所述相的过程中交联的继续而进一步发展。对于每个相关相 的该交联水平可通过试验测定交联度并将其与最大理论交联度（其可通过评估引入交 联剂的摩尔数和具有交联能力的聚合物单元的摩尔数的比率计算）比较而确定。可间 接（例如，通过推顶力的测定，参见实施例2)或直接（例如，通过核磁共振光谱测定法 (NMR))实验评估交联度，例如使用Kenne等人描述的方法化enneetal.,Modification andcross-linkingparametersinhyaluronicacidhydrogels-definitionsand analyticalmethods,Carbohyr.Polym. 2013, 91:410-418)
[0053] 因此，通常，部分交联的相的"部分交联度"小于（理论上计算的交联度最大值 的）90 %，或小于70 %，或甚至小于50 %，或甚至小于30 %，或甚至小于10 %。
[0054] 根据本发明的一个实施方案，透明质酸的浓度C2大于或等于浓度Cl。运种特殊性 给出促进更强浓缩的第二相在第一相中混合并且得到第二相在第一相中更大溶胀的可能 性（第一相为在水中具有溶胀能力的透明质酸，且由于其浓度很大更是如此）。运然后给出 了通过第二相聚合物链在第一相中的缠结促进最大空间"植入"并且促进将使第一和第二 相的聚合物链结合的交联反应的可能性，运是由于运些链更大程度的物理接近和因此更好 的用于桥接运些链的反应的效率。
[00巧]根据本发明的一个实施方案，交联剂的量Q2大于或等于量Q1，W使第二相获得比 第一相更高的部分交联度。
[0056] 根据本发明的一个实施方案，交联溫度T2大于或等于溫度Tl,W使第二相获得比 第一相更高的部分交联度。交联溫度Tm本身高于T2W使允许第一相和第二相通过共价键 结合的交联反应的效率最大化。
[0057] 根据本发明的一个实施方案，交联持续时间t2大于或等于持续时间tl，W使第二 相获得比第一相更高的部分交联度。交联持续时间tm本身可大于或等于也可小于持续时 间tl和t2。所述持续时间tm取决于所选择的用于实现所述至少两相的纔合物交联的温度Tm〇
[0058] 在混合物的制备过程中，第一和第二相的质量可为相等或不同。取决于根据本发 明所需赋予所得水凝胶的性质，在混合过程中，应相对于另一个相适当提升一个相的存在， 因此可使用相对于另一相更大质量的该相。因此，可W说，从机械/流变学观点出发，具有 最高交联度的相较具有较低交联度的相赋予根据本发明的凝胶更佳的弹性和存在期性能。 在另一方面，具有最低交联度的相赋予该相较小的推顶力并因此更容易使用将被注射的产 品。使用根据本发明的水凝胶，因此观察到在机械/流变、存在期和注射能力特性方面所形 成性能的协同作用。运种协同作用是由于彼此相互作用的两个参数的最优化得到的：所述 相中一种相的低交联度促进更好的水凝胶的注射能力W及内聚力和整体灵活性并减少存 在期和弹性，而另一相的强交联度提升存在期、进一步明显的粘弹性质，有利于弹性且对立 地减少注射能力、内聚力和灵活性。该协同性因此给出了用含交联聚合物颗粒的组合物通 过最小化它们的缺点结合各不同构成相的优点同时避免上述缺点的可能性。各交联相在所 述水凝胶内的比例的优化因此给出了得到可容易注射的产品的可能性，使用所述可容易注 射的产品可能满足对于在美学或医学中的治疗在注射能力、机械/流变性能和存在期方面 所表达的不同需求。
