米粒的制备
在25ml圆底烧瓶中加入24.65mg卵磷脂，4.28mg胆固醇，3.79mgDSPE-PEG2000以及10ug IR780，用5ml 二氯甲烷完全溶解。之后通过旋转减压蒸发，除去二氯甲烷，在圆底烧瓶上形成携载了 IR780的脂质薄膜。加入1.4ml生理盐水，并用超声水化lOmin，使脂质薄膜完全从瓶壁脱落，并均匀分散在生理盐水中。在冰浴下，利用高速分散器对溶液进行高速分散。分六次加入共0.6ml氯仿(每次0.1ml)，每次氯仿加入后高速分散Smiru0.6ml氯仿加毕后，再继续高速分散冰浴下10?15min直至粒径均一，溶液稳定。得到的悬液迎光呈光亮透明，而且载光敏剂的粒子平均粒径为100-2000nm, (BIC90plus Particle Size Analyzer) 0
[0039]实施例8.含50ug/ml IR780, 30 v/v%脂质体-氯仿-1R780纳米粒的制备
在25ml圆底烧瓶中加入24.65mg卵磷脂，4.28mg胆固醇，3.79mgDSPE-PEG2000以及10ug IR780，用5ml 二氯甲烷完全溶解。之后通过旋转减压蒸发，除去二氯甲烷，在圆底烧瓶上形成携载了 IR780的脂质薄膜。加入1.4ml生理盐水，并用超声水化lOmin，使脂质薄膜完全从瓶壁脱落，并均匀分散在生理盐水中。在冰浴下，利用高速分散器对溶液进行高速分散。分六次加入共0.6ml氯仿(每次0.1ml)，每次氯仿加入后高速分散Smiru0.6ml氯仿加毕后，再继续高速分散冰浴下10?15min直至粒径均一，溶液稳定。得到的悬液迎光呈光亮透明，而且载光敏剂的粒子平均粒径为550-5000nm, (BIC90plus Particle Size Analyzer) 0
[0040] 实施例9.含50ug/ml IR780, 20 v/v%，泊洛沙姆-全氟己烷-酞菁锌纳米粒的制备
在25ml圆底烧瓶中加入35mg泊洛沙姆以及10ug IR780，用5ml三氯甲烷完全溶解。之后通过旋转减压蒸发，除去三氯甲烷，在圆底烧瓶上形成携载了 IR780的脂质薄膜。加入1.6ml生理盐水，并用超声水化lOmin，使脂质薄膜完全从瓶壁脱落，并均匀分散在生理盐水中。在冰浴下，利用高速分散器对溶液进行高速分散。分4次加入共0.4ml全氟己烷(每次
0.1ml)，每次全氟己烧加入后高速分散Sminc3Ojml全氟己烧加毕后，再继续高速分散冰浴下3-5min直至粒径均一，溶液稳定。载光敏剂的粒子平均粒径为150-1 OOOnm, (BIC90plusParticle Size Analyzer)。
[0041 ] 实施例10.含50ug/ml IR780, 20 v/v%，吐温-全氟己烷-金丝桃素纳米粒的制备在25ml圆底烧瓶中加入47mg吐温以及10ug金丝桃素，用5ml 二氯甲烧完全溶解。之后通过旋转减压蒸发，除去二氯甲烷，在圆底烧瓶上形成携载了 IR780的脂质薄膜。加入1.6ml生理盐水，并用超声水化lOmin，使脂质薄膜完全从瓶壁脱落，并均匀分散在生理盐水中。在冰浴下，利用高速分散器对溶液进行高速分散。分4次加入共0.4ml全氟己烷(每次
0.1ml)，每次全氟己烧加入后高速分散Sminc3Ojml全氟己烧加毕后，再继续高速分散冰浴下10-15min直至粒径均一，溶液稳定。载光敏剂的粒子平均粒径为550-5000nm，(BIC90plusParticle Size Analyzer)。
[0042]附加实验表明脂质体、蛋白和大分子等均能作为乳化剂，且用脂质体和白蛋白做载体乳化剂得到的粒径较小。
[0043]在制备过程中，我们考察了不同的缓冲液(水、生理盐水、生理葡萄糖、磷酸盐缓冲液、醋酸缓冲液和TRIS缓冲液等)对粒子粒径的影响，结果表明，生理盐水较好。
【主权项】
