进性增加每日递送的巴氯芬的剂量，由此对可能 的巴氯芬诱发的副作用（即使它们不可能有副作用）进行限制。
[0288] 作为剂量方案，每位受试者通过口服途径被给予以下治疗：
[0289] -第-1天：不给予药物或安慰剂
[0290] -第1天：6mg巴氯芬和0· 4mg阿坎酸，或安慰剂，在早上；
[0291] -第2天：6mg巴氯芬和0· 4mg阿坎酸，或安慰剂，每日两次（早、晚）；
[0292] -第3天：6mg巴氯芬和(X4mg阿坎酸，或安慰剂，在早上；以及12mg巴氯芬和 0. 8mg阿坎酸，或安慰剂，在晚上；
[0293] -第4天：12mg巴氯芬和0.8mg阿坎酸或，安慰剂，每日两次（早，晚）；
[0294] -第5天到第9天：15mg巴氯芬和Img阿坎酸，或安慰剂，每日两次（早，晚）；
[0295] -第10天：15mg巴氯芬和Img阿坎酸，或安慰剂，在早上。
[0296] 2)认知试验和电生理学测量
[0297] 下述的试验允许评价本发明的组合物对受试者的记忆的效果。在该试验自始至终 使用CogStatexi开发的四种认知试验以及认知事件相关性电位（ERP)的电生理学测量。这 些测试是在第-1天（不给予药物和安慰剂）、第1天（在给药6小时后）、第9天（给药 前）和第10天（在给药6小时后）进行。关于认知试验，结果表示为在研宄的基线和每个 时间点之间的表现的平均变化。这种试验可以容易地在个人计算机上进行。
[0298] a)警觉和视觉注意力表现的评价：鉴别试验
[0299] 屏幕上的前置任务（pre-task)指令询问："纸牌（card)是红色的吗？ "试验监督 者向受试者阅读来自试验监督者脚本的完整指令。开始任务时，试验监督者或受试者必须 按下"回车"键。纸牌被呈现在屏幕的中心。该纸牌将翻转过来，使之面朝上。一旦呈现纸 牌，受试者必须决定该纸牌是否为红色。如果是红色，他们应该按下"是"，如果它不是红色， 他们应该按下"否"。
[0300] 受试者进行练习直到他们达到所需数目的响应，或直到练习期满。然后，在屏幕上 呈现真正的试验的指令。试验监督者或受试者必须按下"回车"键以开始真正的试验。
[0301] 鼓励受试者尽量快速完成并且尽量精确。例如，受试者在纸牌翻转之前应该尝试 不去按下"是"或"否"键。如果他们犯错，他们将会听到错误提示音。确定正确响应的百 分比。
[0302] b)视觉学习和记忆：单张纸牌学习试验
[0303] 屏幕上的前置任务指令询问："在该任务之前你曾见过这张纸牌吗？ "试验监督者 向受试者阅读来自试验监督者脚本的完整指令。开始任务时，试验监督者或受试者必须按 下"回车"键。纸牌被呈现在屏幕的中心。一旦呈现纸牌，受试者必须决定在该任务之前是 否曾见过同一张纸牌。因此第一个答案总是"否"。
[0304] 每次显露出纸牌时，受试者必须决定在该任务之前他们是否被展示过那张纸牌并 通过按下"是"或"否"键来响应。如果做出了不正确的响应（例如当纸牌之前被呈现过时， 按下了"否"），则听到错误提示音。
[0305] 一旦完成了练习（达到所需次数的响应或者时间到了），屏幕上的指令和试验监 督者告诉受试者真正的试验现在开始。试验监督者或受试者必须按下"回车"键以开始真 正的试验。
[0306] 鼓励受试者尽量快速完成并且尽量精确。例如，在纸牌翻转之前他应该尝试不去 按下"是"或"否"键，并且他应该尝试并记住在该任务中呈现的所有的纸牌。如果他犯错， 他将会听到错误提示音（error sound) 〇
[0307] 确定正确响应的百分比。
[0308] c)心理运动功能和处理速度：察觉任务（DET)
[0309] 屏幕上的前置任务指令询问："纸牌翻转了吗？ "试验监督者向受试者阅读来自试 验监督者脚本的完整指令。开始任务时，试验监督者或受试者必须按下"回车"键。纸牌被 呈现在屏幕的中心。该纸牌将翻转过来，使之面朝上。一旦呈现纸牌，受试者必须按下"是" 键。纸牌将移动到这幅纸牌的后面，一旦下一张纸牌翻转过来，受试者必须按下"是"键，如 此反复。
[0310] 受试者进行练习直到他们达到所需数目的响应，或直到练习期满。然后，在屏幕上 呈现真正的试验的指令。试验监督者或受试者必须按下"回车"键以开始真正的试验。
[0311] 鼓励受试者尽量快速完成并且尽量精确。例如，受试者在纸牌翻转之前应该尝试 不去按下"是"键。如果受试者这样做了或者没有响应于翻转过来的纸牌，他将会听到错误 提不音。
