一种个体化疫苗制剂制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物医学领域，特别是涉及一种个体化疫苗制剂制备方法。
【背景技术】
[0002]疫苗是指为了预防、控制传染病的发生、流行，用于人体预防接种的疫苗类预防性生物制品，生物制品，是指用微生物或其毒素、酶，人或动物的血清、细胞等制备的供预防、诊断和治疗用的制剂，预防接种用的生物制品包括疫苗、菌苗和类毒素，其中，由细菌制成的为菌苗；由病毒、立克次体、螺旋体制成的为疫苗，有时也统称为疫苗，疫苗(vaccine)分为两类，第一类疫苗，是指政府免费向公民提供，公民应当依照政府的规定受种的疫苗，包括国家免疫规划确定的疫苗，省、自治区、直辖市人民政府在执行国家免疫规划时增加的疫苗，以及县级以上人民政府或者其卫生主管部门组织的应急接种或者群体性预防接种所使用的疫苗；第二类疫苗，是指由公民自费并且自愿受种的其他疫苗，但是现在市面上的疫苗都没有个体特异性，只能保证已经发展成熟的疫苗种类，不能根据个人的需要，给予他们合适的选择，而且疫苗需多次注射，浪费人力物力。
【发明内容】
[0003]为克服现有技术上的不足，本发明目的是提供一种个体化疫苗制剂制备方法。
[0004]为实现本发明的目的，本发明的技术方案如下:
[0005]一种个体化疫苗制剂制备方法，
[0006](I)DNA提取:取2ml人全血在室温下放置20min，在离心机中2500rpm，lOmin，得到凝血块和血清，小心吸取上方血清，在离心机中6500rpm，5min离心两次后，在血清中加入等体积的试剂盒缓冲液和蛋白酶，37°C水浴箱中放置24h，通过DNA柱层析，得洗脱液，加二倍体积的无水乙醇，在离心机中lOOOOrpm，5min离心后，取沉淀，再加等体积的75%乙醇，lOOOOrpm, 5min离心两次，在沉淀中加RNA酶消化后得到DNA提取物；
[0007](2) DNA测序与比对:在DNA测序仪中得到DNA的全序列，与人类基因组序列比对，找出其中可能致病的序列；
[0008](3)疫苗制备:根据可能致病序列和其致病机理，取灭活或减毒活细菌、病毒、立克次体、螺旋体等或类毒素，将其制成混悬液或者乳液，包覆于聚乳酸生物可降解骨架中，制成疫苗植入剂；
[0009](4)皮下包埋:在皮肤皮下组织局部做一个切口，将疫苗植入剂用特殊注射剂推入。
[0010]上述一种个体化疫苗制剂制备方法，其中，所述疫苗植入剂可为管形、小棒形、小丸形、片形或膜形，亦可以是微泵形。
[0011]上述一种个体化疫苗制剂制备方法，其中，所述混悬液或者乳液中需要添加防腐剂。
[0012]上述一种个体化疫苗制剂制备方法，其中，所述防腐剂为尼泊金甲酯。
[0013]本发明的有益效果:通过DNA提取、DNA测序与比对、疫苗制备、皮下包埋四个步骤，完成了疫苗制备全过程，DNA提取步骤中，通过血清提取，血细胞破裂，除蛋白，除RNA得到纯化的DNA后，比对制备所得的疫苗，根据个人基因的缺陷，对症制备疫苗，满足了个体特异性，然后通过植入剂的形式皮下包埋，皮下神经分布较少，对外来异物反应小，植入后的刺激和疼痛较低，持续缓慢释放，安全性高，既避免了多种疫苗多次注射的繁琐，也因为释放含量低，保持体内相应抗体处于激活状态，随时对抗病毒的侵扰，选用聚乳酸生物可降解骨架，几个月后，骨架自动降解，也无需再次取出，对身体造成影响，疫苗植入剂可根据植入部位不同，选用不同形状，尼泊金甲酯的加入，可以保护疫苗，防止腐败。
【具体实施方式】
[0014]为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合【具体实施方式】，进一步阐述本发明。
[0015]实施例1:
[0016]一种个体化疫苗制剂制备方法，
[0017](I)DNA提取:取2ml大鼠全血在室温下放置20min，在离心机中2500rpm，1min,得到凝血块和血清，小心吸取上方血清，在离心机中6500rpm，5min离心两次后，在血清中加入等体积的试剂盒缓冲液和蛋白酶，37°C水浴箱中放置24h，通过DNA柱层析，得洗脱液，加二倍体积的无水乙醇，在离心机中lOOOOrpm，5min离心后，取沉淀，再加等体积的75%乙醇，lOOOOrpm, 5min离心两次，在沉淀中加RNA酶消化后得到DNA提取物；
[0018](2)DNA测序与比对:在DNA测序仪中得到DNA的全序列，与人类基因组序列比对，找出其中可能致病的序列；
[0019](3)疫苗制备:根据可能致病序列和其致病机理，取灭活或减毒活细菌、病毒、立克次体、螺旋体等或类毒素，将其制成混悬液或者乳液，包覆于聚乳酸生物可降解骨架中，制成疫苗植入剂；
