NO. :29 所示 CDR2 区和 SEQ ID Nd :30 所示 CDR3 区。
[0040] 在本发明的一个实施方式中，所述第二结合分子含有：轻链可变区，包括根据 Kabat法确定的SEQ ID NO. :31 所示CDRl 区、SEQ ID NO. : 32所示CDR2 区、和SEQ ID NO. : 33 所示CDR3区；和重链可变区，包括根据Kabat法确定的SEQ ID NO. : 34所示CDRl区、SEQ ID NO. :35 所示 CDR2 区和 SEQ ID NO. :36 所示 CDR3 区。
[0041] 在本发明的一个实施方式中，所述第二结合分子含有：轻链可变区，包括根据 Kabat 法确定的 SEQ ID NO. : 37 所示 CDRl 区、SEQ ID NO. : 38 所示 CDR2 区和 SEQ ID NO. : 39 所示CDR3区；和重链可变区，包括根据Kabat法确定的SEQ ID NO. :40所示CDRl区、SEQ ID NO. :41 所示 CDR2 区和 SEQ ID NO. :42 所示 CDR3 区。
[0042] 在本发明的一个实施方式中，所述第一结合分子含有：轻链可变区，包括根据 Kabat 法确定的 SEQ ID NO. :7 所示 CDRl 区、SEQ ID NO. :8 所示 CDR2 区、和 SEQ ID NO. :9 所示⑶R3区；和重链可变区，包括根据Kabat法确定的SEQ ID NO. : 10所示⑶Rl区、SEQ ID NO. : 11所示⑶R2区和SEQ ID NO. : 12所示⑶R3区；和所述第二结合分子含有：轻链可 变区，包括根据Kabat法确定的SEQ ID NO. : 25所示CDRl区、SEQ ID NO. : 26所示CDR2区 和SEQ ID NO. : 27所示CDR3区；和重链可变区，包括根据Kabat法确定的SEQ ID NO. : 28 所示 CDRl 区、SEQ ID NO. : 29 所示 CDR2 区和 SEQ ID NO. : 30 所示 CDR3 区。
[0043] 在本发明中，根据Kabat等设计的系统采用常规方法测定对可变域的互补决定 区（CRD)(见see Kabat等，免疫相关蛋白序列（第五版）（Sequences of Proteins of Immunological Interest(5th))，国立卫生研究院，贝塞斯达（National Institutes of Health, Bethesda)，MD. (1991))。本发明采用的⑶R编号经Kabat法确定，但本发明也 覆盖了采用其它方法测定的含有CDR的结合分子，所述其它方法包括頂GT法、乔西亚法 (Chothia)以及 AbM 法。
[0044] 在本发明的一实施方式中，所述第一结合分子包括含有选自下组的任一序列的多 肽序列：SEQ ID Nd :43-48。
[0045] 在本发明的一实施方式中，所述第一结合分子含有一轻链区，其包括SEQ ID NO. :43所示的多肽序列，以及一重链区，其包括SEQ ID NO. :44所示的多肽序列。
[0046] 在本发明的一实施方式中，所述第一结合分子含有一轻链区，其包括SEQ ID NO. : 45所示的多肽序列，以及一重链区，其包括SEQ ID NO. : 46所示的多肽序列。
[0047] 在本发明的一实施方式中，所述第一结合分子含有一轻链区，其包括SEQ ID NO. : 47所示的多肽序列，以及一重链区，其包括SEQ ID NO. : 48所示的多肽序列。
[0048] 在本发明的一实施方式中，所述第二结合分子包括含有选自下组的任一序列的多 肽序列：SEQ ID Nd :49-56。
[0049] 在本发明的一实施方式中，所述第二结合分子含有一轻链区，其包括SEQ ID NO. : 49所示的多肽序列，以及一重链区，其包括SEQ ID NO. : 50所示的多肽序列。