[0059] 根据本发明的一个实施方案，通过实现纯化W移除残留的未反应的交联剂而停止 不同部分交联相的混合物的交联。根据本领域技术人员周知的技术实施所述纯化，例如使 用透析浴或用连续水流冲洗。优选选择使用等渗溶液并具有合适抑的透析纯化。在不同 部分交联的相的混合物交联反应结束时和在凝胶纯化步骤之前，根据本领域已知的标准中 和得到的凝胶是有利的，例如当交联在碱性介质中进行时通过添加酸，和当条件在酸性介 质中进行时通过添加碱中和。
[0060] 本发明设及透明质酸或其一种盐的交联，特别地其在生理学上可接受的盐如钢、 巧、锋、钟盐，有利地钢盐。透明质酸可来源于动物或通过细菌发酵获得。它可具有几个化 至数百万化，有利地约0. 1至4百万化的分子量。
[0061] 本发明也设及其他生物相容聚合物与透明质酸结合的交联。运些天然和合成的 源的聚合物应具有允许它们交联的化学功能且它们应是生物可相容的W使能够与生物流 体或组织接触。例如可提及的有多糖、聚醋、聚酸酢、聚憐腊、聚e-己内醋、聚乳酸及其衍 生物、聚酸、聚丙締酷胺、N-乙締基化咯烧酬和丙締酸聚合物和生物学上可接受的衍生物系 列。
[0062] 交联反应在酸性或碱性介质中在水溶液中进行，有利地在抑优选8-13之间的碱 性介质中。溶液的抑值可相同或不同。
[0063] 不同交联反应中所设及的交联剂可相同或不同。运些通常是不同类型的二或多官 能的交联剂，且它们可例如选自二乙締基讽，二或多官能的环氧化物，碳二亚胺和甲醒。优 选选择来自二或多官能环氧树脂系列的试剂，尤其是最好的代理商双家庭或多功能环氧树 脂的选择和特别是1，4-下二醇二缩水甘油酸度D呢），二环氧辛烧或1，2-二-(2, 3-环氧丙 基）-2, 3-乙締。抓DE的使用对于将进行的各交联反应是最特别优选的。
[0064] 交联溫度通常为约15°C-60°C。它们对于部分交联的相的交联有利地为小于35°C 且对于不同的部分交联相的混合物的交联有利地为大于45°C。
[0065] 交联持续时间通常为数小时，有利地大于I小时多达约12小时。
[0066] 优选使用2个相实施不同部分交联相的混合物的交联，但也可使用多于2个具有 不同部分交联度的相实施。
[0067] 在将被交联的混合物中的各部分交联的相的重量比例可强烈地显著变化，取决 于选择的精确组分、不同相关相的部分交联度和所追求的最终性能。通常，在混合物中， 具有最高部分交联度的相的重量比为混合物不同相总质量的约0. 1-99. 9%，或进一步约 5-95 %，或进一步10-90 %，或进一步20-80 %，或进一步30-70 %，或进一步40-60 %，或进 一步 45-55%。
[0068] 根据本发明的交联方法与现有技术中所述的不同。运些方法都不设及由下列步骤 组成的交联：在交联过程中混合已部分交联的交联透明质酸和任选地其他生物相容的聚合 物的至少2个水相，然后继续所述交联反应W通过共价键结合所述至少2个相，而在所述交 联方法步骤中不制备和/或添加交联的透明质酸或其盐或任何其他聚合物的制品。
[0069] 被认为最接近本发明的现有技术的相关文件如下：
[0070]-申请WO97/04012描述了对于可为透明质酸的多糖的特定交联方法；一种包含 如下步骤的方法：
[0071]O将多糖加入水溶液中，
[0072]O通过添加交联剂引发交联反应，
[0073]O引入对交联反应不利的空间条件，运些条件优选为在交联过程中反应混合物的 稀释，和
[0074]O再引入对交联反应有利的空间条件，运些条件优选为通过蒸发实施的反应混合 物浓缩W完成交联反应。
[0075] 与本发明不同，该申请不设及在交联过程中不同部分交联的透明质酸相的混合。 在另一方面，本发明不W在交联反应中提供不利空间条件（例如稀释）然后提供有利条件 (例如蒸发）为特征，根据本发明的交联在有利条件下实施W优化产率。