1.一种含有单线态氧保护剂的组合物的制备方法，所述组合物由乳化剂、光敏剂和保护剂组成，其特征在于，制备方法包括以下步骤: (a)用溶剂溶解光敏剂、乳化剂获得混合溶液； (b)向上述的混合溶液中加入1O2保护剂，在冰浴下乳化保护剂制成组合物。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(a)操作中的溶剂是二氯甲烷、三氯甲烷、乙醇、甲醇、丙醇中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中的乳化方法是挤出法、超声法或者高速分散法。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(a)中的光敏剂光敏剂为亲水性、亲油性或者两亲性的，选自卟啉及其衍生物中的ICG、Ce6、5-ALA;叶绿素及其衍生物中的脱镁叶绿素、二氢卟酚及紫红素18、蒽醌及其衍生物;酞菁及其衍生物中的锌酞菁、酞菁铝；内源性光敏剂中的5-氨基乙酰丙酸、藻胆蛋白中的藻红蛋白、藻蓝蛋白、五氮齿类衍生物中的镥III五氮齿、醌类化合物、玫瑰红、富勒烯;聚乙炔类中的苯庚三炔、噻吩类化合物中的α噻吩;无机光敏剂中的氧化钛(Ti02)、氧化锌;或选自中草药类光敏剂中的的竹红菌素衍生物、补骨脂素、姜黄素、金丝桃素、假金丝桃素、大黄素、核黄素、芦荟大黄素;七甲川菁类中的IR780、IR775中的一种或几种。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的光敏剂为IR780、IR775、酞菁中的一种或几种。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(a)操作中的乳化剂为脂质类:DSPE-PEG2000，卵磷脂，胆固醇，DSPC，DPPC，DSPE;蛋白类:人血白蛋白、血红蛋白、转铁蛋白、免疫球蛋白、胰岛素;高分子类:聚乙烯醇PVA，泊洛沙姆、吐温、司盘、苄泽，卖泽、聚氧乙烯、蓖麻油中的一种或几种。7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的乳化剂是磷脂、DSPE-PEG2000、白蛋白中的一种或几种。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述的步骤(b)操作中的单线态氧保护剂包括石蜡、碘油、大豆油、二氯甲烷、氯仿、全氟化物、重水、Freonll中的一种或几种。9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述保护剂作为微泡、微囊、微粒、微乳以及纳米粒和纳米乳的芯材料，或者作为其成膜材料组分，或者粘附于成膜材料之上。10.根据权利要求1-9任一项所述的制备方法，其特征在于，具体制备方法如下: (a)在温度是10-35°C，pH3-10的条件下，用溶剂溶解光敏剂、乳化剂获得混合溶液;利用两亲性脂质同时作为携载疏水性光敏剂的载体和保护剂的乳化剂;有机溶剂同时溶解脂溶性光敏剂和两亲性乳化剂； (b)将以上混合溶液置于合适的圆底烧瓶中并抽真空恒温水浴锅内除去溶剂，使光敏剂均匀分散到乳化剂的疏水端中乳化剂和光敏剂在圆底烧瓶底部形成一层均匀的薄膜； (c)向上述圆底烧瓶内加入溶剂，并用超声水化10-15min，使乳化剂脱落，分散于水中形成胶束、囊泡等结构使脂质薄膜完全从瓶壁脱落，并均匀分散在溶剂中； (d)在温度是2-35°C，pH3-9的条件下向步骤(c)获得的混合溶液中加入保护剂，并用高速分散器进行分散，利用亲水-疏水相互作用，使得乳化剂包裹保护剂，形成纳米或微米乳滴。11.权利要求1所述方法制备出的组合物，其特征在于，所述组合物用于增效光动力治疗。
【专利摘要】本发明涉及一种利用保护剂可以使得单线态氧孵育在其中并能明显延长单线态氧的寿命的特性，提供大量的持久性的单线态氧，进而增强光动力治疗疗效。组合物是由具有延长单线态氧寿命的功能性物质、乳化剂和光敏剂组成，通过乳化剂将功能性物质制成乳剂，与光敏剂协同递送到肿瘤组织内，由此光动力疗法将可以利用具有延长单线态氧寿命的功能性物质中所孵育的大量单线态氧进行光动力治疗，从而提高光动力治疗的药效。
【IPC分类】A61K47/04, A61K47/44, A61K9/107, A61P35/00, A61K41/00, A61K47/06
【公开号】CN105561306
【申请号】CN201610028413
【发明人】胡一桥, 吴锦慧, 程宇豪, 程浩, 王开开
【申请人】南京大学
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2016年1月16日