[0050] 在本发明的一实施方式中，所述第二结合分子含有一轻链区，其包括SEQ ID NO. :51所示的多肽序列，以及一重链区，其包括SEQ ID NO. :52所示的多肽序列。
[0051] 在本发明的一实施方式中，所述第二结合分子含有一轻链区，其包括SEQ ID NO. : 53所示的多肽序列，以及一重链区，其包括SEQ ID NO. : 54所示的多肽序列。
[0052] 在本发明的一实施方式中，所述第二结合分子含有一轻链区，其包括SEQ ID NO. :55所示的多肽序列，以及一重链区，其包括SEQ ID NO. :56所示的多肽序列。
[0053] 在本发明的一实施方式中，所述第一结合分子含有一轻链区，其包括SEQ ID NO. :45所示的多肽序列，以及一重链区，其包括SEQ ID NO. :46所示的多肽序列；和所述第 二结合分子含有一轻链区，其包括SEQ ID NO. :51所示的多肽序列，以及一重链区，其包括 SEQ ID NO. : 52所示的多肽序列。
[0054] 在本发明的一实施方式中，所述结合分子为抗体或其抗原结合片段。所述抗体可 具有与其相连的药物。
[0055] 在本发明的一实施方式中，所述组合物可用于预防或治疗由流感病毒引起的疾 病。
[0056] 在本发明的一实施方式中，所述组合物可用于诊断由流感病毒引起的疾病。
[0057] 在本发明的一实施方式中，所述组合物可含有药学上可接受的赋形剂。
[0058] 在本发明的个实施方式中，所述组合物的剂型可以是（但不限于）无菌注射溶液、 冻干制剂、注射器预装溶液、口服剂型、外用制剂、或栓剂。
[0059] 本发明还提供了一种治疗由流感病毒引起的疾病的方法，所述方法包括步骤：向 患有所述疾病的对象施用治疗有效量的所述组合物。
[0060] 本发明还提供了一种诊断、预防或治疗由流感病毒引起的疾病的方法：i)向患有 所述疾病的对象同时施用治疗有效量的第一结合分子和第二结合分子；或步骤ii)向患有 所述疾病的对象施用治疗有效量的第一结合分子，然后向所述对象施用治疗有效量的第二 结合分子；或步骤iii)向患有所述疾病的患者施用治疗有效量的第二结合分子，然后向所 述对象施用治疗有效量的第一结合分子。
[0061] 在一实施方式中，本发明提供了一种治疗由甲型流感病毒引起的疾病的方法，所 述方法包括步骤：i)向患有所述疾病的对象施用治疗有效量的第一结合分子；和ii)继步 骤i)之后，向所述对象施用治疗有效量的第二结合分子。
[0062] 在另一实施方式中，本发明提供了一种治疗由甲型流感病毒引起的疾病的方法， 所述方法包括步骤：i)向患有所述疾病的对象施用治疗有效量的第二结合分子；和ii)向 所述对象施用治疗有效量的第一结合分子。
[0063] 在本发明的一个实施方式中，诊断、预防、或治疗所述疾病的方法还包括步骤：施 用抗病毒药物、病毒进入抑制剂或病毒附着抑制剂。所述抗病毒药物可为（但不限于）神 经氨酸酶抑制剂、血球凝集素（HA)抑制剂、唾液酸抑制剂、M2离子通道抑制剂或RNA聚合 酶抑制剂。
[0064] 所述神经氨酸酶抑制剂可以是（但不限于）帕拉米韦（Peramivir)、扎那米韦 (Zanamivir)、奥司他韦（Oseltamivir)或拉尼娜米韦（Laninamivir) 0
[0065] 所述M2离子通道抑制剂可以是（但不限于）金刚烷胺（Amantadine)或金刚烷乙 胺（Rimantadine)〇
[0066] 所述RNA聚合酶抑制剂可以是（但不限于）法匹拉韦（Favipiravir)。
[0067] 本发明还提供了一种预防由流感病毒引起的疾病的方法，所述方法包括步骤：向 患有所述疾病的对象施用治疗有效量的所述组合物。
