IgE肽疫苗的制作方法
【专利摘要】本发明提供能够用于预防或治疗人或犬等除小鼠以外的动物的变态反应性疾病的IgE肽疫苗。肽，该肽包含下述的氨基酸序列(i)或(ii)：(i)SEQIDNO:28所表示的氨基酸序列、(ii)包含SEQIDNO:28所表示的氨基酸序列中的连续的至少10个氨基酸的氨基酸序列，对动物给予该肽时，该肽与该动物的IgE抗体的CH3区特异性结合，能够阻止上述IgE抗体与IgE受体结合。
【专利说明】IgE化疫苗
【技术领域】
[0001] 本发明涉及能够用于预防或治疗变态反应性疾病的小鼠 I班的部分肤和含有该 部分肤的I班肤疫苗。
【背景技术】
[0002] 肤疫苗疗法是指，通过将肿瘤等的抗原或其表位部分和佐剂一同给药，诱导针对 上述肿瘤等的抗原的细胞性免疫和体液性免疫该两种免疫，其临床应用正在推进。
[0003] I班参与变态反应、特别是I型变态反应。近年来，在作为宠物来饲养的犬中，和人 一样变态反应性疾病在增加。
[0004] 作为I型变态反应的治疗方法，考虑使用与血清中的I班结合、并抑制I班与服大 细胞的结合的化合物，作为该样的化合物，暗示能够使用与I班的化区结合的抗体（参照 专利文献1)。
[0005] 为了治疗变态反应而采用上述的肤疫苗疗法，并使用由I班的C册区诱导的抗原 性肤作为肤疫苗，已有关于该方面的报道（参照专利文献2)。但是，为了治疗犬的变态反应 而诱导抗犬I班的抗体，为此使用同种来源的I班的抗原性肤作为疫苗。
[0006] 现有技术文献 专利文献 专利文献1 ;日本特开2006-151880号公报； 专利文献2 ;日本特开2005-102701号公报。
【发明内容】
[0007] 发明所要解决的课题 本发明W提供能够用于预防或治疗人或犬等除小鼠 W外的动物的变态反应性疾病的 I班肤疫苗为目的。
[0008] 用于解决课题的手段 本发明人等对犬的变态反应的治疗方法进行了研究，最初制作了大鼠抗犬I班单克隆 抗体，发现存在识别犬I班、小鼠 I班和猫I班的单克隆抗体。该暗示识别例如小鼠 I班的 特定表位的抗体也能够识别其他动物种的I班。根据该认知，本发明人考虑能否将小鼠 I班 的部分肤用于诱导抗其他动物种的I班的抗体、即能否将其用作对其他动物种进行给药的 变态反应治疗用肤疫苗，进行了深入研究。
[0009] 其结果，发现了对犬给予与犬的序列同源性未必高的部分肤时，在犬体内诱导出 抗该部分肤的抗体，该抗体不仅识别肤还识别I班，而且与犬自身的I班的化区结合，阻止 了 I班与服大细胞的结合。
[0010] 其结果，发现了小鼠 I班的部分肤能够用作用于治疗I班介导性的变态反应的疫 苗，从而完成了本发明。
[0011] 不仅是对于犬、对于包括人在内的除小鼠或与小鼠类缘的晒齿类W外的动物，该 肤也可被用作肤疫苗。
[0012] 即使不使用佐剂，只将该肤进行皮下给药，即可作为疫苗来使用。
[0013] 目P，本发明如下。
[0014] [1]肤，该肤包含下述的氨基酸序列： (i) SEQ ID NO: 28所表示的氨基酸序列、或 (ii) 包含SEQ ID NO: 28所表示的氨基酸序列中的连续的至少10个氨基酸的氨基酸 序列， 对动物给予该肤时，其与该动物的I班抗体的C册区特异性结合，能够阻止上述I班抗 体与I班受体结合。
[0015] [2] [1]所述的肤，该肤包含下述的氨基酸序列： (i) SEQ ID NO: 27所表示的氨基酸序列、或 (ii) 包含SEQ ID NO: 27所表示的氨基酸序列中的连续的至少10个氨基酸的氨基酸 序列， 对动物给予该肤时，其与该动物的I班抗体的C册区特异性结合，能够阻止上述I班抗 体与I班受体结合。
[0016] [3] [1]所述的肤，该肤包含选自SEQ ID NO: 22、23、24、25和26的氨基酸序列。
