申请的一个或多个实施方案的清洗剂的功效和安全性。
[0105] 6. 1.乳化油滴的包封的功效 进行了实验以证实通过至少一个实施方案的清洗剂的包封乳化油滴的功效。1300cSt 硅油用绿色荧光染料BODIPY (493/503)标记（图11 A-B)。然后通过高速分散器（T-10 Basic，IKA)，以30000rpm的速度，通过将荧光标记的1300cSt硅油与在IX磷酸缓冲盐水 (PBS)中的2% Pluronic F68 (亲水表面活性剂）一起以1:99的油：含水溶液体积比均化 1分钟，产生标准乳液（图12A-C)。然后将该水包硅油乳液与所提出的清洗剂在小室中混 合。
[0106] 进行镜检以可视化油包水包油双乳液的形成。在用所提出的清洗剂洗涤后，观察 到具有两个截然不同的边界的三相，这表明了双乳液的形成，如图13所示。在图14(C)中， 合并图像进一步支持我们预测的o/w/o双乳液的形成，因为在最里面的硅油滴用油溶性荧 光染料染色后，最里面的相显示绿色荧光信号。
[0107] 6. 2体外洗涤眼模型室中清洗剂在除去乳化油滴中的效率 在此实施例中，定制的聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA)模型眼室用作体外眼模型。使标准乳 液保留在体外眼模型中24小时。之后，收集室内的乳液，并使用Coulter计数器Multisizer 4测量液滴大小以获得室内乳液液滴的"起始"计数。随后将室用盐水清洗4次（作为对 照），并用所提出的清洗剂清洗3次，接着用盐水清洗1次（作为实验运行）。在清洗步骤 后，各室用IXPBS再水化。然后再将经清洗的室进行连续滚动（这模拟眼球的运动）达另 一 24小时。之后，使用Coulter计数器Multisizer 4收集室内的液体用于第二次测量任 何留下的液滴的大小（图15)。乳化油的成功去除将导致余留在模型眼室中的液滴数显著 降低。
[0108] 结果显示，在通过所提出的清洗剂洗涤后余留在室中的乳化液滴的量只是通过盐 水洗涤后的液滴的1/3 (图16)，这表明其在本申请中除去乳化液滴的较高效率。总的来 说，清洗剂在体外有效地除去乳化硅油滴。由于该组分广泛用于许多领域，尤其用于化妆品 和医学中，预计在注册和临床实践期间具有较小的安全顾虑和问题。
[0109] 6. 3乳化油滴的包封和清洗剂在除去乳化油滴中的效率 在此研究中，清洗剂由六甲基二硅氧烷、聚二甲基硅氧烷（PDMS)的单体作为主要组分 与少量基于硅酮的疏水表面活性剂Dow Corning 749流体组成。硅油1300cSt用BODIPY 493/503 (Invitrogen)染色，然后分散在含4% Pluronic F68 (Sigma)的IX磷酸缓冲盐水 (PBS)中形成水包油（o/w)乳液。然后将此乳液加入并保留在眼模型室中24小时。随后在 对照实验中，将室用所提出的清洗剂或IXPBS洗涤。收集洗出液，在光学显微镜下观察。然 后将清洗后的室充满1XPBS。在24小时后，使用颗粒计数器Coulter计数器Multisizer 4 定量乳化油滴的数目。
[0110] 结果显示，在体外洗涤模型中，通过所提出的洗涤剂清洗导致油滴减少；余留的油 滴的量只是通过IXPBS洗涤后的1/3。而且，在所提出的清洗剂的洗出液中观察到油包水包 油（o/w/o)双乳液。在较大的水滴中检测到因 BODIPY所致的荧光信号；这证实了初始SO 液滴被含水壳相包封。所得o/w/o双乳液可被容易的洗掉，同时余留的洗涤剂可容易地通 过蒸发除去。
[0111] 此研究表明，乳化SO液滴可随着使用所提出清洗剂的而被包封在水滴内，所得〇/ w/o双乳液可被容易地洗去。因此，按照本申请的至少一个实施方案，此清洗剂在减少除去 硅油后与乳化有关的术后并发症中显示优异的潜力。
[0112] 6. 4体外与清洗剂一起孵育1小时后RGC-5和rMC-Ι细胞的细胞成活力和细胞死 亡 视网膜最里面的细胞层被称为视网膜神经节细胞层。它主要由视网膜神经节细胞与一 些MUller细胞和另外的一些毛细血管组成。此细胞层在解剖学上定位最靠近玻璃体，因此 在此研究中几乎与清洗剂直接接触。因此，在此体外细胞培养研究中使用视网膜神经节细 胞系（RGC-5)和大鼠 MUller细胞系以评价本申请的至少一个实施方案的清洗剂的生物相 容性。
