一种治疗动脉粥样硬化的硒核苷及其药物组合物的制作方法

本发明涉及抗动脉粥样硬化药物领域，具体涉及硒核苷或硒核苷与碳酸酐酶抑制剂在制备治预防和/或治疗动脉粥样硬化药物中的应用。
背景技术：
：动脉粥样硬化(atherosclerosis，as)是一种常见的以慢性炎症反应为主要特征的血管系统疾病，是导致心血管病变的重要危险因素，主要累及大中型血管动脉内膜。血管内皮细胞受损为其起始环节，继而大量血脂沉积、单核细胞集聚和泡沫细胞形成、血管内皮细胞功能紊乱和平滑肌细胞增生，最终导致动脉粥样硬化病变。动脉粥样硬化斑块形成是动脉硬化的标志性病变。动脉粥样硬化斑块分为稳定斑块和不稳定斑块，不稳定斑块又称易损斑块，易出现纤维帽溃疡、斑块破裂、斑块内出血，是心绞痛、心肌梗死、脑卒中的发生基础。在动脉管腔变窄或斑块侵蚀、破裂引发急性事件之前，动脉粥样硬化通常保持“临床沉默”。易损斑块的早期准确评估及有效干预具有重要意义。。经典的反映斑块稳定性的血清标志物有c反应蛋白(crp)、基质金属蛋白酶(mmp)、tnf-α、白细胞介素-6(il-6)、白细胞介素-1β(il-1β)、纤维蛋白原(fib)、脂蛋白相关磷脂酶a2(lp-pla2)、同型半胱氨酸(hcy)、单核细胞趋化因子-1(mcp-1)等。通过降低动脉粥样硬化易损斑块患者中上述血清标志物的含量，可以增强斑块稳定性，降低心血管事件概率。动脉粥样硬化通常伴随总胆固醇(tc)、总甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)含量的升高，和高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)含量的降低。研究表明，血液中硒的水平与总胆固醇(tc)、总甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)呈明显地负相关。还有研究表明，硒能够增强血管抗氧化能力，硒以硒代半胱氨酸的形式存在于蛋白之中，硒代半胱氨酸残基上的硒氢基(-seh)具有很强的还原性。机体缺硒使硒蛋白合成减少，抗氧化能力降低，而一些不含硒的抗氧化剂收到ros的攻击而受损，从而总的抗氧化能力降低。补充硒可以增加硒蛋白的合成，一些含硒抗氧化酶活性增加，进而提高血管抗氧化能力。此外，血管平滑肌细胞(vsmc)凋亡是动脉粥样硬化发病机理的重要环节。氧化型固醇可明显诱导血管平滑肌细胞凋亡，具有量小关系，而补充硒可以明显抑制剂血管平滑肌细胞凋亡。碳酸酐酶(ca)是一种广泛存在于人体内的含锌金属酶，能高效催化二氧化碳和水的可逆水合反应，促进co，和hco，一的形成。目前在高等脊椎动物(包括人类)体内已发现15种同工酶，主要参与机体内的呼吸作用、体液循环、生物合成反应(如糖异生、脂肪及尿素生成)、肿瘤生成、骨吸收等生理过程。因此ca与人体的健康息息相关。有文献报道，碳酸酐酶抑制剂能够减弱动脉硬化进程，并对动脉粥样硬化验证因子发挥抑制作用。本发明的发明人出人意料的发现，硒核苷能够降低动脉粥样硬化患者血清中脂质含量，抑制动脉粥样硬化患者血清中炎症因子表达，抑制动脉粥样硬化斑块形成。进一步地，本发明的发明人还发现，硒核苷和碳酸酐酶抑制剂的组合在降低动脉粥样硬化中脂质含量和炎症因子表达以及动脉粥样硬化斑块形成方面具有协同效应，进而完成本发明。技术实现要素：在本发明的一个方面，提供了硒核苷在制备预防和/或治疗由此需要的患者的动脉粥样硬化疾病的药物中的应用。进一步地，所述硒核苷是2-硒鸟苷(2-selenouridine)。本发明的另一方面，硒核苷在制备预防和/或治疗由此需要的患者急性心血管事件的药物中的应用。进一步地，所述硒核苷抑制动脉粥样硬化斑块形成。