态。修剪周围残存的石蜡。切片厚度为3iim，先在40°C水上延展15min，而后用 阳离子防脱载玻片捞取切片，标记好后，随即放于65°C平台上干烤lh，室温保存。实验前再 以65°C平台上干烤30min。
[0104] 2.脱蜡
[0105] 将石蜡切片置于二甲苯中浸泡20min，每20min更换一次二甲苯，连续更换3次。 二甲苯脱蜡后，入100 % - 100 % - 95 % - 85 % - 70 %的梯度酒精水化，在每个浓度中浸泡 2min。PBS洗 3 次，每次 5min。
[0106] 3.消除内源性过氧化物酶
[0107] 将切片浸入足量3%双氧水，置于室温中作用1〇1^11，？83洗3次，每次5111111。
[0108] 4?抗原修复
[0109] 将切片浸泡在PH8. 0的抗原修复液中，再将放有切片的玻璃缸盖上盖子后放入高 压锅。加热至冒气后关闭阀门开始增压，当增压至温度达到121°C时开始保温IOmin.热抗 原修复完成后，让其自然冷却到室温。PBS洗3次，每次5min。
[0110] 5.抗原抗体杂交
[0111] 羊血清封闭30min后，用油性组织笔圈住组织，将一抗用一抗稀释液稀释至适宜 比例后滴加到组织上。切片置于湿盒中，4°C过夜。向PBS中加入0. 2%Tween20,切片入此 PBS中洗3次，每次5min。将二抗滴加到组织上，切片置于湿盒中，37°C孵育40min。PBS洗 3次，每次5min。
[0112] 6.DAB显色、复染
[0113]DAB原液经专用稀释液稀释40倍后，显色l-2min，在显微镜下掌握染色程度。自 来水冲洗2-3min,终止反应。Harris苏木素复染核，染色5min,自来水冲洗返蓝。切片入 0. 1%盐酸乙醇分化液（99. 9ml70%乙醇，IOOul浓盐酸），分化30sec。自来水冲洗20min。
[0114] 7?封片、照相
[0115] 切片入70 % - 85 % - 95 % - 100 %脱水，再入二甲苯浸泡5min透明，最后用中性 树脂封片。按照适合放大比例，倒置相差显微镜拍摄图像保存。
[0116] 8.弹性蛋白特异性染色
[0117] 石蜡切片脱蜡至水。擦干片子后，高锰酸钾染色5min，蒸馏水洗净。擦干片子后， 草酸漂白5min，蒸馏水洗净。95%乙醇稍洗后，直接滴加弹性蛋白染液覆盖全部组织，4°C过 夜。95%乙醇分化洗去染液，蒸馏水洗净。擦干片子后，VG对比染色lmin。95%乙醇分化 Isec后，置于无水乙醇中。二甲苯透明，封片。
[0118] 9.苏木素-伊红（H&E)染色
[0119] 石蜡切片脱蜡至水。擦干片子后，于95 %乙醇中浸泡数秒后，伊红染色3min，蒸馏 水洗净。擦干片子后，苏木素染色15min，蒸馏水洗净。切片入70%-85%-95%-100% 脱水，再入二甲苯浸泡5min透明，最后用中性树脂封片。
[0120] 实施例6?明胶酶谱法（gelatinzymography)检测MMPs酶活性
[0121] 1.小鼠主动脉中MMPs酶活性的检测
[0122] 在灌流动物后，完全剥去血管周围组织和外膜，按组织块3倍体积加入明胶酶谱 法专用RIPA裂解液，用玻璃匀浆器充分匀浆，冰浴30min。4°C，12500rpm离心30min。取上 清液BCA法测定蛋白质浓度后，加入新EP管中，再加入2Xsamplebuffer,混匀后做好标 记，短期应用则-20°C保存，长期则放于-80°C备用。
[0123] 配制一定量的10%的明胶酶谱法专用分离胶（含明胶），混匀后灌胶，并小心在胶 面上加入Icm蒸馏水，待胶自然凝聚后倾出，配制一定量的5 %的明胶酶谱法专用浓缩胶， 混匀后倒胶，迅速插入梳子，待凝固后小心拔出梳子，用注射器抽取电泳缓冲液冲洗加样 孔，清除未凝的丙烯酰胺。
[0124] 用移液器将等量总蛋白样品加入孔内，注意不要污染临近孔，不要加到外面。4°C， 165V恒压电泳lh。结束后，去除浓缩胶，将剩余胶放入干净玻璃培养皿内，加100mL2. 5% Triton-XlOO缓冲液，室温水平摇晃15min，2次。弃去2. 5%Triton-XlOO缓冲液，加入 IOOmL显色缓冲液，37°C孵育16-40h。
[0125] 弃去显色缓冲液，考马斯亮蓝染色过夜，脱色液脱色Ih后照相。将图片设置为灰 度模式而后反相，用IPP软件计算每个样品的IOD值，与对照组即生理盐水刺激组比较，得 出活性增加的倍数。
[0126] 2.溶液配制：
[0127] 根据本领域技术人员熟知的方法制备分离胶和浓缩胶。
