[0026] 含第一代双膦酸盐的胶原蛋白海绵的制取：
[0027] 将第一代双膦酸盐（如依替膦酸钠）加入到制取好的胶原蛋白酶解液中，并按 60U/g胶原的比例加入交联剂谷氨酰胺转氨酶，交联2-5小时。搅拌均匀，放入不锈钢盘中。
[0028] 把不锈钢盘置于真空冷冻干燥机中，冻干10-16小时。取出冻干蛋白海绵，按临床 需要切割成不同规格的产品。内包装密封。将包装密封的含第一代双膦酸盐的胶原蛋白海 绵用钴60照射灭菌。灭菌后的产品供临床实验使用。其特征在于保证胶原蛋白海绵用于 临床时，原型药中膦酸根的最佳等效剂量为70_140mg/kg。当给药剂量小于最佳剂量时，其 局部释放药物浓度达不到所需治疗浓度；当给药剂量大于最佳剂量时，其局部释放药物浓 度过高可能会产生毒性作用。
[0029] 实施例2 :
[0030] 含第二代双膦酸盐的胶原蛋白海绵的制取：
[0031] 将第二代双膦酸盐（如氯膦酸钠、帕米膦酸钠和替鲁膦酸钠）加入到制取好的胶 原蛋白酶解液中，并按60U/g胶原的比例加入交联剂谷氨酰胺转氨酶，交联2-5小时。搅拌 均匀，放入不锈钢盘中。
[0032] 把不锈钢盘置于真空冷冻干燥机中，冻干10-16小时。取出冻干蛋白海绵，按临床 需要切割成不同规格的产品。内包装密封。将包装密封的含第二代双膦酸盐的胶原蛋白海 绵用钴60照射灭菌。灭菌后的产品供临床实验使用。其特征在于保证胶原蛋白海绵用于 临床时，原型药中膦酸根的最佳等效剂量为70-140mg/kg。当给药剂量小于最佳剂量时，其 局部释放药物浓度达不到所需治疗浓度；当给药剂量大于最佳剂量时，其局部释放药物浓 度过高可能会产生毒性作用。
[0033] 实施例3 :
[0034] 含第三代双膦酸盐的胶原蛋白海绵的制取
[0035] 将第三代双膦酸盐（如阿仑膦酸钠、奈立膦酸钠、奥帕膦酸钠、利塞膦酸钠和伊班 膦酸钠）加入到制取好的胶原蛋白酶解液中，并按60U/g胶原的比例加入交联剂谷氨酰胺 转氨酶，交联2-5小时。搅拌均匀，放入不锈钢盘中。
[0036] 把不锈钢盘置于真空冷冻干燥机中，冻干10-16小时。取出冻干蛋白海绵，按临床 需要切割成不同规格的产品。内包装密封。将包装密封的含第三代双膦酸盐的胶原蛋白海 绵用钴60照射灭菌。灭菌后的产品供临床实验使用。其特征在于保证胶原蛋白海绵用于 临床时，原型药中膦酸根的最佳等效剂量为70-140mg/kg。当给药剂量小于最佳剂量时，其 局部释放药物浓度达不到所需治疗浓度；当给药剂量大于最佳剂量时，其局部释放药物浓 度过高可能会产生毒性作用。
[0037] 实施例4 :
[0038] 含氯化锶的胶原蛋白海绵的制取：
[0039] 将氯化锶加入到制取好的胶原蛋白酶解液中，并按60U/g胶原的比例加入交联剂 谷氨酰胺转氨酶，交联2-5小时。搅拌均匀，放入不锈钢盘中。
[0040] 把不锈钢盘置于真空冷冻干燥机中，冻干10-16小时。取出冻干蛋白海绵，按临 床需要切割成不同规格的产品。内包装密封。将包装密封的含氯化锶的胶原蛋白海绵用钴 60照射灭菌。灭菌后的产品供临床实验使用。其特征在于保证胶原蛋白海绵用于临床时， 其中氯化锶的最佳剂量为100_200mg/kg。当给药剂量小于最佳剂量时，其局部释放药物浓 度达不到所需治疗浓度；当给药剂量大于最佳剂量时，其局部释放药物浓度过高可能会产 生毒性作用。
[0041] 实施例5 :含雷尼酸锶胶原蛋白海绵的制取：
[0042] 将雷尼酸锶加入到制取好的胶原蛋白酶解液中，并按60U/g胶原的比例加入交联 剂谷氨酰胺转氨酶，交联2-5小时。搅拌均匀，放入不锈钢盘中。
[0043] 把不锈钢盘置于真空冷冻干燥机中，冻干10-16小时。取出冻干蛋白海绵，按临床 需要切割成不同规格的产品。内包装密封。将包装密封的含雷尼酸锶的胶原蛋白海绵用钴 60照射灭菌。灭菌后的产品供临床实验使用。其特征在于保证胶原蛋白海绵用于临床时， 其中雷尼酸锶的最佳剂量为300-600mg/kg。当给药剂量小于最佳剂量时，其局部释放药物 浓度达不到所需治疗浓度；当给药剂量大于最佳剂量时，其局部释放药物浓度过高可能会 产生毒性作用。
