一种疫苗组合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种疫苗组合物，具体地说，涉及一种圆环病毒疫苗组合物。
【背景技术】
[0002] 猪圆环病毒（PCV)是迄今发现的一种最小的动物病毒。现已知PCV有两个血清 型，即PCVl和PCV2。PCVl为非致病性的病毒。PCV2为致病性的病毒，它是断奶仔猪多系统 衰竭综合征（PMWS)的主要病原。PMWS的临床特征有消瘦、皮肤苍白、呼吸困难、腹泻、黄疽 等。病理变化可见全身淋巴结肿大，特别是腹股沟淋巴结肿大可达5?10倍；肺主要呈弥 散性、间质性肺炎变化，质地硬如橡皮，表面一般呈灰褐色的斑驳状外观；肾的变化较多，可 见皮质和髓质散在大小不一的白色坏死灶，由于水肿而导致其呈现蜡样外观；脾轻度肿大； 大多病猪的肝有不同程度的萎缩、纤维化。
[0003] 除PMWS外，猪皮炎与肾病综合征（PDNS)、增生性坏死性肺炎（PNP)、猪呼吸道疾病 综合征（PRDC)、繁殖障碍、先天性颤抖、肠炎等疾病亦与PCV2感染有重要关联。PCV2相关 的猪病，死亡率达10%?30%不等，较严重的猪场在暴发时死淘率高达40%，给养猪业造成严 重的经济损失。现有技术通过全病毒灭活疫苗和PCV2的CAP蛋白制备的亚单位疫苗用于 预防PMWS，然而全病毒灭活疫苗，由于PCV的细胞产量不高造成成本较高，而亚单位疫苗具 有不在动物体内增殖，无外源性核酸，因此不具传染性等优点，但同时也存在纯化成本高的 问题。现有技术需要一种成本低廉且高效的针对圆环病毒的疫苗。
【发明内容】
[0004] 为解决现有技术的不足，本发明提供一种圆环病毒疫苗，包含：圆环病毒2型抗 原、左旋咪唑或其衍生物、聚合物和药学上可以接受的载体。
[0005] 本发明的主要目的在于提供一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括免疫量的圆环 病毒2型抗原以及左旋咪唑或其衍生物。
[0006] 术语"猪圆环病毒2型抗原"是指含有至少一种PCV2抗原形式的任何组合物，所述 抗原接种猪可诱导、刺激或增强抵抗PCV2感染的免疫应答。所述PCV2抗原可以是PCV2全 病毒、如灭活的PCV2全病毒、含有PCV2免疫原性氨基酸序列(如0RF2蛋白）的嵌合病毒，任 何其它至少含PCV2免疫原性氨基酸序列的多肽或亚单位或其他成分。PCV2抗原还可以包 含以下组合物的任一种抗原：如梅里亚公司（Merial)的CilXOVac?;辉瑞公司（Pfizer) 的Suvaxyn?: PCV2 ;哈尔滨维科生物技术开发公司的猪圆环病毒2型灭活疫苗（LG株）； 福州大北农生物技术有限公司的猪圆环病毒2型灭活疫苗（DBN-SX07株）和基因工程亚单 位疫苗(如勃林格殷格翰公司（Boehringer-Ingelheim)的Ingelvac CirC0_FLEX?等等） 因 PCV2基因组大小为1767bp或1768bp，不同毒株之间核苷酸序列同源性较高，均在90%以 上，因此 PCV2SH 株（GenBank 登录号为 AY686763 )、PCV2LG 株（GenBank 登录号为 HM038034 )、 PCV2DBN-SX07-2 (GenBank登录号为HM641752)均在本发明之内。
[0007] 优选地，所述圆环病毒2型抗原为PCV20RF2蛋白，所述PCV20RF2蛋白为2?300 微克/mL，更优选2?60微克/mL，最优选60微克/mL。
[0008] 优选地，所述圆环病毒2型抗原为灭活的猪圆环病毒2型全病毒抗原，所述猪圆环 病毒2型全病毒抗原为灭活前彡10 6_°TCID5Q。
[0009] 本发明所述圆环病毒2型抗原，优选亚单位抗原或灭活后的全病毒抗原。作为本 发明的一种实施方式，全病毒抗原为SH株全病毒抗原，可按照专利申请CN101240264A公开 的方法、菌株制备，作为本发明的另外一种实施方式，抗原为PCV20RF2蛋白，可按照专利申 请CN103173470A公开的方法、基因来源制备。