[0312] 结果表示为表现速度的平均值（Lmn，正确响应的反应时间的LoglO的平均值）。
[0313] d)执行功能和空间问题解决：Groton迷宫学习任务（GMLT)
[0314] 在计算机触摸屏上对受试者展示10x10网格的瓦片。一个28步路径（28-step pathway)隐藏在这些100个可能位置中。起点指示为左上角的蓝色瓦片，终点位置是网格 的右下角的具有红色圆圈的瓦片。受试者被指示从开始位置向终点（右下角）移动一步， 然后继续，一次一个瓦片。
[0315] 受试者通过用输入笔（stylus)触摸邻近他们当前位置的瓦片来移动。每次做出 移动后，计算机通过显露出绿色的对勾来提示这是正确的（即这是在所述路径中的下一 步）或通过显露出红色的叉来提示这是不正确的（即这不是在所述路径中的下一步，或受 试者破坏了规则，见下文）。若选择是不正确的（即显露出红色的叉），则受试者必须触摸 上一次正确的位置（即上一次显露出的绿色对勾），然后做出不同的瓦片选择以便向终点 前进。
[0316] 当移动通过隐藏的迷宫时，要求受试者坚持两个规则。首先，受试者不能呈对角线 移动或连续两次触摸同一块瓦片。其次，受试者不能沿着路径向后移动（例如移动回到显 示了绿色对勾、并且他们曾移动到达的位置）。
[0317] 若受试者选择了不属于隐藏路径的一部分的瓦片，且瓦片选择符合规则，则这被 记录为不同类型的错误（例如不违反规则）。这可能是由于偶然（首次通过迷宫）或是由 于随后尝试的路径的错误记忆。
[0318] 受试者基于该尝试错误（trial and error)反馈学习通过迷宫的所述28步路径。 一旦完成，他们被送回起始位置并重复任务，通常再需4次来试着记忆他们刚完成的路径。
[0319] 就该任务而言存在20个良好匹配的交替形式，这些以伪随机次序选择，以确保在 整个研宄中没有受试者会在任何两个不同的试验阶段完成相同的隐藏路径。
[0320] 用于本研宄的、通过GMLT试验方式测量的标准为：
[0321] -表现的效率（efficiency of performance) :mps
[0322] -任务的持续（duration of task) :dur
[0323] -错误的总数：ter
[0324] 〇per (持续动作）
[0325] 〇rer (破坏规则的错误）
[0326] 〇 Ier (合乎规则的错误数（legal numbers of errors))
[0327] -正确移动的数目：cmv
[0328] -返回前面的错误：rth
[0329] 这4个认知试验中的数据（参见a、b、c、d)各自独立地分析或合并在一起在"复 合" Cogstate 平分中分析。
[0330] e)反映注意力的感知事件：事件相关电位（ERP)
[0331] ERP在评价认知过程时具有广泛的应用，这是因为结果独立于使用的刺激且因为 它们基于刺激处理提供信息，即使没有行动上的改变是可感知的。与行动认知试验相比时， 它们通常被视为更加无偏的试验。
[0332] 来自三个头皮部位（额：Fz，中央：Cz，头顶部：Pz)的记录数据根据国际10/20标 准收集起来作为参考，两个连接电极连接到右和左耳垂（A1-A2)。认知任务需要关注奇数刺 激，并根据特定规程对它们进行计数。
[0333] 受试者接受随机顺序的声刺激，且ERP测量由oddballs (具有N200和P300亚组 分潜伏期和振幅）发出的P300波，这反映了注意力。具有受损的认知的受试者对较低的振 幅表现出延迟的信号。
[0334] 将针对这三种部分的概括性数据的评分作为ERP "复合"评分给出。
[0335] 3)结果
[0336] a)验证研宄
[0337] 认知行为试验的实验设置通过比较未治疗的老年组和年轻组中获得的结果来检 验。注意到年轻组和老年组之间认知表现的明显差异，如图5中所示的DET试验中所阐明 的那样。年轻组与老年组相比显示了较高的知表现，这与一般的年龄相关的认知衰退一致。
[0338] b)本发明的组合有效改善健康年轻受试者的认知表现
[0339] 认知试骀中表现的改善
[0340] 已发现与未治疗的受试者相比，本发明的组合在经治疗的健康年轻人类受试者中 有效改善认知功能。巴氯芬-阿坎酸治疗的受试者显示了其认知表现的改善，如图6的DET 试验所示，这种改善在整个治疗过程中一直持续。
