染小鼠中进行验证性药代动力 学研宄，并根据所得到的浓度-时间曲线进行药效学分析和ELF fT > MIC评估。对于这些 研宄，用上述计算出的方案给感染的中性粒细胞减少性小鼠给药，并在整个第三给药间隔 (即16-24h)期间在多个时间点使一组六只小鼠安乐死，以验证目标暴露。
[0125] 进行药代动力学研宄以描述感染小鼠中的上皮细胞衬液浓度。对于这些研宄， 用上述计算出的方案给感染的中性粒细胞减少性小鼠给药，并在整个第三给药阶段（即 16-24h)期间在多个时间点使一组六只小鼠安乐死。在安乐死后，如上所述收集血清和BAL 样品。将血清和BAL样品储存在-80 °C下，直至分析。使用BAL浓度-时间曲线，计算包括 上部95%置信区间的ELF fT > MIC。
[0126] 用于定向ELF fT > MIC研宄的头孢他啶给药方案的确定
[0127] 在监测研宄中已经观察到，头孢他啶-阿维巴坦对铜绿假单胞菌的MIC9tl为8 μ g/ mL (10-12)。鉴于此，很少分离株具有更高MIC，在鼠类肺部感染模型内生长的分离株数量 甚至更少。以前的文献还发现，推导出的头孢他啶-阿维巴坦对铜绿假单胞菌的血液fT > MIC功效目标与头孢他啶单一疗法以及其它头孢菌素获得的的血液fT > MIC功效目标充 分相关。鉴于头孢他啶的相对MIC很容易多32 μ g/mL，我们计划使用上述人化的头孢他啶 方案以进一步深入了解功效与细菌生长之间的药效学断裂。在实验过程中观察到，ELF fT > MIC显著超过预期，并且产生的ELF fT > MIC不能使我们区分对于功效所需要的fT > MIC。因此，进行这些研宄以设计导致足够低的ELF fT>MIC，以便我们能够观察肺部感染 模型内的功效损失的在小鼠中的方案。在整个给药期间降低上述以前的人化方案的剂量， 并进行进一步药代动力学研宄。在这些研宄中，历时24h向小鼠给药头孢他啶方案，并在三 个间隔中的最后一个间隔期间（即16_24h)取样。使小鼠安乐死，并在预定时间如上所述 收集血清和BAL样品。
[0128] 体内功效：头孢他啶-阿维巴坦方案
[0129] 对于28株铜绿假单胞菌分离株中的每一株，从开始感染后2小时开始向各组小鼠 给药头孢他啶-阿维巴坦方案。所有剂量均作为〇. 2mL皮下注射给药，并且由三个8小时 给药间隔（即24小时）组成。另一组小鼠以与治疗方案相同的体积、途径和频率给药生理 盐水以作为对照动物。在治疗开始后24小时从所有动物收获肺；未能存活24小时的小鼠 在断气时收获。所有研宄小鼠的收获步骤以通过〇) 2暴露安乐死开始，随后颈椎脱位。处死 后，将肺取出，并单独在生理盐水中制匀浆。将肺匀浆的连续稀释液铺板在具有5%羊血的 胰蛋白酶解酪蛋白大豆琼脂上用于CFU测定。除上文提到的治疗组和对照组以外，在给药 开始时收获另一组6只感染的未治疗的小鼠，并作为Oh对照。指定为细菌密度的变化的功 效计算为24h后对于治疗小鼠获得的Iog ltl细菌CFU从在Oh对照动物中观察到的起始密度 的变化。耐药性的产生也通过将匀浆的直接接种物铺板到含有32-4 μ g/mL头孢他啶-阿 维巴坦的板上来进行测试。
[0130] 体内功效：头孢他啶方案
[0131] 针对先前描述的这种头孢他啶方案（8)对9株铜绿假单胞菌分离株进行测试。从 开始感染后2小时开始向各组小鼠给药头孢他啶方案。所有剂量均作为0. 2mL皮下注射给 药，并且由三个8小时给药间隔（即24小时）组成。另一组小鼠以与所述治疗方案相同的 体积、途径和频率给药生理盐水以作为对照动物。来自每只动物的肺的收获和处理如上文 所述进行，并且功效定义为细菌密度的变化，其计算为24h后对于治疗小鼠获得的Iog ltl细 菌CFU从在Oh对照动物中观察到的起始密度的变化。
[0132] 体内功效：头孢他啶定向ELF fT > MIC研宄
