专利名称：抑制环境雌激素的方法
雌激素是内源激素，它在人生理上具有各种显著的功能。该激素主要影响雄性和雌性的生殖系统。例如在成年雌性，雌激素在怀孕和哺乳阶段是不可缺少的。它也降低心脏病发作和骨质疏松的危险。另外，出生前和出生后的早期阶段的雌激素与雄激素的比例调节性分化和适当的生殖器官的正确形成。雌激素也与乳腺和子宫细胞生长的增加，即癌症相关。雄性中，雌激素调节精子产生，不正常的高浓度导致精子数目的下降。
近几年，对人类和野生种群暴露在其作用是模仿内源雌激素的人造或天然产生的化学物质的关注增加。这些物质有各种来源，包括农药，动物健康产品，塑料，燃烧副产物，以及植物(植物雌激素)。具体的例子包括玉米赤霉醇(zeranol)，染料木素，香豆雌醇，o，p-DDT，开篷，甲氧氯，玉米赤霉烯酮，dioxin，对辛基苯酚，和双酚A。总的来说，这类化合物已称为环境雌激素，并与许多疾病相关，包括男子女性型乳房(DiRaimondo等，N.Engl.J.Med.301，1089，(1980))，早熟青春期(Comas，Lancet，1299，(1982))，精子数低(R.M.Sharpe等，Lancet，341，1392(1993))，子宫内膜异位(S.E.Rier等，Fundam.Appl.Toxicol.，31，423，(1993))，和乳腺癌(M.S.Wolff等，J.Natl.Cancer Inst.，85，648，(1993))。
本发明提供了抑制环境雌激素作用的方法，包括给需要此种治疗的人或其它动物施用有效量的式I化合物，及其可药用盐，和其溶剂化物
其中R1和R3单独为氢，-CH3，
或
，其中Ar任选自取代苯基；R2选自吡咯烷基，六亚甲基亚胺，和哌啶子基；现发明涉及式I的2-苯基-3-芳酰基苯并噻吩(苯并噻吩)对抑制环境雌激素作用是有用的这一发现。特别地，本发明的方法包含抑制环境雌激素的生殖影响。
本发明提供的方法，通过给需要此种处理的人或其它动物服用式I化合物或其药用盐或溶剂化物而实施，它对抑制环境雌激素的影响有效。术语“抑制”包括其通常所承认的意思，包括阻止，妨碍，限制，以及减慢，停止或逆转。照此，本方法包括以适当的方式给与药物治疗和/或预防。
Raloxifene，本发明的化合物，它是式I化合物的盐酸盐，R1和R3是氢，R2是1-哌啶基，是核调节分子。已知Raloxifene结合到雌激素受体，原认为其功能和药理学是抗雌激素的，它阻断雌激素激活子宫组织的能力和雌激素依赖的乳腺癌。事实上，Raloxifene确实阻断了雌激素在某些细胞内的作用；然而在另外一些类型的细胞，Raloxifene象雌激素那样活化相同的基因并显示相同的药理学，如骨质疏松，高脂血症。因此，Raloxifene已被称为具有混合激动剂-拮抗剂性质的抗雌激素。Raloxifene所显示并区别于雌激素的独特性质现在被认为相对于雌激素-雌激素受体复合物对基因的活化和/或抑制作用归因于Raloxifene-雌激素受体复合物对各种基因功能独特的活化和/或抑制作用。因此，虽然Raloxifene和雌激素利用并竞争相同的受体，但不易预料两者通过基因调控的药理学结果，而且对两者中每一个都是独特的。
一般地，该化合物用普通的赋形剂，稀释剂或载体配制，并压成片剂，或配制成酏剂或溶液以方便口服，或经肌内或静脉途径给药。该化合物可以经皮给药，并可以配制成缓释制剂形式等等。