[0068] 在一实施方式中，本发明提供了一种预防由甲型流感病毒引起的疾病的方法，所 述方法包括步骤：i)向患有所述疾病的对象施用治疗有效量的第一结合分子；和ii)向所 述对象施用治疗有效量的第二结合分子。
[0069] 在另一实施方式中，本发明提供了一种预防由甲型流感病毒引起的疾病的方法， 所述方法包括步骤：i)向患有所述疾病的对象施用治疗有效量的第二结合分子；和ii)向 所述对象施用治疗有效量的第一结合分子。
[0070] 本发明还提供了诊断患者感染流感病毒的方法，所述方法包括步骤：i)将所述组 合物与样品接触；和ii)检测所述组合物和所述样品之间的反应。
[0071] 本发明还提供了一种诊断流感病毒的试剂盒，所述试剂盒含有i)用于诊断流感 病毒的组合物；和ii) 一容器。
[0072] 【有益效果】
[0073] 含有至少两种甲型流感病毒中和结合分子的本发明组合物维持了针对各种亚型 的结合分子活性而在各结合分子之间无干扰，从而表现出叠加效应。本发明所述组合物甚 至在与化学化合物联合施用时，也能表现出协同效应。本发明所述组合物可有效中和系统 发育群1和2中的多种亚型，且可与化学化合物联合使用，因此对于预防和治疗由于流感病 毒引起的疾病非常有用。
[0074] 【附图描述】
[0075] 图1显示了 CT104、CT120和CT123抗体对单体血球凝集素（下文称为"HA"）以 及三聚体HA的结合亲和力。
[0076] 图2显示了 CT147、CT149、CT164和CT166抗体对单体HA亚单位（HAl)以及HA三 聚体的结合亲和力。
[0077] 图3显示了 pCT145⑷和pCT147⑶载体的图谱：
[0078] A :pCT145 载体；
[0079] B :pCT147 载体；
[0080] pac :编码嘌呤霉素 N-乙酰基-转移酶（PAC)的基因；和
[0081] DS :二重对称序列（结合于oriP二重对称序列元件的EBNA1)。
[0082] 图4为表达本发明抗甲型流感病毒单克隆抗体的表达载体图谱。
[0083] 图 5a-5d 显示 了采用表达 Hl (HlNl)、H2 (H2N2)、H3 (H3N2)或 H5 (H5N1)亚型 HA 的 细胞系验证CT120和CT149抗体对低pH下暴露HA诱导膜融合的抑制能力的结果。
[0084] 图6a显示了采用本发明CT120和CT149抗体的体外ADCC实验结果，图6b显示了 采用本发明CT120和CT149抗体的体外⑶C实验结果。
[0085] 图7显示了采用含有小鼠 Fc的CT149抗体进行的动物实验结果。
[0086] 图8a描述的氨基酸序列及示意图显示了 CT120抗体的A/越南/1203/04 (H5N1) 病毒HA-结合位点，图8b和8c描述的氨基酸序列及其示意图分别显示了 CT149抗体的A/ 爱知/1968 (H3N2)和A/安徽/1/2013 (H7N9) HA蛋白结合位点。
[0087] 图9显示了采用表达H1(H1N1)、H3(H3N2)或H5(H5N1)HA亚型细胞系的CELISA实 验验证抗体（CT120、CT149、以及CT120和CT149混合抗体）对HA的结合亲和力。
[0088] 图10显示了向小鼠单独或联合施用CT120和CT149抗体的动物实验结果，以确认 抗体对HlNl的预防或治疗效果。
[0089] 图11显示了向小鼠单独或联合施用CT120和CT149抗体的动物实验结果，以确认 抗体对H3N2的预防或治疗效果。
[0090] 图12显示了向小鼠单独或联合施用CT120和CT149抗体的动物实验结果，以确认 抗体对H5N1的预防或治疗效果。
[0091] 图13显示了向小鼠施用CT149抗体的动物实验结果，以确认抗体对H7N9的预防 或治疗效果。
[0092] 图14显示了以非最适浓度单独和联合施用帕拉米韦和抗HlNl病毒或H3N2病毒 的抗体后，对小鼠死亡率变化的观察结果。