[0133] 对于这些研宄，针对CAZ方案在获得特定ELF fT > MIC的小鼠中对9株铜绿假单 胞菌分离株进行评价。在接种测试生物体后2小时开始给药，并且所有剂量均作为0. 2mL 皮下注射给药，并且由三个8小时给药间隔（即24小时）组成。另一组小鼠以与治疗方案 相同的体积、途径和频率给药生理盐水以作为对照动物。所有研宄小鼠的收获步骤以通过 〇)2暴露安乐死开始，随后颈椎脱位。处死后，将肺取出，并分别在生理盐水中制匀浆。将肺 匀浆的连续稀释液铺板在具有5%羊血的胰蛋白酶解酪蛋白大豆琼脂上用于CFU测定。除 上文提到的治疗组和对照组以外，在给药开始时收获另一组6只感染的未治疗的小鼠，并 作为Oh对照。指定为细菌密度的变化的功效计算为24h后对于治疗小鼠获得的Iog ltl细菌 CFU从在Oh对照动物中观察到的起始密度的变化。
[0134] 抗菌剂：
[0135] 市售头抱他啶（Fortaz?，批号：L716，GlaxoSmithKline Research Triangle Park，NC，USA)从哈特福特医院药学系（Hartford Hospital Pharmacy Department)获得， 并且用于所有的体内研宄。分析级阿维巴坦由AstraZeneca Pharmaceuticals (Waltham， MA，USA)制备。将头孢他啶的临床小瓶如处方信息中所述进行重构，并且视需要进行稀释 以达到期望的浓度；称取足以达到所需浓度的量的分析级阿维巴坦粉末，并在即将使用之 前进行重构。
[0136] 结果
[0137] 细菌分离株
[0138] 头孢他啶和头孢他啶-阿维巴坦对于功效研宄中所包括的28株分离株的MIC示 于表6中。
[0139] 表6.在体内功效研宄过程中使用的29株革兰氏阴性分离株的表型数据。
[0140]
[0142] 宿主感染状况对药代动力学性质的影响的测定
[0143] 在感染小鼠和未感染小鼠中在体内测定的头孢他啶-阿维巴坦的游离药物血清 和ELF浓度-时间曲线示于图1和图2中。如表7中所述，对于感染小鼠和未感染小鼠，穿 透率彼此相似。此外，在感染小鼠与未感染小鼠之间，所计算的药效学原理fT > MIC相当 (表 8)。
[0144] 表7.与感染小鼠和未感染小鼠中的血清浓度相比，在第三个给药间隔（即 16-24h)中头孢他啶和阿维巴坦的上皮细胞衬液（ELF)点穿透率。
[0145] 头孢他啶和阿维巴坦的ELF点穿透率
[0146]
[0147] 表8.与在感染小鼠和未感染小鼠中所观察到的相比，在人中每8h作为2h输注的 2000-500mg头孢他啶-阿维巴坦的人模拟血清剂量后，头孢他啶和阿维巴坦的上皮细胞衬 液（ELF)和血清药效学估计。
[0148] 头孢他啶和阿维巴坦的药效学估计
[0149]
[0150] 头孢他啶-阿维巴坦的上皮细胞衬液（ELF)浓度的表征
[0151] 在体内测定的头孢他啶-阿维巴坦的游离药物血清药代动力学曲线示于图3中。 从这些图可清楚，鼠类血清暴露曲线类似于在人中观察到的那些，重要的是，在所测试的 MIC范围内，这些方案在血清中达成的所有fT > MIC相当。在第三给药间隔中的ELF浓度 示于图4中。从这些数据确定针对一系列MIC的fT > MIC值。平均值和上部95%置信区 间描述于图5中。
[0152] 头孢他啶的上皮细胞衬液（ELF)浓度的表征
[0153] 在体内测定的头孢他啶的游离药物血清和ELF药代动力学曲线示于图6中。在研 宄进行过程中，确定这种方案不会在ELF内产生足以观察功效断裂的范围的fT > MIC。因 此，表9和图7中所描述和所绘的功效数据并不用于任何药效学测定。
[0154] 表9.在中性粒细胞减少性肺部感染模型中使用头孢他啶方案的体内功效研宄的 结果。*0h对照数据代表开始给药时的细菌密度。
[0155]
[0156] 头孢他啶的定向ELF fT > MIC研宄的给药方案的确定
[0157] 在体内测定的单独头孢他啶的游离药物药代动力学曲线示于图8中。此外，对于 上述方案，在第三给药间隔中的ELF浓度也示于图8中。从这些数据确定针对一系列MIC 的fT > MIC值。平均值和上部95%置信区间描述于图9中。
[0158] 体内功效：头孢他啶-阿维巴坦的人模拟血清研宄
