可比托莫德在治疗炎症性肠病中的应用的制作方法

本发明涉及用于治疗炎症性肠疾病，例如活动性溃疡性结肠炎(activeulcerativecolitis,uc)的新疗法，其中根据优化的剂量方案给药寡核苷酸，特别是可比托莫德(cobitolimod)。

背景技术：

溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,uc)是一种以直肠和结肠粘膜的慢性炎症为特征的疾病，在第一阶段影响最内层。该病是复发性的，活动性和非活动性在病理、症状和治疗上都不同。uc的根本原因尚不清楚，也不知道是什么触发该疾病在其非活动形式和活动形式之间复发(irvine,e.j.(2008)inflammboweldis14(4):554-565)。活动性uc的症状包括带血的进行性排便稀疏和排便次数增加。活动性粘膜炎症可通过内窥镜检查来诊断。

粪便中含有脓液、粘液和血，常伴有腹部绞痛和紧急排泄(tenesmi)。腹泻可能有隐匿的发病，或更罕见的是突然发作。在严重的情况下，症状可能包括发烧和全身不适。在严重阶段，肠壁深层炎症可能会发展为腹部压痛、心动过速、发烧和肠穿孔风险而发展。此外，患有uc的患者可能遭受额外的肠道表现，例如关节痛和关节炎，结节性红斑，坏疽性脓皮病和眼睛发炎。在uc缓解或非活动性的情况下，患者通常无肠症状。

uc患者的粘膜发炎和受损程度不同。仅影响直肠的uc被称为溃疡性直肠炎。当结肠左侧直至脾曲处出现炎症变化时，这种情况称为远端或左侧结肠炎。在广泛的uc中，横结肠也受到影响，而全结肠炎是指涉及整个结肠的疾病。

活动性粘膜炎症可通过内窥镜检查来诊断，其特征是血管图案消失(lossofvascularpatterning)、水肿、瘀斑、自发性出血和纤维状渗出物。内窥镜检查图像是连续发炎的图像，从直肠开始，并以不同程度近端地延伸到结肠中。在内窥镜检查下获得并经过组织学检查的活组织检查可帮助诊断病情。包括艰难梭菌(clostridiumdifficile)、弯杆菌(camphylobacter)、沙门氏菌(salmonella)和志贺氏菌(shigella)在内的传染性病因可能模仿uc，并可以通过粪便培养排除。

uc的医学管理分为活动性疾病治疗和维持缓解。

患有活动性uc的患者的治疗旨在减少炎症并促进结肠愈合和粘膜恢复。在病情较轻的情况下，可以用常规药物控制疾病，所述常规药物包括柳氮磺胺吡啶，5-氨基水杨酸(5-asa)(sutherland,l.,f.martin,s.greer,m.robinson,n.greenberger,f.saibil,t.martin,j.sparr,e.prokipchuk和l.borgn(1987)gastroenterology92:1894-1898)和糖皮质激素(gcs)(domenech,e.,m.manosa和e.cabre(2014).digdis32(4):320-327)。

gcs通常用于治疗疾病突发，不建议用于维持缓解，因为长期使用会产生明显的副作用，并且可能会发展类固醇依赖性疾病。糖皮质激素药物作用是非选择性的，因此从长远来看，它们可能会损害许多健康的合成代谢过程。因此，不建议使用全身性gcs进行维持治疗(prantera,c.ands.marconi(2013)therapadvgastroenterol6(2):137-156)。

对于对gcs变得难治且uc严重性或中度严重性发作的患者，可以使用免疫调节剂，例如环孢霉素(cyclosporine)、6-巯基嘌呤(6-mercaptopurine)和咪唑硫嘌呤(azathioprine)。然而，免疫调节剂作用缓慢，并且在这些患者中的缓解诱导通常是暂时的(khan,k.j.,m.c.dubinsky,a.c.ford,t.a.ullman,n.j.talley和p.moayyedi(2011)amjgastroenterol106(4):630-642)。

uc的其他治疗选项包括生物制剂(fausel,r.和a.afzali(2015)therclinriskmanag11:63-73)。目前批准用于中度至重度uc治疗的三种tnf-α抑制剂是英夫利昔单抗(infliximab)，阿达木单抗(adalimumab)和戈利木单抗(golimumab)。所有这三种都带有与其用途相关的潜在风险，在某些患者中应避免使用，例如那些患有不受控制感染、晚期心力衰竭、神经系统疾病的患者，以及有恶性肿瘤病史的患者，因为有加速肿瘤生长的潜在风险。tnf-α抑制剂治疗的其他潜在不良反应包括中性粒细胞减少、肝中毒、血清病、白细胞碎裂性血管炎、皮疹(包括牛皮癣样皮疹)、诱导自体免疫，以及注射或输注部位反应，包括过敏反应，抽搐和低血压。

三种tnf-α抑制剂及其相关的生物类似物/衍生物对应物可以用于诱导和维持uc患者的临床反应和缓解。带有咪唑硫嘌呤的联合疗法也可用于诱导缓解。

但是，超过50％的接受tnf-α抑制剂治疗的患者随时间逝去无法响应诱导给药或失去对tnf-α抑制剂的响应(fausel,r.和a.afzali(2015)therclinriskmanag11:63-73)。

维多珠单抗(vedolizumab)，为一种α4β7整合素抑制剂，最近被批准用于uc治疗。在gemini1试验中，发现维多珠单抗在诱导和维持临床响应、临床缓解和粘膜愈合方面比安慰剂更有效(feagan,b.g.,p.rutgeerts,b.e.sands,s.hanauer,j.f.colombel,w.j.sandborn,g.vanassche,j.axler,h.j.kim,s.danese,i.fox,c.milch,s.sankoh,t.wyant,j.xu,a.parikhandg.s.group(2013).“vedolizumabasinductionandmaintenancetherapyforulcerativecolitis.”nengljmed369(8):699-710.)。

溃疡性结肠炎患者处于长期活动性并且对已知治疗无效，这造成严峻医学挑战，通常唯一剩下的行动方案就是结肠切除术。全结肠切除术可能是重度uc患者的一种潜在治愈选择，但它是改变生命的手术，伴随并发症(例如结肠袋衰竭、结肠袋炎、盆腔脓毒症、女性不育症和夜间粪便沾污等)的风险。因此，通常将手术预留给患有严重难治性疾病、外科手术或其他紧急情况的患者，或患有结直肠发育不良或癌症的患者。

uc的紧急三线治疗方法是可比托莫德(卡帕普鲁特(kappaproct)/dims0150)，其是一种基于修饰的单链脱氧核糖核酸(dna)的合成寡核苷酸，长度为19个碱基。可比托莫德具有序列5'-g*g*a*acagttcgtccat*g*g*c-3'(seqidno:1)，其中cg二核苷酸是未甲基化的。

可比托莫德通过靶向免疫细胞中存在的toll样受体9(tlr9)来充当免疫调节剂。这些免疫细胞(即b细胞和浆细胞样树突状细胞(pdc))大量存在于粘膜表面(例如结肠和鼻粘膜)中。免疫系统是uc改变的关键介质。uc患者的结肠和直肠的粘膜长期发炎，并含有活跃的免疫细胞。可在炎症区域局部给药可比托莫德，其使药物与大量预期的靶细胞紧密接触，确保药物将到达富tlr9表达细胞的区域。通过可比托莫德对这些细胞的激活诱导了多种细胞因子，例如i型干扰素和白介素10(il-10)，它们是典型的抗炎细胞因子并被认为是可比托莫德的临床疗效的重要因素。

已经使用可比托莫德进行了一系列非临床安全性研究，和四项临床试验。大多数试验涉及相对低(30mg)剂量的可比托莫德的给药。总体而言，有关可比托莫德的数据支持对慢性活动性uc患者的正面获益风险评估。可比托莫德安全且耐受良好，已被证明对诱导慢性活动性uc患者的临床响应和缓解有效，以及对难治性中度至重度慢性活动性uc患者的症状缓解和内窥镜检查缓解有效。

现在需要改进可比托莫德的剂量方案，以使其临床应用的功效/安全性特征最大化。

技术实现要素：

现已令人惊讶地发现，对于治疗诸如uc的炎症性肠疾病，在至少两次，优选两次，间隔为三周的分开的场合下，以150mg至350mg，优选约250mg的剂量给药比托莫莫德，对于例如诱导缓解是最佳的。250mg时该药疗效的增加超过了以前以低得多的剂量进行临床研究所预期的。

因此，本发明提供了包含序列5'-ggaacagttcgtccatggc-3'(seqidno:2)的寡核苷酸在治疗人类受试者的炎症性肠病中的应用，其中在至少两次分开的场合下，将单次剂量(individualdoses)为150mg至350mg的所述寡核苷酸给药于受试者，其中所述分开的场合相隔3周。

本发明还提供了一种包含如本文所限定的寡核苷酸以及一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物在治疗如本文所限定的人类受试者中的如本文所限定的炎症性肠病中的应用，其中所述组合物的单次给药量(individualadministrations)在至少两次分开的场合下，给药于所述受试者，其中所述分开的场合相隔3周，并且其中所述组合物的每次给药递送如本文所限定的量的寡核苷酸。