[0093] 图15显示了对抗!17_仏/安徽/1/2013，/上海/2/2013)的（：1'149抗体以及 CT120和CT149抗体混合物的丽实验结果。
[0094] 图16a显示了抗H7N9(A/上海/2/2013)野生型的CT149抗体以及CT120和CT149 抗体混合物的MN实验结果，图16b显示了抗NAI耐药性H7N9(A/上海/2/2013) R292K的 CT149抗体或CT120和CT149抗体混合物的丽实验结果。
[0095] 图17a显示了抗HlNl (A/加利福尼亚/04/2009)野生型的CT120抗体以及CT120 和CT149抗体混合物的丽实验结果，图17b显示了抗NAI耐药性HlNl (A/加利福尼亚 /04/2009)H275Y的CT120抗体或CT120和CT149抗体混合物的MN实验结果。
[0096] 图18a显示了抗A/威斯康辛/67/05(H3N2)野生型以及HA D19N突变体的CT120 和CT149抗体的免疫荧光染色结果，图18b显示了抗A/安徽/1/2013 (H7N9)野生型以及HA D19N突变体的CT120和CT149抗体的免疫荧光染色结果。
[0097]【最佳方式】
[0098]自此，本发明所用术语定义如下。
[0099] 如本文所用，术语"甲型流感病毒"指的是属于正黏病毒科的包膜病毒，其基因组 由八条反义单股RNA(核糖核酸）区段构成。这些流感病毒被份为甲型、乙型和丙型。基于 主要表面蛋白血球凝集素（HA)和神经氨酸酶（NA)，甲型流感病毒进一步分为各种亚型。截 止目前，已鉴定有17种HA和10种NA。
[0100] 本发明所述 "H1 亚型"包括 H1N1、H1N2、H1N3、H1N4、H1N5、H1N6、H1N7、H1N8、H1N9 和 H1N10。
[0101] 本发明所述 "H2 亚型"包括 H2N1、H2N2、H2N3、H2N4、H2N5、H2N6、H2N7、H2N8、H2N9 和 H2N10。
[0102] 本发明所述 " H5 亚型"包括 H5N1、H5N2、H5N3、H5N4、H5N5、H5N6、H5N7、H5N8、H5N9 和 H5N10。
[0103] 本发明所述 " H9 亚型"包括 H9N1、H9N2、H9N3、H9N4、H9N5、H9N6、H9N7、H9N8、H9N9 和 H9N10。
[0104] 本发明所述 " H3 亚型"包括 H3N1、H3N2、H3N3、H3N4、H3N5、H3N6、H3N7、H3N8、H3N9 和 H3N10。
[0105] 本发明所述 " H7 亚型"包括 H7N1、H7N2、H7N3、H7N4、H7N5、H7N6、H7N7、H7N8、H7N9 和 H7N10。
[0106] 如本文所用，术语"血球凝集素"（下文称为"HA"）表示流感病毒的包膜糖蛋白。 HA介导了流感病毒对宿主细胞的吸附和穿透。日前已报道了 17种HA亚型。
[0107] 如本文所用，术语"结合分子"指的是完整免疫球蛋白，包括单克隆抗体，例如嵌合 的、人源化的或人单克隆抗体，或指可变区、底物结合酶、受体或蛋白，其包括与完整免疫球 蛋白竞争特异性结合免疫球蛋白结合伴侣的免疫球蛋白片段，例如甲型流感病毒的HA单 体或HA三聚体。无论结构如何，所述抗原结合片段结合完整免疫球蛋白识别的相同抗原。 抗原结合片段可含有一肽或多肽，其包括的氨基酸序列由结合分子氨基酸序列中至少2、 20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、125、150、175、200、或 250 个连续氨基酸残基构成。 "抗原结合片段"还包括的？813、？(313')、？(313')2、？￥、(^13、？(1、互补决定区（^01?)片段、 单链抗体（scFv)、二价单链抗体、单链