[0017] [4] [2]所述的肤，该肤包含选自SEQ ID NO: 29?92的氨基酸序列。
[0018] [5] [4]所述的肤，该肤包含选自 SEQ ID NO: 29、31、：34、38、43、49、56、64、72、82、 30、33、37、42、48、55、63、71、81 和 92 的氨基酸序列。
[001引 [6][句所述的化该肤包含SEQ ID NO: 45所表示的氨基酸序列。
[0020] [7]化该肤包含山?[6]中任一项所述的肤的氨基酸序列中有1?3个氨基酸 被缺失、取代、添加而获得的氨基酸序列，对动物给予该肤时，其与该动物的I班抗体的CH3 区特异性结合，能够阻止上述I班抗体与I班受体结合。
[002。 閒I班介导性疾病用疫苗或治疗药，其中包含山?[7]中任一项所述的肤。 [002引[9]閒所述的疫苗或治疗药，其中，I班介导性疾病选自特应性皮炎、花粉病、食 物过敏、过敏性鼻炎、支气管哮喘、过敏性结膜炎、峨过敏性疾病、専麻疹、过敏性休克和肺 嗜酸性粒细胞浸润（pulmonary infiltration with eosinophilia, PIE〇 综合征。
[0023] [10]预防或治疗I班介导性疾病的方法，该方法包括；对非人动物给予包含 [1]?[7]中任一项所述的肤的I班介导性疾病用疫苗或治疗药。
[0024] [山[10]所述的预防或治疗I班介导性疾病的方法，其中，I班介导性疾病选自 特应性皮炎、花粉病、食物过敏、过敏性鼻炎、支气管哮喘、过敏性结膜炎、峨过敏性疾病、専 麻疹、过敏性休克和PIE (肺嗜酸性粒细胞浸润）综合征。
[00巧]本说明书包含作为本申请的优先权基础的日本国专利申请2012-136944号的说 明书和/或附图中记载的内容。
[002引发明效果 本发明的肤在犬、人等其他种哺乳类中可W诱导抗I班抗体（IgG)的形成，该抗I班抗 体与已诱导抗体的动物种的I班结合，可W阻止I班与服大细胞或嗜碱性粒细胞的I班受 体结合。因此，本发明的小鼠 I班的CH3区的部分肤可W用作引起抗I班的IgG抗体的、用 于预防或治疗I班介导性的变态反应性疾病等疾病的I班肤疫苗。
【专利附图】
【附图说明】
[0027] 图1-1是显示犬I班C册区合成肤地图的图。
[002引 图1-2是显示犬I班C册区和小鼠 IgE C册区氨基酸序列的比对的图。
[0029] 图2是显示表位分析结果的图。
[0030] 图3-1是显示血清中肤特异性IgG浓度的测定结果的图。
[0031] 图3-2是显示血清中I班特异性IgG浓度的测定结果的图。
[0032] 图4是显示血清中Der f 2特异性I巧浓度的测定结果的图。
[0033] 图5是显示血清中I班浓度测定中的肤非给药组和给药组的化ISA反应系统的反 应方式的图。
[0034] 图6-1是显示是否存在固相化抗原与检测抗原的非特异反应的图。
[00巧]图6-2是显示抗原（I班肤和人I班）与抗犬IgG抗体的反应性分析结果的图。
[0036] 图6-3是显示抗原（I班肤、人I班和犬I班）与抗犬IgGl抗体的反应性分析结果 的图。
[0037] 图6-4是显示抗原（I班肤和人I班）与抗犬IgG2抗体的反应性分析结果的图。
[0038] 图6-5是显示给予肤后用Der f 2和Alum佐剂一同进行免疫（人工致敏）后的 Der f 2特异性I班的反应性分析结果的图。
[0039] 图6-6是显示用Der f 2和Alum佐剂一同进行免疫（人工致敏）后犬血清中的 人I班特异性犬IgG、IgGl和IgG2的值的图。
[0040] 图7是显示Prausnitz-Kustner (P-K)试验中的血清的给药方法的图。图中，带 圆圈的数字的1?4分别显示血清1?血清4。
