ALT的含量。
[0290] 表16式3和式4所示化合物对非酒精性脂肪肝的影响
[0291]
阳293]结合解剖时对肝脏大体的肉眼观察和组织病理切片的肥染色发现（图2)，模型组 大鼠肝细胞内均有大量大小不等的脂肪空泡，形成脂肪肝。而化合物3和4组大鼠肝细胞 内的脂肪空泡基本消失。结果表明化合物3和化合物4的不同剂量组均可W有效防治由于 肥胖引起的的非酒精性脂肪肝症状。
[0294] 实施例11、小鼠急性毒性试验
[0295] 1.实验材料
[0296] 雄性正常昆明种小鼠，170只，体重20-22克，购自北京维通利华实验动物有限公 司。
[0297] 2.实验方法
[029引1)化合物的配制
[0299] 称化合物1-17各2g，用0. 5%CMC-Na配制至10ml，浓度为0. 2g/ml。
[0300] 2)动物分组与给药
[0301] 将正常小鼠适应性饲养3-5天后，实验前一天晚6点禁食，自由饮水。实验时，将 小鼠按体重随机分组，每组10只，灌胃给药，每lOg小鼠体重给0. 25ml，即给药剂量为5g/ kg。正常对照组给0. 5%CMC-Na，每lOg小鼠体重给0. 25ml
[0302]扣评价指标
[0303] 给药后观察动物的一般状况，如外观、行为、对刺激的反应、分泌物及排泄物，记录 异常现象发生时间。观察有无死亡发生，记录死亡发生时间，尸检，观察有无异常现象。
[0304]在急性毒性试验中，灌胃大、小鼠的毒性分级依据LDw分为五级：LDw<Img/kg为极 毒，LD加在l-50mg/kg之间为剧毒，LD加在51-500mg/kg为中等毒，LD加在501-5000mg/kg之 间为低毒，大于5000mg/kg为实际无毒。
[0305] 3.实验结果
[0306] 给药后均未发现明显异常现象，化合物3,4,6组部分小鼠体重减轻，给药第5天2, 4, 5, 7,10组均有一只小鼠死亡，尸检，未发现明显的异常现象。第12天1，13组有一只小鼠 死亡，尸检，未发现明显异常现象。第29天后将小鼠脱颈处死，尸检，均未发现明显异常现 象。
[0307] 实施例12化合物1-17的抗肿瘤作用
[0308] 测试用肿瘤细胞：人肝癌细胞化pG2,人前列腺癌细胞PC3用含体积百分含量10% 的胎牛血清的DMEM培养液培养，人肺癌细胞A549、人结直肠癌细胞HCT-15、人宫颈癌细胞 化La、人白血病细胞K562、人胃癌细胞SGC-7901、人乳腺癌细胞MCF-7用含体积百分含量 10%的胎牛血清的RPMI1640培养液分别培养。上述细胞的培养条件均为37°C、5%C〇2培 养箱中常规培养，隔天传代。
[0309] 被测样品溶液：实施例3所述的17个化合物。准确称取各样品，用DMS0(二甲基亚 讽）配制成200mM溶液（制备时溶于少量DMS0后，再用蒸馈水稀释至相应浓度，控制DMS0 的最终体积百分含量<1 % )，用DMEM培养基进行2倍梯度稀释，共8个浓度，供活性测试。
[0310] 阳性对照溶液：五氣尿喀晚巧-FU)是W抗代谢物而起作用，在细胞内转化为有 效的氣尿喀晚脱氧核巧酸后，通过阻断脱氧核糖尿巧酸受细胞内胸巧酸合成酶转化为胸巧 酸，而干扰DNA的合成。五氣尿喀晚同样可W干扰RNA的合成。静脉用药后，氣尿喀晚广泛 分布于体液中，并在4小时内从血中消失。五氣尿喀晚是最早的抗癌药物，抗瘤谱广泛，临 床用于结肠癌、直肠癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、绒毛膜上皮癌、恶性葡萄胎、头颈部鱗癌、皮 肤癌、肝癌、膀脫癌等。五氣尿喀晚配制成2mM水溶液（制备时溶于少量DMS0后，再用蒸馈 水稀释至相应浓度，控制DMS0的最终体积百分含量<1 % )，用DMEM培养基溶液进行2倍梯 度稀释，共8个浓度。
[0311] 采用细胞增殖抑制活性测试方法（MIT法）测试样品的抗肿瘤细胞增殖活性，其原 理是，活细胞线粒体中脱氨酶能够代谢还原黄色的漠化3-(4, 5-二甲基嚷挫）-2, 5-二苯 基四氮挫为蓝紫色的不溶于水的甲臘（formazan)，甲臘的量可通过酶标仪测定其吸光度求 得。由于甲臘的量与活细胞数成正比，所W可根据吸光度计算得出活细胞的数目，从而获得 药物抑制或杀伤肿瘤细胞的能力。