本发明还提供了在如本文所限定的人类受试者中治疗如本文所限定的炎症性肠疾病的方法，其包括向所述受试者给药如本文所限定的寡核苷酸或如本文所限定的组合物，其中将所述寡核苷酸或组合物的单独给药在至少两次分开的场合下给予患者，其中所述分开的场合相隔3周，并且其中寡核苷酸或组合物的每次给药递送如本文所限定的量的寡核苷酸。

在优选的实施方案中，寡核苷酸具有序列5'-g*g*a*acagttcgtccat*g*g*c-3'(seqidno:1)，其中cg二核苷酸未甲基化。因此，在优选的实施方案中，寡核苷酸是可比托莫德。

附图说明

图1显示了在给药本发明的寡核苷酸，或安慰剂(添加到标准治疗(standardofcare,(s.o.c.)中)后，处理组和安慰剂组每周报告便血＝0(7天内患者报告结果最大值)的比例的安慰剂对照临床试验的结果。

图2显示了在给药本发明的寡核苷酸，或安慰剂(添加到标准治疗(s.o.c.)中)后，处理组和安慰剂组每周报告每周排便次数<18(7天内患者报告结果的总结)的比例的安慰剂对照临床试验的结果。

图3显示了在给药本发明的寡核苷酸，或安慰剂(添加到标准治疗(s.o.c.)中后，处理组和安慰剂组每周报告每周排便次数<35(7天内患者报告结果的总结)的比例的安慰剂对照临床试验的结果。

图4显示了在给药本发明的寡核苷酸，或安慰剂(添加到标准治疗(s.o.c.)中)后，处理组和安慰剂组每周报告每日排便次数<3(7天内平均每日患者报告结果)的比例的安慰剂对照临床试验的结果。

图5显示了在给药本发明的寡核苷酸，或安慰剂(添加到标准治疗(s.o.c.)中)后，处理组和安慰剂组每周报告每日排便次数<4(7天内平均每日患者报告结果)的比例的安慰剂对照临床试验的结果。

图6显示了在给药本发明的寡核苷酸，或安慰剂(添加到标准治疗(s.o.c.)中)后，处理组和安慰剂组每周报告每日排便次数<5(7天内平均每日患者报告结果)的比例的安慰剂对照临床试验的结果。

图7显示了在10天内dss诱导的结肠炎小鼠模型中小鼠的体重减轻结果。

图8显示了在10天内dss诱导的结肠炎小鼠模型中疾病活动性指数(diseaseactivityindex,dai)的结果。

图9显示了在10天内dss诱导的结肠炎小鼠模型中内窥镜下结肠炎分级的结果。

图10显示了示出第10天在dss诱导的结肠炎小鼠模型中从小鼠结肠样本中分离出的固有层单核细胞(lpmc)的cd4⁺t细胞亚群中的il17⁺、rorγt⁺和il17⁺rorγt⁺细胞的百分比的流式细胞仪分析。

图11显示了第10天在dss诱导的结肠炎小鼠模型中从小鼠结肠样本中分离的骨髓来源的抑制细胞(mdsccd11⁺gr1⁺)种群的流式细胞仪分析。

具体实施方式

本文引用的所有专利、专利申请和出版物均通过引用其全文并入本文。

如本文所用，术语“受试者”是指人类受试者/患者。术语“受试者”和“患者”在本文可互换使用。

如本文所用的，术语炎症性肠病(inflammatoryboweldisease,ibd)是指结肠和胃肠道的一组炎症性病症。ibd的主要类型是溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,uc)和克罗恩氏病。uc和克罗恩氏病之间的主要区别是炎症变化的位置和性质。克罗恩氏病可影响胃肠道的任何部分，从口腔到肛门，而uc仅限于结肠和直肠。在某些情况下，由于表现中的特质，无法对克罗恩氏病或uc做出明确的诊断。在这些情况下，可以诊断为不确定的结肠炎。ibd的其他形式包括但不限于胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、转移性结肠炎、白塞氏病(disease)和不确定性结肠炎。

通常，炎症性肠病是溃疡性结肠炎(uc)。

溃疡性结肠炎(uc)是本领域技术人员众所周知的。根据本发明治疗的溃疡性结肠炎可包括治疗溃疡性直肠炎、远端或左侧结肠炎、广泛性结肠炎、胰腺炎和结肠袋炎。

uc患者通常表现出从缓解到严重活动性的一系列疾病严重程度。临床评估可用于将uc患者分为如d’haens,gastroenterology2007；132:763–786所定义的4个疾病活动亚组，其全部内容通过引用并入本文：(1)缓解(<2或3次排便/每天，粪便中无血和/或脓液，没有全身症状)；(2)轻度活动性疾病(3或4次排便/每天，和/或粪便中有血和/或脓液少于每日，没有全身发烧或体重减轻的症状)；(3)中度活动性疾病(>4次排便/每天，和/或每天有血和/或脓液)，具有最小的全身症状；(4)严重活动性疾病(>6次排便/每天，并且有毒性的证据，如发烧、心动过速、贫血或红细胞沉降速率esr所证明)。

通常，患者遭受中度至重度uc。优选地，患者遭受上述的中度至重度uc。

如本文所用的，词语“治疗”和“进行治疗”应理解为包含疾病或病症的症状的加重/恶化的治疗和/或改善和/或防止和/或减轻，以及对引起该疾病或病症的原因的治疗，并且可以包括以改善或稳定受试者病症的方式逆转、减轻或阻止病症的症状、临床体征和潜在病理。

特别是在溃疡性结肠炎的情况下，“治疗”通常是指在患有活动性溃疡性结肠炎的患者中诱导响应或缓解。因此，通常，寡核苷酸用于患者中活动性溃疡性结肠炎的诱导响应或缓解。诱导响应是指通过例如减轻和/或阻止活动性疾病的症状和临床体征来改善患者的状况。诱导缓解是指将患者从被认为处于疾病活动性阶段的状态转变为被认为处于缓解的状态。

通常通过内窥镜检查、组织学、患者记录的结果和生活质量结果中的一项或多项来评估uc患者的响应或缓解的诱导。因此，提及响应或缓解的诱导包括内窥镜检查缓解、内窥镜检查响应、组织学缓解，组织学响应、由医生或患者记录的结果确定的响应或缓解，和由生活质量确定的响应或缓解中的一种或多种的诱导。这通常可以参考一个或多个标准指数来评估。

通常，溃疡性结肠炎是慢性活动性溃疡性结肠炎。

如本文所用，术语“慢性活动性溃疡性结肠炎”是指患有活动性和慢性的溃疡性结肠炎的患者。活动性溃疡性结肠炎通常如本文所限定的，即患者未缓解。慢性溃疡性结肠炎是指以直肠和结肠的粘膜的慢性炎症为特征的疾病。

优选地，本文中提及的“治疗”是指在患有慢性活动性溃疡性结肠炎的患者中诱导响应或缓解。因此，通常寡核苷酸用于诱导患者中慢性活动性溃疡性结肠炎的响应或缓解。

可以根据一种或多种标准疾病指数确定uc患者中响应或缓解的诱导。典型的疾病指数包括但不限于以下所述：(i)通过临床和生化疾病活动性确定的疾病活动性，(ii)通过内窥镜下疾病活动性确定的疾病活动性，(iii)通过临床和内窥镜下疾病综合活动性确定的疾病活动性，(iv)生活质量，(v)组织学疾病活动性。这些指数在d'haens(同上)中进行了讨论。

基于由临床和生化疾病活动性确定的疾病活动性的指数包括truelove和witts严重性指数；powell-tuck(st.mark’s)指数；临床活动性(rachmilewitz)指数；活动性(seo)指数；医师总体评估；lichtiger(修正的truelove和witts严重性)指数；研究者全球评估；简单的临床结肠炎活动性指数；基于个体症状评分的改善；溃疡性结肠炎临床评分；和患者定义的缓解。这些指数在d'haens(同上)中进行了讨论。

基于由内窥镜下疾病活动性确定的疾病活动性的指数包括truelove和witts乙状结肠镜评估；baron评分；powell-tuck乙状结肠镜评估；内窥镜检查(rachmilewitz内窥镜检查)指数；乙状结肠镜指数；乙状结肠镜炎症等级评分；mayo评分柔性直肠乙状结肠镜评估；sutherland粘膜外观评估；和修改的baron评估。这些指数在d'haens(同上)中进行了讨论。

基于根据临床和内窥镜下疾病活动性确定的疾病活动性的指数包括mayo评分(mayo临床评分/疾病活动性指数)；改良的mayo评分和sutherland指数(疾病活动性指数/uc疾病活动性指数)。mayo评分和sutherland指数在d'haens(同上)中进行了讨论。

基于生活质量的指数包括ibd患者关注度评分表；和炎症性肠病问卷(inflammatoryboweldiseasequestionnaire,ibdq)。这些指数在d'haens(同上)中进行了讨论。