[0041] 图8是显示Prausnitz-Kustner (P-K)试验中的抗原液W及阳性对照和阴性对照 的给药方法的图。图中，带圆圈的数字的1?4分别显示血清1?血清4。
[0042] 图9是显示Prausnitz-Kustner (P-K)试验的结果之一例的图。图中，带圆圈的 数字的1?4分别显示血清1?血清4。
[0043] 图10是显示在Prausnitz-Kustner (P-K)试验中，在具有相同浓度的Der f 2特 异性I班的血清1和血清2中产生分数差的理由的图。
[0044] 图11-1是显示用肤进行了免疫（人工致敏）的兔血清与犬I班的反应性的图。
[0045] 图11-2是显示用肤进行了免疫（人工致敏）的兔血清与犬IgG的反应性的图。
[0046] 图11-3是显示用肤进行了免疫（人工致敏）的兔血清与小鼠 I班的反应性的图。
[0047] 图11-4是显示用肤进行了免疫（人工致敏）的兔血清与人I班的反应性的图。
[0048] 图11-5是显示用肤进行了免疫（人工致敏）的兔血清与猫重组C册的反应性的 图。
[0049] 图12-1是显示20种肤对大鼠的疫苗效果的图。
[0050] 图12-2是显示20种肤中的肤No. 1?4对大鼠的疫苗效果的图（将血清稀释100 倍后测定）。
[0051] 图12-3是显示20种肤中的肤No. 5?8对大鼠的疫苗效果的图（将血清稀释100 倍后测定）。
[0052] 图12-4是显示20种肤中的肤No. 9?12对大鼠的疫苗效果的图（将血清稀释 100倍后测定）。
[0053] 图12-5是显示20种肤中的肤No. 13?16对大鼠的疫苗效果的图（将血清稀释 100倍后测定）。
[0054] 图12-6是显示20种肤中的肤No. 17?20对大鼠的疫苗效果的图（将血清稀释 100倍后测定）。
[00巧]图13是显示使用大鼠的静脉给药试验方案的图。
[0056] 图14是显示对大鼠静脉给予肤时的抗I班抗体效价上升的图。
[0057] 图15是显示使用大鼠的皮下给药试验方案的图。
[0058] 图16是显示预防实验方案的图。
[0059] 图17是显示对大鼠皮下给予肤时的抗I班抗体效价的上升变化和最终的抗体效 价的图。
[0060] 图18是显示对大鼠皮下给予肤时每一个体的抗I班抗体效价的上升的图。
[0061] 图19是显示对大鼠皮下给予肤时Der f 2特异性I班测定结果的图。
[0062] 图20是显示对大鼠皮下给予肤时每一个体的Der f 2特异性I班测定结果的图。
[0063] 图21是显示使用犬的肤给药试验（其一）方案的图。
[0064] 图22是显示对犬皮下给予肤时抗I班抗体效价的上升的图。
[0065] 图23是显示使用犬的肤给药试验（其二）方案的图。
[0066] 图24是显示对犬皮下给予肤时抗I班抗体效价的上升的图。
[0067] 图25是显示使用粉尘峨（3十b 3。歹二）人工致敏犬的治疗实验方案的图。
[0068] 图26是显示对粉尘峨人工致敏犬皮下给予肤时抗I班抗体效价的上升的图。
[0069] 图27是显示对粉尘峨人工致敏犬皮下给予肤时粉尘峨（3十b 3。b歹二）抗 原特异性I班的测定结果的图。
【具体实施方式】
[0070] W下，对本发明进行详细说明。
[0071] 本发明的变态反应性疾病的治疗用肤疫苗中使用的肤是小鼠 I班的部分肤。具体 而言，是包含小鼠 I班肤的C册(C e 3)区的NVTWN犯邸TSVSASQWYTKHHNNATTSI TSILPV (SEQ ID NO: 28)所表示的氨基酸序列的肤、或该肤的部分肤，所述部分肤包含至少6个、7个、8 个或9个、优选至少10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21 个、22个、23个或24个、进一步优选至少25个连续的氨基酸序列。