一种利拉鲁肽复乳微球及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于利拉鲁肽及其制备领域，特别涉及一种利拉鲁肽复乳微球及其制备方法。
【背景技术】
[0002]利拉鲁肽上市于2009年7月，其主要是通过基因重组技术，利用酵母生产的人胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物，由39个氨基酸的多肽，分子式:C172H265N43051;分子量:3751.20Da，目前利拉鲁肽主要用于改善使用二甲双胍和磺酰脲类药物不理想的2糖尿病患者的血糖控制，利拉鲁肽是一种GLP-1类似物，与人GLP-1具有97%的序列同源性，可以结合并激活GLP-1受体，GLP-1本身是一种胰高血糖素样胎，没有降糖作用，但是其可以促进胰岛素的释放，最终达到降糖的作用。
[0003]作为一种新型的材料，聚乳酸-轻基乙酸共聚物(poly (lactic-co-glycolicacid，PLGA)由两种单体-乳酸和羟基乙酸随机聚合而成，乳酸和羟基乙酸均为可降解的功能高分子有机化合物，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能，被广泛应用于制药、医用工程材料和现代化工业领域。在美国PLGA通过FDA认证，被正式作为药用辅料收录进美国药典。
[0004]聚乙烯醇是一种有机化合物，白色片状、絮状或粉末状固体，无味，溶于水，不溶于汽油、煤油、植物油、苯、甲苯、二氯乙烷、四氯化碳、丙酮、醋酸乙酯、甲醇、乙二醇等，微溶于二甲基亚砜。聚乙烯醇是重要的化工原料，用于制造聚乙烯醇缩醛、耐汽油管道和维尼纶合成纤维、织物处理剂、乳化剂、纸张涂层、粘合剂、胶水等。
[0005]由于利拉鲁肽在人体中的药代动力学和药效动力学特点均适合每天一次的给药方案。但是每天一次的皮下给药给病人带来很多不便，同时也给患者带来了极大的身心痛苦，因此是否可以利用常用的缓释制剂来提高利拉鲁肽的作用时间，降低患者的注射次数。检索国内外有关长效降糖药物和专利表明:以PLGA制作的长效药物制剂并不少见，但关于长效降糖药物利拉鲁肽研宄的目前还没有文献报道。利用PLGA以及PVA制作复乳微球能进一步拓展PLGA复乳微球在临床医学的引用范围。
【发明内容】
[0006]本发明所要解决的技术问题是提供一种利拉鲁肽复乳微球及其制备方法，该方法操作简单、反应条件温和，PLGA和PVA制作的利拉鲁肽复乳微球装载率高，且具有长效释放性的特性。
[0007]一种利拉鲁肽复乳微球，所述复乳微球包括:聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA以及聚乙烯醇PVA。
[0008]所述PLGA 的分子量为 13KD，PVA 为 PVA-217。
[0009]一种利拉鲁肽复乳微球的制备方法，包括:称取利拉鲁肽冻干粉，用醋酸钠溶液溶解作为内水相，然后与PLGA的二氯甲烷溶液超声混合，搅拌后得到初乳，将初乳滴加到PVA水溶液中，搅拌，得到复乳，搅拌，离心后收集微球，洗涤，冷冻干燥，得到复乳微球；其中，以PLGA的二氯甲烷溶液为油相，以PVA水溶液为外水相，V内水相/V油相为1:100，V油相/V外水相为1:20。
[0010]所述制备方法在常温下即可完成。
[0011]所述超声的时间为5min。
[0012]所述PVA水溶液的质量分数为2 %。
[0013]所述复乳的搅拌速度为1200r/min，时间为4h。
[0014]所述微球用蒸馏水洗涤三次。
[0015]所述冷冻干燥的时间为24h。
[0016]所述复乳微球的直径在10 μ m之内。
[0017]所述复乳微球经腹腔注射不会带来任何不适感。
[0018]所述复乳微球作为长效降糖药物用于医疗行业。
[0019]有益效果
[0020](I)本发明的制备方法操作简单、实验条件温和；
[0021](2)本发明的制作的利拉鲁肽微球药物装载量高，能够长效缓释，且在体内稳定，其分解产物在体内没有毒副作用，在今后具有临床应用价值。
【附图说明】
[0022]图1为实施例1中利拉鲁肽复乳微球的SEM图片；
[0023]图2为实施例2中利拉鲁肽复乳微球的粒径分布图；
[0024]图3为实施例2中利拉鲁肽复乳微球的体外释放曲线；
[0025]图4为实施例3中不同组别的2型糖尿病大鼠在注射利拉鲁肽复乳微球前的血糖变化；
[0026]图5为不同组别的2型糖尿病大鼠在注射利拉鲁肽复乳微球5天后的血糖变化；
[0027]图6为不同组别的2型糖尿病大鼠在注射利拉鲁肽复乳微球10天后的血糖变化；
[0028]图7为不同组别的2型糖尿病大鼠在注射利拉鲁肽复乳微球15天后的血糖变化；
[0029]图8为不同组别的2型糖尿病大鼠在注射利拉鲁肽复乳微球20天后的血糖变化；
[0030]图9为不同组别的2型糖尿病大鼠在注射利拉鲁肽复乳微球25天后的血糖变化；