[0044] 实施例6 :
[0045] 含双膦酸盐和锶盐胶原蛋白海绵的制取：
[0046] 将双膦酸盐（包括依替膦酸钠、氯膦酸钠、帕米膦酸钠、替鲁膦酸钠、阿仑膦酸钠、 奈立膦酸钠、奥帕膦酸钠、利塞膦酸钠和伊班膦酸钠等）和锶盐（包括氯化锶和雷尼酸锶 等）加入胶原蛋白的酶解液中，并按60U/g胶原的比例加入交联剂谷氨酰胺转氨酶，交联 2-5小时。搅拌均匀，放入不锈钢盘中。
[0047] 把不锈钢盘置于真空冷冻干燥机中，冻干10-16小时。取出冻干蛋白海绵，按临床 需要切割成不同规格的产品。内包装密封。将包装密封的含双膦酸盐和锶盐的胶原蛋白海 绵用钴60照射灭菌。灭菌后的产品供临床实验使用。其特征在于保证胶原蛋白海绵用于临 床时，原型药中膦酸根的最佳等效剂量为70-140mg/kg，氯化锶的最佳剂量为100-200mg/ kg，雷尼酸锁的最佳剂量为300-600mg/kg。当给药剂量小于最佳剂量时，其局部释放药物浓 度达不到所需治疗浓度；当给药剂量大于最佳剂量时，其局部释放药物浓度过高可能会产 生毒性作用。
[0048] 含药胶原蛋白海绵促进骨折愈合的动物实验：
[0049] 1 ?材料与方法
[0050] 1. 1实验动物：采用新西兰兔，雄性，重量约2-3kg (12-16周龄）
[0051] 1. 2实验分组及材料：分为空白组（Control)、胶原蛋白海绵组（CS)、伊班膦酸钠 组（0. lmg/kg IB)、小剂量伊班膦酸钠+胶原蛋白海绵组（SIB+CS，0. 125mg IB)、中剂量伊 班膦酸钠+胶原蛋白海绵组（MIB+CS，0. 25mg IB)和大剂量伊班膦酸钠+胶原蛋白海绵组 (LIB+CS，0. 5mg IB)，共6组。每组10只实验动物，共70只。
[0052] 1.3材料制备：
[0053] SIB+CS组材料制备：将lmg/ml IB 125ul加入到600ml胶原蛋白酶解液中，制备 50*25*5mm胶原蛋白海绵；
[0054] MIB+CS组材料制备：将lmg/ml IB 250ul加入到600ml胶原蛋白酶解液中，制备 50*25*5mm胶原蛋白海绵；
[0055] LIB+CS组材料制备：将lmg/ml IB 500ul加入到600ml胶原蛋白酶解液中，制备 50*25*5mm胶原蛋白海绵；
[0056] 2?实验方法：
[0057] 将雄性新西兰兔予以戊巴比妥钠（3%，lmg/kg)耳缘静脉注射麻醉，麻醉成功后， 用8%硫化钠脱毛术区皮肤，消毒，将动物背卧位固定并消毒铺无菌巾单，右腿股骨远端髌 旁纵行切口，牵开髌骨暴露股骨远端内外侧課，从内外髁之间通过电钻逆行打入2mm克氏 针1根，克氏针经髓腔自股骨近侧端穿出皮肤，截断远端克氏针保证远端埋入膝关节面下， 膝盖复位。取股骨远端外侧切口，沿肌间隙暴露股骨，充分保护周围肌肉血管等软组织，牙 钻锯断。Control组与IB组不做任何处理，分别将CS组、SIB+CS组、MIB+CS组及LIB+CS 组制备材料置入动物骨折处，无菌生理盐水冲洗切口及皮肤并用5-0尼龙线缝合，Control 组及IB组在术后分别给予生理盐水（0. lml/kg)和伊班膦酸钠（0. lml/kg)。术后所有动物 3天内每天肌肉注射丁丙诺啡（0. 05mg/kg)两次及环丙沙星（10mg/kg) -次。所有动物均 正常喂养（避光安静，温度20-26°C，湿度低于80%)。手术当天X线拍片査看术后骨折对 位对线情况。并在2周，4周，每次处死1/2的新西兰兔，进行检测
[0058] 3?实验结果：
[0059] 3. 1第2周及第4周各组骨痂横切面积变化如下表所示，在第二周及第四周时，不 同剂量含IB胶原蛋白海绵组骨痂横切面积较Control、GS及IB组均有明显增加。其中中 剂量组变化最明显。
[0060] 表1第2周及第4周各组骨痂横切面积变化（CSA，mm2)
[0061]
[0062] a:control组与IB组相比，p〈0. 001
[0063] b:control组与SIB+GS组相比，p〈0. 001
[0064] c: