一种用于弓形虫感染预防的药剂及应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于免疫疫苗技术领域，具体涉及一种用于弓形虫感染预防的药剂。
【背景技术】
[0002] 弓形虫病（toxoplasmosis)是由刚地弓形虫（Toxoplasmagondii)感染引起的一 种普遍存在的人兽共患胞内寄生虫病，可导致孕畜流产死胎、生产力低下，给畜牧业造成巨 大的经济损失。人类如果误食未煮熟的食物或接触环境中的卵囊可导致感染。目前全世界 约有1/3的人患有弓形虫病，免疫正常的成年人多不出现明显症状，但免疫功能低下或受 损者(如孕妇，器官移植者，HIV病人等）常常导致严重甚至致命的伤害。然而，由于弓形虫 生活史及其感染的复杂性，目前尚未有安全有效的药物和疫苗来对抗弓形虫感染，因此研 制安全有效的弓形虫疫苗在人与动物弓形虫病防控中具有重要的意义。
【发明内容】
[0003] 本发明提供了一种用于弓形虫感染预防的药剂。
[0004] 本申请人研宄发现，CL097为TLR7/8受体的一种配体，可以作为激动剂通过与相 应的TLRs结合激活免疫细胞，并调节适应性免疫反应的强度，或改变反应的类型。而氢氧化 铝佐剂（ImjectAlum)可以通过表面电荷效应能够高效地吸附CL097,在小鼠体内可诱导出 抗弓形虫免疫应答。因此，本发明中，采用ImjectAlum吸附制备含有5ygCL097/100yl， 制成佐剂"ImjectAlum+CL097"，并选用弓形虫疫苗 "PvAX-GRA16+PvAX-NF3" 与"Imject Alum+CL097"联合使用进行免疫效果评估。TLR7/8蛋白结构较为保守，在人与小鼠体内均 存在，能高效地诱导小鼠体内产生Thl型免疫应答。CL097作为配体能够刺激TLR7/8蛋白 产生Thl型免疫反应。
[0005] 本发明提供一种用于弓形虫感染预防的药剂，所述药剂是用氢氧化铝佐剂吸附 TLR7/8激动剂CL097制备而成的。
[0006] 优选地，每100y1药剂中所述CL097的含量大于0yg，小于等于5yg;作为优选， 每100y1药剂中含3-5yg的CL097 ;最优选地，每100y1药剂中含5yg的CL097。
[0007] 在药剂中只要含有CL097,就能够提升免疫疫苗的免疫效果，但是每IOOy1药 剂CL097的含量需要小于等于5yg，否则作为免疫佐剂或疫苗使用后，小鼠会产生其他不 良反应。每100y1药剂中含3-5yg的CL097时，作为免疫佐剂或疫苗的效果较佳，当每 100y1药剂中含5yg的CL097时，作为免疫佐剂或疫苗的效果最好。
[0008] 进一步地，所述药剂中还包括缓冲液，所述缓冲液为PBS，所述PBS的含量小于等 于药剂总体积的60% ;作为优选，所述PBS的含量为药剂总体积的40%-60% ;最优选地，所述 PBS的含量为药剂总体积的50%。
[0009] PBS的体积不能超过药剂总体积的60%，PBS体积含量过高时，氢氧化铝佐剂不能 被吸附，短时间内会分层，导致没有效果。在药剂中也可以不加入PBS，此时药剂也具有免疫 佐剂和免疫疫苗的功效，但是免疫后小鼠会有一些副作用。经试验，当PBS的含量为药剂总 体积的40%-60%时，制备的药剂在具有良好免疫佐剂和免疫疫苗功效的同时，不会产生不 良反应；当PBS的含量为药剂总体积的50%时，制备的药剂作为免疫佐剂和免疫疫苗的效果 最佳。
[0010] 进一步地，所述药剂的制备方法为：在常温下温育PBS和氢氧化铝佐剂，再加入 TLR7/8激动剂CL097,冰上吸附，完成免疫佐剂的制备。
[0011] 本发明还提供上述药剂的制备方法，是在常温下温育PBS和氢氧化铝混合液，再 加入TLR7/8激动剂CL097,冰上吸附后完成免疫佐剂的制备。
[0012] 作为优选，每100y1药剂中所述CL097的含量大于0yg，小于等于5yg ;作为优 选，每100y1药剂中含3-5yg的CL097 ;最优选地，每100y1药剂中含5yg的CL097。
[0013] 进一步地，所述PBS的含量小于等于药剂总体积的60% ;作为优选，所述PBS的含 量为药剂总体积的40%-60% ;最优选地，所述PBS的含量为药剂总体积的50%。
[0014] 更进一步地，是在常温下将PH7. 4的PBS与50体积氢氧化铝温育30min，再加入 10体积CL097置于冰上吸附30min，完成免疫佐剂的制备。
[0015] 本发明的第三个目的是提供上述药剂在制备增强弓形虫疫苗免疫效果的免疫佐 剂中的应用。
[0016] 优选地，所述弓形虫疫苗为GRA16和NF3的联合疫苗。
[0017] 本发明的第四个目的是提供上述药剂在制备增强弓形虫免疫预防的疫苗中的应 用。
[0018] 本发明的第五个目的是提供一种联合疫苗，由GRA16、NF3和本发明的药剂组成。
[0019] 本发明的药剂作为免疫佐剂能够增强弓形虫疫苗的免疫效果，并能够单独作为弓 形虫疫苗使用。
【附图说明】