在现发明的方法中使用的化合物可以根据已建立的步骤制造，如在美国专利号4,133,814,4,418,068，和4,380,635中详述的，所有这些在此引入作为参考。总的来说，该过程从具有6-羟基和2-(4-羟基苯基)基团的苯并噻吩开始。该起始物被保护，乙酰化，并脱保护形成式I化合物。制备此化合物的实施例由上面描述的美国专利提供。任选的取代苯基包括苯基和被C1-C6烷基，C1-C4烷氧基，羟基，硝基，氯，氟，或三(氯或氟)甲基取代一次或两次的苯基。
在本发明的方法中使用的化合物用各种有机和无机酸和碱形成药用酸和碱加合盐，包括在药物化学常用的生理上可接受的盐。此种盐也是本发明的部分。典型的用于形成此盐的无机酸包括盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硝酸，硫酸，磷酸，连二磷酸等等。也可以使用从有机酸形成的盐，如脂族单和二羧酸，苯基取代的链烷酸，羟基链烷酸和羟基链烷二酸，芳香酸，脂族和芳香族磺酸。于是此药用盐包括乙酸盐，苯乙酸盐，三氟乙酸盐，丙烯酸盐，抗坏血酸盐，苯甲酸盐，氯代苯甲酸盐，二硝基苯甲酸盐，羟基苯甲酸盐，甲氧基苯甲酸盐，甲基苯甲酸盐，邻乙酸基苯甲酸盐，萘-2-苯甲酸盐，溴化物，异丁酸盐，苯基丁酸盐，β-羟基丁酸盐，丁炔-1，4-dioate，己炔-1，4-dioate，癸酸盐，辛酸盐，氯化物，肉桂酸盐，柠檬酸盐，甲酸盐，反式丁烯二酸盐，乙醇酸盐，庚酸盐，马尿酸盐，乳酸盐，苹果酸盐，顺丁烯二酸盐，羟基顺丁烯二酸盐，丙二酸盐，扁桃酸盐，甲磺酸盐，烟酸盐，异烟酸盐，硝酸盐，草酸盐，邻苯二甲酸盐，teraphthalate，磷酸盐，磷酸氢盐，磷酸二氢盐，偏磷酸盐，焦磷酸盐，丙炔酸盐，丙酸盐，苯基丙酸盐，水杨酸盐，癸二酸盐，琥珀酸盐，辛二酸盐，硫酸盐，硫酸氢盐，焦硫酸盐，亚硫酸盐，亚硫酸氢盐，磺酸盐，苯磺酸盐，对溴苯基磺酸盐，氯苯基磺酸盐，乙磺酸盐，2-羟基乙磺酸盐，甲磺酸盐，萘-1-磺酸盐，萘-2-磺酸盐，对甲苯磺酸盐，二甲苯磺酸盐，酒石酸盐，等等。优选的盐是盐酸盐。
药用酸加合盐典型地通过式I化合物与等摩尔或过量的酸反应形成。反应物一般在相容溶剂如乙醚或苯中结合。正常地盐在约1小时到10天内从溶液中沉淀出来，并经过滤分离或用常规方法除去溶剂。
通常用于形成盐的碱包括氢氧化铵及碱金属和碱土金属氢氧化物，碳酸盐，以及脂肪族和伯，仲和叔胺，脂肪族二胺。制备加合盐特别有用的碱包括氢氧化铵，碳酸钾，甲胺，二乙胺，乙二胺和环己胺。
与其来源的化合物相比，药用盐通常具有提高的溶解性，所以常常更易于配制成液体或乳剂。
药物的配制可以采用技术上已知的步骤。例如，化合物可以用普通的赋形剂，稀释剂，或载体配制，并制成片剂，胶囊，混悬剂，散剂等等。适合于此配制的赋形剂，稀释剂和载体包括如下填料和填充剂如淀粉，糖，甘露醇和硅衍生物；粘合剂如羧甲基纤维素和其它纤维素衍生物，硅酸盐，明胶，及聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如碳酸钙和碳酸氢钠；用于阻滞溶解的试剂如石蜡；吸收加速剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇，单硬脂酸甘油酯；吸附载体如高岭土和膨润土；以及润滑剂如滑石硬脂酸钙和镁，和固体聚乙二醇。
化合物也可以配制成酏剂或方便口服给药的溶液或作为适于肠胃外给药的溶液，例如经肌内，皮下或静脉途径。另外，化合物很适合配制成缓释剂形式等。该制剂可配制成仅在或优选在肠道的特殊部分，可能在一段时间内释放活性成分。可以用如聚合物或蜡制成涂层，包皮和保护层。
