果主要取决于高于阈％ fT > CTlmg/L的时间，当与头孢他啶伴随给 药时，平均值为36. 3%。在头孢他啶的较低剂量下需要相对更高的暴露。
[0173] 材料和方法
[0174] 抗菌剂：
[0175] 头孢他啶（CAZ)
[0176] 由 AstraZeneca (ex GSK)提供
[0177] 批号：G263770
[0178] 有效期截止日期：2012年12月5日
[0179] 生产日期：2010年12月6日
[0180] CAS 号：78439-06-2
[0181] 效能：77.2%
[0182] 阿维巴坦
[0183] AstraZeneca(ex Dr Reddy)
[0184] 批号：AFCH005151 (07113P028)，分析编号：A1002CQ055
[0185] 有效期截止日期：2013年3月
[0186] 效能：91.7%
[0187] 细菌菌株和敏感性测试：
[0188] 如表1中所示，在实验中使用7株充分表征的从各种临床相关来源获得的耐 头孢他啶的铜绿假单胞菌菌株。MIC从较早的体外棋盘研宄（Berkhout&Mouton 2013 CAZ-AVI-M1-061)获得，并根据ISO准则（ISO 2006)通过微量稀释进行测定。这种方法是 符合CLSI的。
[0189] 动物：
[0190] 在实验中使用体重20_25g的4-5周龄的远系杂交种雌性⑶-1小鼠（Charles River，Netherlands)。通过两种剂量的环磷酰胺s. c.:-种在感染实验前4天（150mg/kg)， 而另一种在感染实验前1天（l〇〇mg/kg)来诱发粒细胞减少。
[0191] 将动物在标准条件下饲养，随意供应饮料和食物，并在每天免疫抑制2-3次后每 天检查一次。动物研宄根据欧洲共同体的建议（Directive 86/609/EEC，1986年11月 24日）进行，并且所有动物步骤都由Radboud大学的动物福利委员会（Animal Welfare Committee) (RU-DEC 2012-003)批准。
[0192] 感染：
[0193] 中性粒细胞减少性小鼠每只动物感染2株铜绿假单胞菌菌株，一株在左大腿中， 一株在右大腿中。将0. 05mL由约IO5-IO6个细菌组成的细菌悬浮液经肌内接种。在t = 〇h，即引发感染后2小时开始用q2h的给药方案用递增剂量的头孢他啶或盐水（对照） 进行治疗，每剂量为皮下给药的〇. lmL，持续24h。所有给药方案在至少两只动物中进行。 在t = 0h，将两只小鼠人道地处死，以测定治疗前即刻的初始接种物。所有其它动物在t =24h处死，除非遵循动物福利法规，动物的福利表明需要提前终止。取大腿，并移动到 预冷却的含有 2mL 磷酸盐缓冲盐水（PBS;8.00g/L NaCl，L44g/L Na2HP04*2H20,0.26g/ L KH2PO4, pH 7.2-7.4)的 IOmL 塑料管（Transport Tube，Omnilabo, NL)中。随后，使用 Ultra_Turrax(IKA Labortechnik，Germany)将大腿碾碎。制备十倍稀释系列，并且每次稀 释铺板3 X 10 μ L (Chromagar，Biomerieux，NL)。第二天，对菌落进行计数，并计算每只大腿 的cfu数量。然后，药物效果测定为t = 24h与t = Oh时log1(l[cfu/大腿]值之间的差异 (2只小鼠的平均值），表示为"dcfu"。
[0194] 抗生素浓度测量
[0195] 使用冷却离心机将血液与血浆分离。将样品分成几部分，并储存在_80°C下。头孢 他啶和阿维巴坦的浓度由AstraZeneca(Waltham，MA)的药物代谢和药物代谢动力学（Drug Metabolism and Pharmacokinetics)组测定，头抱他啶的量的下限为I. 5ng/mL，阿维巴坦 的量的下限为I. 8ng/mL。如在平衡透析室中测定的以及通过LC-MS/MS分析的，对于头孢他 啶，蛋白结合为10 %，对于阿维巴坦，蛋白结合为8 %。