基于组织学疾病活动性的指数包括在d'haens(同上)中讨论的那些，例如geboes指数和riley指数，以及其他指数，例如nancy指数和robarts指数。

评估uc患者的优选指数包括临床活动性(rachmilewitz)指数，mayo评分和改良的mayo评分。

临床活动性(rachmilewitz)指数是考虑7个变量的指数：排便次数、便血、研究人员对症状状态的整体评估、腹部疼痛或痉挛、结肠炎引起的发烧、肠外临床表现和实验室检查结果。这在d’haens(同上)和rachmilewitzd.,bmj1989；298:82–86中进一步进行了讨论，其全部内容通过引用并入本文。确定临床活动性(rachmilewitz)指数可为患者提供0到29分之间的分数(分数越高是指疾病越严重)。

临床缓解可被视为临床活动性(rachmilewitz)指数评分<4分。由临床活动性(rachmilewitz)指数确定的响应表示患者治疗后的得分比治疗前低。

mayo评分是考虑以下4项的指数：排便次数、直肠出血、较低的gi内窥镜检查结果以及医师总体评估(physician’sglobalassessment,pga)。这在d’haens(同上)和schroederkw等人,nengljmed1987；317:1625–1629中进一步进行了讨论，其全部内容通过引用合并于此。mayo评分的确定产生0到12分之间的分数(分数越高是指疾病越严重)。除了所述四个具体项目之外，还对患者的功能评估进行了测量，这并不是指要包括在12-分指数计算中，而应在确定pga评分时用作衡量整体健康水平的量度。

下表列出了4项中每一项的mayo评分。

^b每个患者都可以作为其自己的对照来确定粪便频率的异常程度。

^c每日出血得分代表出血最严重的一天。

^d医师总体评估确认其他三个标准，患者腹部不适和总体健康感的每日记录，以及其他观察结果，例如身体检查结果和患者的体力状态。

根据mayo评分的缓解可定义为下述完全消除：(1)排便次数(正常的排便次数)，(2)直肠出血(无直肠出血)，(3)患者功能评估得分(通常良好)，(4)内窥镜检查结果(正常)，并且pga评分为0。由mayo评分确定的响应通常需要pga评分的改善(与基线相比至少降低1分)，和至少一项其他临床评估(排便次数、直肠出血、患者的功能评估、内窥镜检查结果)的改善，并且在任何其他临床评估中无恶化。

或者，临床缓解可被定义为mayo评分为0，临床改善(响应)定义为mayo评分从基线降低≥3分。

或者，临床缓解可被定义为mayo评分为0，临床改善(响应)定义为mayo评分从基线降低≥3分(或者，如果基线mayo评分≤3分，则降低≥2分)。

或者，由mayo评分确定的缓解可定义为要求乙状结肠镜检查和直肠出血的分项评分均为0，排便次数和pga分项评分的得分为0或1。响应可定义为mayo评分从基线降低≥3分；临床响应可限定为mayo评分(无内窥镜检查分项评分，也称为部分mayo评分)从基线降低≥2分，内窥镜检查响应可定义为内窥镜检查评分从基线降低≥1分。

或者，临床缓解可被定义为mayo评分≤2分，而没有个体分项评分>1分，临床响应可被定义为总mayo评分从基线降低≥3分和≥30％，和直肠出血分项评分降低≥1或绝对直肠出血分项评分为0或1，粘膜愈合可被定义为绝对内窥镜检查分项评分为0或1。

在一个实施方案中，患有活动性溃疡性结肠炎的患者的mayo评分＞2。溃疡性结肠炎缓解期患者的mayo评分通常≤2。

改良的mayo评分与上面定义的mayo评分有关。改良的mayo评分与mayo评分的不同之处在于，结肠镜检查/乙状结肠镜检查评分不太考虑易碎性。因此，改良的mayo评分的评分表如下所示。

^b每个患者都可以作为其自己的对照来确定粪便频率的异常程度。

^c每日出血得分代表出血最严重的一天。

^d医师总体评估确认其他三个标准，患者腹部不适和总体健康感的每日记录，以及其他观察结果，例如身体检查结果和患者的体力状态。

改良的mayo评分的缓解和响应值与上面所述的mayo评分相同。改良的mayo评分通常根据fda的草案指南文件“溃疡性结肠炎：行业临床试验终点指南”进行评估，其见于http://www.fda.gov/downloads/drugs/guidancecomplianceregulatoryinformation/guidances/ucm515143.pdf。

另外，改良的mayo评分不同于mayo评分之处可在于，结肠镜检查/乙状结肠镜检查评分不太考虑易碎性，而且在于，医师整体评估是非决定性的。因此，改良的mayo评分的评分表也可以如下。

^b每个患者都可以作为其自己的对照来确定粪便频率的异常程度。

^c每日出血得分代表出血最严重的一天。

此替代性改良的mayo评分的缓解值和响应值通常如上针对mayo评分所述。或者，可以根据该替代性改良的mayo评分，通过以下分项评分定义缓解：i)直肠出血为0，ii)排便次数为0或1(与基线即第0周相比降低至少1分)，和iii)内窥镜检查评分为0或1(不包括易碎性)。

uc缓解的诱导可以根据s.p.l.travis,alimentpharmacolther2011；34:113–124中列出的标准进行，其全部内容通过引用并入本文，即完全停止直肠出血，紧迫感和增加的排便次数，最好通过内窥镜下粘膜愈合来确认。

或者，可以根据e.f.stange,journalofcrohn'sandcolitis(2008)2,1–23；s.p.l.travis,journalofcrohn's和colitis(2008)2,24–62；kgeboes,gut2000；47:404–409进行响应或缓解的诱导；其全部内容通过引用并入本文。

可以根据一种或多种标准疾病指数确定克罗恩氏病患者的响应或缓解的诱导。典型的指数包括克罗恩氏病活动指数(crohn’sdiseaseactivityindex,cdai)。cdai在love,“pharmacotherapyformoderatetosevereinflammatoryboweldisease:evolvingstrategies”,amjmanagcare.2016；22:s39-s50；peyrin-biroulet等人“definingdiseaseseverityininflammatoryboweldiseases:currentandfuturedirections”clingastroenterolhepatol.2015；pii:s1542-3565(15)00787-00789.doi:10.1016/j.cgh.2015.06.001；和ungar等人“advancesinthedevelopmentofnewbiologicsininflammatoryboweldisease”,annalsofgastroenterology(2016)29,243-248中进行了讨论。评估克罗恩氏病患者的其他指数包括harvey-bradshaw指数和炎症性肠病问卷。

cdai是考虑了与克罗恩氏病相关的大量症状的综合评分，其包括液便或软便的量；腹痛；一般健康状况；并发症(关节疼痛(关节痛)或弗兰克关节炎的存在)；虹膜或葡萄膜炎的炎症；结节性红斑、坏疽性脓皮病或口疮的存在；肛门裂痕，瘘管或脓肿；其他瘘管；前一周的发烧)的存在；使用止泻宁(lomotil)或阿片类药物止泻；腹部肿块的存在；血细胞比容值；与标准重量的百分比偏差。根据cdai的临床缓解通常用<150分表示。

根据本发明治疗的受试者通常是对抗炎疗法而言难治的或响应不足或不耐受和/或证明或先前证明对至少一种免疫调节剂tnf-α抑制剂或抗整合素响应不足，响应丧失或不耐受。因此，通常受试者先前已经接受或目前正在接受抗炎疗法，优选用于uc的抗炎疗法，和/或免疫调节、tnf-α抑制剂或抗整合素治疗，优选用于uc的此类治疗。本文讨论了用于uc的抗炎疗法，其通常包括gcs，柳氮磺胺吡啶和5-asa。

本文讨论了免疫调节剂、tnf-α抑制剂和抗整合素，其通常包括咪唑硫嘌呤、6-巯基嘌呤，和生物制剂，所述生物制剂包括tnf-α抑制剂英夫利昔单抗及其生物类似物和衍生物、戈利木单抗及其生物类似物和衍生物、阿达木单抗及其生物类似物和衍生物、抗整合素维多珠单抗及其生物类似物和衍生物。

难治性疾病或对治疗响应不足的疾病通常是这样的疾病，即尽管有至少一个疗程史，即本发明上下文中的抗炎疗法史，但活动性疾病的体征和症状仍持续存在的疾病。尽管有两个或多个疗程的抗炎疗法史，但通常在uc的治疗中，活动性疾病的体征和症状仍持续存在。本领域技术人员将很好地理解针对uc的抗炎疗法的典型治疗过程，并且所述典型治疗过程通常包括以足够的剂量进行足够的剂量数以诱导典型患者的缓解。

在本发明的上下文中，对治疗，抗炎疗法不耐受是指该治疗已在受试者中引起了不能耐受的副作用，例如通常会导致治疗中断的副作用。

通常，受试者先前已经接受或目前正在接受氨基水杨酸(5-asa)，优选针对uc的5-asa治疗。

通常，受试者先前已经接受或目前正在接受口服糖皮质激素(gcs)，优选针对uc的口服ucs治疗。

通常，抗炎疗法难治的或对抗炎疗法响应不足或不耐受的受试者显示出或先前显示出对直肠、口服和/或肠胃外gcs治疗(由于早期副作用而不包括gcs治疗)的响应不足或响应丧失(即难治的)或不耐受。

