交联透明质酸的方法，制备可注射水凝胶的方法，得到的水凝胶，得到的水凝胶的用图
【专利说明】交联透明质酸的方法，制备可注射水凝胶的方法，得到的水 凝胶，得到的水凝胶的用途
[oocn] 本发明的目的是：
[0002] -用于交联透明质酸，或它的一种盐，和任选的其他生物相容的聚合物的方法，
[0003]-用于制备根据所述交联方法获得的可注射的水凝胶的方法，
[0004]-根据所述交联方法得到的水凝胶，和
[0005] -根据所述交联方法得到的水凝胶在美学和医学领域中的用途。
[000引透明质酸是通过由D-葡萄糖醒酸和N-乙酷基葡萄糖胺（N-actetyl glucosamine)。结构是线性的且不具有任何物种特异性。透明质酸广泛分布在人和动物生 物体内，在其中它实现了许多生物学功能，例如水合作用水平的控制或流体或组织粘弹性 的维持。尤其是发现它在眼睛的滑液流体、玻璃体和在真皮中有高浓度。一个70千克的人 大约有15克透明质酸，其中一半是含在皮肤中且该量随着年龄增长而下降。
[0007] 透明质酸凝胶是已知的且已被用在美学和医学的广泛领域许多年的。运些凝胶尤 其通常被注入：
[0008]-眼睛，在眼科手术中，W维持眼内空间和保护眼的组织，
[0009] -连接点，在关节的情况下，用于补充不充足的滑膜液和暂时恢复所述生物流体的 软骨保护性能，
[0010] -注入或在皮肤下，W填充皱纹或增加脸部或身体的某些区域的体积。
[0011] 透明质酸在生物体内半衰期短（小于1周）。在美学和医学的许多应用的情况下， 所施用的可注射水凝胶包含通过交联稳定的透明质酸，所述交联给出显著增加该多糖在体 内的寿命（也称为存在期）并因此增加所注射产品效果的持续时间的可能性。因此，借助 于通过交联的该修饰，基于交联的透明质酸的水凝胶具有例如在数月的时间内填充皱纹的 能力。
[0012] 为了提高基于透明质酸的可注射水凝胶的体内存在期，本领域技术人员意识到他 /她可增加透明质酸的交联度；但运种分子修饰使凝胶的粘度增加并因此使将其通过针挤 出和后续将该凝胶注射入执业医生所希望的区域。运必然意味着：
[0013]-或者限制透明质酸的交联度并因此凝胶在体内的存在期，目的是具有保持满意 的推顶力，
[0014]-或使用W较大直径的针W能够减少通过该针挤出凝胶所需的推顶力，运对于被 治疗的患者在注射区域产生更大的疼痛和更大的创伤（疲斑，红色斑点，炎症，水肿，……）。
[0015] 已经提出了许多解决方案用于克服该问题，工作者力图提供具有合适存在期和黏 度性能并因此通过针挤出凝胶的令人满意水平的可注射制剂。提议可由如下实例组成：
[0016]-基于交联透明质酸颗粒的制剂，所述交联透明质酸颗粒是通过将交联的凝胶通 常是通过研磨分裂为颗粒得而到；多种制备方法已被描述用于得到该类型的制剂，如申请 W097/04012 的案例，
[0017] -基于含不同交联成分（crosslinkingidentities)的交联透明质酸的制剂，来 自申请WO2005/085329中描述的特定的制备方法。
[0018] -基于交联透明质酸的制剂，含不彼此交联即不通过共价键彼此连接的交联凝胶 混合物；运些制剂根据在FR2924615中描述的特定的制备方法得到，和
[0019] -基于交联透明质酸的制剂，由与交联的透明质酸基质交联在一起的交联的透明 质酸颗粒组成；运些制剂根据申请EP2011816或申请US2010/0028435制备。
[0020] 然而，运些解决方案并不完全令人满意。
