色葡萄球菌菌株， 达托霉素的MIC显著增加（32倍到> 128倍）。少至1%的肺表面活性物质即导致达托霉 素金黄色葡萄球菌的MIC增加32倍。
[0063] 头孢他啶、头孢他定-阿维巴坦和达托霉素对CLSI QC参考细菌菌株的MIC数据 列在表1中。对于每种菌株，头孢他啶、头孢他定-阿维巴坦和达托霉素的MIC值在CLSI QC范围内。
[0064] 结论
[0065] 对于头孢他啶、阿维巴坦或头孢他啶-阿维巴坦，在至多10%肺表面活性物质存 在下，针对所测试的任一种细菌菌株，未观察到与表面活性物质相关的MIC增加。头孢他 啶、阿维巴坦和头孢他啶-阿维巴坦在不同浓度的肺表面活性物质存在下的一致抗菌活性 值得注意，特别是对于认为可用于治疗呼吸道感染的药物。正如所料，达托霉素阳性对照对 于金黄色葡萄球菌的MIC值随着肺表面活性物质浓度的增加而显著增加。
[0066]
[0075] 实施例2-与其它常见共给药药剂的潜在药物相互作用
[0076] 使用棋盘测定法来测定（如果存在的话）头孢他啶和头孢他啶-阿维巴坦组合 与6种既定抗菌剂：妥布霉素、左氧氟沙星、万古霉素、利奈唑胺、替吉环素和粘菌素之间的 相互作用。将在存在和不存在各种浓度的这些抗菌剂下头孢他啶和头孢他啶-阿维巴坦的 MIC进行比较，以得到一系列分级抑制浓度指数（FICI)值。从每个组合的棋盘取平均FICI， 并根据公认的标准进行解释。在抗菌剂没有效果（万古霉素和利奈唑胺针对革兰氏阴性分 离株；粘菌素针对革兰氏阳性分离株）的情况下，将头孢他啶和头孢他啶-阿维巴坦的单独 MIC与所述MIC与这些抗菌剂的和0. 5 X 的组合进行比较。包括4株高表达AmpC、 8株产广谱β -内酰胺酶（ESBL)，包括2株产CTX-M-15和5株产KPC的肠杆菌科和铜绿假 单胞菌，以及具有基础MIC的各物种的代表。还包括3株金黄色葡萄球菌和3株粪肠球菌。 未观察到头孢他啶或头孢他啶-阿维巴坦与任何其它抗菌剂之间的协同或拮抗相互作用。 根据这个实验得出以下结论：在微生物学上，头孢他啶和头孢他啶-阿维巴坦不与组合使 用的任何测试药物不利地相互作用。
[0077] 所测试的菌株列于下表2中。
[0078] 表 2 :
[0079]
[0081] 药品的供应：
[0082] 妥布霉素、左氧氟沙星、万古霉素和粘菌素由Sigma-Aldrich(Dorset，UK)供应。 利奈挫胺和替吉环素由Molekula(Dorset，UK)供应。
[0083] 体外敏感性测试方法：
[0084] 所有MIC测定，包括在棋盘测定法中进行的那些都在阳离子调节的 Mueller-Hinton 肉汤（从 Becton Dickinson，Oxford UK 购买）中进行。
[0085] 初始MIC数据通过CLSI (2012b)推荐的微量肉汤稀释法测定。棋盘根据由Pillai 等人，Antimicrobial Combinations in Antibiotics，LABORATORY MEDICINE (Lorian 编， 第5版（2005))第365-440页给出的方法，按照标准微量肉汤稀释测试但是用组合药剂制 备。
[0086] 以四倍于所需浓度的浓度制备储备溶液，并连续稀释在阳离子调节的 Mueller-Hinton肉汤中，头孢他啶-阿维巴坦除外，两种药剂均以八倍于所需浓度的浓度 制备，以补偿待进行的抗菌稀释。在整个研宄中，使用4mg/L的最终阿维巴坦浓度。将抗菌 剂使用Evolution III液体处理系统组合到微量滴定板中。
[0087] 在针对万古霉素和利奈唑胺的革兰氏阴性分离株的情况下，将头孢他啶和头孢 他啶-阿维巴坦的单独MIC与在C最大和0.5XC最大的万古霉素（Baxter Healthcare公 司，2008)和利奈挫胺（MacGowan，Pharmacokinetics and Pharmacodynamic Profile of Linezolid in Healthy Volunteers and Patients with Gram-Positive Infections,JAC, 51(Sup S2) :iil7-1125(2003))存在下的 MIC 进行比较。