进一步地，所述硒核苷是2-硒鸟苷(2-selenouridine)。根据前述的应用，所述药物降低所述患者血清中总甘油三酯(tc)、总胆固醇(tg)和低密度脂蛋白(ldl-c)含量，提高所述患者中高密度脂蛋白(hdl-c)含量。根据前述的应用，所述药物降低所述患者血清中炎症因子水平，所述炎症因子选自hs-cpr、tnf-α、il-6、il-1β中的一种或几种。在本发明的第三方面，本发明提供了硒核苷和第二活性成分的组合在制备预防和/或治疗有此需要的患者中动脉粥样硬化的药物中的应用。在本发明的第四方面，本发明提供了硒核苷和第二活性成分的组合在制备预防和/或治疗有此需要的患者中急性心血管事件的药物中的应用。进一步地，所述硒核苷抑制动脉粥样硬化斑块形成。进一步地，所述第二活性成分是碳酸酐酶抑制剂。进一步地，所述碳酸酐酶抑制剂选自乙酰唑胺、醋甲唑胺、双氯非那胺、依索唑胺、多佐唑胺或布林唑胺中的一种或几种，优选的，所述碳酸酐酶抑制剂是双氯非那胺。进一步地，所述硒核苷和碳酸酐酶抑制剂的重量比为10:1至1:10，优选地，两者的重量比为6:1至1:6，更优选地，两者的重量比为2:1。在本发明的第五方面，提供了一种药物组合物，用于预防或治疗动脉粥样硬化或动脉粥样硬化斑块形成。所述药物组合物包含硒核苷和碳酸酐酶抑制剂。进一步地，所述硒核苷为2-硒鸟苷，所述碳酸酐酶抑制剂选自选自乙酰唑胺、醋甲唑胺、双氯非那胺、依索唑胺、多佐唑胺或布林唑胺中的一种或几种，优选的，所述碳酸酐酶抑制剂是双氯非那胺。任选地，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体或赋形剂。进一步地，所述硒核苷和碳酸酐酶抑制剂的重量比为10:1至1:10，优选地，两者的重量比为6:1至1:6，更优选地，两者的重量比为2:1。本文所描述的药物或药物组合物可以是适合口服给药的形式例如片剂或胶囊剂形式，适合非肠道注射(包括静脉内、皮下、肌内、血管内或输注)的形式例如无菌溶液剂、混悬剂或乳剂形式，适合局部给药的形式例如软膏剂或乳剂形式，适合直肠给药的形式例如栓剂形式，或者给药途径可以采取直接注入肿瘤或通过区域递送或局部递送。在本发明其它实施方案中，联合治疗中的化合物可以通过内窥镜、器官内、病灶内(intralesionally)、经皮、静脉内、皮下、腹膜内或肿瘤内递送。通常，本文所述的组合物可以按照常规方法使用本领域熟知的常规赋形剂或载体制备。用于片剂的适宜可药用赋形剂或载体包括例如惰性赋形剂如乳糖、碳酸钠、磷酸钙或碳酸钙，制粒或崩解剂例如玉米淀粉或藻酸；粘合剂例如明胶或淀粉；润滑剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石；防腐剂例如4-羟基苯甲酸乙酯或丙酯，以及抗氧化剂例如抗坏血酸。为了调节片剂的崩解以及接下来活性成分在胃肠道中的吸收，或者为了改善片剂的稳定性和/或外观，片剂可以不包衣，也可以包衣，在上述两种情形中均可以使用本领域熟知的常规包衣剂和方法。用于口服的组合物可以是硬胶囊剂形式，其中将活性成分与惰性固体赋形剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者是软胶囊剂形式，其中将活性成分与水或油例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。