[0031]图10为不同组别的2型糖尿病大鼠在注射利拉鲁肽复乳微球30天后的血糖变化；
【具体实施方式】
[0032]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0033]实施例1
[0034]利拉鲁肽复乳微球的制作。
[0035](I)称取1mg的利拉鲁肽冻干粉，用质量分数为I %的醋酸钠溶液溶解作为内水相，与质量分数为2%的PLGA的二氯甲烷溶液(50mL)超声混合，超声5分钟制得初乳。
[0036](2)将制好的初乳快速滴加到质量分数为2% PVA水溶液中，匀浆器高速搅拌(1200r/min)得到复乳，继续搅拌4h，离心收集微球，蒸馏水洗涤三次，冷冻干燥24h即得，SEM图如图1所示。
[0037]实施例2
[0038]利拉鲁肽微球的体外释放测定。
[0039](I)准确称量实施例1中利拉鲁肽微球20mg，混悬于1mmol ?L_1pH 7.4磷酸盐缓冲液(含0.01 %叠氮钠和5mmol.T1SDS)，
[0040](2)在水浴摇床中震荡，速度lOOrpm，温度37°C，每隔Id取出离心管于4000rpm离心lOmin，取出全部上清液，用HPLC测定利拉鲁肽的含量并测定，结果如图3所示。
[0041]实施例3
[0042]利拉鲁肽复乳微球的体内降糖观察。
[0043](1)2型糖尿病大鼠动物模型的建立，给予高脂饲料喂食6个月建立2型糖尿病大鼠模型，高脂饲料由10%的猪油、18.9%的蛋白粉，70%的普通饲料、I %的胆固醇以及0.1 %的胆酸钠构成。
[0044](2)于实验开始的第0、5、10、15、20、25、30天早上之前测定大鼠血糖，测量之前大鼠禁食12h，尾静脉取血，用三诺血糖仪进行血糖测定，观察大鼠之内的血糖特点，如图5-10所示。之后给予大鼠利拉鲁肽微球(实施例1中制备得到)腹腔注射，注射量为9mg ;给药前小鼠禁食12h，观察各组在给药后6h内的血糖变化情况，如图5-10所示。图中CG指空白对照组大鼠，HFG指模型对照组大鼠，LLG指微球低剂量组大鼠(6mg每月每千克大鼠体重)、LMG指微球中剂量组大鼠(12mg每月每千克大鼠体重)、LHG指微球高剂量组大鼠24mg每月每千克大鼠体重，LCIG指普通利拉鲁肽注射液组。
【主权项】
1.一种利拉鲁肽复乳微球，其特征在于，所述复乳微球包括:聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA以及聚乙烯醇PVA。
2.根据权利要求1所述的一种利拉鲁肽复乳微球，其特征在于，所述PLGA的分子量为13KD，PVA 为 PVA-217。
3.—种利拉鲁肽复乳微球的制备方法，包括:称取利拉鲁肽冻干粉，用醋酸钠溶液溶解作为内水相，然后与PLGA的二氯甲烷溶液超声混合，搅拌后得到初乳，将初乳滴加到PVA水溶液中，搅拌，得到复乳，搅拌，离心后收集微球，洗涤，冷冻干燥，得到复乳微球；其中，以PLGA的二氯甲烷溶液为油相，以PVA水溶液为外水相，V内水相/V油相为1:100，V油相/V外水相为1:20。
4.根据权利要求3所述的一种利拉鲁肽复乳微球的制备方法，其特征在于，所述超声的时间为5min。
5.根据权利要求3所述的一种利拉鲁肽复乳微球的制备方法，其特征在于，所述PVA水溶液的质量分数为2%。
6.根据权利要求3所述的一种利拉鲁肽复乳微球的制备方法，其特征在于，所述复乳的搅拌速度为1200r/min，时间为4h。
7.根据权利要求3所述的一种利拉鲁肽复乳微球的制备方法，其特征在于，所述微球用蒸馏水洗涤三次。
8.根据权利要求3所述的一种利拉鲁肽复乳微球的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥的时间为24h。
9.根据权利要求3所述的一种利拉鲁肽复乳微球的制备方法，其特征在于，所述复乳微球的直径在10 μ m之内。
【专利摘要】本发明涉及一种利拉鲁肽复乳微球及其制备方法，所述复乳微球的成分包括聚乳酸-羟基乙酸共聚物PLGA以及聚乙烯醇PVA。制备方法包括：称取利拉鲁肽冻干粉，用醋酸钠溶液溶解作为内水相，然后与PLGA的二氯甲烷溶液超声混合，搅拌后得到初乳，将初乳滴加到PVA水溶液中，搅拌，得到复乳，搅拌，离心后收集微球，洗涤，冷冻干燥，得到复乳微球；其中，V内水相/V油相为1:100，V油相/V外水相为1:20。本发明的复乳微球具有缓慢且持续的降血糖的特点，所包裹的利拉鲁肽在体内药效高达30天，同剂量的药物疗效明显好于每天注射，有着很好的实用价值。
【IPC分类】A61P5-50, A61K38-26, A61K9-19, A61P3-10, A61K47-34
【公开号】CN104825405
【申请号】CN201510239616
【发明人】朱利民, 武俊紫, 权静, 吴焕玲, 孙晓竹, 李赫宇
【申请人】东华大学
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年5月12日