根据本发明抑制环境雌激素的作用所需的适宜化合物的具体剂量依赖于条件的严重性，给药途径和由出诊医生决定的相关因素。一般地，每日可接受的有效剂量为约0.1-1000mg/日，更典型地为约50-200mg/日。这些剂量每日1-3次给与需要此种治疗的受治疗者，更经常的用于有效治疗综合症或至少其中一种症状。
通常优选以酸加合盐的形式给与式I化合物，正如通常服用含碱性基团如哌啶子基环的药物那样。通过口服施用此化合物也是有利的。为此可使用下列口服剂量形式。
下列配方中，“活性成分”指式I化合物制剂1明胶胶囊硬明胶胶囊用下列方式制备成分 量(mg/胶囊)活性成分 0.1-1000淀粉，NF 0-650可流动淀粉粉末0-650硅酮流体350厘沲 0-15
成分混合，过No.45目美国细筛，填进硬明胶胶囊中。
已制备的Raloxifene特殊胶囊配制的实施例包括如下所示的成分制剂2Raloxifene胶囊成分 量(mg/胶囊)Raloxifene 1淀粉，NF 112可流动淀粉粉末225.3硅酮流体350厘沲 1.7制剂3Raloxifene胶囊成分 量(mg/胶囊)Raloxifene 5淀粉，NF 108可流动淀粉粉末225.3硅酮流体350厘沲 1.7制剂4Raloxifene胶囊成分 量(mg/胶囊)Raloxifene 10淀粉，NF 103可流动淀粉粉末225.3硅酮流体350厘沲 1.7制剂5Raloxifene胶囊成分量(mg/胶囊)Raloxifene50淀粉，NF 150可流动淀粉粉末397硅酮流体350厘沲 3.0上面具体的配制可以按照所提供的的合理变化而改变。片剂配制用如下成分制备制剂6片剂成分 量(mg/片)活性成分 0.1-1000纤维素，微晶 0-650煅制二氧化硅 0-650硬脂酸0-15组分混合后压成片剂。另外，每片含0.1-1000mg活性成分的片剂制备如下制剂7片剂成分 量(mg/片)活性成分 0.1-1000淀粉 45纤维素，微晶 35聚乙烯吡咯烷酮4(10％水溶液)羧甲基纤维素钠4.5硬脂酸镁 0.5滑石 1
活性成分，淀粉和纤维素过No.45目美国细筛并彻底混合。聚乙烯吡咯烷酮的溶液与总粉末混合，然后过No.14目美国细筛。如此形成的颗粒在50°-60℃干燥并国No.18美国细筛。然后已过No.60美国细筛的羧甲基纤维素钠，硬脂酸镁，及滑石加入到颗粒中，混合后，在压片机上压成片剂。
每剂5mi含0.1-1000mg药剂的混悬液制备如下制剂8混悬液成分 量(mg/5ml)活性成分 0.1-1000mg羧甲基纤维素钠50mg糖浆 1.25mg苯甲酸溶液0.10ml调味剂q.v.颜色 q.v.加纯水至 5ml药剂过No.45目美国细筛并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合形成调匀的浆。搅拌下加入用水稀释的苯甲酸溶液，调味剂，颜色。然后加入足量的水至需要体积。
测试步骤试验1在解释方法的实施例中，绝经后模型用于测定不同的治疗对循环脂质的作用。
75天龄雌性Sprague Dawley大鼠(体重200-225g)从CharlesRiver实验室(Portage，MI)获得。动物在Charles River实验室被双侧卵巢切除(OVX)并于一周后送来。到达时它们被以每笼3-4只关在金属笼中，并随意摄食(钙含量约0.5％)和水一周。室温保持在22.2±1.7℃，最小相对湿度为40％。室内光周期为12小时照明12小时黑暗。