通常，抗炎疗法难治的或对抗炎疗法响应不足或不耐受的受试者具有对gcs治疗不充分响应(例如，类固醇难治性)、类固醇依赖性、或gcs治疗响应丧失、或gcs治疗不耐受的病史或当前状态。在治疗溃疡性结肠炎的过程中，受试者通常已接受类固醇/gcs。

类固醇难治性通常是指尽管有至少一个疗程的类固醇治疗史(例如包括每日剂量相当于强的松(prednisone)40-60mg，口服给药30天或静脉内(intravenous,iv)给药7至10天的诱导方案)，但受试者缺乏有意义的临床响应，即表现出持续活动性溃疡性结肠炎的体征和症状。

类固醇依赖性通常是指在开始类固醇治疗后3个月内无法将类固醇降低到相当于泼尼松龙(prednisolone)10mg/d以下的水平，而无复发性活动性溃疡性结肠炎的患者，或在停止类固醇治疗后3个月内复发的患者。

gcs治疗不耐受通常是指受试者经历了gcs治疗后其无法耐受的副作用，例如但不限于库欣综合征(cushing′ssyndrome)、骨量减少/骨质疏松症、高血糖症，失眠或感染。

对免疫调节剂响应不足或响应丧失通常是指尽管先前已使用至少一种免疫调节剂进行了治疗(例如口服咪唑硫嘌呤(≥1.5mg/kg)或6-巯基嘌呤(≥0.75mg/kg)的一个8周方案)，但活动性溃疡性结肠炎的体征和症状仍持续存在。

对免疫调节剂不耐受通常是指受试者在接受免疫调节剂后经历恶心/呕吐、腹痛、胰腺炎、肝功能测试(lft)异常、淋巴细胞减少、硫嘌呤甲基转移酶(tpmt)基因突变或感染或其他副作用。

对tnf-α抑制剂响应不足或响应丧失是指尽管先前已使用至少一种tnf-α抑制剂进行了治疗，例如英夫利昔单抗(5mg/kg(iv)，2剂，相隔至少2周)或其生物类似物或衍生物；或戈利木单抗(200/100mg(sc)，2剂，相隔至少2周)或其生物类似物或衍生物；或阿达木单抗(160/80mg(sc)，2剂，相隔至少2周)或其生物类似物或衍生物的4周诱导方案(或根据当前标签推荐剂量)，活动性溃疡性结肠炎的体征和症状仍持续存在，或在先前临床受益后的维持用药期间出现症状复发。

对tnf-α抑制剂不耐受是指在接受tnf-α抑制剂后与输注相关的响应、脱髓鞘、充血性心力衰竭、感染或其他副作用。

对抗整合素响应不足或响应丧失是指尽管先前用抗整合素进行了治疗，例如至少10周方案的维多珠单抗300mg(iv)或生物类似药或衍生物，或按照当前标签中推荐的，但活动性溃疡性结肠炎的体征和症状仍持续存在，或在先前临床获益后的维持用药期间出现症状复发。

通常，受试者已被诊断为患有左侧溃疡性结肠炎(即远端结肠炎)，其包括直肠乙状结肠炎。

通常，所述受试者对于结肠切除术是选择性的。

如本文所用，术语“结肠切除术”是指任何程度的大肠(结肠)的手术切除。在此，结肠切除术包括但不限于右半结肠切除术、左半结肠切除术、扩展半结肠切除术、横结肠切除术、乙状结肠切除术、直肠乙状结肠切除术、哈特曼氏手术、“双管”或米库利兹结肠造口术、全结肠切除术(也称为雷恩氏手术)、全部直肠结肠切除术和结肠次全切除术。如本文所用，短语“对于结肠切除术是选择性的”是指基于医师和外科医生的评估受试者可以选择进行非紧急结肠切除术程序。选择进行结肠切除术的受试者可以是但不限于可用疗法(对于溃疡性结肠炎)难治的或对可用疗法不耐受的受试者(对于溃疡性结肠炎)。这不同于紧急结肠切除术，紧急结肠切除术是对患有急性疾病或受伤且需要立即就医的受试者的一种急性干预措施。该短语还包括选择做结肠切除术的受试者。

如本文所用，术语“寡核苷酸”是指由多个连接的单个核苷单元形成的多核苷。这样的寡核苷酸可从现有的核酸来源获得，包括基因组dna或cdna、质粒、载体或细菌dna，但优选通过合成方法产生。核苷残基可以通过任意众多已知的核苷间键中的任一个来彼此耦合。这样的核苷间键包括但不限于天然的核苷间磷酸二酯键或实际上是修饰的核苷间键，例如但不限于硫代磷酸酯(phosphorothioate)、二硫代磷酸酯、烷基膦酸酯、烷基硫代膦酸酯(alkylphosphonothioate)、磷酸三酯、氨基磷酸酯、硅氧烷、碳酸酯、烷氧羰基、对乙酰氨基酸酯(acetamidate)、氨基甲酸酯、吗啉基、硼基(borano)、硫醚、桥连的氨基磷酸酯、桥连的亚甲基磷酸酯、桥连的硫代磷酸酯和砜核苷间键。术语“寡核苷酸”还包括具有一个或多个立体特异性核苷间键(例如，(rp)-或(sp)-硫代磷酸酯、烷基膦酸酯或磷酸三酯键)的多核苷。如本文所用，术语“寡核苷酸”和“二核苷酸”明确旨在包括具有任何这样的核苷间键的多核苷和二核苷，而无论该键是否包含磷酸基团。在某些优选的实施方案中，这些核苷间键可以是磷酸二酯、硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯键或其组合。

术语“寡核苷酸”还包括具有额外取代基的多核苷，所述额外取代基包括但不限于蛋白质基团、亲脂基团、嵌入剂、二胺、叶酸、胆固醇和金刚烷。术语“寡核苷酸”还涵盖任何其他含核碱基的聚合物，包括但不限于肽核酸(pna)、具有磷酸基的肽核酸(phona)、锁核酸(lna)、吗啉代主链寡核苷酸和主链部分有烷基接头(linker)或氨基接头的寡核苷酸。烷基接头可以是支链的或直链的，取代的或未取代的，纯手性的或外消旋混合物。

本发明的寡核苷酸可包括天然存在的核苷、修饰的核苷或其混合物。如本文所用，术语“修饰的核苷”是包括修饰的杂环碱基、修饰的糖部分或其组合的核苷。在一些实施方案中，如本文所述，修饰的核苷是非天然嘧啶或嘌呤核苷。在一些实施方案中，修饰的核苷是2'-取代的核糖核苷，阿拉伯核苷(arabinonucleoside)或2'-脱氧-2'-取代的阿拉伯糖苷。

如本文所用，术语“杂合寡核苷酸”是具有多于一种类型核苷的寡核苷酸。

本文中，术语“寡核苷酸”包括杂合寡核苷酸和嵌合寡核苷酸。“嵌合寡核苷酸”是在其序列结构内具有多于一种类型的核苷间键的寡核苷酸。这种嵌合寡核苷酸的一个优选实例是包含硫代磷酸酯、磷酸二酯或二硫代磷酸酯区域和非离子键如烷基膦酸酯或烷基硫代磷酸酯键的嵌合寡核苷酸(us5635377和us5366878)。

在此，术语“寡核苷酸”也包括环化变体和环状寡核苷酸。

优选地，寡核苷酸包含至少一种天然存在的磷酸二酯，或一种修饰的硫代磷酸酯，或二硫代磷酸酯核苷间键，但是也考虑了以下的优选的键或实际上主链修饰：包括但不限于甲基膦酸酯、甲基硫代磷酸酯、磷酸三酯、硫代磷酸三酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、三酯前药、砜、磺酰胺、氨基磺酸酯、甲缩醛(formacetal)、n-甲基羟胺、2'ome(在2'位的氧甲基)、碳酸酯、氨基甲酸酯、吗啉代、硼代膦酸酯、氨基磷酸酯、尤其是伯氨基氨基磷酸酯、n3氨基磷酸酯和n5氨基磷酸酯以及立体特异性键(例如(rp)-或(sp)-硫代磷酸酯、烷基膦酸酯或磷酸三酯键)。

核苷的糖部分可以是非天然存在的糖基。在本文中，“天然存在的糖部分”是作为核酸的一部分天然存在的糖部分，例如核糖和2'-脱氧核糖，“非天然存在的糖部分”是指不是作为核酸的一部分天然存在的，但可以在寡核苷酸的主链中使用的任何糖，例如但不限于己糖。阿拉伯糖和阿拉伯糖衍生物是优选的糖部分的实例。

修饰或取代的寡核苷酸通常，由于期望性质例如增强的细胞摄取、增强的核酸靶向亲和力和在核酸酶存在下增强的稳定性，而优于天然形式。寡核苷酸通常由多于十(10)个直到一百(100)个或更多个脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸组成，尽管优选为在约八(8)个至约四十(40)个之间，最优选为在约八(8)个至约二十(20)个之间。确切的大小将取决于许多因素，而这些因素转而取决于寡核苷酸的最终功能或用途。寡核苷酸可以以任何方式产生，包括化学合成、dna复制、反转录或其组合。