附图说明图1不同组动物中主动脉内膜动脉硬化斑块程度形态图，a模型组，b2-硒鸟苷低剂量组，c2-硒鸟苷高剂量组，d联合用药组，e双氯非那胺治疗组有益效果本发明通过apoe基因敲出小鼠(apoe-/-)模型，发现硒核苷单体降低动脉硬化小鼠血清中总胆固醇(tc)、总甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白(ldl-c)水平，升高高密度脂蛋白(hdl-c)水平，具有显著的降脂效果，并且能够抑制血清中炎性因子hs-cpr、tnf-α、il-6、il-1β水平，减少主动脉中动脉硬化斑块形成，对于动脉粥样硬化以及动脉粥样硬化斑块破裂导致的其它急性心血管事件有良好的预防和治疗作用。本发明还发现，2-硒鸟苷和双氯非那胺的组合对于动脉粥样硬化模型小鼠的降血脂、抑制炎性因子水平、和减少主动脉中动脉硬化斑块形成有协同增效作用。具体实施方式实施例12-硒鸟苷与双氯非那胺单独以及联合用药对apoe-/-小鼠血脂和炎症因子的影响5周龄雄性apoe敲除小鼠(apoe-/-)，同品系同周龄c57bl/6j雄性小鼠(购自南方医科大学实验动物中心)。先适应性饲养1周，6周龄开始喂饲高脂饲料(基础饲料+10％猪油+1.25％胆固醇)，高脂饲料喂养8周，建立as模型。实验分组如下：(a)c57bl/6j正常对照组，给予等体积0.5％羧甲基纤维素钠(cmcna)；(b)apoe-/-模型对照组，给予等体积0.5％cmcna；(c)2-硒鸟苷(2-seu)低剂量组，灌胃给予10mg/kg/day的2-硒鸟苷；(d)2-硒鸟苷(2-seu)高剂量组，灌胃给予30mg/kg/day的2-硒鸟苷；(e)联合用药组，灌胃给予10mg/kg/day的2-硒鸟苷(2-seu)和5mg/kg/day的双氯非那胺(dcf)；(f)双氯非那胺组(dcf)，灌胃给予5mg/kg/day的双氯非那胺。每日按照上述分组和剂量连续给药16周。实验开始第22周时，各组小鼠采用眼球取血，装有血液的ep管室温静置30分钟后3000rpm离心10分钟，吸出上层血清，无菌ep管分装后-80℃冰箱保存备用。用血脂测定试剂盒(购买自北京中生北控生物技术有限公司)，检测血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白(ldl-c)、高密度脂蛋白(hdl-c)含量。采用酶联免疫试剂盒(购买自北京中生北控生物技术有限公司)检测其中炎症因子hs-cpr、tnf-α、il-6、il-1β水平。实验结果见下表1，表2。表1b.w.(g)tc(mm)总胆固醇tg(mm)甘油三酯hdl-c(mm)ldl-c(mm)c57bl/6j23.2±1.83.1±0.21.1±0.70.52±0.021.0±0.3apoe-/-31.8±2.1##32.4±1.8###13.9±2.4###0.49±0.0613.3±1.2###2-seu低30.1±1.518.5±4.0*8.8±1.2*0.87±0.14*10.2±2.5*2-seu高30.6±2.312.1±3.7**6.2±2.2**0.81±0.04*6.4±1.5**2-seu+dcf29.4±2.08.2±5.3***3.8±2.1***0.96±0.05*3.6±3.0***dcf30.3±3.315.2±2.5**5.8±1.9**0.76±0.02*7.8±1.3**注：同模型对照组(apoe-/-)相比，*p<0.05，**p<0.01,***p<0.001，与正常对照组(c57bl/6j)相比，##p<0.01,###p<0.001。从表1的结果可知，高脂饲料喂养后，模型组小鼠体重与正常对照组(c57bl/6j)小鼠相比明显增加(p<0.01)，与模型对照组(apoe-/-)相比，2-seu和dcf单独给药，以及两者联用对于体重无明显影响(p>0.05)。模型对照组(apoe-/-)小鼠tc、tg和ldl-c显著增加，与正常对照组相比有极显著差异(p<0.001)，hdl-c与正常对照组相比没有统计学差异。