专利名称：：邻-二羟基黄酮-硒配合物制备方法及医学用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于天然药化、药物合成和药理学
技术领域：
，具体涉及到合成黄酮-硒配合物，以及该化合物对人体肿瘤细胞生长抑制活性筛选。可用于制备保健品、农药、杀虫剂、植物生长调节剂、饲料添加剂、免疫调节剂、抗肿瘤药物、抗菌药物。
背景技术：
：硒对人体健康具有多种特殊的功能，当今硒己被联合国卫生组织确认为人体必需的微量元素，多种疾病如肿瘤、衰老、免疫力低下等疾病都与机体缺硒有关，适量补充硒对提高机体免疫力、抑制衰老、预防疾病有着重要的意义。有机硒同无机硒相比，具有生物利用度高、生物活性强、毒性低、环境污染小等特点，因此寻找生物活性高且毒性低的有机硒化合物就成为目前药物研究的一个热点，特别是中药成分的有机硒化合物的研究。黄酮具有降低毛细血管通透性的功能，能维持血管正常的渗透压，有助于保持恢复毛细血管的正常弹性，对多种炎症也具有良好的疗效。卢丁是邻-二羟基黄酮类物质的代表，最为常见，选用其作为实验的原料。芦丁的某些过渡金属配合物的合成已有报道，但对芦丁-硒配合物的合成及抗肿瘤活性研究尚未见报道。通过把芦丁水解可以得到槲皮素，近期发现其还具有抗肿瘤的功效，对其进行结构的改造，能获得更好的抗肿瘤活性。
发明内容本发明的目的之一是提供邻-二羟基黄酮-硒配合物。本发明的目的之二是提供邻-二羟基黄酮-硒配合物的制备方法。本发明的这些目的将通过下列详细描述和说明来进一步体现和阐述。本发明的目的是通过下述技术方案来实现的本发明的，主要为邻-二羟基黄酮类，其结构通式如下(见说明书附图1):图1邻-二羟基黄爾其中R,、R3可为羟基，氢或者甲氧基，R2可为羟基，单糖苷、多糖苷、芸香糖苷。具体实施方式1.仪器与试剂本实验的各种化合物熔点用XRC-1型显微熔点测定仪，温度未校正。1100seriesLC/MSDTrapSL型高效液相色谱-质谱联用仪，包括四元泵(G1311A)、在线真空脱气机(G1379A)、二极管阵列检测器(DAD)(G1315B)、柱温箱(G1316A)、自动进样器(G1313A)和Agilent色谱工作站(美国Agilent公司);670FT-IR型智能付里叶红外光谱仪(美国Nicolet公司)，BrukeAVANCE-300核磁共振仪，'HNMR的观测频率为300.13MHz,13CNMR的观测频率为75.47MHz,加0脉冲宽度为ll.Ous，13C脉冲宽度为7.8us。氯氧化硒购自上海百威灵试剂公司，芦丁购自上海国药集团，其余试剂均为分析纯。2.化合物的制备实施例l:芦丁-硒配合物的制备将lg(0.001641mol)芦丁加入到干燥的20ml吡啶中，搅拌，滴入氯氧化硒0.5ml，干燥下，常温反应48h，加乙醚析出沉淀物，用乙醚、氯仿反复洗，得沉淀物，真空冷冻干燥，最终得棕褐色芦丁-硒配合物。称重1.332g，产率51.5%。新合成的化合物均经过各种物理方法进行了结构鉴定，包括^NMR、MS和元素分析。其结构如下(见说明书附图2):图2戸丁-硒配合物mp:185.0-189.0°C.IR(KBr)3219cm—'(0-H)，1654cm—'(C=0)，1610,1537cnT!(OC),1198cm.1(C-O-C),750cnf1(C-H),680cm匿1(Se-O).'HNMR(CDC13，300MHz)，S(ppm):11.68(s,1H，5-OH),10.56(s,1H，7-OH),7.53(d，1H'2'-H)，7.38(d，1H，5'一H),6.70(d，1H，6'-H)，6.13(d,1H，8—H)，5.96(d，1H，6-H)，(rhamnoseandgluose的'H则R省略).13CNMR(CDC13，300MHz)S(ppm)144.79(C2)，138.55(C3)，177.08(C4),154.55(C5)，98.89(C6)，161.56(C7)，93.68(C8)，103.61(C9),164.01(C10)，121.56(d')，115.21(C2')，144.79(C3，),148.56(C4'),116.16(C5'),121.06(C6'),gluose93.68(C,")'76.46(C/)，75.88(C3")'70.55(C/)'74.09(C5〃),68.22(Cfi"),rh謹ose98.89(C,),68.22(C2'〃)，69.98(C3'，，70.35(C4"，，71.85(C5"),17.71(C6").MS(ra/z):686(IVT+Se).分子式:C27H28016Se，元素分析Calcdfor(%)C47.16，H4.07，Se11.50:Found(%)C47.45，H4.08，Se11.23.