[0088] 在针对粘菌素的革兰氏阳性分离株的情况下，将头孢他啶和头孢他啶-阿维巴坦 的单独 MIC 与在 Cmax和(XSXCmaJ^粘菌素（如 Couet 等人，Clinical Microbiology and Infection, Colistin Pharmacokinetics ：the Fog is Lifting，CMI18 :30-39 (2011)中提 及的）存在下的MIC进行比较。
[0089] 将棋盘板接种，并根据CLSI准则（2012b)在35±2°C下在环境空气中培养 16-20h。第二天，MIC记录为抑制所有可见生长所需的最低浓度或浓度组合。
[0090] 根据Meletiadis等人，Defining Fractional Inhibitory Concentration Index Cutoffs for Additive Interactions Based on Self-Drug Additive Combinations， Monte Carlo Simulation Analysis and in vitr〇-in vivo Correlation Data for Antifungal Drug Combinations Against Aspergillus fumigatus，AAC 54 :602-09(2010) 的方法，从MIC数据计算每个棋盘的FICI。对应于MIC的每个孔的FICI通过下式计算：
[0091] FICI = FICa+FICb= (C a/MICa) + (Cb/MICb)
[0092] 其中，10(；是组合抗菌剂的单独的MIC，并且MIC B是头孢他啶或头孢他啶-阿维 巴坦的单独的MIC。Ca是组合中的组合药物的浓度，并且C B是组合中的头孢他啶或头孢他 啶-阿维巴坦的浓度。
[0093] 由于每个棋盘给出了许多FICI值，因此，从所有值计算算术平均值以得到组合的 两种药剂针对一种分离株的平均FICI。平均FICI通过由0dds(2003)给出的以下标准进行 解释，所述标准现在是大多数期刊接受的标准：
[0094] 彡0.5协同
[0095] 0· 51-4 无差别
[0096] > 4 拮抗
[0097] 用于解释无差别相互作用的宽的FICI范围是由于二倍稀释方案中的MIC结果的 固有变异性（Pillai等人，2005)。Meletiadis等人，（2010)建议，大于2的FICI应解释为 拮抗的，但此类解释由于这种变异性应谨慎对待。
[0098] 结果
[0099] 总结的MIC数据示于表3中。总结的平均FICI数据示于表4中。FICI计算不可 能的情况下的单独和组合的头孢他啶/头孢他啶-阿维巴坦MIC比示于表5中。
[0100] 头孢他啶
[0101] 在可计算的情况下，对于所有抗菌剂，头孢他啶与第二药剂的组合的平均FICI范 围为 0. 64-1. 99。
[0102] 在所有与头孢他啶的组合中，没有平均FICI大于2的情况。
[0103] 在将和0. 5XC#的万古霉素和利奈唑胺与头孢他啶组合针对革兰氏阴性分 离株的情况下，单独和组合的头孢他啶的MIC在所有情况下均保持在一次二倍稀释内。同 样，在将C?t和〇. 5XCftt的粘菌素与头孢他啶组合针对革兰氏阳性分离株的情况下，单独 和组合的头孢他啶的MIC在所有情况下均保持在一次二倍稀释内。
[0104] 头孢他啶-阿维巴坦
[0105] 头孢他啶-阿维巴坦与所有抗菌剂的组合的平均FICI范围为0. 72-2. 13。
[0106] 头孢他啶-阿维巴坦与粘菌素的组合针对肺炎克雷伯菌012得到2. 13的平均 FICI。对于与头孢他啶-阿维巴坦的所有组合，这是平均FICI大于2的唯一实例。