[0113] 在该研究中，采用CellTiter 96? AQ_US非放射性细胞增殖测定法（MTS)和细胞 毒性检测试剂盒（LDH测定法）以测试在与清洗剂一起孵育后RGC-5和rMC-Ι细胞的细胞成 活力和细胞死亡（图17)。清洗剂的主要组分是八甲基三硅氧烷（1.0 cSt硅油[S0])与疏 水表面活性剂DC749 (Dow Corning)。包括了具有不同浓度的DC749 (0%、5%、10%以体积计 算）的清洗剂。孵育时间设计为1小时，因为所提出的清洗剂的使用在体内不会久于15分 钟，因此1小时研究将远足以确定所提出的清洗剂对眼腔中的细胞的作用。将Hank平衡盐 溶液（HBSS)用作实验对照。在本研究中还包括2种液体，全氟萘烷（PFD)和F6H8。PFD是 一种广泛接受的短期使用的术中用于平整化视网膜手术期间折叠的视网膜的辅助剂。F6H8 是重硅油（HSO)的关键组分，所述重硅油已被用作长期眼内填塞物。将清洗剂组的性能与 PFD和F6H8进行比较，所述PFD和F6H8被看作为临床使用中可接受的标准。
[0114] 对于MTS和LDH测定法二者，进行了 3次实验。在RGC-5研究中，当通过单因素方 差分析接着邦弗朗尼事后检验，与对照、HBSS和同样的参照物PFD和F6H8比较时，在使用 具有不同浓度的表面活性剂的所提出的清洗剂的所有实验组中，可以观察到在相对细胞成 活力和死细胞的百分比两者中无差异（图18和19)。这表明，该组分可以是相对惰性的，具 有低毒性，并且是挥发性的，几乎没有残余物。形态图像进一步支持MTS和LDH结果，其中 在实验清洗剂组和对照（HBSS、PFD和F6H8)之间不能鉴定出可观察到的差异（图20A-F)。 在使用rMC-Ι细胞的研究中，得到类似结果。
[0115] 在MTS研究中，结果表明，与LOcSt + 10% DC749相比，F6H8引起MUller细胞的 细胞成活力显著降低。在LDH试验中，当通过单因素方差分析接着邦弗朗尼事后检验，与对 照、HBSS和同样的参照物PFD和F6H8比较时，在使用具有不同浓度的表面活性剂的所提出 的清洗剂的所有实验组中，未能观察到死细胞的百分比的差异（图21和22)。形态图像支 持MTS和LDH结果，其中在实验清洗剂组和对照（HBSS、PFD和F6H8)之间不能鉴定出可观 察到的差异（图23A-F)。
[0116] 这些结果表明，在1小时孵育后，基于I. 0 cSt硅油的清洗剂不对RGC和MUller 细胞两者诱导细胞毒性作用，并且其细胞毒性性能与PFD和F6H8相似，这表明了通常会被 眼科专家接受的生物相容性水平。
[0117] 6. 5体外清洗剂的生物相容性 在类似于上述6. 4的研究中，在30分钟实验中研究了 RGC-5的细胞成活力和百分比细 胞死亡。
[0118] 在MTS测定法中，在含10% DC749的I. 0 mPa .s SO和HBSS对照之间以及同样在 所提出的清洗剂和PFD之间，我们未得到任何统计差异。当与HBSS和PFD比较时，在仅I. 0 mPa · s SO中也得到类似结果。然而，当与HBSS对照比较时，在0. 65 mPa · s SO以及也在 含10% DC749的0· 65 mPa · s SO中得到细胞成活力显著降低。另外，在0· 65 mPa · s SO 组和I. 0 mPa · s SO组之间也得到显著差异（图24)。
[0119] 在LDH测定法中，在暴露于不同的作用剂之后，得到RGC-5细胞死亡的百分比。在 HBSS对照和4个LMff-SO组之间没有显著差异。与I. 0 mPa · s SO相比，在I. 0 mPa · s SO + 10% DC749中观察到较低的细胞死亡，尽管这不是统计显著性的（图25)。
[0120] MTS测定法的结果表明，在30分钟内LMff-SO 0. 65 mPa · s在具有降低RGC-5细 胞代谢的作用，但这没有长到足以导致显著的细胞死亡。结果表明，对于本申请而言，当与 LMff-SO 0. 65 mPa · s 比较时，LMff-SO I. 0 mPa · s 将是更好的选择。