[0020](4)皮下包埋:在大鼠腹部皮下组织局部做一个切口，将疫苗植入剂用特殊注射剂推入。
[0021]其中，所述疫苗植入剂为小丸形，在所述混悬液或者乳液中需要添加尼泊金甲酯防腐剂。
[0022]通过在与人体的基因相似度最高的大鼠身上进行DNA提取、DNA测序与比对、疫苗制备、皮下包埋四个步骤，完成了疫苗制备全过程，DNA提取步骤中，通过血清提取，血细胞破裂，除蛋白，除RNA得到纯化的DNA后，比对制备所得的疫苗，根据个人基因的缺陷，对症制备疫苗，满足了个体特异性，然后通过植入剂的形式皮下包埋，皮下神经分布较少，对外来异物反应小，植入后的刺激和疼痛较低，持续缓慢释放，安全性高，既避免了多种疫苗多次注射的繁琐，也因为释放含量低，保持体内相应抗体处于激活状态，随时对抗病毒的侵扰，选用聚乳酸生物可降解骨架，几个月后，骨架自动降解，也无需再次取出，对身体造成影响，疫苗植入剂可根据植入部位不同，选用不同形状，尼泊金甲酯的加入，可以保护疫苗，防止腐败。
[0023]实施例2:其余与所述实施例1相同，不同之处在于，不进行DNA比对过程，先在100只大鼠腹部皮下包埋下破伤风疫苗后，立即给大鼠注射高浓度破伤风病毒，大鼠死亡率为 89%。
[0024]实施例3:其余与所述实施例2相同，不同之处在于，先在100只大鼠腹部皮下包埋下破伤风疫苗后，I个月后，给大鼠注射高浓度破伤风病毒，大鼠死亡率为18%。
[0025]实施例4:其余与所述实施例1相同，不同之处在于，取10只大鼠，DNA测序后，得出多种易感病毒类型后，制备对应疫苗，大鼠腹部皮下包埋后，立即给大鼠注射其易感病毒，7只染病。
[0026]实施例5:其余与所述实施例4相同，不同之处在于，大鼠腹部皮下包埋后，I个月后，给大鼠注射其易感病毒，7只染病。
[0027]以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
【主权项】
1.一种个体化疫苗制剂制备方法，其特征在于，包括以下步骤: (1)DNA提取:取2ml人全血在室温下放置20min，在离心机中2500rpm，lOmin，得到凝血块和血清，小心吸取上方血清，在离心机中6500rpm，5min离心两次后，在血清中加入等体积的试剂盒缓冲液和蛋白酶，37°C水浴箱中放置24h，通过DNA柱层析，得洗脱液，加二倍体积的无水乙醇，在离心机中lOOOOrpm，5min离心后，取沉淀，再加等体积的75%乙醇，1000rpm, 5min离心两次，在沉淀中加RNA酶消化后得到DNA提取物； (2)DNA测序与比对:在DNA测序仪中得到DNA的全序列，与人类基因组序列比对，找出其中可能致病的序列； (3)疫苗制备:根据可能致病序列和其致病机理，取灭活或减毒活细菌、病毒、立克次体、螺旋体等或类毒素，将其制成混悬液或者乳液，包覆于聚乳酸生物可降解骨架中，制成疫苗植入剂； (4)皮下包埋:在皮肤皮下组织局部做一个切口，将疫苗植入剂用特殊注射剂推入。
2.根据权利要求1所述的一种个体化疫苗制剂制备方法，其特征在于，所述疫苗植入剂可为管形、小棒形、小丸形、片形或膜形，亦可以是微泵形。
3.根据权利要求1所述的一种个体化疫苗制剂制备方法，其特征在于，所述混悬液或者乳液中需要添加防腐剂。
4.根据权利要求3所述的一种个体化疫苗制剂制备方法，其特征在于，所述防腐剂为尼泊金甲酯。
【专利摘要】本发明公开了一种个体化疫苗制剂制备方法，涉及生物医学领域，通过DNA提取、DNA测序与比对、疫苗制备、皮下包埋四个步骤，完成了疫苗制备全过程，DNA提取步骤中，通过血清提取，血细胞破裂，除蛋白，除RNA得到纯化的DNA后，比对制备所得的疫苗，根据个人基因的缺陷，对症制备疫苗，满足了个体特异性，然后通过植入剂的形式皮下包埋，皮下神经分布较少，对外来异物反应小，植入后的刺激和疼痛较低，持续缓慢释放，安全性高，既避免了多种疫苗多次注射的繁琐，也因为释放含量低，保持体内相应抗体处于激活状态，随时对抗病毒的侵扰，选用聚乳酸生物可降解骨架，几个月后，骨架自动降解，也无需再次取出，对身体造成影响。
【IPC分类】A61K47-34, A61K39-02, A61K39-12, A61K39-00
【公开号】CN104548080
【申请号】CN201410807910
【发明人】崔强军, 张政, 刘新亮, 余炼
【申请人】广西大学
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月22日