[0312] 取对数生长期的上述各种测试用肿瘤细胞（人肝癌细胞化pG2、人前列腺癌细胞 PC3、人肺癌细胞A549、人结直肠癌细胞肥T-15、人宫颈癌细胞化la、人白血病K562细胞、 人胃癌细胞SGC-7901、人乳腺癌细胞MCF-7)，分别用膜酶消化，制成每毫升含1X105个细 胞的单细胞悬液，接种于96孔板内（每孔200yL)，每组设3个平行孔。在37°C下经过24 小时后加入2ul上述不同浓度的被测样品溶液，作为给药组，培养48小时。同时设空白对 照组（2ulDMS0替代上述的被测样品溶液）和阳性对照组（2ul不同浓度的五氣尿喀晚溶 液替代上述的被测样品溶液）。然后在各组中加入20yL含M1T的RPMI-1640溶液（M1T终 浓度为5mg/L)再培养4小时，移出150yL培养液后加入150yLDMS0溶解甲臘，在540皿 处测定其吸收度，计算抑制率（％ )。
[0313] 抑制率（％ ) (I) = (1-给药组0D值/空白对照组0D值）X100%。
[0314]计算I〔5。值： 阳引引咕。=[Cl(Ih-50)+Ch(50-Il)]/(Ih-Il)
[0316] 低浓度值；Ch:高浓度值；IH:高浓度下的抑制率；I低浓度下的抑制率。结果 如表17所不。
[0317] 表17 [031 引
[0319] 表17表明，17个化合物对于多种肿瘤细胞都有一定程度的抗肿瘤活性，其活性强 于阳性对照组的五氣尿喀晚。运些化合物可W用于肿瘤治疗或治疗过程中/后的辅助药 物。
[0320] 实施例13化合物1-17的RXRa受体结合抑制剂作用
[0321] 实验原理：在一定条件下，放射性同位素标记的配体[3田-9-cis-RA与GST偶联的 RXR a-LBD蛋白结合可形成配体-受体复合物，用Glutathione Se地arose 4 B Bead吸附 RXRa-LBD后，用液闪仪测定与受体结合的[3田-9-cis-RA的含量，若在同一体系中存在 着可与[3田-9-cis-RA竞争结合RXR a -L抓的配体，则与RXR a -L抓结合的[3田-9-cis-RA 含量降低，cpm(counts per minute)值变低。该实验可直接区分化合物是否与RXRa受体 有高亲和力，方法简便、快捷、易于操作并且容易实现高通量筛选。
[0322] 实验方法：
[0323] 供试品的配制：将供试品和阳性对照药9-顺视黄酸巧-cis-RA，Sigma公司产 品）用DMS0 或dd-HzO配成 20mg/ml储存液，临用前用TEGD(PH7. 4,lOOmMTris, 1. 5mM 邸TA，10%甘油，1/lOOODTT)缓冲液稀释成所需的浓度。
[0324] 活性的测定：在100y1反应体系中，加入2ygRXRa-LBD蛋白及饱和浓度的
[3田-9-cis-RA(15nmol/L)W及不同浓度的药物，测定非特异性结合量。另管加200倍 [3H]-9-cis-RA量的9-cis-RA(相当于药物），置4°C避光反应14小时；加50%Glutathione Se地arose4BBead 室溫反复混合反应30分钟；将Beads点在GF/C膜上，用冰冷 洗脱缓冲液抽滤，每次5ml，共4次，烘干膜；将膜放入1ml闪烁液中，液闪仪测定cpm值。
[0325] 药物对RXRa配体受体竞争结合的抑制率％=仰心。^。1-〔?14^。,)/仰心。^。1-CPMnsb)X100% 防32引CPMwntroi=对照组CPM值；CPM化ug=样品组CPM值；CPMnsb=9-ds-RA组CPM值
[0327] 实验结果；
[0328] 样品在50yg/ml浓度下与[3田-9-cis-RA联合使用时，对RXRa配体受体竞争 结合的影响结果见表18。实验结果表明，化合物1-17具有一定的RXRa受体结合抑制剂 的活性。因此，运些化合物可W作为RXRa受体抑制剂用于肿瘤治疗。
[0329] 表18化合物1-17RXRQ受体结合抑制剂活性结果
[0330]
【主权项】
1. 一种对苯二酚法尼基类化合物及其药用盐在如下（1)至（14)任一项中的应用： (1) 作为a-葡萄糖苷酶抑制剂； (2) 制备治疗和/或预防II型糖尿病的药物； (3) 制备抑制a-葡萄糖苷酶的药物； (4) 作为HMG-CoA还原酶抑制剂； (5) 制备治疗和/或预防高血脂症的药物； (6) 制备抑制HMG-CoA还原酶的药物； (7) 制备具有降血糖及降血脂作用的药物或功能保健品； (8) 制备具有治疗或预防非酒精性脂肪肝的药物或功能保健品； (9) 制备具有二型糖尿病并非酒精性脂肪肝的药物或功能性保健品； (10) 制备预防和/或治疗癌症或抑制肿瘤细胞增殖的药物或功能性保健品； (11) 作为RXRa受体结合抑制剂； (12) 制备作为RXRa受体结合抑制剂的药物； (13) 作为蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制剂； (14) 制备作为蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制剂的药物。