一种禽流感卵黄抗体口服液及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于禽类用生物制品技术领域，涉及一种禽流感卵黄抗体口服液及其制备 方法。
【背景技术】
[0002] 禽流感（avianinfluenza;AI)又名真鸡瘟，由禽流感病毒（AIV)所引起的一种主 要流行于鸡群中的烈性传染病。高致病力毒株可致禽类突发死亡，是国际兽疫局规定的A 类疫病，也能感染人。禽流感最早发生于1878的意大利。当时，意大利发生鸡群大量死亡， 当时被称为鸡瘟。到1955年，科学家证实其致病病毒为甲型流感病毒。此后，这种疾病被 更名为禽流感。禽流感被发现100多年来，人类并没有掌握特异性的预防和治疗方法，仅能 以消毒、隔离、大量宰杀禽畜的方法防止其蔓延。
[0003] 卵黄抗体IgY是的一种免疫球蛋白Ig，IgY在功能上相当于哺乳动物IgG，但结构 上有所不同，具有典型的的免疫球蛋白的空间构象。卵黄抗体具有很多优越性。（1)由于鸟 类与哺乳类动物种系发生学的差距，鸟类更适于生产抗哺乳动物抗原的特异性抗体。卵黄 抗体不会激发补体系统，不与抗哺乳动物抗原的抗体发生反应，不与哺乳动物和细菌的Fc 受体结合，这在免疫诊断中具有重要意义。（2)卵黄抗体作为一种具有生物活性的免疫球蛋 白，在贮存、生产、加工、摄食及消化过程中保证其稳定性是非常关键的。多项试验表明，IgY 具有较好的稳定性，耐酸、耐碱、耐热。卵黄抗体较易保存，4°C条件下存放5年或室温条件 下存放6个月对抗体活性无明显影响。（3)卵黄抗体量大，成本低，便于规模化生产。卵黄 中抗体浓度能长期维持在相当于甚至超过血清抗体浓度的水平上。总的来讲，卵黄抗体对 动物没有毒副作用，用卵黄抗体治疗动物疾病不但避免了血清价格昂贵、产量低的缺点，而 且可以避免血清在治疗过程中引起的副作用，是一种很有前途的新型免疫球蛋白制剂。因 此，卵黄抗体在禽畜疾病诊断、治疗和预防的应用越来越多。目前卵黄抗体的制备及生产工 艺已经成熟，可以保质保量的生产。
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种禽流感卵黄抗体口服液及其制备方法，解决注射用的禽流感卵黄 抗体使用不方便的问题。
[0005] 本发明的目的是通过以下形式实现的： 一种禽流感卵黄抗体口服液，包括以下按照体积比计算的原料：含卵黄抗体的全蛋水 溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;还包括800-1000单位/毫升 口服液的青链霉素。
[0006] 制备步骤是： 1) 采用禽流感灭活疫苗对鸡只进行强化免疫：采用三次免疫程序，每次间隔10天，每 只鸡每次疫苗用量为2ml，当抗体效价达到1 : (128-256)时，进行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新洁尔灭对高免蛋进行消毒； 3) 将2)中高免蛋的全蛋液进行乳化，乳化时间7-10min，然后加入pH为4. 2-4. 3的、 温度为4-6°C的盐酸酸化水，盐酸酸化水的加入量为全蛋液体积的5. 5-6. 5倍，混匀后，降 温至3-5°C，静置18-24小时； 4) 取3)中的上层清液，升温到25-32°C，加入辛酸，搅拌l_2h，静置10-12h，过滤；其中 辛酸体积量：上层清液体积量为（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青链霉素，使卵黄抗体的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的体积 比为（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青链霉素的含量为 800-1000 单位 / 晕升口服液； 6) 分装，保存。
[0007] 步骤4)过滤时依次通过1. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的滤膜进行过滤。
[0008] 本发明通过对高免蛋全蛋提取、低温酸化处理、辛酸处理后得到澄清卵黄抗体口 服液。本发明将全蛋使用到卵黄抗体的提取中，可以直接在临床上进行口服使用，蛋清中含 有大量的各类蛋白质，可充分利用高免蛋的价值，提高动物机体的免疫力和应激能力，生物 利用度高，具有生物活性不受影响的优点。
【具体实施方式】
[0009] 实施例1 : 一种禽流感卵黄抗体口服液的配方包括以下原料：含卵黄抗体的全蛋水溶液95L、辛 酸0. 2L、甲醛0. 3L、硫柳汞0. 02L，以及1000单位/毫升口服液的青链霉素。
