一种透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及医药，特别是一种透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物及其制备方 法与应用。
【背景技术】
[0002] 目前，纳米材料作为一种安全、高效的药用载体，在肿瘤的治疗中表现出广阔的发 展空间，作为载体材料，应具有粒径小，毒性低，生物相容性好，性能稳定等特点。中空介孔 硫化铜具有独特的笼状结构，载药能力突出，且粒径小，物化性质稳定，对生物体毒性小，通 过对其修饰一些基团来增强其水溶性及靶向性，有利于载体在生物体内随着血液流动，到 达肿瘤部位，减小对正常组织的损害，提高治疗效果。
[0003] 硫化铜纳米粒作为一种新的光热转换材料，具有很强的近红外吸收，这是由于Cu2+ 间的d -d能级之间的跃迀和铜硫族纳米颗粒的SPR效应共同作用的结果，其吸收峰不会随 着离子的形状和大小改变，具有良好的光热稳定性和较高的光热转换效率，在肿瘤治疗方 面具有很大的潜能。并且硫化铜纳米粒子有较低的生物毒性，能够被生物体所降解，因此作 为光热转换材料在肿瘤治疗方面获得了广泛的关注。硫化铜纳米粒在近红外光下可以产生 活性氧进行光动力学治疗，硫化铜纳米粒子在近红外的照射下，其内部会发生振动，可以用 于光声成像，对肿瘤部位进行诊断治疗。通过将热疗、化疗、光声成像结合起来可有效降低 副作用，并增强肿瘤治疗效果。
[0004] 尽管硫化铜是一种极具潜力的光热化疗载体材料，但要实现其在制备肿瘤治疗药 物中的应用，仍面临诸多挑战，如：水分散性性差，肿瘤细胞靶向性低等，难以实现药物的靶 向转运及高效、低毒的光热联合化疗。因此，如何制备一种透明质酸修饰的中空介孔硫化铜 复合物，以实现在制备治疗肿瘤药物中的应用，是需要认真解决的技术问题。
【发明内容】
[0005] 针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种透明质酸修 饰的中空介孔硫化铜复合物及其制备方法与应用，可有效解决硫化铜水溶性弱，靶向性差， 生物相容性低的问题。
[0006] 本发明解决的技术方案是，中空介孔硫化铜纳米颗粒键合在硫化铜纳米粒的表 面，连接上巯基乙胺，通过酰胺键反应修饰上透明质酸，成透明质酸修饰的中空介孔硫化铜 复合物，粒径为50-250nm，透明质酸和中空介孔硫化铜的质量比为1-3 : 3,所述透明质酸 分子量为40-400kDa。由以下步骤实现：
[0007] (1)、将0?7-0. 8g 的 CuS04 *51120 溶解于 180-220ml 水中，搅拌，加入 5. 5-6. 5g 聚乙 烯吡咯烷酮，室温反应10~20min，加入1. 1-1. 3g氢氧化钠，搅拌均匀，滴加10-14ml水合 肼，搅拌5~lOmin，再加入1. 2-1. 4ml硫酸按，搅拌lh，用超纯水在15000rpm离心5-10min， 水洗至中性，冷冻干燥46-50h，成中空介孔硫化铜纳米颗粒；
[0008](2)、将中空介孔硫化铜纳米粒180-220mg加入180-220ml超纯水，超声分散10~ 30min，再在搅拌下加入360-440mg疏基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉 淀用超纯水复溶，再15000rpm离心5-10min，得沉淀，沉淀再用超纯水复溶，如此重复2~3 遍，直至中性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物（CuS-NH 2);
[0009] (3)、将750-850mg透明质酸加入pH7~9的磷酸盐缓冲液46-54ml中，搅拌溶解， 加入2-2. lg 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺、1. 2-1. 3g羟基琥珀酰亚胺为活化 剂，室温搅拌30min，成活化的透明质酸；
[0010] (4)、在冰浴下，将步骤（2)制备的氨基化中空介孔硫化铜复合物（CuS-NH2)用pH =7~9的磷酸盐缓冲液分散，得分散液，将活化的透明质酸缓慢加入分散液中，升至室温， 反应3h，15000rpm离心5-1 Omin得沉淀，沉淀加水分散，在水中透析2d，冷冻干燥，即得透明 质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物（HA-CuS)。