用于本发明的寡核苷酸包含序列5'-ggaacagttcgtccatggc-3'(seqidno:2)。通常，至少一种cg二核苷酸是未甲基化的。

通常，所述寡核苷酸中的至少一个核苷酸具有主链修饰。通常，所述寡核苷酸中的至少一个核苷酸具有磷酸主链修饰。主链修饰通常是硫代磷酸酯或二硫代磷酸酯修饰。

在序列中，例如以下序列中，硫代磷酸酯键可以用星号(*)说明：

5'-g*g*a*acagttcgtccat*g*g*c-3'(seqidno:1)，其中cg二核苷酸是未甲基化的。

优选地，所述寡核苷酸具有序列

5'-g*g*a*acagttcgtccat*g*g*c-3'(seqidno:1)，其中cg二核苷酸是未甲基化的。因此，优选地所述寡核苷酸是可比托莫德。

因此，本发明优选地提供了用于治疗在如本文所限定的人类受试者中如本文所限定的活动性溃疡性结肠炎的可比托莫德，其中在至少两次分开的场合下，向受试者给药如本文所限定的量的单次剂量的可比托莫德，其中所述分开的场合相隔3周。

在本发明的疗法中，给药了单次剂量为150mg至350mg的所述寡核苷酸，优选可比托莫德。通常，在每次单次剂量/给药中给予相同剂量的寡核苷酸，但是也可以使用不同的剂量。

通常，给药单次剂量为大于100mg至高达350mg的所述寡核苷酸，优选可比托莫德。

通常，在每次剂量/给药中给予175mg至325mg，优选200mg至300mg，更优选210至290，再更优选220至280，还再更优选230至270，甚至更优选240至260mg，甚至更优选245至255，甚至更优选249至251mg的所述寡核苷酸，优选可比托莫德。

优选地，给药约250mg的所述寡核苷酸，优选可比托莫德。因此，在至少两次场合中的各次下，给药约250mg的所述寡核苷酸，优选可比托莫德。

在活性剂剂量的上下文下，本文所用的“约”是指+/-10％，典型地+/-5％，优选+/-1％。

更优选地，给药250mg的所述寡核苷酸，优选可比托莫德。

在本发明的疗法中，在至少两次分开的场合下向患者给药单次剂量(如本文指定量)的所述寡核苷酸，其中所述分开的场合相隔3周。这意味着在间隔三周的指定剂量/给药之间，患者不会再接受任何其他寡核苷酸。在间隔三周的指定剂量/给药之间的三周窗口期中，患者未接受如本文所限定的寡核苷酸，但可能接受一种或多种用于治疗溃疡性结肠炎的其他治疗剂。

当在多于两次的场合下向患者给药一定剂量的所述寡核苷酸时，则通常每次场合为在前一次场合之后的三周。通常，在例如2、3、4、5、6、7、8、9或10次单独的场合下向患者施用一定剂量(本文指定的量)的所述寡核苷酸，每次场合为前一次场合之后的三周。通常，向患者给药一定剂量的所述寡核苷酸，直到该患者缓解为止，如上所述。在一些实施方案中，仅在两次分开的场合下向受试者给药单次剂量，所述分开的场合相隔3周。

应该理解的是，提及在至少两次分开的场合下给药，其中所述分开的场合相隔3周，是指用于诱导缓解的单个治疗方案。因此，在按照本发明的治疗过程之后，不排除在将来用寡核苷酸进行进一步的治疗，例如在缓解后复发为活动性疾病状态。

在患者仅接受两次剂量的情况下，第一次剂量将在第0天递送，第二次剂量将在三周后递送。在患者接受三次剂量的情况下，第一次剂量将在第零天递送，第二次剂量将在三周后递送，第三剂将在又一三周后递送，即从第0天开始六周。

如本文所用，术语“相隔3周”在某些实施方案中是指精确地相隔21天给药所述剂量，即，第一次剂量在第0天施用，而另一剂量在第21天给药。然而，应当理解，对此的微小变化仍在本发明的范围内。由于例如患者患病或药物不能利用导致的这样的微小变化是不可避免的。因此，如本文所用的“间隔3周”是指间隔14-28天，通常间隔18-24天，或者间隔19-23天，或者间隔20-22天给药。

因此，在某些实施方案中，本发明提供了如本文所限定的寡核苷酸，其用于治疗在如本文所限定的人受试者中如本文所限定的溃疡性结肠炎，其中在至少两次例如两次分开的场合下，向患者给药如本文所限定的量的单次剂量的所述寡核苷酸，其中所述分开的场合相隔18-24天，相隔19-23天，或相隔20-22天。

本发明中使用的药物可以作为适应症的单一疗法给药，或与其他药物(一种或多种)作为适应症的辅助疗法一起施用，如下文更详细地描述的。在辅助(或“附加”(add-on))疗法的情况下，用于本发明的药物可以与其他药物(一种或多种)，例如以固定剂量组合或以分开的剂量，同时地、分开地或依次地给药。

如本文所用，术语“附加(add-on)”是指在不中断当前疗法或药物方案的情况下除了当前疗法或药物方案之外还给药所述寡核苷酸。

因此，寡核苷酸可以作为单一疗法给药，或与一种或多种其他治疗溃疡性结肠炎的治疗剂组合给药。通常，寡核苷酸可以作为单一疗法给药，或与一种或多种用于治疗溃疡性结肠炎的其他治疗剂组合给药，所述其他治疗剂选自免疫调节药物、抗tnf治疗药物或用于治疗溃疡性结肠炎的其他合适的药物。

适合与所述寡核苷酸组合使用的此类药物的实例包括但不限于gcs或衍生物；泼尼松龙、decortin、抗tnf或衍生物；英夫利昔单抗及其生物类似物和衍生物、阿达木单抗及其生物类似物和衍生物、戈利木单抗及其生物类似物和衍生物、抗整合素或衍生物；维多珠单抗及其生物类似物和衍生物、天然ifn-β、硫嘌呤或衍生物；咪唑硫嘌呤、6-巯基嘌呤、5-asa、柳氮磺胺吡啶、甲氨蝶呤、环孢菌素，及其等同物。

通常，接受所述寡核苷酸的受试者还接受一种或多种其他药物，所述其他药物选自gcs、decortin、5-asa、咪唑硫嘌呤、6-巯基嘌呤、柳氮磺胺吡啶、甲氨蝶呤、泼尼松龙及其等同物或衍生物。

优选地，接受所述寡核苷酸的受试者还接受一种或多种其他药物，所述其他药物选自gcs、5-asa、咪唑硫嘌呤、6-巯基嘌呤、柳氮磺胺吡啶和甲氨蝶呤。

更优选地，接受所述寡核苷酸的受试者还接受一种或多种其他药物，所述其他药物选自口服gcs、口服5-asa、咪唑硫嘌呤、6-巯基嘌呤和口服甲氨蝶呤。

在一些实施方案中，接受所述寡核苷酸的受试者还接受一种或多种类固醇药物，例如皮质类固醇和糖皮质激素。

为了本发明的目的，术语“与...组合”和“附加”是指在同一患者中治疗相同疾病的过程中，并且包括以任何顺序给药寡核苷酸和一种或多种其他治疗剂，包括同时给药，以及间隔长达几个月间隔的暂时间隔顺序。

通常，将所述寡核苷酸局部地给药，例如局部给药于粘膜。

通常，所述寡核苷酸通过结肠内给药。结肠内给药通常通过直肠进行。结肠内给药通常使用灌肠或导管进行。结肠内给药可包括通过直肠灌肠剂给药。结肠内给药可以是局部的，例如在结肠镜检查期间借助于通过结肠镜检查活检通道插入的喷射导管或其他合适的医疗设备进行。所述寡核苷酸可被递送至降结肠的上部或至结肠的横向区域。然而，其他区域也可以在合适的时候使用。也可以局部给药至胃肠道的其他部位。在该方面的又一实施方案中，所述寡核苷酸可以通过任何合适的给药途径来给药，例如但不限于吸入、鼻内、肠胃外、口服、皮内、皮下、阴道和直肠给药。此外，在某些实施方案中，可以使用所述寡核苷酸的全身给药。

寡核苷酸可以以药物组合物的形式给药，该药物组合物包含如本文所限定的寡核苷酸以及一种或多种药学上可接受的载体。如本文所用，术语“载体”涵盖任何赋形剂、稀释剂、填充剂、盐、缓冲剂、水、稳定剂、增溶剂、脂质或本领域公知的用于药物制剂的其他材料。应该理解，载体的特性将取决于具体应用的给药途径。

如本文所用，术语“药学上可接受的”是指不干扰免疫调节性寡核苷酸的有效性并且与诸如细胞、细胞培养物、组织、器官或有机体的生物系统相容的材料。优选地，生物系统是活有机体，例如脊椎动物。

通常，组合物是寡核苷酸在液体载体中的溶液。

通常，载体是水，优选无菌水。因此，通常该组合物包含如本文所限定的寡核苷酸和水。

优选地，载体是水，并且寡核苷酸(以组合物的形式)结肠内给药，例如作为直肠灌肠剂。

已经发现寡核苷酸有利地在水中稳定，因此可以以基本上由如本文所限定的寡核苷酸和水组成的组合物的形式给药寡核苷酸。该组合物可以由如本文所限定的寡核苷酸和水组成。

基本上由各组分组成的组合物是指包含基本上由其组成的组分以及其他组分的组合物，条件是其他组分不会实质性地影响组合物的基本特性。通常，基本上由某些组分组成的组合物将包含大于或等于95wt％(相对于组合物的总重量)的那些组分或大于或等于99wt％(相对于组合物的总重量)的那些组分。