2. 如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述对苯二酚法尼基类化合物为如下式1至 式17中任一所示的化合物：3.-种组合物在如下（1)至（14)任一项中的应用，其特征在于，所述组合物包含至少 一种如权利要求2中式1至式17中所示的化合物或其药用盐： (1) 作为a-葡萄糖苷酶抑制剂； (2) 制备治疗和/或预防II型糖尿病的药物； (3) 制备抑制a-葡萄糖苷酶的药物； (4) 作为HMG-CoA还原酶抑制剂； (5) 制备治疗和/或预防高血脂症的药物； (6) 制备抑制HMG-CoA还原酶的药物； (7) 制备具有降血糖及降血脂作用的药物或功能保健品； (8) 制备具有治疗或预防非酒精性脂肪肝的药物或功能保健品； (9) 制备具有二型糖尿病并非酒精性脂肪肝的药物或功能性保健品； (10) 制备预防和/或治疗癌症或抑制肿瘤细胞增殖的药物或功能性保健品； (11) 作为RXRa受体结合抑制剂； (12) 制备作为RXRa受体结合抑制剂的药物； (13)作为蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制剂； (14)制备作为蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制剂的药物。4. 一种具有降血糖作用的组合物，其特征在于，所述组合物包括权利要求2中式3中所 示的化合物与二甲双胍。5.如权利要求1至3中任一所述的应用，其特征在于，所述抑制剂或药物为注射液、片 剂、粉剂、颗粒剂、丸剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂或喷剂。6. 如权利要求1至3中任一所述的应用，其特征在于，所述药物或功能保健品为口服 液、茶饮、含片、胶囊、饮品或泡腾片。7.如权利要求1至3中任一所述的应用，其特征在于，所述药物或功能保健品用于日常 保健、预防糖尿病、高血脂症和非酒精性脂肪肝，或在糖尿病、高血脂症及非酒精性脂肪肝 的治疗过程中/后起辅助作用。8. 如权利要求1至3中任一所述的应用，其特征在于，所述抑制剂或药物包括一种或以 上药学上可接受的辅料。9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述辅料包括药学领域常规的稀释剂、赋形 剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂和缓释剂。10. 如权利要求1至3中任一所述的应用，其特征在于，所述药物通过口服、胃肠内给 药、注射、喷射、物理或化学介导方法给药，或是被其他物质混合或包裹后给药。11. 如权利要求1至3中任一所述的应用，其特征在于，所述癌症为肝癌、肺癌、直肠癌、 宫颈癌、白血病、胃癌、前列腺癌或乳腺癌； 所述肿瘤细胞为肝癌细胞、肺癌细胞、直肠癌细胞、宫颈癌细胞、白血病细胞、胃癌细 胞、前列腺癌细胞或乳腺癌细胞；进一步地，为人肝癌细胞、人前列腺癌细胞、人肺癌细胞、 人结直肠癌细胞、人宫颈癌细胞、人白血病细胞、人胃癌细胞或人乳腺癌细胞。
【专利摘要】本发明提供了一种对苯二酚法尼基类化合物及其药用盐作为α-葡萄糖苷酶、蛋白酪氨酸磷酸酶1B或HMG-CoA还原酶抑制剂、或制备治疗和/或预防II型糖尿病或高血脂症的药物，或制备具有降血糖及降血脂药物或功能保健品，或制备具有治疗或预防非酒精性脂肪肝的药物或功能保健品，或制备具有肝保护作用的药物或功能性保健品，或制备预防和/或治疗癌症或抑制肿瘤细胞增殖的药物或功能性保健品，或作为RXRα受体结合抑制剂，或制备作为RXRα受体结合抑制剂的药物的应用，通过本发明的对苯二酚法尼基类化合物及其药用盐制备的抑制剂、药物、食品或保健品无毒副作用，治疗效果显著。
【IPC分类】A61K31/192, A61P3/06, A61K31/575, A61K31/343, A61K31/365, A61P1/16, A61P35/00, A61P35/02, A61P3/10, A61K31/56
【公开号】CN105213363
【申请号】CN201510578951
【发明人】刘宏伟, 汪锴, 宝丽, 韩俊杰
【申请人】中国科学院微生物研究所
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2015年9月11日