[0128] 100X明胶：10% (w/v)明胶于ddH20(100mg/mL)中，55°C预热至溶解。
[0129] 2X上样缓冲液：0?125MTris-HCl，pH6. 8,4% (w/v)SDS，20% (v/v)甘油，0?04% (w/v)溴酉分蓝。
[0130]显色缓冲液：0? 05MTris-HClpH8. 0,5mMCaC12。
[0131] 脱色液：甲醇：冰醋酸：水（4. 5:1:4. 5,v:v:v)。玻璃瓶内室温保存。
[0132] 实施例7.DHE染色检测组织原位ROS产生
[0133] 1.小鼠主动脉组织冰冻切片
[0134] 在灌流动物后，保留血管周围组织和外膜。截取腹主动脉肾上段或腹主动脉瘤体 部分，快速浸入液氮中凝成刚性固体，迅速将其包埋入OCT中。而后将包埋了组织的OCT块 浸入液氮保存，标记好。切片时，将OCT块固定于切片座上，厚度为3pm。用阳离子防脱切 片收取组织片，随即开始后续实验。
[0135] 2.DHE染色及分析
[0136] 将DHE原液用PBS稀释至5iiM，直接滴加至冰冻切片组织上，每个组织100iiL，室 温避光作用30min。预冷PBS稍洗后，以相同的设置参数-荧光显微镜观察，拍摄图像。采 用480-535nm波长激发，测定590-610nm以上的发射，ROS阴性细胞仅有很低的荧光强度， ROS阳性细胞有较强的红色荧光。
[0137] 荧光探针-二氢乙啶（Dihydroethidium，DHE)可自由透过活细胞膜进入细胞内， 并被细胞内的ROS氧化，形成氧化乙啶；氧化乙啶可掺入染色体DNA中，产生红色荧光。根 据活细胞中红色荧光的产生，可以判断细胞ROS含量的多少和变化。二氢乙啶在细胞内主 要被超氧阴离子型ROS氧化，用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察。ROS的数量与荧光强 度呈正比，将图片设置为灰度模式而后反相，用IPP软件计算每个样品的IOD值，与对照组 即生理盐水刺激组比较，得出活性增加的倍数。
[0138] 实施例8.统计学方法
[0139] 计数资料的统计用Graphpad软件进行Fisher's检验。
[0140] 计量资料结果用均数土标准误（mean土s.e.m)表示。先用SPSS软件分析数据 是否符合正态分布和方差齐性。两组间比较，若符合正态分布且方差齐，则应用未配对t 检验；若符合正态分布但方差不齐，则应用未配对t检验和Welch's校正；若不符合正态 分布，则应用非参数检验（MannWhitney检验）。多组间比较应用单因素AN0VA(one_way AN0VA)以及使用Bonferroni检验进行事后分析（posthocanalysis)。
[0141] P< 0. 05 认为有统计学意义。*P< 0. 05 广P< 0. 01 < 0. 001。
[0142] 实验结果
[0143] I.BAI显著抑制AngII诱导的Apoe-/-小鼠腹主动脉瘤形成
[0144] I.IBAI降低Apoe-/-小鼠腹主动脉瘤的发生率
[0145] AngII刺激28d后，VehApoe-/-组小鼠腹主动脉瘤发生率为88. 2%，盐水诱导组 无腹主动脉瘤形成（图1 ;图2)。该结果与文献报道相符，证明小鼠腹主动脉瘤模型成功。 而在AngII诱导的BAI-30Apoe-/_与BAI-IOOApoe-/-组小鼠中，腹主动脉瘤发生率分别降 至47. 1%和31. 3% (图1 ;图2)。AngII刺激的3组中，各有2只动物死亡，均死于加泵后 的第2周，解剖所见全部为腹主动脉瘤破裂致死。
[0146] I. 2BAI减低Apoe-/-小鼠腹主动脉瘤的严重程度
[0147] 腹主动脉瘤严重程度的评估指标主要包括主动脉重量与体重比、瘤体最大径长， 这些指标均与腹主动脉瘤严重程度正相关。
[0148] 发明人首先计算了主动脉重量与体重比，发现在VehApoe7小鼠中，AngII诱导 28d后，这一比值显著升高；而在BAHOApoe7与BAI-IOOApoe/组小鼠中，比值较Veh Apoe7小鼠明显下降（图3)。随后，发明人利用ImageProPlus软件测量了腹主动脉肾 上段的最大径长。统计结果显示，与盐水对照组相比，AngII刺激28d后显著增加了腹主动 脉肾上段的最大径长；而在BAI组小鼠中，动脉的扩张明显受到抑制（图4A至4C;图5)。
[0149] I. 3BAI不影响组间血流动力学与血脂水平
[0150] 鉴于血流动力学（主要是SBP...