因此，基本上由如本文所限定的寡核苷酸和水组成的组合物包含大于或等于95wt％的寡核苷酸和水(相对于组合物的总重量)或大于或等于99wt％的寡核苷酸和水(相对于组合物的总重量)。

药物组合物中寡核苷酸的浓度将取决于几个因素而变化，包括要给药的寡核苷酸的剂量。溶液形式的组合物中寡核苷酸的典型浓度为1mg/ml至20mg/ml，优选4至10mg/ml，在某些情况下为10至20mg/ml，优选4.8mg/ml至5.2mg/ml，更优选约5.0mg/ml。

优选地，本发明提供了用于在如本文所限定的人类受试者中治疗如本文所限定的溃疡性结肠炎的可比托莫德，其中仅在两次分开的场合下，向患者给药单次剂量为约250mg的可比托莫德，所述分开的场合相隔3周。

或者，本发明提供了用于在如本文所限定的人类受试者中治疗如本文所限定的溃疡性结肠炎的可比托莫德，其中在两个或更多个分开的相隔3周的场合下，向患者给药单次剂量为约250mg的可比托莫德直至受试者缓解，通常通过如本文所限定的指数确定所述缓解。

更优选地，本发明提供了用于在如本文所限定的人类受试者中治疗如本文所限定的活动性溃疡性结肠炎的可比托莫德，其中仅在两次分开的场合下，向患者给药单次剂量为约250mg的可比托莫德，所述分开的场合相隔3周，其中可比托莫德以含有可比托莫德和水的药物组合物的形式给药。

更优选地，本发明提供了用于在如本文所限定的人类受试者中治疗如本文所限定的活动性溃疡性结肠炎的可比托莫德，其中仅在两次分开的场合下，向患者给药单次剂量为约250mg的可比托莫德，所述分开的场合相隔3周，其中可比托莫德通过结肠内或直肠内给药。

更优选地，本发明提供了用于在如本文所限定的人类受试者中治疗如本文所限定的活动性溃疡性结肠炎的可比托莫德，其中仅在两次分开的场合下，向患者给药单次剂量为约250mg的可比托莫德，所述分开的场合相隔3周，其中可比托莫德以包含可比托莫德和水的药物组合物的形式通过结肠内或直肠给药。

甚至更优选地，本发明提供了用于在如本文所限定的人类受试者中治疗如本文所限定的活动性溃疡性结肠炎的可比托莫德，其中仅在两次分开的场合下，向患者给药单次剂量为约250mg的可比托莫德，所述分开的场合相隔3周，其中可比托莫德以包含可比托莫德和水的药物组合物的形式通过结肠内或直肠内给药。

本发明还提供了包含如本文所限定的寡核苷酸以及一种或多种药学上可接受的载体的药物组合物，其用于在如本文所限定的人类受试者中治疗如本文所限定的炎症性肠病，其中在至少两次分开的场合下，向患者给药单次剂量的组合物，其中所述分开的场合相隔3周，并且其中每次给药组合物递送了一定量的如本文所限定的寡核苷酸。

用于如上文所限定的用途的寡核苷酸的优选特征也是使用组合物的优选特征。

本发明还提供了如本文所限定的寡核苷酸或如本文所限定的药物组合物在用于治疗如本文所限定的人类受试者的如本文所限定的炎症性肠病的药物的制备中的用途，其中在至少两次分开的场合下，向患者给药所述寡核苷酸或组合物的单次剂量，其中所述分开的场合相隔3周，并且其中每次给药所述寡核苷酸或组合物递送了一定量的如本文所限定的寡核苷酸。

用于如上所述使用的寡核苷酸的优选特征也是使用寡核苷酸或组合物的优选特征。

本发明还提供了治疗如本文所限定的人类受试者中的如本文所限定的炎症性肠疾病的方法，其包括向所述受试者给药如本文所限定的寡核苷酸或如本文所限定的组合物，其中在至少两次分开的场合下，向患者给药所述寡核苷酸或组合物的单次剂量，其中所述分开的场合相隔3周，并且其中每次给药寡核苷酸或组合物递送了一定量的如本文所限定的寡核苷酸。

本发明还提供了治疗如本文所限定的人类受试者中的如本文所限定的炎症性肠疾病的方法，该方法包括：

(a)选择如本文所限定的患者；和

(b)向所述患者给药如本文所限定的寡核苷酸或如本文所限定的组合物，其中在至少两次分开的场合下，向患者给药所述寡核苷酸或组合物单次剂量，其中所述分开的场合相隔3周，并且其中每次给药寡核苷酸或组合物递送了一定量的如本文所限定的寡核苷酸。

用于如上所述使用的寡核苷酸的优选特征也是要求保护的方法的优选特征。

下列非限制性实施例说明了本发明。

实施例

实施例1–临床试验研究

随机双盲的、安慰剂对照的试验根据既定方法评估了局部可比托莫德对中度至重度活动性溃疡性结肠炎患者的疗效和安全性。

方法：根据该领域的标准的入选标准选择男性和女性进行试验，所述入选标准包括以下：

1.男性或女性≥18岁；

2.建立uc诊断，距诊断的最短时间为≥3个月；

3.中度至重度活动性左侧uc(疾病应在肛门边缘以上延伸15cm或更多且不超过脾曲)，由6-12的改良的mayo评分(排除内窥镜检查分项评为1级的易碎性)确定，内镜分项评分为2，由筛查就诊1b(第7天至第10天筛查就诊)时进行的内窥镜检查中心读数评估，且无其他个体分项评分<1；

4.当前口服使用5-asa/sp，或口服使用5-asa/sp的病史；

5.当前使用gcs，或gcs依赖性、难治性或不耐受性的病史，包括由于早期副作用而没有进行gcs治疗(仅必须满足gcs标准之一，请参见欧洲克罗恩和结肠炎组织(europeancrohn′sandcolitisorganization,ecco)指导方针中的定义)；

6.对以下试剂中的至少一种表现出响应不足、响应丧失或不耐受：

·免疫调节剂，例如环孢霉素、甲氨蝶呤、aza/6-mp、他克莫司(tacrolimus)

ο例如，尽管先前使用口服aza(≥1.5mg/kg)，或6-mp(≥0.75mg/kg)，或(由于不耐受或硫代嘌呤甲基转移酶(tpmt)缺乏症引起的)更低剂量的至少一个8周方案，但活动性疾病的体征和症状仍持续存在，或

ο例如，对至少一种免疫调节剂的先前不耐受(包括但不限于恶心/呕吐、腹痛、胰腺炎、肝功能检查(lft)异常、淋巴细胞减少、tpmt基因突变、感染)

·tnf-α抑制剂和/或抗整合素：

ο尽管先前使用例如下述药物的间隔至少2周共2次剂量(或根据当前标签推荐的剂量)的至少一种诱导方案的治疗，但活动性疾病的体征和症状仍持续存在：

■英夫利昔单抗5mg/kg(静脉(iv))或

■戈利木单抗200/100mg(皮下(sc))或

■阿达木单抗160/80mg(sc)或

■维多珠单抗300mg(iv)或

ο不耐受史(包括但不限于与输液有关的响应、脱髓鞘、充血性心力衰竭、感染)

先前的临床获益后，使用上述任何一种药物在维持用药期间的症状复发(继发性失败)[尽管临床获益不合格，但停药]；

7.在研究期间允许接受以下uc药物的治疗剂量：

a)口服gcs治疗(≤20mg强的松或同等剂量/每天)，条件是该剂量在就诊1a(第14天)前已稳定2周；

b)在就诊1a之前至少8周已开始口服mmx布地奈德(budesonide)治疗(9mg/每天)；

c)口服5-asa/sp化合物，条件是该剂量在就诊1a前已稳定2周并且在就诊1a前至少8周已开始；

d)aza/6-mp，条件是剂量在就诊1b前已稳定8周，并且在就诊1a前至少3个月已开始；

8.了解治疗的能力，愿意遵守所有研究要求以及提供知情同意的能力。

可以根据本领域中已知的排除标准将患者排除在试验之外，所述排除标准包括：

1.疑似鉴别诊断，例如克罗恩氏小肠结肠炎、缺血性结肠炎、放射性结肠炎、不确定性结肠炎、感染性结肠炎、憩室病、相关性结肠炎、镜下结肠炎、大规模假性息肉病或不可通过性狭窄；