[0076]-申请WO2005/085329描述了W如下内容为特征的特定交联方法：
[0077]O引发确定量的至少一种聚合物的交联的步骤，和
[0078]O在溶液中添加额外量的分子量大于500,OOODa的聚合物，伴随着稀释反应混合 物，W降低聚合物在溶液中的整体浓度同时继续所述交联反应。
[0079] 与本发明不同，该申请不设及在交联过程中不同部分交联的透明质酸的混合。
[0080] 该申请设及在交联反应中聚合物的添加，但该聚合物没有经受部分或全部的初步 交联。另一方面，与本发明不同，该聚合物的加入必然伴随着反应混合物的稀释，结果是提 供不利的空间条件和因此并不非常有效的继续交联反应。
[0081]-申请FR2924615描述了制备水凝胶的方法，特征在于在混合前被交联的相同 或不同X聚合物的均匀混合。
[0082] 与本发明不同，该申请不设及在交联过程中混合不同的部分交联的透明质酸。
[0083] 混合预先交联的且它们中每个的交联反应均停止的X聚合物，W得到运些X聚合 物的简单并置而不产生共价键：在运些不同聚合物之间无交联。
[0084]-申请EP2011816描述了制备水凝胶的方法，包含步骤：
[0085]O根据本领域技术人员已知的研磨技术制备第一强交联的多糖颗粒，W得到具有 所需粒度的颗粒，
[0086]O悬浮所述颗粒，
[0087]O添加至少一种第二多糖，和
[0088] O交联所述至少一种第二多糖直至交联度X2用于得到至少一种第二弱交联的多 糖并将所述至少一种弱交联的第二多糖与所述颗粒交联在一起。
[0089] 与该申请不同，本发明不设及在交联过程中交联颗粒的使用（制备和/或添加在 反应混合物中）。特别地，在本发明的交联方法过程中不存在允许制备交联的透明质酸颗粒 的研磨步骤：
[0090]O对于部分交联的相，在混合运些相用于继续交联之前，和
[0091]O对于混合部分交联的相，在继续所述交联的过程中。
[0092] 申请US2010/0028435描述了用于制备与申请EP2011816相似的可注射凝胶的 方法。
[0093] 通过实现交联的透明质酸颗粒和透明质酸凝胶的相互交联得到申请US 2010/0028435 的凝胶。
[0094] 与该申请不同（也与申请EP2011816不同），根据本发明的交联方法不设及任何 在所述交联方法步骤中制备和/或添加交联的透明质酸颗粒或它的一种盐或任何其他聚 合物。根据本发明的交联方法因此不允许交联的颗粒与透明质酸凝胶的相互交联。
[0095] 本发明也设及用于制备由根据先前描述的交联方法交联的透明质酸或它的一种 盐和任选的其他生物相容的聚合物形成的可注射水凝胶的方法。所述制备方法的特征在于 其包含至少下面的连续步骤：
[0096]-根据前面描述的交联方法交联透明质酸或它的一种盐和任选的其他生物相容聚 合物，
[0097] -使用具有合适pH的等渗溶液纯化所述混合物，
[0098]-均质化所述混合物，任选地添加一种或数种其他生物相容聚合物和/或一种或 数种可对生物体提供益处的物质如活性物质，
[0099] -任选地脱气和/或冷冻干燥，
[0100] -在注射器或烧瓶或任何其他密封容器中调制，和
[0101] -灭菌。
[0102] 有利地，在注射器中调制根据本发明的可注射水凝胶，然后根据任何本身已知的 方法并优选通过高压灭菌对其进行灭菌，用于直接应用和/或销售。
[0103] 本发明也设及根据先前表面的交联方法得到的水凝胶。所述水凝胶由至少交联的 透明质酸或它的一种盐和任选的其他生物相容聚合物组成，特征在于