[0021] 申请WO97/04012描述了一种特定的制备方法，给出得到基于颗粒形式的多糖 (其可为透明质酸）的可能性。基于交联的透明质酸的颗粒凝胶，在文献中也被称为"双相 凝胶"，其特征是存在分散在非交联的透明质酸溶液中的直径约200微米至大于1000微米 的颗粒，运给出有助于通过润滑现象促进喷射的可能性。运些凝胶不完全令人满意，因为通 过针挤出凝胶是不规则的，特别是具有含大直径颗粒的产品；其中起载体作用的基于非解 交联透明质酸的溶液在体内被迅速再吸收，运设及所需效果的至少部分损失（特别是在注 射致力于产生体积的产品后接下来的数天内的填充损失）；并且最后相比较于基于不含任 何颗粒一一其促进对外来体的响应和/或在治疗区域的机械作用下产生运些粒子迁移一一 的透明质酸的凝胶，产品的安全性不太好（即更高水平的副效应）。
[0022] 申请WO2005/0853描述了一种特定的制备方法，其特征在于引发确定量的至少 一种聚合物（可为透明质酸）交联的步骤，和然后通过在具有反应混合物稀释物的溶液中 添加额外量的分子量大于500, 000化的聚合物（可为透明质酸）W降低聚合物在溶液中的 整体浓度同时使交联反应继续。此溶液不给予有效交联透明质酸的可能性。确实，额外量 的聚合物添加伴随着稀释并因此降低反应混合物的透明质酸浓度。透明质酸链和交联剂之 间接触的概率因此下降且交联反应不是很有效。
[0023] 申请FR2924615描述了一种制备方法，特征在于相同或不同的在混合前交联的X 聚合物（其可能是透明质酸）的均匀混合物。混合是指X聚合物的并置而不在后者间产生 共价键。该解决方案不完全令人满意，因为聚合物不相互结合并因此由此获得的凝胶可在 注射区域内分离，特别是在其中非常显著的机械应力的作用下。例如，可提及的有注入嘴唇 的旨在产生体积的产品的案例；所述嘴唇经受强的机械应力。所经历的机械作用可产生植 入的凝胶的迁移和因此在治疗区域及其周围的副效应。
[0024] 申请EP2011816设及到可注射的多糖凝胶（其可为透明质酸），其包含至少一种 颗粒形式的第一强交联的多糖凝胶，和至少一种形成基质的弱交联多糖凝胶，所述至少一 种第一凝胶通过共价键与所述至少一种第二凝胶结合。与申请WO97/04012的产品不同， 强交联的颗粒与弱交联多糖基质结合；因此该实施方案在短期和/或中期强烈限制颗粒的 迁移而不是长期（在弱交联的多糖已被再吸收入组织之后，释放具有迁移可能性的强交联 的颗粒）。由于该解决方案包含强交联的多糖颗粒，由于产品的颗粒性质和运些颗粒高的交 联度，对外来体响应的风险因此很高（透明质酸因此被显著改性，因此通过生物体提升分 子的非识别性）。
[002引 申请US2010/0028435公开了用于制备基于交联的透明质酸的制剂的方法，所述 交联的透明质酸由与交联的透明质酸基质共交联的交联的透明质酸颗粒组成。因此，适用 与上述给出的对申请EP2011816的相同的评论，加上必要的变更。
[0026] 本发明通过提出交联透明质酸，或其一种盐，或任选的其他生物可相容聚合物的 新型方法给出解决运些不同缺点的可能性，所述方法给出得到W下列内容为显著特征的水 凝胶的可能性：
[0027] -良好的通过针被挤出的能力，和因此能够被执业医生轻易注射至将被治疗的区 域的能力，而运不设及患者的疼痛和严重的创伤，
[0028]-在交联方法的过程中不发生水凝胶的一种或多种构成相转化成颗粒（但具有低 的推顶力，尽管不含通常使推顶力下降的颗粒）；在产品中共交联力的缺乏导致显著改善 的安全性（在短和/或中/长期较少的副作用和并发症），水凝胶至组织中的增强的迁移/ 植入能力（产品在组织中的更平均的分布），也可导致显著较短和较不复杂的制备方法（因 为制备不包括乏味冗长的研磨步骤），