[0020] 附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实 施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中： 图1为弓形虫RH株在不同免疫情况下的存活时间折线图。
【具体实施方式】
[0021] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验 方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自 常规生化试剂商店购买得到的。
[0022] 实施例1 本发明的一种用于弓形虫感染预防的药剂，它是用氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激动剂CL097制备得到的，其吸附步骤为：常温下40yIpH7. 4的PBS与50y1 ImjectAlum温育30min，再加入IOyl含量为5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐剂的制备。使用时，用其注射小鼠腿部肌肉。氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)含量为40mg/ ml的氢氧化铝与40mg/ml氢氧化镁。
[0023] 实施例2 本发明的一种用于弓形虫感染预防的药剂，它是用氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激动剂CL097制备得到的，其吸附步骤为：常温下50yIpH7. 4的PBS与45yI ImjectAlum温育30min，再加入IOyl含量为5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐剂的制备。使用时，用其注射小鼠腿部肌肉。氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)含量为40mg/ ml的氢氧化铝与40mg/ml氢氧化镁。
[0024] 实施例3 本发明的一种用于弓形虫感染预防的药剂，它是用氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激动剂CL097制备得到的，其吸附步骤为：常温下60yIpH7. 4的PBS与50y1 ImjectAlum温育30min，再加入IOyl含量为5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐剂的制备。使用时，用其注射小鼠腿部肌肉。氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)含量为40mg/ ml的氢氧化铝与40mg/ml氢氧化镁。
[0025] 实施例4 本发明的一种用于弓形虫感染预防的药剂，它是用氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激动剂CL097制备得到的，其吸附步骤为：常温下50yIpH7. 4的PBS与40y1 ImjectAlum温育30min，再加入IOyl含量为5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐剂的制备。使用时，用其注射小鼠腿部肌肉。氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)含量为40mg/ ml的氢氧化铝与40mg/ml氢氧化镁。
[0026] 实施例5 本发明的一种用于弓形虫感染预防的药剂，它是用氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激动剂CL097制备得到的，其吸附步骤为：常温下60yIpH7. 4的PBS与30y1 ImjectAlum温育30min，再加入IOyl含量为5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐剂的制备。使用时，用其注射小鼠腿部肌肉。氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)含量为40mg/ ml的氢氧化铝与40mg/ml氢氧化镁。
[0027] 实施例6 本发明的一种用于弓形虫感染预防的药剂，它是用氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)吸 附TLR7/8激动剂CL097制备得到的，其吸附步骤为：常温下55yIpH7. 4的PBS与35y1 ImjectAlum温育30min，再加入IOyl含量为5yg的CL097,冰上吸附30min后，完成免疫 佐剂的制备。使用时，用其注射小鼠腿部肌肉。氢氧化铝佐剂（ImjectAlum)含量为40mg/ ml的氢氧化铝与40mg/