作为该样的部分肤，例如 可W列举；包含SEQ ID NO: 22 (NVTWN犯邸TSVSA巧、SEQ ID NO: 23 (犯邸TSVSASQWYTK)、 沈Q ID NO: 24 (SVSASQWYTKHHNNA)、沈Q ID NO: 25 (QWYTKHHNNATTSIT)、SEQ ID NO: 26 (HHNNATTS口SILPV)和SEQ ID NO: 27所表示的氨基酸序列的部分肤。其中，优选包含 犯KKTSVSASQWYTKHHNNATTSIT (SEQ ID NO: 27)所表示的氨基酸序列的肤、或该肤的部分 肤，所述部分肤包含至少6个、优选至少10个连续的氨基酸序列，作为该样的部分肤，可W 列举包含SEQ ID NO: 23、24和25所表示的氨基酸序列的部分肤。而且，还可W适当地使用 包含犯KKTSVSASQWYTKHHNNATTSIT (SEQ ID NO: 27)所表示的氨基酸序列的肤的部分肤， 该部分肤包含15?24个连续的氨基酸序列。作为身为包含犯KKTSVSASQWYTKHHNNATTSIT (SEQ ID NO: 27)所表示的氨基酸序列的肤的部分肤、且包含15?24个连续的氨基酸序列 的部分肤，可w列举包含下述的氨基酸序列的肤。
【权利要求】
1. 肽，该肽包含下述的氨基酸序列： (i) SEQ ID NO: 28所表示的氨基酸序列、或 (ii) 包含SEQ ID NO: 28所表示的氨基酸序列中的连续的至少10个氨基酸的氨基酸 序列， 对动物给予该肽时，该肽与该动物的IgE抗体的CH3区特异性结合，能够阻止上述IgE 抗体与IgE受体结合。
2. 权利要求1所述的肽，该肽包含下述的氨基酸序列： (i) SEQ ID NO: 27所表示的氨基酸序列、或 (ii) 包含SEQ ID NO: 27所表示的氨基酸序列中的连续的至少10个氨基酸的氨基酸 序列， 对动物给予该肽时，该肽与该动物的IgE抗体的CH3区特异性结合，能够阻止上述IgE 抗体与IgE受体结合。
3. 权利要求1所述的肽，该肽包含选自SEQ ID NO: 22、23、24、25和26的氨基酸序列。
4. 权利要求2所述的肽，该肽包含选自SEQ ID NO: 29?92的氨基酸序列。
5. 权利要求4所述的肽，该肽包含选自SEQ ID NO: 29、31、34、38、43、49、56、64、72、 82、30、33、37、42、48、55、63、71、81 和 92 的氨基酸序列。
6. 权利要求4所述的肽，该肽包含SEQ ID NO: 45所表示的氨基酸序列。
7. 肽，该肽包含权利要求1?6中任一项所述的肽的氨基酸序列中有1?3个氨基酸 被缺失、取代、添加而获得的氨基酸序列，对动物给予该肽时，该肽与该动物的IgE抗体的 CH3区特异性结合，能够阻止上述IgE抗体与IgE受体结合。 8. IgE介导性疾病用疫苗或治疗药，其中包含权利要求1?7中任一项所述的肽。
9. 权利要求8所述的疫苗或治疗药，其中，IgE介导性疾病选自特应性皮炎、花粉病、食 物过敏、过敏性鼻炎、支气管哮喘、过敏性结膜炎、螨过敏性疾病、荨麻疹、过敏性休克和肺 嗜酸性粒细胞浸润综合征。
10. 预防或治疗IgE介导性疾病的方法，该方法包括：对非人动物给予包含权利要求 1?7中任一项所述的肽的IgE介导性疾病用疫苗或治疗药。
11. 权利要求10所述的预防或治疗IgE介导性疾病的方法，其中，IgE介导性疾病选自 特应性皮炎、花粉病、食物过敏、过敏性鼻炎、支气管哮喘、过敏性结膜炎、螨过敏性疾病、荨 麻疹、过敏性休克和肺嗜酸性粒细胞浸润综合征。
【文档编号】A61P11/02GK104395337SQ201380032206
【公开日】2015年3月4日 申请日期:2013年6月18日 优先权日:2012年6月18日
【发明者】津久井利广 申请人:日本全药工业株式会社