b组用于小鼠碳廓清实验；c组用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验；d组用于nk细胞活性测定及cona诱导的小鼠淋巴细胞转化实验。小鼠按20mg/kg.bw体重给予受试动物灌胃，受试组分别灌胃“4.1”项下不同剂量的样品，阴性对照组予以等体积的蒸馏水，每天2次，早晚各1次，连续灌胃30d。
4.3迟发型变态反应（dth）（足跖增厚法）：取2%（v/v）srbc对小鼠进行腹腔注射，每只小鼠注射0.2ml，致敏4d后，测量左后足跖部厚度，然后在测量部位皮下注射20%(v/v)srbc，每只小鼠注射20μl，注射后24h测量左后足跖厚度，同一部位测量3次，取平均值，以攻击前后足跖厚度差值(足跖肿胀度)来表示dth的程度。
4.4cona诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(mtt法)：无菌取脾，在装有无菌hank’s液平皿中，用镊子将脾磨碎，制成细胞悬液，200目筛过滤，用hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)，然后取沉淀悬浮于lml的完全培养液中，台酚兰染色计数(应在95％以上)，将细胞浓度调整为3×106个/ml的脾细胞悬液，然后将脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1m1，一孔加浓度为7.5μg/ml的cona液75ml，另一孔作对照，置5％co2、37℃孵箱培养72h，于培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的rpmi1640培养液，同时每孔加入浓度为5mg/ml的mtt50μl继续培养4h，培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，使紫色结晶完全溶解，然后分装到另一培养板，每孔做3个平行孔，测定光密度值（od）。
4.5抗体生成细胞检测（jerne改良玻片法）：取压积srbc用生理盐水配成2%（v/v）的细胞悬液对小鼠进行腹腔注射，每只小鼠注射0.2ml，将免疫5天后的小鼠颈椎脱臼处死，取出脾脏放在盛有hank’s液的小平皿内，然后将脾脏磨碎，制成细胞悬液，采用200目筛网过滤，离心10min(转速为1000r/min)，用hank’s液洗2遍，最后将细胞悬浮在5mlrpmi1640培养液中，台酚兰染色计数(应在95％以上)，并将细胞浓度调整为5×106个/ml，制成脾细胞悬液。取1g琼脂糖加双蒸水至100ml于水浴（45~50℃）保温30min，再加入等量的双倍浓度的hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内迅速加入10％srbc(v/v，用sa缓冲液配制)50μl和脾细胞悬液各20μl，迅速混匀后，倾倒于琼脂糖薄层玻片上，平行制备两片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，放入二氧化碳培养箱中孵育1.5h，然后将sa缓冲液稀释的补体（1:8）加入到玻片架凹槽中，继续在二氧化碳培养箱中孵育1.5h，然后计数溶血空斑数。
4.6小鼠碳廓清实验：将印度墨汁原液用生理盐水稀释3倍，然后依据小鼠的体重（0.2ml/20g）于小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁，立即计时，分别在注入墨汁后2、10min从小鼠内眦静脉丛取血20μl，并立即加到2ml0.1%na2co3溶液中，以na2co3溶液作空白对照，用723分光光度计于600nm处测定光密度值。将小鼠处死，分别称定肝脏和脾脏重量，计算吞噬指数。
4.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）：取20%鸡红细胞悬液1ml对小鼠进行腹腔注射，30min后将小鼠颈椎脱臼处死，并将其仰位固定与鼠板上，沿小鼠腹壁正中剪开皮肤，取2ml生理盐水经腹腔注入，转动鼠板1min，吸出腹腔洗液1ml，平均滴于2张载玻片上，置搪瓷盒内，于37℃孵箱温育30min，漂洗、晾干、固定，再用4%（v/v）giemsapbs染色3min，漂洗凉干，油镜下计数。计算吞噬百分率及吞噬指数。
4.8nk细胞活性测定（乳酸脱氢酶ldh测定法）：无菌条件下，取小鼠脾脏，撕碎，制成单细胞悬液，经200目筛网过滤，每次离心10min（转速为1000r/min），制备成浓度为2×107个/ml的效应细胞，取靶细胞和效应细胞各100μl（效应细胞和靶细胞的比重为50:1），置于96孔培养板中，加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔由靶细胞100μl加2.5%triton100μl制得，上述每项各设置3个平行孔，于5%co2、37℃培养箱中培养4h，然后将96孔培养板离心5min（转速为1500r/min），吸取离心后的上清液100μl置于另一培养板，加ld基质液100μl，反应10min后，加1mol/lhcl30μl，测度光密度值（od），计算nk细胞活性（%）。
5结果统计分析
5.1本发明实施例1-3组合物对迟发型变态反应的影响
结果分析：经方差分析，本发明实施例1-3组小鼠足趾肿胀明显高于对照，差异显著。
5.2本发明实施例1-3组合物对cona诱导的小鼠淋巴细胞转化实验的影响
结果分析：经方差分析，本发明实施例1-3组合物中销售淋巴细胞转化能力明显高于对照，差异极显著。
5.3本发明实施例1-3组合物对抗体生成细胞的影响
结果分析：经方差分析，本发明实施例1-3组合物在小鼠抗体生成细胞数明显高于对照，差异显极著。
5.4本发明实施例1-3组合物对小鼠碳廓清实验的影响
结果分析：经方差分析，本发明实施例1-3组合物在小鼠小鼠碳廓清能力与对照组具有显著性统计学差异。
5.5本发明实施例3组合物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的影响
结果分析：经方差分析，本发明实施例3组合物在小鼠巨噬细胞吞噬鸡血红细胞能力与对照组具有显著性统计学差异。
5.6本发明实施例3组合物对nk细胞活性测定实验的影响
结果分析：经方差分析，本发明实施例1-3组合物处理后的小鼠nk细胞活性明显高于对照组。