[0196] 组合给药方案的评价和验证
[0197] 患有实验性大腿感染的中性粒细胞减少性小鼠中的阿维巴坦的暴露-反应关系 在用头孢他啶的固定给药方案治疗下测定，所述头孢他啶的固定给药方案导致为期24小 时的头孢他啶治疗后与特定菌株的初始接种物相比增加l-21og 1Qcfu。该方案被选中是因 为对阿维巴坦的效果的变化具有敏感性。阿维巴坦的给药量的频率和剂量变化。头孢他啶 和阿维巴坦的暴露使用 MicLab 2. 36 (Medimatics，Maastricht，The Netherlands)使用从 药代动力学研宄获得的药代动力学参数估计量确定。在模拟中，对于头孢他啶，使用10%的 蛋白结合，并且对于阿维巴坦，使用8%的蛋白结合。药物效果测定为t = 24h与t = Oh时 l〇g1Q[Cfu/大腿]值之间的差异（2只小鼠的平均值），表示为dcfu。在所有计算中使用游 离药物浓度。将模型（或线性回归）拟合到剂量和PK/ro指数（roi)反应，以测定产生 静态效果或具体特定的log杀死效果的单独头孢他啶和与阿维巴坦组合的头孢他啶的roi 值。对于阿维巴坦，对于〇. 25mg/L、lmg/L和4mg/L的Ct，计算高于阈浓度Ct的给药间隔的 时间％。基于阿维巴坦的体外活性选择(^值，在敏感性测试中使用4mg/L，但如在体外棋盘 研宄和具有肠杆菌科的中空纤维模型（Nichols W，Levasseur P，Li J，Das S. 2012.药代 动力学衰亡期期间的阿维巴坦（AVI)的阈浓度，低于所述阈浓度，肠杆菌科中的β-内酰胺 酶抑制变得无效）中测定的，更低的浓度也具有活性。第52届抗微生物剂和化学疗法的交 叉学科会议的口头报告，San Francisco, CA.摘要#Α-1760)。
[0198] 表12 :用于头孢他啶和阿维巴坦的药效学研宄的铜绿假单胞菌菌株
[0201] 在实验中使用的铜绿假单胞菌菌株基于体外的MIC和体外的棋盘结果进行选择。 CAZ =头孢他啶，CAZ-AVI =头孢他啶和阿维巴坦的组合，*MIC CAZ-AVI在4mg/L阿维巴坦 下测定。
[0202] 表13 :剂量分级实验的设计。
[0203] 用头孢他啶和阿维巴坦的组合方案治疗中性粒细胞减少性CD-I雌性小鼠的剂量 分级设计的实例。每组由2只小鼠组成，并基于与初始接种物相比的21og 1(l增加每2小时 接受固定剂量的头孢他啶以及如方案中所示的阿维巴坦。
[0205] Gr，组；FZ，生理盐水；uur，小时；C，对照。剂量以mg/kg计。
[0206] 表14 :在大腿感染小鼠的治疗中，当与预先确定的恒定给药的头孢他啶组合时， 阿维巴坦的与对6株铜绿假单胞菌的24小时静态反应有关的暴露。
[0207]
[0208] CT1 = lmg/L的阈浓度，TDD =总日剂量，CAZ =头孢他啶，AVI =阿维巴坦
[0209] 表15 :用头孢他啶q2h和阿维巴坦q2h治疗小鼠的非线性回归（Emax模型）结果
[0211] 括号中为SE
[0212] 结果
[0213] 如表12中所示，单一疗法期间头孢他啶的静态％ fT > MIC为0-38%。对于最耐 药的菌株，未观察到效果，从而需要更低的％ fT > MIC。这表明，对于一些高度耐药菌株，需 要更低的％ fT > MIC。对于所有菌株，阿维巴坦降低头孢他啶的静态％ fT > MIC。
[0214] 全剂量分级研宄的设计示于表13中。图10示出了经历阿维巴坦的全剂量分级研 宄的两株菌株的结果。尽管指数、AUC/MIC和剂量中的每一个表现出一定的相关性，但 附图的目视检查得出以下结论：％ fT > Ct是稍微更好的预测因子，但似乎有显著变化。这 表明，在这种背景下，％ fT > Ct并不是决定结果的唯一因素。附图示出了三个Ct浓度的％ fT > Ct。与0· 25mg/L和4mg/L相比，％ fT > Ct lmg/L似乎是稍微更好的预测因子。在 lmg/L的浓度下，需要30. 2 (菌株7)或74. 1 (菌株18)的％ fT > Ct以支持抑菌效果。