[0010] 所述SH菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期 2008年3月4日，保藏号为CGMCC No. 2389。
[0011] 圆环病毒的抗原含量，至少包含2微克PCV20RF2蛋白/剂量，优选2?300微 克PCV20RF2蛋白/剂量，更优选20-150微克PCV20RF2蛋白/剂量，更优选50-100微克 PCV20RF2蛋白/剂量，更优选60微克PCV20RF2蛋白/剂量。
[0012] 全病毒的灭活疫苗灭活前病毒含量述猪圆环病毒抗原为IX IO5 tlTCID5ci/剂量以 上，优选IO6 qTCID5q/剂量以上。
[0013] 优选地，左旋咪唑衍生物为左旋咪唑盐酸盐或磷酸盐，所述左旋咪唑或其衍生物 的含量为〇. 1?10晕克/mL，更优选1. 5?3晕克/mL。
[0014] 术语左旋咪唑为分子式C11H12N2S化合物，左旋咪唑的衍生物是指左旋咪唑衍生物 是其盐酸盐或磷酸盐，使用时按其分子量折算为左旋咪唑的量。
[0015] 左旋咪唑或衍生物优选0. 1毫克?10毫克/剂量，更优选0. 5毫克g?5毫克/ 剂量，更优选I. 〇晕克?3晕克/剂量，更优选1. 5晕克?2晕克/剂量最优选1. 5晕克/ 剂量。
[0016] 优选地,所述疫苗组合物进一步包括聚合物,所述聚合物包括DEAE葡聚糖、聚 乙二醇、聚丙烯酸，以及聚甲基丙烯酸，优选聚丙烯酸，更优选卡波姆，所述聚合物含量为 0. 1?500毫克/mL，更优选2毫克//mL。
[0017] 疫苗组合物还可包括一或多种聚合物，诸如，例如：DEAE葡聚糖、聚乙二醇和聚丙 烯酸，以及聚甲基丙烯酸。这类物质可自市场购得。适合用于佐剂组合物中的聚合物的量 取决于所使用的聚合物的性质。优选地，本发明所述聚合物为聚丙烯酸；更优选地，所述聚 合物为商品名为卡波姆（Carbomer)的聚丙烯酸；
[0018] 本发明所述聚合物的量为0. 1晕克?500晕克/剂量，优选1晕克?20晕克剂 量，更优选5晕克?10晕克/剂量，更优选1晕克?3晕克剂量，最优选2mg/剂量。
[0019] 优选地，所述疫苗组合物进一步包括DDA，DDA含量为1?5000微克/mL，更优选 50?150微克/mL。
[0020] 作为本发明的另一种实施方式，组合物中还含有DDA，所述DDA为双十八烷基二甲 基溴化铵的简称。通常为每剂量约1微克至约5000微克。其使用量亦可为每剂量约1微 克至约4000微克、每剂量约1微克至约3000微克、每剂量约1微克至约2000微克及每剂 量约1微克至约1000微克。其使用量亦可为每剂量约5微克至约750微克、每剂量约5微 克至约500微克、每剂量约5微克至约200微克、每剂量约5微克至约100微克、每剂量约 15微克至约100微克及每剂量约30微克至约75微克。
[0021] 优选地，所述疫苗组合物进一步包括药学上可以接受的载体，所述药学上可以接 受的载体包括任何可用的溶剂、分散介质、稳定剂、等渗剂、稀释剂、或防腐剂。
[0022] 术语"药学上可以接受的载体包括任何所用溶剂、等渗剂、分散介质、稳定剂、稀释 齐U、防腐剂。如稀释剂包括但不限于水、磷酸盐缓冲溶液，盐水、乙醇、甘油，等渗剂包括但不 限于氯化钠、右旋糖苷、葡萄糖；稳定剂包括蛋白或乙二胺四乙酸二钠，由于蛋白可以和蛋 白酶结合，因此具有稳定作用。
[0023] 组合物中还可以含有抗生素或防腐剂，包括，例如：庆大霉素、硫柳汞、或氯甲酚； 本领域技术人员公知可以选用不同类别的抗生素或防腐剂。
[0024] 优选地，所述疫苗组合物包括PCV20RF2蛋白抗原20微克/mL，盐酸左旋咪唑 I. 8mg/mL，卡波姆10毫克/mL，以及DDA100微克/mL ;或所述疫苗组合物包括PCV20RF2蛋 白20ug/mL，盐酸左旋咪唑I. 8mg/mL，卡波姆2mg/mL，以及DDA50微克/mL ;或所述疫苗组合 物包括PCV20RF2蛋白60 μ g/mL，盐酸左旋咪唑I. 8mg/mL，卡波姆2mg/mL，以及DDA100微克 /!TIT,η
[0025] 作为本发明的一个优选实施方式、圆环病