剂量服法组织收集 一周适应期后(即OVX后两周)，开始每日给与被试化合物Raloxifene。玉米赤霉醇和被试化合物在20％环糊精赋形剂中口服给与。动物每日口服，连续4天。服用后动物称重并用ketamine赛拉嗪(2∶1，V∶V)混合物麻醉并通过心脏穿刺收集血样。动物然后通过用二氧化碳窒息处死，中线切开取出子宫并测量子宫湿重。
胆固醇分析 血样在室温凝固2小时，3000rpm离心10分钟后得到血清。用Boehringer Mannheim诊断高效胆固醇测定法测定血清胆固醇。简要地，胆固醇被氧化成胆甾-4-烯-3-酮和过氧化氢。然后过氧化氢在过氧化物酶的存在下与酚和4-氨基安替匹林反应产生对苯醌亚胺染料，在500nm分光光度计读数。胆固醇浓度根据标准曲线计算得出。整个实验用Biomek自动化工作站自动进行。
子宫嗜曙红细胞过氧化物酶(EPO)试验子宫保存在4℃直到酶分析。子宫然后用50体积的含0.005％Triton X-100的50mMTris缓冲液(pH8.0)匀浆。加入0.01％过氧化氢和Tris缓冲液中10mM的邻苯二胺(终浓度)后，在450nm监测吸光度1分钟。子宫中嗜曙红细胞的存在是化合物雌激素活性的指示，测定开始的反应曲线线性部分15秒间隔最大速率。
数据归纳如表1所示玉米赤霉醇作为环境雌激素的实例使子宫湿重增加3倍，并导致子宫嗜曙红细胞显著增加(相对于OVX对照组EPO最大速率为4mOD/min)和血清胆固醇的减少。这些活性与在此试验系统中雌激素药物(即17α-乙炔基雌二醇)所产生的性质上相似。
被试化合物与玉米赤霉醇组合使用时减缓子宫刺激和环境雌激素的降胆固醇活性。在10mg/kg剂量水平被试化合物导致对玉米赤霉醇诱导的子宫重量刺激，子宫EPO升高和血清胆固醇下降的明显衰减。
表1子宫重量 子宫血清胆固(相对于 EPO醇OVX对照的升 (Vm (相对于高百分比) ax) OVX对的下降百分数照)玉米赤霉醇 200.5 403.8 82.8(10mg/kg)玉米赤霉醇 189.2 429.6 77.710mg/kg+测试化合物(0.1mg/kg)玉米赤霉醇 202.2 360.3 66.210mg/kg+测试化合物(1mg/kg)玉米赤霉醇 91.2 177.9 52.410mg/kg+测试化合物(10mg/kg)17α-乙炔雌二109.2 177.9 86.4醇(0.1mg/kg)试验2采用了5至40个已知受环境雌二醇处理并显示出症状的(即癌症，男子女性型乳房，精子量低)个体。这些个体用式I的化合物治疗4至12个月，在此期间环境雌二醇的影响被测定回归。
在这些研究之一中，这种化合物的实用性为其对于环境雌二醇的影响的作用而证明。
权利要求
1.抑制环境雌激素影响的方法，包括给需要此种治疗的人或其它动物施用有效量的式
的化合物，或其溶剂化物的药用盐，其中R1和R3单独为氢，-CH3，
或
，其中Ar选自任选取代的苯基；R2选自吡咯烷基，六亚甲基亚胺，和哌啶子基。
2.权利要求1的方法，其中所说的化合物是其盐酸盐。
3.权利要求1的方法，其中所说的化合物是
或其盐酸盐。
4.权利要求1的方法，其中所说的影响涉及生殖系统。
全文摘要
抑制环境雌激素作用的方法，包括给与需要的人或其它动物有效量的式(I)化合物或者其溶剂化物的药用盐，其中R
文档编号A61K31/445GK1169116SQ9619159
公开日1997年12月31日 申请日期1996年1月22日 优先权日1995年1月25日
发明者H·U·布赖恩特, J·A·道杰 申请人:伊莱利利公司