[0215] 对于6株菌株，测定了用头孢他啶的固定给药方案用不同剂量的阿维巴坦达到静 态效果所需的剂量（图11)。从这些结果确定每株菌株的％ fT > Ct lmg/L。平均％ fT > CtS 36. 3% (14. 1-62. 5)(表14)。静态效果所需的估计量部分取决于头孢他啶的剂量（如 果头孢他啶的剂量相对于菌株的MIC相对较高，则需要较低值）。
[0216] 表15示出了对6株铜绿假单胞菌菌株的非线性回归分析的结果。估计量在一些 情况下显示显著标准误差。
[0217] 实施傲且j3k孢他啶和阿维巴坦在患有实验性肺炎的中性粒细胞减少性雌性CD-I 小鼠中的药效学
[0218] CD-I中性粒细胞减少性小鼠通过在浅麻醉下通过鼻孔滴注在肺中感染约IO6Cfu。 2h后单独用头孢他啶（q2h以不同剂量）开始治疗，持续24h，并测定肺中的cfu以建立其暴 露反应关系。对于头孢他啶MIC分别为32mg/L和128mg/L的两株菌株，阿维巴坦在头孢他 啶暴露下以两倍递增剂量以q2h或q8h给药，所述头孢他啶暴露在头孢他啶单一疗法实验 中是允许21og 1(l生长的最大暴露。对于两株菌株，在头孢他啶的两个不同剂量水平下进行 阿维巴坦的全剂量分割研宄；此外，也测定阿维巴坦q2h对另外两株菌株的功效。将E max模 型拟合到剂量和PK/H)指数（PDI)反应，以测定产生静态效果（Ι-log杀死和2-log杀死） 的单独头孢他啶和与阿维巴坦组合的头孢他啶的PDI值。对于阿维巴坦，计算高于虚拟体 内阈浓度C t的给药间隔的时间％，即％ fT > C τ %为0· 25mg/L、lmg/L和4mg/L)。
[0219] 阿维巴坦的暴露反应关系（R2 0. 54-0. 86)表明，q2h比q8h更有效，从而对于两 株菌株，日剂量降低到1/2. 7和1/10. 1，以获得组合的静态效果。这对应于20. 1(范围 16. 1-23. 5)的平均％ fT > Ct lmg/L。在剂量分割研宄中，对于％ fT > Ct lmg/L，观察到 最佳的阿维巴坦PDI相关性。静态效果所需的阿维巴坦暴露估计量部分取决于头孢他啶的 剂量（如果头孢他啶的剂量较高，则需要较低值）。对于两株对照菌株，％ fT > Ct lmg/L 估计量为22. 4%和21. 6%。
[0220] 总之，阿维巴坦的效果取决于剂量的频率；频率降低时观察到降低的效果。与效果 相关的主要PK/H)指数是高于阈C t的时间。对于大多数菌株，对于静态效果，lmg/L的％ fT > Ct为 16-25%。
[0221] 为定义阿维巴坦的最低效果浓度，基于阈浓度Ct引入新的药效学指数。这个参数 代表在体内产生显著效果的阿维巴坦的阈浓度。因此，实现药效学效果所需的阿维巴坦的 暴露可使用这个参数来表示。因此，阿维巴坦的暴露表示为药效学指数％ fT > Ct，其类似 于β -内酰胺（在这项研宄中为头孢他啶）的％ fT > MIC。与头孢他啶类似，％ fT > Ct 的估计量取决于Ct本身。但是，β-内酰胺的MIC通常从体外数据获知，而Ct不是。在这 里介绍的实验中，使用以下C rI试值：0. 25mg/L、lmg/L和4mg/L，以根据经验选择最佳值。 理论值目前还不得而知。
[0222] 在这项研宄中，使用患有肺部感染的中性粒细胞减少性小鼠模型来测定在每2 h 的头孢他啶的固定给药频率下对于铜绿假单胞菌bij阿维巴坦的暴露-反应关系，以比较 阿维巴坦的不同给药方案。
[0223] 材料和方法
[0224] 抗菌剂：
[0225] 头孢他啶（CAZ)
[0226] 由 AstraZeneca (ex GSK)提供
[0227] 批号：G263770
[0228] 有效期截止日期：2012年12月5日
[0229] 生产日期：2010年12月6日
[0230] CAS 号：78439-06-2
[0231] 效能：77.2%
[0232] 阿维