[0011] 本发明选择具有良好生物相容性、肿瘤细胞靶向性的天然多糖一一透明质酸 (hyaluronic acid, HA)，对硫化铜纳米粒进行修饰，构建了一种新型光热治疗联合化疗的 纳米载体。该载体的合成工艺简单，并将硫化铜显著的光热敏感性、强大的药物负载特性， 透明质酸独特的肿瘤细胞靶向性、辅助的抗肿瘤活性、良好的生物相容性有机的整合于一 体，加之可以物理负载具有抗肿瘤活性的化疗药物，既可克服传统光热疗、化疗技术的非靶 向性难题，降低治疗过程中对正常组织的损伤，与传统光热疗法相比具有高效、可控的优 势，并且，其光热治疗与化疗技术的结合更体现癌症综合治疗，具有强大的药物负载特性， 在透明质酸酶存在下具有敏感释药和近红外敏感释药的特性，构建热疗-化疗-肿瘤诊断 综合治疗一体化转运系统，同时具有生物相容性高、靶向性好、成本低廉等特点，经济和社 会效益巨大。
【具体实施方式】
[0012] 以下结合实施例和具体情况对本发明的【具体实施方式】作详细说明。
[0013] 本发明在具体实施中可由以下实施例给出
[0014] 实施例1
[0015] 本发明透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物在具体实施中，由以下方法实现：
[0016](1)、将0?75g的CuS04.5H20溶解于200ml水中，搅拌，加入6. 0g聚乙烯吡咯烷酮， 室温反应10~20min，加入1. 2g氢氧化钠，搅拌均匀，滴加12ml水合肼，搅拌5~lOmin， 再加入1. 29ml硫酸按，搅拌lh，用超纯水在15000rpm离心5-10min，水洗至中性，冷冻干燥 48h，成中空介孔硫化铜纳米颗粒；
[0017](2)、将中空介孔硫化铜纳米粒200mg加入200ml超纯水，超声分散10~30min， 再在搅拌下加入400mg疏基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀用超纯水 复溶，再15000rpm离心5-10min，得沉淀，沉淀再用超纯水复溶，如此重复2~3遍，直至中 性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物（CuS-NH 2);
[0018] (3)、将800mg透明质酸加入pH7~9的磷酸盐缓冲液50ml中，搅拌溶解，加入 2. 072g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺、1.24g羟基琥珀酰亚胺为活化剂，室温搅 拌30min，成活化的透明质酸；
[0019](4)、在冰浴下，将步骤（2)制备的氨基化中空介孔硫化铜复合物（CuS-NH2)用pH =7~9的磷酸盐缓冲液分散，得分散液，将活化的透明质酸缓慢加入分散液中，升至室温， 反应3h，15000rpm离心5-1 Omin得沉淀，沉淀加水分散，在水中透析2d，冷冻干燥，即得透明 质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物（HA-CuS)。
[0020] 实施例2
[0021] 本发明透明质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物在具体实施中，由以下步骤实现：
[0022] (1)、将0? 7g的CuS04 *5H20溶解于180ml水中，搅拌，加入5. 5g聚乙烯吡咯烷酮， 室温反应10~20min，加入1. lg氢氧化钠，搅拌均勾，滴加10ml水合肼，搅拌5~lOmin， 再加入1. 2ml硫酸按，搅拌lh，用超纯水在15000rpm离心5-10min，水洗至中性，冷冻干燥 46-50h，成中空介孔硫化铜纳米颗粒；
[0023](2)、将中空介孔硫化铜纳米粒180mg加入180ml超纯水，超声分散10~30min， 再在搅拌下加入360mg疏基乙胺，搅拌24h，15000rpm离心5-10min得沉淀，沉淀用超纯水 复溶，再15000rpm离心5-10min，得沉淀，沉淀再用超纯水复溶，如此重复2~3遍，直至中 性，冷冻干燥，得氨基化中空介孔硫化铜复合物（CuS-NH 2);
[0024] (3)、将750mg透明质酸加入pH7~9的磷酸盐缓冲液46ml中，搅拌溶解，加入2g 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺、1. 2g羟基琥珀酰亚胺为活化剂，室温搅拌30min， 成活化的透明质酸；
[0025](4)、在冰浴下，将步骤（2)制备的氨基化中空介孔硫化铜复合物（CuS_NH2)用pH =7~9的磷酸盐缓冲液分散，得分散液，将活化的透明质酸缓慢加入分散液中，升至室温， 反应3h，15000rpm离心5-1 Omin得沉淀，沉淀加水分散，在水中透析2d，冷冻干燥，即得透明 质酸修饰的中空介孔硫化铜复合物（HA-CuS)。