[0029]-由所得到的水凝胶的特定结构引起的显著的粘弹性，运提供向执业医生建议具 有特定机械/流变特性的产品的可能性，用于满足他/她对治疗所需区域的期望，同时遵守 其解剖，控制它的生理机制，和，如果适用的话，将允许其更正确定的缺陷，
[0030]-由于所得水凝胶的特定"多结构化"（且无共交联的颗粒）结构，W简单方式被 植入要被治疗区域的组织的能力，
[0031]-由于较好的在被治疗区域内不分离和因此不向其他相邻或更远区域迁移的能力 而显著加强的安全性，尤其是在机械应力的作用下，
[0032]-所得到凝胶的复杂结构，特征在于"多结构化"，从而允许当适用时活性和/或生 物物质的受控释放的最优化，
[0033]-所得水凝胶的最佳化的存在期W扩展美学或治疗处理的效能，从而给出限制每 次医疗或手术程序的操作数量的可能性。
[0034] 对于该目的，本发明的目的是用于交联透明质酸，或其一种盐，或任选的其他生物 可相容聚合物的新型方法，包含至少W下步骤：
[0035]a)制备部分交联的透明质酸和任选的其他生物相容的聚合物的第一水相，特征在 于：
[0036]-将透明质酸或其一种盐和任选的其他生物相容的聚合物添加至水溶液中W得到 浓度Cl的透明质酸，
[0037]-添加Ql的量的交联剂，
[0038]-通过控制交联反应的溫度Tl和持续时间tl得到部分交联的透明质酸，
[0039] 其中所制备的部分交联的透明质酸的第一水相通常不转化为颗粒，
[0040]b)制备部分交联的透明质酸和任选的其他生物相容的聚合物的至少一种第二水 相，特征在于：
[0041]-将透明质酸或其一种盐和任选的其他生物相容的聚合物添加至水溶液中W得到 浓度C2的透明质酸，
[0042]-添加Q2的量的交联剂，
[0043]-通过控制交联反应的溫度T2和持续时间t2得到部分交联的透明质酸，
[0044] 其中所制备的部分交联的透明质酸的至少一种第二水相通常不转化为颗粒，
[0045]C)将至少第二部分交联的透明质酸相添加至第一相中，然后通过任选地添加额外 的Qm的量的交联剂实施所述至少两相的混合，
[0046] d)通过控制交联反应的溫度Tm和持续时间tm继续进行预先形成的混合物的交 联。
[0047] 然后停止交联反应，有利地通过用水溶液稀释和/或通过实施纯化移除未反应的 交联剂。
[004引根据本发明的交联方法因此由W下构成：在交联过程中混合已部分交联的透明质 酸和任选的其他生物相容的聚合物的至少两个水相，然后继续交联反应W通过共价键结合 所述至少两个水相。
[0049] "部分交联的"是指如下事实：所述至少2个水相的透明质酸，任选地含其他生物 相容的聚合物，在聚合物链上仍具有可利用的能够与交联剂反应用于交联/桥接透明质酸 和/或其他生物相容聚合物的新链的反应位点。
[0050] 指定如下内容是重要的：根据本发明的交联方法在所述交联方法的步骤中例如在 上述步骤a、b、C和d中不设及透明质酸或其一种盐或任何其他聚合物的交联颗粒的制备 和/或添加。在所述交联方法的步骤中，所有部分交联的相任何时间均不通过例如研磨转 化为颗粒。因此，根据本发明的交联方法不给出具有与透明质酸凝胶交联在一起的交联颗 粒的可能性。
[0051] 根据本发明的一个实施方案，部分交联的透明质酸的第二水较部分交联的透明质 酸的第一水相具有更大的部分交联度。运特别地给出了促进第二更强交联的相在第一相中 混合的可能性。
[0052] "部分交联度"是指所述相在其与另一相混合前的交联水平；所述交联水平仅为 部分，因为它将随着在混合