实施例2:槲皮素-硒配合物的制备将2g(0.006623mol)槲皮素加入到干燥的30ml吡啶中，搅拌，滴入氯氧化硒2.0ml，干燥下，常温反应48h，加乙醚析出沉淀物，用乙醚、氯仿反复洗，得沉淀物，真空冷冻干燥，最终得棕褐色槲皮素-硒配合物。称重2.437g，产率47.8%。其结构如下(见说明书附图3):图3槲皮素-硒配合物迈p:315.0-318.0°C.IR(KBr)1651cm—、CK))，1606,1530cm、C-C),1206cm—1(C-O-C)，755cnf1(C-H)，680cm—1(Se-0).力NMR(CDC13，300MHz)，S(ppm)11.88(s，lH,5-0H)，10.50(s,1H,7-OH),10.26(s，lH，3-0H),7.60(d，lH,2'-H),7.29(d,1H，5'-H),6.71(d，lH,6'-H)，6.18(d,1H,8-H),5.98(d,1H，6-H),MS(m/z):378.1(+Se).分子式C15H807Se，元素分析Calcdfor(%)C47.49，H2.11,Se20.84;Found(%)C48.22,H2.29，Se20.67.3.药理试验药理实施芦丁-硒配合物的体外抗肿瘤活性将CNE2(鼻咽癌)、HEP2(喉癌)、BEL-7404(肝癌)、KB(口腔上皮癌)及HELA(宫颈癌)细胞分别在盛有DMEM液(内含10%(V/V)小牛血清)的培养瓶中培养，培养条件为37°C，5%C02，将生长旺盛的癌细胞经0.25%的胰蛋白酶液消化后，用DMEM(含10%小牛血清)配成50000的悬液，加入96孔板，每孔100uL，置培养箱内培养24h。采用改良MTT法，每孔加入100uL饥饿DMEM培养液(含0.4%小牛血清)，置培养箱中饥饿培养24h后弃上清夜。每孔加入100uL浓度不同的药物。于培养箱中培养48h。每孔加入20uL5mg/mL的MTT，再置培养箱中培养4h，吸掉上清，每孔加入0.2mL预温培养液清洗一遍，再加入0.15mL的DMS0混匀，30分钟后在酶联检测仪上用490nm波长测0D值。细胞抑制率=100%-加药孔的值/阴性对照孔的OD值。利用统计软件SPSS11.5，芦丁及芦丁-硒配合物对细胞半数抑制浓度(IC5。)由剂量效应曲线得出ICs。，同样条件下，用顺铂作阳性对照，测得IC5。，结果见下表<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>试验结论本试验表明戸丁-硒配合物对CNE2、HEP2、BEL-7404、KB及HELA细胞具有较强的抑制肿瘤细胞的活性，有可能发展成为新的具有治疗这五种癌症及相关肿瘤作用的药物。权利要求1、下式表示的邻-二羟基黄酮-硒配合物或其药学上可接受的盐，其结构式如下，其中R1、R3可为羟基，氢或者甲氧基，R2可为羟基、单糖、多糖、芸香糖2、权利要求1项的化合物表示的邻-二羟基黄酮-硒配合物或其药学上可接受的盐在制备治疗白血病、鼻咽癌、肝癌、直肠癌、胃癌、乳腺癌、恶性淋巴瘤等肿瘤疾病的药物中的应用；3、权利要求1项的化合物表示的邻-二羟基黄酮-硒配合物或其药学上可接受的盐在制备治疗或预防由细菌感染引起的炎症的药物中的应用；4、权利要求1项的化合物表示的邻-二羟基黄酮-硒配合物或其药学上可接受的盐在制备农药、杀虫剂中的应用以及词料添加剂中的应用；5、权利要求1项的化合物表示的邻-二羟基黄酮-硒配合物或其药学上可接受的盐在制备保健品、植物生长调节剂中的应用；6、药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1项的化合物或其药学上可接受的盐，并含有常规药用载体，及药用辅料。7、根据权利要求6所述，其特征是所述药物的制剂形式包括注射剂、片剂、胶囊剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用擦剂、软膏剂、控释或缓释剂或纳米制剂。全文摘要本发明涉及到合成邻-二羟基黄酮-硒配合物制备方法及用途。本发明还涉及其制备方法及其医药用途，可用于制备保健品、农药、杀虫剂、植物生长调节剂、饲料添加剂、免疫调节剂、抗肿瘤药物、抗菌药物等。其结构式见摘要附图，式中R<sub>1</sub>、R<sub>2</sub>、R<sub>3</sub>见权利要求书。文档编号C07D345/00GK101148445SQ20071006697公开日2008年3月26日申请日期2007年1月26日优先权日2007年1月26日发明者仇佩虹,叶发青,吴建章,鹏周,丽林,平郭申请人:温州医学院