[0159] 研宄在中性粒细胞减少性动物中进行。在开始给药时对照小鼠中的各自细菌密度 为5. 98±0. 441og1(lCFU，24小时后增加到9. 13±0. 801og1(lCFU。中性粒细胞减少性研宄的 结果示于表10和图5中。针对铜绿假单胞菌的集合，观察到头孢他啶-阿维巴坦针对分离 株的活性，MIC为32 μ g/mL和更低，一株分离株除外，其MIC为16 μ g/mL。对单独存在的分 离株未观察到活性，MIC为64 μ g/mL。在将直接匀浆铺板到含有药物的板上后，未观察到生 长，这表示不存在耐药性的产生。
[0160] 表10.在中性粒细胞减少性肺部感染模型中使用头孢他啶-阿维巴坦方案的体内 功效研宄的结果。*〇h对照数据代表开始给药时的细菌密度。
[0164] 体内功效：头孢他啶定向ELF fT > MIC研宄
[0165] 定向ELF fT > MIC功效研宄的结果示于表11和图9中。研宄在中性粒细胞减少 性动物中进行。在开始给药时对照小鼠中的各自细菌密度为5. 89±0. 301og1QCFU，24小时 后增加到8. 75±0. 931og1(lCFU。基于32至128 μ g/mL之间的头孢他啶的MIC来选择分离 株。针对MIC为32 μ g/mL的那些分离株观察到活性。针对MIC为64 μ g/mL的分离株的功 效可变化；当使用头孢他啶单一疗法方案时，MIC为128 μ g/mL的分离株看到很少至未看到 活性。
[0166] 表11.在中性粒细胞减少性肺部感染模型中使用定向ELF fT > MIC头孢他啶方 案的体内功效研究的结果。*〇h对照数据代表开始给药时的细菌密度。
[0169] 在鼠类肺部感染模型内，不管宿主的免疫状况，头孢他啶-阿维巴坦的组合均在 肺内产生相当大的浓度。使用先前确定的头孢他啶-阿维巴坦方案，针对MIC < 32 μ g/mL 的那些分离株观察功效，其中ELF fT > MIC彡19%。鉴于这些观察，肺内所需的fT > MIC 可小于先前对于头孢菌素所认为的约60%。当然，在没有明显的ELF fT> MIC的情况下， 对于所述组合，在64 μ g/mL的MIC下，头孢他啶-阿维巴坦不产生功效。头孢他啶定向ELF fT > MIC的结果也证明这可能是正确的，针对32 μ g/mL的MIC观察到活性，其中ELF fT > MIC为12%，并且在64 μ g/mL和128 μ g/mL的MIC下可变活性至无活性。
[0170] 实施例4 :中件粒细朐减Φ件大腿樽姻
[0171] CD-I中性粒细胞减少性小鼠在大腿中感染约IO6Cfu产β -内酰胺酶的铜绿假单 胞菌菌株。2h后单独用头孢他啶（q2h以不同剂量）开始治疗，持续24h，并测定大腿中的 cfu以建立其暴露反应关系。对于2株（头孢他啶的MIC为32mg/L和64mg/L)，进行阿维 巴坦的全剂量分级研宄。对于另外6株铜绿假单胞菌菌株（头孢他啶的MIC为64-128mg/ L)，测定阿维巴坦q2h的暴露反应。将模型拟合到剂量和PK/H)指数（PDI)反应，以测 定产生静态效果（I-Iog ltl杀死和2-log 1(|杀死）的单独头孢他啶和与阿维巴坦组合的头孢 他啶的PDI值。对于阿维巴坦，计算高于虚拟体内MIC(阈浓度，C t)的给药间隔的时间％， 即 ％ fT > Ct %为 0· 25mg/L、lmg/L 和 4mg/L)。
[0172] 用于单一疗法的头孢他啶的静态％ fT > MIC为0-38%，其中一些菌株需要更低 的％ fT > MIC。对于所有菌株，阿维巴坦降低头孢他啶的静态％ fT > MIC。在剂量分级研 宄中，对于lmg/L的％ fT > Ct，观察到最佳的阿维巴坦PDI相关性。在lmg/L的CtT，需要 30.2-74.1 的％^>(^。对于另外6株菌株，平均％^>(^111^/1为36.3%(14.1-62.5)。 静态效果所需的估计量部分取决于头孢他啶的剂量（如果头孢他啶的剂量较高，则需要更 低值）。阿维巴坦的效