[0010] 其制备方法包括以下步骤： 1)采用市售的禽流感灭活疫苗（HP株）进行强化免疫，每只鸡每次疫苗用量为2ml，每 次间隔10天，进行三次免疫程序，当抗体效价达到1 :256时，开始收集高免蛋。
[0011] 2)将收集高免蛋整理，0. 2%新洁尔灭消毒，备用。
[0012] 3)水稀释法酸化处理：将2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐体内进行充分乳化，乳化时 间7min，然后将乳化后的全蛋液加入pH为4. 2、温度为4°C的盐酸酸化水，盐酸酸化水加入 量为全蛋液体积的6倍，混匀，放置4°C环境中18小时静置沉淀，取上清液；盐酸酸化水是 在水中加入盐酸使其PH值达到4. 2。
[0013] 4)辛酸处理；将步骤3)的上清液，即含卵黄抗体的全蛋水溶液进行称量，升温到 25°C，加入辛酸，充分混匀lh，然后静置10h;其中，按体积比，上层清液：辛酸=95 :0. 2 ; 5) 对步骤4)所得澄清液依次用1. 0_、0. 45mm、0. 22mm的滤膜过滤，留取滤液； 6) 向步骤5)所得滤液加入甲醛、硫柳汞、青链霉素；按体积比，含卵黄抗体的全蛋全蛋 水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞=95 :0. 2 :0. 3 :0. 02 ;青链霉素在该口服液中的含量为1000单 位/毫升； 7) 分装，保存。
[0014] 为确定卵黄抗体口服液在常温下的放置有效期，做了以下试验：将本品保存在 37°C培养箱中，保存24个月，分别1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月 后，用琼脂扩散(AGP)法，测定每个时间点取样品的卵黄抗体效价变化，结果见表1。
[0015] 表1.常温放置口服液不同时间段效价的变化
【主权项】
1. 一种禽流感卵黄抗体口服液，其特征在于：包括以下按照体积比计算的原料：含 卵黄抗体的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;还包括 800-1000单位/毫升口服液的青链霉素。
2. -种如权利要求1所述禽流感卵黄抗体口服液的制备方法，其特征在于具体步骤 是： 1) 采用禽流感灭活疫苗对鸡只进行强化免疫：采用三次免疫程序，每次间隔10天，每 只鸡每次疫苗用量为2ml，当抗体效价达到1 : (128-256)时，进行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新洁尔灭对高免蛋进行消毒； 3) 将2)中高免蛋的全蛋液进行乳化，乳化时间7-10min，然后加入pH为4. 2-4. 3的、 温度为4-6°C的盐酸酸化水，盐酸酸化水的加入量为全蛋液体积的5. 5-6. 5倍，混匀后，降 温至3-5°C，静置18-24小时； 4) 取3)中的上层清液，升温到25-32°C，加入辛酸，搅拌l_2h，静置10-12h，过滤；其中 辛酸体积量：上层清液体积量为（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青链霉素，使卵黄抗体的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的体积 比为（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青链霉素的含量为 800-1000 单位 / 晕升口服液； 6) 分装，保存。
3. 根据权利要求2所述的禽流感卵黄抗体口服液的制备方法，其特征在于：步骤4) 过滤时依次通过1. 〇mm、〇. 45mm、0. 22mm的滤膜进行过滤。
【专利摘要】本发明公开了一种禽流感卵黄抗体口服液及其制备方法。其配方在于，包括以下按照体积比计算的原料：含卵黄抗体的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02；还包括800-1000单位/毫升口服液的青链霉素。制备时采用高免蛋全蛋得到澄清卵黄抗体口服液。这种方法制备的卵黄抗体口服液不仅使生产过程中损失少、免疫活性物质强多、生物活性高、无临床副作用，同时，含有蛋清中大量的各种蛋白质，可以减少口服时对抗体的不良影响。
【IPC分类】A61K39-42, A61K9-00, A61K31-43, A61K31-7036, A61P31-16
【公开号】CN104524572
【申请号】CN201410762581
【发明人】徐进, 郭俊清
【申请人】郑州后羿制药有限公司
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月14日