2.急性暴发性uc和/或全身毒性体征；

3.uc仅限于直肠(在肛门边缘上方延伸<15cm的疾病)；

4.恶性病史，但以下情况除外：

·已治疗(治愈)的基底细胞或鳞状细胞原位癌；

·已治疗(治愈)的子宫颈上皮内瘤变或子宫颈原位癌，筛查就诊1a前5年内无复发迹象；

5.研究者认为，任何临床重大疾病的病史或存在可能会影响患者遵守治疗方案和治疗方案程序的可能性或会混淆研究结果或损害患者安全性；

6.入选时用环孢霉素、甲氨蝶呤、他克莫司、tnf-α抑制剂、抗整合素或类似的免疫抑制剂和免疫调节剂同时治疗。使用此类药物的任何在先治疗必须在就诊1a前至少8周停止，或者具有不可测量的血清浓度水平；

7.就诊1b前2周内用直肠gcs、5-asa/sp或他克莫司治疗；

8.就诊1a前2周内用抗生素或非甾体抗炎药(nsaid)长期治疗(允许短期使用抗生素，偶尔使用nsaids的治疗方案)；

9.严重的活动性感染；

10.包括难辨梭菌(clostridiumdifficile)粪便试验阳性的胃肠道感染；

11.目前正在接受肠胃外营养或输血；

12.在筛查期间正在哺乳或血清妊娠试验阳性的女性；

13.有生育能力的女性在整个研究期间未使用可靠的避孕方法(可靠的方法是屏障保护、激素避孕、宫内节育器或禁欲)；

14.在入选前最后一次治疗实验产品后的5个半衰期内和至少30天内，同时参与另一项具有研究性治疗或以前使用过研究性治疗的临床研究；

15.以前暴露于可比托莫德；

被选择进行试验的患者被随机分配至治疗时序，其包括有效剂量的可比托莫德(包括接受间隔三周的两次250mg可比托莫德给药的组)和由直肠灌肠剂给药的安慰剂。

试验终点/评估的临床标准如下：

·第4周或第6周诱导临床缓解、症状缓解，内窥镜检查缓解或(完全)组织学缓解的患者比例

·第4周或第6周没有直肠出血的患者比例

·第4或6周排便次数正常或增加的患者比例

·第6周和第10周诱导持久性症状缓解的患者比例

·第6周临床响应的患者比例

·第6周有组织学响应的患者比例

·排便紧迫性评分降低的患者比例

·与第0周相比，第1、2、3和6周粪便钙卫蛋白的平均变化

·第6周至第10周缓解的患者中类固醇剂量的平均变化

·与第0周相比，第6周的每个炎症性肠病问卷(inflammatoryboweldiseasequestionnaire,ibdq)子域的平均变化

·第6周内窥镜和组织学缓解的患者比例

结论：中度至重度溃疡性结肠炎患者间隔三周给药两次剂量的250mg可比托莫德的治疗可改善临床疗效，表明可比托莫德可在治疗溃疡性结肠炎中的有效性。

参考例1–显示最佳给药频率的临床试验结果

在一项随机双盲的安慰剂对照试验中，将131例中度至重度活动性溃疡性结肠炎患者随机分组，以在基线和第4周的下消化道摄影内窥镜检查期间接受局部给药的两次单剂量的可比托莫德/卡帕普鲁特(30mg)或安慰剂。

使用电子日记十二周，监测处理组和安慰剂组的患者的按周他们的最大便血量(无、少或多)、每周排便次数(<18、18-35、36-60或61+)和每日排便次数(<1、1-1.99、2-2.99、3-3.99、4-4.99、5-5.99、6-6.99、7-7.99或者8+)。

整理结果并计算处理组相对于安慰剂组的治疗差量。从这些结果可以看出，初次给药3周后有特别高的治疗差量。

下图显示了处理组和安慰剂组的结果：

图1显示了按周报告便血＝0(7天内患者报告结果最大值)的处理组和安慰剂组的比例。

图2显示了按周报告每周排便次数<18(7天内患者报告结果的总结)的处理组和安慰剂组的比例。

图3显示了按周报告的每周排便次数<35(7天内患者报告结果的总结)的处理组和安慰剂组的比例。

图4显示了按周报告的每日排便次数＜3(7天内平均每日患者报告结果)的处理组和安慰剂组的比例。

图5显示了按周报告的每日排便次数＜4(7天内平均每日患者报告结果)的处理组和安慰剂组的比例。

图6显示了按周报告的每日排便次数<5(7天内平均每日患者报告结果)的处理组和安慰剂组的比例。

下表列出了试验中评估的各种临床结果的治疗差量。

实施例2–葡聚糖硫酸酯钠(dss)诱导的结肠炎小鼠模型

材料和方法

小鼠：balb/c小鼠获自查尔斯河实验室(charlesriverlaboratories)，研究模型(researchmodels)和服务公司(sulzfeld,germany)。八周龄雌性balb/c小鼠用于实验，并保留在单独通风的笼子中，以符合动物福利法。水和食物是任意可获得的。

dss诱发结肠炎：向8周龄雌性balb/c小鼠的饮用水中给药3％(w/v)葡聚糖硫酸酯钠(dss)(mpbiomedicals,illkirch,france)共10天。完全未处理的三只小鼠的另一个对照组也是实验建立的一部分。在第0、2、4、6、7、8和10天监测食物摄取和体重。

直肠给药可比托莫德：每只小鼠两次直肠给药40μg、84μg、1000μg或1560μg可比托莫德(第4天和第8天)。用无菌水稀释各自浓度的可比托莫德，每只小鼠使用100μl进行直肠给药。小鼠中1000μg剂量大约相当于人体内250mg剂量(请参阅“工业指南–估计成人健康志愿者治疗的初始临床试验中的最大安全起始剂量”，美国卫生与公众服务部食品和药物管理局药物评价和研究中心，2005年7月(“guidanceforindustry–estimatingthemaximumsafestartingdoseininitialclinicaltrialsfortherapeuticsinadulthealthvolunteers”,usdepartmentofhealthandhumanservicesfoodanddrugadministrationcenterfordrugevaluationandresearch,july2005))。在此小鼠模型中观察到的结果可被认为是在相隔3周的两次分开的场合下给药单次剂量的150mg至350mg的可比托莫德的人类中所观察到的效果的预测。小鼠的84μg剂量大致相当于人的30mg剂量。

将不含可比托莫德的无菌水直肠给予七只小鼠的对照组(安慰剂)。在实验开始之前，将来自不同处理组的小鼠在每个笼子中随机混合以确保可比较的实验条件。

dss诱发结肠炎的评估：在第0、2、4、6、7、8和10天监测体重的减轻。疾病活动性指数(diseaseactivityindex,dai)，相比初始体重的体重减轻、粪便稠度和排泄物中可见血的结合评分。每只小鼠的最大分数为12。在第0、2、4、6、7、8和10天评估dai。此外，使用由微型内窥镜(范围1.9mm外径)、氙气光源、三芯片相机和气泵(均来自karlstorz,tutzingen,germany)组成的coloview内窥镜系统体内研究结肠炎症，以实现受控的小鼠结肠膨胀。对于内窥镜检查，在速率为0.2-0.5l/min的100％氧气中用4％异氟烷(isoflurane)将小鼠麻醉，使用2％异氟烷进行维持。内窥镜下结肠炎分级包括五个参数：结肠增厚、正常血管图案的改变、纤维蛋白的存在、粘膜粒度和粪便稠度。对每个参数进行内窥镜分级(0-3分)，导致累积得分在0-15之间。在第0、2、4、6、7、8和10天分析内窥镜分级。

结果

图7显示了实验过程中各个处理组中小鼠体重的变化。开始dss处理后四天，所有dss处理组开始以类似方式减轻体重。与安慰剂处理的小鼠相比，在第4天直肠施用可比托莫德导致用84μg可比托莫德(*p＝0.0472)和1000μg可比托莫德(*p＝0.0122)处理的小鼠在第6天明显更小的体重减轻。在第7天，相较于用84μg(*p＝0.0122)可比托莫德处理的小鼠，用1000μg可比托莫德(**p＝0.0012)处理的小鼠组的体重减轻更为显著地减小，此后两组的体重减轻继续显著地比安慰剂处理组的体重减轻更小，直到第10天(实验结束)。用40μg可比托莫德处理的小鼠组也显示出从第7天的体重减轻的少量减小，然而，该减小不显著。与安慰剂处理的小鼠相比，用1560μg可比托莫德处理的小鼠组显示出增加的体重减轻。在第10天实验结束时，除用1560μg可比托莫德处理的组的体重减轻与安慰剂处理组相似外，所有可比托莫德处理组与安慰剂处理组相比，均表现出减小的体重减轻。在整个实验过程中，完全未经处理的(无dss，无可比托莫德/安慰剂)小鼠的体重没有变化(图7)。

图8显示了在整个实验过程中，各个处理组中的小鼠的疾病活动性指数(dai)的变化。dai数据显示直肠应用可比托莫德可改善dss诱发的结肠炎。除40μg可比托莫德处理的小鼠外，所有可比托莫德处理的小鼠的dai均显示相似的变化。与安慰剂对照相比，用40μg可比托莫德处理的小鼠组的dai并未显示出显著的降低。从第6天开始，与安慰剂组相比，用84μg和1000μg可比托莫德处理的小鼠的dai降低。在最早的时间点(第6天)显示出dai显著降低(*p＝0.0216)的剂量是1000μg的可比托莫德处理组。在第8天和第10天，用84μg和1000μg可比托莫德处理的小鼠显示出dai的显著降低(***p＝0.0006)。用1560μg可比托莫德处理的组在第7天显示出dai降低，且第8天和第10天降低显著(分别为**p＝0.0023和***p＝0.0006)。在整个实验过程中，完全未经处理(无dss，无直肠用药)的小鼠的dai均未发生变化(图8)。