[0107] 在将(：^^和0. 5XCftt的万古霉素和利奈唑胺与头孢他啶-阿维巴坦组合针对革 兰氏阴性分离株的情况下，单独和组合的头孢他啶-阿维巴坦的MIC在所有情况下均保持 在一次二倍稀释内，一种情况除外。在这种情况（大肠杆菌08)下，头孢他啶-阿维巴坦的 MIC在与C敎的万古霉素组合时从0· 12mg/L降低到0· 03mg/L。在将C敎和0· 5 X C最大的 粘菌素与头孢他啶-阿维巴坦组合针对革兰氏阳性分离株的情况下，单独和组合的头孢他 啶-阿维巴坦的MIC在所有情况下均保持在一次二倍稀释内。
[0108]
[0116] 实施例3-CAZ-AVI到ELF中的穿透
[0117] 进行药代动力学研宄以描述头孢他啶-阿维巴坦在感染小鼠和未感染小鼠内的 肺处置（pulmonary disposition)。然后，使用中性粒细胞减少性肺部感染模型进行头孢他 啶和头孢他啶-阿维巴坦针对铜绿假单胞菌分离株的功效研宄。在感染小鼠与未感染小鼠 之间，在血清或ELF中未观察到药代动力学差异。使用作为2h输注的2000mg头孢他啶和 500mg阿维巴坦的人模拟血清剂量，在32 μ g/mL的MIC下观察到针对这些分离株的最大活 性，其中对于上部95%置信区间，ELF fT> MIC彡19%。给定头孢他啶-阿维巴坦的MIC9q 为8 μ g/mL，对于很少分离株，MIC更高，甚至更少分离株能够在鼠类肺部感染模型内生长。 因此，进行头孢他啶定向ELF fT > MIC研宄，并针对32 μ g/mL的MIC显示活性，其中ELF fT > MIC 为 12%。
[0118] 中性粒细胞减少性肺部感染模型
[0119] 体重约25g的无病原体的雌性ICR小鼠从Harlan Sprague Dawley公司 (Indianapolis，IN)获得，并在所有这些实验中使用。动物按照国家研宄委员会（National Research Council)的建议进行喂养和使用，并随意提供食物和水。通过分别在接种前1天 和 4 天腹膜内注射 lOOmg/kg 和 250mg/kg 环磷酰胺（Cytoxan?; Bristol-Myers Squibb， Princeton，NJ)使小鼠呈现中性粒细胞减少。在接种前3天，还给小鼠单次腹膜内注射5mg/ kg硝酸铀酰。这产生可预测程度的肾损害以减缓药物清除。在抗微生物治疗开始前2小 时，将小鼠使用异氟烷（在100%氧气载体中的2. 5% v/v)轻度麻醉，直到目视检查时呼吸 速率降低。通过滴注0.05mL IO7CFU测试分离株的接种物诱发肺炎，所述接种物悬浮在生 理盐水中的3%粘蛋白中。当小鼠被麻醉时，将接种物递送到动物的口腔中，阻塞鼻孔并使 小鼠保持垂直位。当动物开始自发呼吸时，细菌被吸入肺中。在富氧室中从麻醉完全恢复 之后，将接种的小鼠随机分到对照组（〇小时和24小时）和治疗组（CAZ和CAZ-AVI)中。
[0120] 头孢他啶-阿维巴坦的上皮细胞衬液（ELF)浓度的表征
[0121] 在这些研宄中，我们使用上文所述的先前确定的给药方案。在感染小鼠中进行验 证性血清药代动力学研宄。对于这些研宄，用上述计算出的方案给感染的中性粒细胞减少 性小鼠给药，并在整个24小时期间在多个时间点使一组六只小鼠安乐死，以验证目标暴 露。通过心脏穿刺收集血液，并将血清样品储存在-80°C下，直至分析。
[0122] 进行药代动力学研宄以描述感染小鼠中的上皮细胞衬液浓度。对于这些研宄， 用上述计算出的方案给感染的中性粒细胞减少性小鼠给药，并在整个第三给药阶段（即 16-24h)期间在多个时间点使一组六只小鼠安乐死。在安乐死后，如上所述收集血清和BAL 样品。将血清和BAL样品储存在-80 °C下，直至分析。使用BAL浓度-时间曲线，计算包括 上部95%置信区间的ELF fT > MIC。
[0123] 头孢他啶的上皮细胞衬液（ELF)浓度的表征
[0124] 我们在小鼠中使用先前确定的模拟在每8小时作为2小时输注（8)给予2000mg 头孢他啶的人中观察到的血清fT > MIC的给药方案。在感