与模型对照组(apoe-/-)相比，2-seu低剂量组和高剂量显著降低tc、tg和ldl-c水平(p<0.05,p<0.01)，提高hdl-c水平(p<0.05,p<0.01)，说明2-seu有显著地降血脂作用。低剂量的2-seu和dcf联用时，tc、tg和ldl-c水平与模型组相比有极显著差异(p<0.001)，说明2-seu和dcf联用，对血脂的改善有明显的协同增效作用。表2hs-cpr(μg/ml)tnf-α(pg/ml)il-6(pg/ml)il-1β(pg/ml)c57bl/6j0.160±0.047.12±1.5823.76±15.4413.78±2.85apoe-/-0.408±0.086###39.87±10.11###92.52±38.89###33.19±9.98###2-seu低0.397±0.05636.26±8.8989.88±33.6428.66±4.422-seu高0.215±0.031**17.59±9.36**42.65±12.37**23.43±2.57*2-seu+dcf0.186±0.039***11.12±5.98***22.28±9.98***13.56±3.39***dcf0.201±0.058**18.86±10.29**33.95±11.78**17.98±1.25**注：同模型对照组(apoe-/-)相比，*p<0.05，**p<0.01,***p<0.001，与正常对照组(c57bl/6j)相比，#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001。从表2的结果可以看出，高脂饲料喂养后，模型对照组(apoe-/-)小鼠血清中高敏c-反应蛋白(hs-crp)以及炎性因子tnf-α、il-6、il-1β水平较正常对照组(c57bl/6j)小鼠相比明显升高，两者之间有极显著差异(p<0.001)。同模型组(apoe-/-)相比，2-seu高剂量组、dcf组降低了hs-crp、tnf-α、il-6、il-1β水平(p<0.01)，说明2-seu和dcf都有显著地抗炎作用。低剂量的2-seu和dcf联用时，hs-crp、tnf-α、il-6、il-1β水平与模型组相比有极显著差异(p<0.001)，且hs-crp、il-6、il-1β与正常对照组相比没有统计学差异，说明低剂量的2-seu和dcf联用，对动脉粥样硬化炎症反应的改善有明显的协同增效作用。实施例22-硒鸟苷与双氯非那胺单独以及联合用药对apoe-/-小鼠主动脉窦斑块面积的影响实验分组同实施例1，取下灌注后的心脏，pbs漂洗去除残血，垂直于主动脉根部的方向切开，剥取完整主动脉，解剖镜下将其纵向剖开，包被于含oct的溶液中，立即液氮速冻后置于-80℃冰箱保存。油红o染色，leicamicrosystems系统拍照，双盲法计算斑块面积，结果见图1。结果表明，高脂饲料喂养后，模型对照组(apoe-/-)小鼠相比形成深度动脉粥硬化斑块，至主动脉下游斑块仍然十分明显，斑块面积较大，向官腔凸起明显(a)。与模型组(apoe-/-)小鼠相比，2-seu低剂量组(b)和高剂量组(c)分别使斑块面积减少了30％和45％(p<0.05)，dcf组(e)使斑块面积下降了45％(p<0.05)，而2-seu和dcf联合治疗组(d)使斑块面积下降了90％以上(p<0.01)，这表明两种药物联用对于动脉硬化斑块形成具有显著的协同抑制效应。以上描述了本发明优选实施方式，然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。当前第1页12