图9显示了在整个实验过程中，各个处理组中的小鼠的内窥镜下结肠炎分级的变化。内窥镜下结肠炎分级与体重减轻和dai的结果一致。与安慰剂处理组相比，用可比托莫德处理的所有小鼠均出现较少的dss诱发结肠炎的体征。首次应用可比托莫德后，与安慰剂组相比，内窥镜下结肠炎分级降低，直至所有可比托莫德处理组的实验结束。从第7天开始，除40μg可比托莫德处理组外，所有可比托莫德处理组的降低显著(**p≤0.01)。显示在最早时间点(第6天)内窥镜下结肠炎分级显著降低(*p＝0.0408)的剂量是1000μg可比托莫德处理组(图9)。

结论

综上所述，这些结果表明，通过显著降低可比托莫德处理的小鼠的体重减轻、疾病活动性指数和内窥镜下结肠炎等级，可比托莫德治疗改善了dss诱导的结肠炎。在第4天和第8天给药1000μg可比托莫德的小鼠实现了体重减轻、dai和内窥镜下结肠炎分级的显著改善。尤其是，在1000μg剂量下比在其他可比托莫德剂量下，在更早的时间点观察到dai和内窥镜下结肠炎分级的改善。

实施例3–葡聚糖硫酸酯钠(dss)诱导的结肠炎小鼠模型的流式细胞仪结果

材料和方法

小鼠：balb/c小鼠获自查尔斯河实验室，研究模型和服务公司(sulzfeld,germany)。八周龄雌性balb/c小鼠用于实验，并保留在单独通风的笼子中，以符合动物福利法。水和食物是任意可获得的。

dss诱发结肠炎：向8周龄雌性balb/c小鼠的饮用水中给药3％(w/v)葡聚糖硫酸酯钠(dss)(mpbiomedicals,illkirch,france)共10天。完全未处理的三只小鼠的另一个对照组也是实验建立的一部分。

直肠给药可比托莫德：每只小鼠两次直肠给药40μg、84μg、500μg或1560μg可比托莫德(第4天和第8天)。用无菌水稀释各自浓度的可比托莫德，每只小鼠使用100μl用于直肠给药。小鼠中500μg剂量约为125mg人等效剂量(hed-请参阅“工业指南–估计成人健康志愿者治疗的初始临床试验中的最大安全起始剂量”，美国卫生与公众服务部食品和药物管理局药物评价和研究中心，2005年7月)。小鼠的84μg剂量大致相当于人的30mg剂量。

另外将不含可比托莫德的无菌水直肠给药予七只小鼠的对照组(安慰剂)。在实验开始之前，将来自不同处理组的小鼠在每个笼子中随机混合以确保可比较的实验条件。

流式细胞术：在第10天通过颈脱位法处死小鼠，并提取结肠样本进行流式细胞术分析。使用固有层(laminapropria)试剂盒(miltenyibiotec,bergischgladbach,germany)从肠道样本中分离固有层单核细胞(laminapropriamononuclearcells,lpmcs)。在细胞内染色之前，将细胞用含有pma，高尔基-斯托普(golgi-stop)和离子霉素(ebioscience,frankfurt,germany)的刺激混合物在37℃下处理4小时。使用转录因子缓冲液组(bdbiosciences,heidelberg,germany)将细胞固定并进行渗透化处理。对细胞进行cd4(bdpharmingen,franklin,usa)、il17a(biolegend,sandiego,usa)、roryt(bdpharmingen,franklin,usa)和相应同种型对照的染色。对于骨髓衍生的抑制细胞(myeloid-derivedsuppressorcell,mdsc)，对分离后的lpmc进行cd11b(miltenyibiotec,bergischgladbach,germany)和gr-1(bdpharmingen,franklin,usa)的细胞外染色。用facscalibur(bdbiosciences,heidelberg,germany)进行流式细胞仪分析。使用flowjo单细胞分析软件(version10.1r5,treestarashland,usa)分析细胞。

统计分析：使用graphpadprism(graphpadsoftwareversion6.05,lajolla,ca)进行统计分析。用shapirowilk正态性检验来检验正态分布后，使用未配对的学生t检验或mann-whitneyu-ranktest检验计算样本之间的显著差异(*p≤0.05；**p≤0.01；***p≤0.001)。

结果

图10显示了在第10天从小鼠采集的结肠样本中lpmc的细胞内染色的结果。典型地，ibd被认为主要由cd中的th1细胞或uc中的th2细胞介导，但现在知道th17细胞和它们的相关细胞因子在两种情况下都是至关重要的介质。th17细胞大量浸润ibd患者的发炎的肠，其中它们产生了il17a和其他细胞因子，触发并放大了炎症过程(gálvezj.,roleofth17cellsinthepathogenesisofhumanibd.isrninflamm.2014mar25；2014:928461)。已经表明，与健康对照受试者相比，uc患者的血清/结肠中il17/th17的水平显著更高(gong,y.等人,theth17/tregimmunebalanceinulcerativecolitispatientswithtwodifferentchinesesyndromes:dampness-heatinlargeintestineandspleenandkidneyyangdeficiencysyndrome.evidbasedcomplementalternatmed.2015:p.264317)。因此，th17和il17的降低是改善ibd患者临床终点的重要步骤。

对结肠lpmc染色，以检查th17细胞和转录因子视黄酸受体相关的孤儿受体γt(rorγt，调节th17分化的转录因子)的存在。如所预期的，与健康动物(对照，无dss)相比，患有结肠炎(经dss处理)的小鼠中的th17(rorγt⁺,il17⁺)、rorγt⁺和il17⁺细胞群体增加。与水处理相比，在可比托莫德处理后，这种增加被显著抑制。在第10天实验结束时从小鼠结肠样本中分离出的lpmc的流式细胞仪分析揭示，与安慰剂处理的小鼠相比，用可比托莫德处理的小鼠的roryt⁺il17⁺、roryt⁺和il17⁺t细胞的水平显著降低。在500μg可比托莫德处理组中，cd4⁺il17⁺细胞的减少比其他组更明显(图10)。

图11显示了示出在第10天从小鼠结肠分离的固有层单核细胞(laminapropriamononuclearcells,lpmc)中存在的骨髓衍生的抑制细胞(cd11⁺gr1⁺)的百分比的流式细胞仪分析。

骨髓细胞是白细胞中最丰富并且异质的群体。它们被快速地从血液中吸收到炎症区域，并执行许多重要的生物学功能。慢性炎症性疾病有助于产生骨髓衍生的抑制细胞(myeloid-derivedsuppressorcells,mdsc)。这些病理地激活的细胞越来越被认为是癌症和ibd的重要参预者。mdsc在ibd中的作用仍存在争议，但是已经表明由肠炎症疾病诱导的mdsc可能参与th17的生成和il17的产生以及建立促炎环境，从而在ibd的发病机理中发挥作用(综述于yeon-jeongkim等人,myeloid-derivedsuppressorcellsininflammatoryboweldisease.intest.res.2015:13(2):105–111中)。因此，减少mdsc可有助于治疗ibd患者的肠道炎症。

进一步的分析显示，与用可比托莫德处理的小鼠相比，在安慰剂处理的小鼠中gr1⁺cd11b⁺mdsc的水平升高。用500μg可比托莫德处理的小鼠显著(*p≤.05)下调了gr1⁺cd11b⁺mdsc的水平(图11)。对于给药500μg可比托莫德的小鼠，gr1⁺cd11b⁺mdsc群体的减少最为明显。

结论

这些结果表明，可比托莫德处理显著降低了dss诱导的结肠炎模型中的小鼠结肠中的促炎症性il17+粘膜t细胞和gr1⁺cd11b⁺mdsc群体。给药500μg可比托莫德的小鼠显示出从结肠提取的样本中的最有希望的结果(il17+cd4+细胞和gr1⁺cd11b⁺mdsc群体减少)。出乎意料的是，针对500μg剂量的il17+cd4+细胞的减少大于针对84μg和1560μg剂量的il17+cd4+细胞的减少，这表明在这些值之间的剂量在调节ibd中的免疫响应中最有效。这一发现还表明，在人类中，间隔3周、至少两次分开的场合下的150mg至350mg的可比托莫德的剂量方案比其他更高和更低剂量能够更好地调节免疫响应，因此用于治疗ibd更有效。

序列表

<110>英德克斯制药公司

<120>新疗法

<130>n408170wo

<150>gb1707501.1

<151>2017-05-10

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<211>19

<212>dna

<213>人工序列（artificialsequence）

<220>

<223>seqidno:1可比托莫德（cobitolimod）

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(4)

<223>碱基1-2,2-3和3-4之间的硫代磷酸酯键

<220>

<221>misc_feature

<222>(16)..(20)

<223>碱基16-17,17-18和18-19之间的硫代磷酸酯键

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<213>人工序列（artificialsequence）

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