[0341] 记忆和记忆相关的心理功能的改善与药物的血浆浓度相关
[0342] 在临床试验的框架中建立了巴氯芬和阿坎酸的药效学。确定了"出现最大血浆浓 度的时间"(Tmax)，其出现在给药阿坎酸1. 5-2小时后以及给药巴氯芬1. 5小时后。由此可 以考虑所述组合的Tmax为每种药物同时给药1. 5-2小时后。
[0343] 在第10天，给予所述药物组合，并在给药6小时后进行Cogstate1<:试验。如图7中 所示，观察到阿坎酸的血浆浓度（给药5小时后）与年轻组中登记的复合Cogstate?评分的 水平之间的正性和显著相关（皮尔森相关性检验）（图7,相关系数=0. 706 ;p值=0. 003)。
[0344] 当考察记忆和相关心理功能的电生理学组分时也观察到所述相关。事实上，如图8 和9中报告的那样，在第10天观察到在给药1. 5小时后（大约对应于Tmax)巴氯芬和阿坎 酸的血浆浓度相对于ERP潜伏期复合评分（在给药6小时后测量）的特别显著的相关（皮 尔森相关性检验）：两种药物的血浆浓度都与ERP中较短的潜伏期正相关（阿坎酸，图9,相 关系数=0. 735 ;p值=0. 002 ;巴氯芬，图8,相关系数=0. 57 ;p值=0. 027)。表现最好的 受试者是在1. 5小时观察到更高血浆浓度的那些。
[0345] 这些相关强调了以下事实：在经治疗的健康年轻受试者中认知表现的改善实际上 与本发明的组合物有关。
[0346] 因此，上述结果显示巴氯芬和阿坎酸组合在改善健康年轻受试者的认知表现中的 功效。
[0347] B.在经受化学诱发的认知缺损的人中记忆和相关功能的改善
[0348] 东莨菪碱诱发的认知衰退是用于模拟暴露于若干物质时可能被诱发的认知缺陷 的模型。如上针对动物所述，当给予志愿者时该药物诱发短暂的和可逆的认知缺损[34]。
[0349] 使用A部分中说明的认知Groton迷宫学习任务试验对受试者的认知表现进行测 试。
[0350] 1)剂量方案
[0351] 年龄在20岁到45岁的20位年轻健康男性志愿者被招募到这项研宄中。
[0352] 进行随机化、2因素交叉的（2-way cross-over)、双盲、安慰剂对照的研宄。该研 宄有两个不同的部分，每个部分包括住院40小时且彼此间隔7天作为清除期（wash out period)。巴氯芬和阿坎酸同时口服使用。
[0353] 作为剂量方案，根据以下治疗通过口服途径对受试者进行给药：
[0354] -在第1天在亚急性给药中每位受试者口服接受巴氯芬（6mg)和阿坎酸（0. 4mg) 混合物，或安慰剂，一日两次，并且在试验当天（第2天）在H3在注射东莨菪碱前以单次剂 量给药。
[0355] -在第2天在H3,皮下注射0. 5mg东莨菪碱。
[0356] 2)试验设计
[0357] 对受损的认知的效果通过在GMLT试验中测量以下特征来探宄：
[0358] -表现的效率：mps
[0359] -错误的总数：ter
[0360] -任务的持续：dur
[0361] 认知Groton迷宫学习任务试验在第1天（训练）以及在第2天Η0、Η2· 5、Η4、Η5· 5、 Η7和Η9以及第3天Η24进行。
[0362] 3)巴氯芬和阿坎酸组合改善了东莨菪碱诱发的认知缺陷
[0363] 对于GMLT试验的mps、ter和dur组分中的每种，获得了类似的数据。将来自 Groton迷宫学习试验（GMLT)的数据在"复合"GMLT评分中合并在一起，其呈现于图10中。
[0364] 已知东莨菪碱在给药后最快30分钟就起作用，其作用持续约6小时。已知它的 Tmax为约3小时[34]。这些数据对应于在未治疗的受试者中观察到的GMLT试验中的表现 短暂衰退（图10,圆圈，虚线）。
[0365] 与给予安慰剂的受试者相比，观察到巴氯芬-阿坎酸治疗的受试者的认知表现的 改善。这种改善在对应于巴氯芬和阿坎酸的Tmax的时间段（约H5. 5附近）是特别显著的 (图10,灰色区域）。
[0366] 因此，巴氯芬和阿坎酸组合有效抵抗东莨菪碱诱发的认知缺损。
[0367] 本发明的组合由此有效逆转由于暴露于损害记忆的有毒物质或药物导致的记忆 缺损。
[0368] 参考文献
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