[0121] 本发明的范围不受本文描述的具体实施方案的限制。实际上，除所描述的那些以 外，根据上文的描述和附图，本发明的各种修改对本领域技术人员而言将是显而易见的。这 类修改意图落入随附权利要求书的范围内。
[0122] 本文引用的所有参考文献都通过引用以其整体结合到本文中并用于所有目的，其 程度就像各个单独的出版物或专利或专利申请具体而单独指明通过引用以其整体予以结 合用于所有目的一样。
【主权项】
1. 一种无菌组合物，其包含（i)粘度为0. 5mPa·S-10. 0mPa·S的低分子量硅油，和 (ii)生物相容性疏水表面活性剂，其中所述组合物是0. 5%-20%v/v的生物相容性疏水表 面活性剂。2. 权利要求1的组合物，其中所述硅油的密度为0. 6g/cm3-1.0g/cm3。3. 权利要求1的组合物，其中所述硅油的密度为0. 76g/cm3-0. 90g/cm3。4. 权利要求1的组合物，其中所述硅油的分子量为160g/mol-200g/mol。5. 权利要求1的组合物，其中所述硅油的分子量为200g/mol-250g/mol。6. 权利要求1的组合物，其中所述硅油的表面张力为15. 9-18. 9mN/m。7. 权利要求1的组合物，其中所述硅油的粘度为1. 〇mPa·s-5. 0mPa·s。8. 权利要求1的组合物，其中所述硅油的粘度为5. 0mPa·s-10. 0mPa·s。9. 权利要求1的组合物，其中所述硅油的粘度为0. 65mPa·s-3. 0mPa·s。10. 权利要求1的组合物，其中所述硅油是直链硅氧烷。11. 权利要求1的组合物，其中所述硅油是取代或未取代的聚二甲基硅氧烷（PDMS)。12. 权利要求1的组合物，其中所述组合物形成双乳液。13. 权利要求1的组合物，其中所述生物相容性疏水表面活性剂为DowCorningFluid DC749〇14. 权利要求1的组合物，其中所述组合物是l%-5%v/v的生物相容性疏水表面活性 剂。15. 权利要求1的组合物，其中所述组合物是5%-10%v/v的生物相容性疏水表面活性 剂。16. 权利要求12的组合物，其中所述双乳液是油包水包油双乳液。17. 权利要求12的组合物，其中所述双乳液是乳化硅油滴被含水小球包封。18. 权利要求1的组合物，其中所述组合物在一个或多个外科手术期间用作清洗剂。19. 权利要求1的组合物，其中所述一个或多个外科手术包括玻璃体视网膜手术。20. -种清洗眼腔的方法，所述方法包括： 开始手术程序；和 用包含以下的无菌组合物清洗眼腔：（i)粘度为〇. 5mPa·s-10. 0mPa·s的低分子量 硅油，和（ii)生物相容性疏水表面活性剂，其中所述组合物为0.5%-20%v/v的生物相容性 疏水表面活性剂。21. 权利要求20的方法，所述方法另外包括： 用所述组合物清洗所述眼腔的至少一部分，其中所述生物相容性疏水表面活性剂是 50. 0%三甲基甲硅烷氧基硅酸酯和50. 0%环甲硅油（十甲基五环硅氧烷）。22. 权利要求21的方法，其中所述生物相容性疏水表面活性剂是DowCorningFluid DC749〇23. 权利要求20的方法，所述方法另外包括以下步骤：（i)通过所述组合物与乳化硅油 滴在眼腔中混合在眼腔中形成双乳液，从而使得乳化硅油滴被大的含水小球包封；（ii)从 眼腔除去乳化硅油滴；和（iii)在从眼腔除去组合物后，用长效气体充满眼腔。
【专利摘要】本文公开的是新的清洗剂，其可适用于手术，具体地说是眼科程序。可使用清洗剂从眼腔中除去乳化油滴。还公开了在眼科程序后使用所公开的清洗剂有效除去余留在眼腔中的乳化硅油滴以防止与乳化油滴有关的长期并发症的发展的方法。
【IPC分类】A61K9/107, A61K9/113, A61P27/04
【公开号】CN105283172
【申请号】CN201480026555
【发明人】岑浩璋, 黃世雄, 陈佑祺
【申请人】港大科桥有限公司
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2014年5月2日
【公告号】EP2994110A1, US20140335172, WO2014180278A1