翼核果素的抗肿瘤应用

翼核果素的抗肿瘤应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物的应用领域，尤其涉及翼核果素的抗肿瘤应用。
【背景技术】
[0002] 翼核果，【拉丁学名】Ventilago leiocarpa Benth，系鼠李科植物，【别名】血风根、 血风藤、红蛇根、青筋藤、铁牛入石、拉牛入石，产自国内的台湾、福建、广东、广西、湖南、云 南；印度、緬甸、越南也有分布;生于海拔1500米以下疏林下或灌丛中或山间沟边或疏林下。 广西民间用根治疗贫血，风湿性关节炎和腰肌劳损等多种疾病。翼核果属植物含有丰富的 醌类化合物，因而引起植物化学家的兴趣。应百平等曾报道从海南岛产的此种植物根中分 得大黄素、大黄素-6，8-二甲醚、1-羟基-6，7，8-三甲氧基-3-甲基蒽醌、翼核果醌和羽扇豆 醇。从广西产翼核果根的乙醇提取物分得七个结晶成分，根据理化性质和光谱数据，分别鉴 定为大黄素-甲醚、大黄素、1，2,4,8_四羟基-3-甲基蒽醌、翼核果醌-I和一个新的萘醌化合 物，命名为翼核果素 (Venti lagol in，5)。
[0003] 肿瘤(tumour)是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织的某一个细胞在基因水 平上失去对其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的新生物，因为这种新生物 多呈占位性块状突起，也称赘生物(neoplasm)。一般认为，肿瘤细胞是单克隆性的，即一个 肿瘤中的所有瘤细胞均是一个突变的细胞的后代。肿瘤的肉眼观形态肉眼观肿瘤的形态多 种多样，并可在一定程度上反映肿瘤的良恶性。学界一般将肿瘤分为良性和恶性两大类。 [0004]良性肿瘤生长缓慢，呈膨胀性生长，表面常有完整包膜，除局部症状外较少全身症 状，不向周围组织浸润也不向全身转移，手术切除后不易复发，对机体危害较小，如脂肪瘤、 血管瘤、腺瘤、囊肿等。
[0005] 恶性肿瘤生长迅速，生长时常向周围组织浸润，表面几无包膜，常有全身转移，病 理检查可见不典型核分裂，除局部症状外，全身症状明显，晚期病人多出现恶病质，手术切 除后复发率高，对机体危害大，如骨癌、食管癌、肝癌、肺癌、白血病、骨肉瘤等。恶性肿瘤的 发草螽斯病率有逐年升高的趋势，在各种疾病的死亡原因中也占前几位，因而是重点防治 的一种疾病。
[0006] 良性肿瘤有时也可转变为恶性，称为良性肿瘤恶性变，如纤维瘤可转变成纤维肉 瘤。有些疾病容易转变为恶性肿瘤，如萎缩性胃炎可发展为胃癌;交界痣可发展为恶性黑色 素瘤，这些疾病称为癌前疾病或癌前病变。
[0007] 恶性肿瘤是一类严重危害人类生命健康的常见病，目前治疗恶性肿瘤的常用手段 为手术治疗、化学治疗、放射治疗和生物学治疗等。然而多数患者就诊时已进入晚期，不适 宜手术切除，而放化疗的远期疗效亦均较差。探寻积极有效的预防途经及有效的治疗药物 显得十分迫切和必要。
[0008] 目前还没有文献公开过翼核果素的抗肿瘤应用。

【发明内容】

[0009] 本发明的目的在于提供翼核果素的抗肿瘤应用，翼核果素抗肿瘤能够在制备抗肿 瘤药物中的应用。
[0010] 为达到上述目的，本发明采用的技术方案为： 翼核果素在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0011] 所述的抗肿瘤药物为抗肝癌药物。
[0012] 所述的抗肿瘤药物为能够抑制人肝癌HepG2细胞增殖的药物。
[0013]所述的抗肿瘤药物为能够诱导HepG2细胞凋亡的药物。
[0014]所述的抗肿瘤药物为能够将细胞周期阻滞在G2/M期的药物。
[0015]所述的抗肿瘤药物为能够引起细胞骨架蛋白F-actin解聚断裂的药物。
[0016]本发明的药效学试验表明，经翼核果素作用24h后MTT结果显示，翼核果素在50~ 200 umol · I/1浓度范围内对HepG2细胞的增殖有抑制作用，并且随着药物浓度的增加，对细 胞的抑制作用逐渐增强，呈现剂量依赖性。翼核果素作用于ifepG2细胞24h的IC 5q值为124.77 umol · L-1O
[0017]本发明的药效学试验表明，细胞经HE染色后观察到，正常培养的HepG2细胞呈梭 形，胞体大，胞浆丰富，多见核分裂像。经翼核果素作用后HepG2细胞数明显减少，细胞皱缩 变细长，胞浆减少，可见明显空泡化，细胞核固缩浓染，可见凋亡小体。
[0018] 本发明的药效学试验表明，经吖啶橙荧光染色后观察到，正常培养的HepG2细胞细 胞膜完整光滑，细胞核形态饱满，呈均匀绿色，染色较浅。经翼核果素作用后ItepG2细胞数量 减少，胞膜皱缩，细胞核体积相对变小，染色质浓集，荧光明显增强，可见凋亡小体等细胞凋 亡特征。
[0019] 本发明的药效学试验表明，Annexin V FITC-PI流式细胞仪检测结果显示，随着 翼核果素浓度的增加，细胞凋亡率增大，组间差异有统计学意义(p<0.01)。提示翼核果素 对!fepG2细胞有诱导凋亡的作用，且呈剂量依赖性。
[0020] 本发明的药效学试验表明，翼核果素作用HepG2细胞后，流式细胞仪检测发现细胞 周期各时相有差异，主要表现为G2/M细胞比例增多，GO/ Gl期细胞比例减少，组间差异有统 计学意义。提示翼核果素能将HepG2细胞阻滞于细胞分裂的G2/M期，从而抑制细胞的分裂增 殖。
[0021] 本发明的药效学试验表明，Actingreen 488能和细胞内的纤维肌动蛋白F-actin 特异性结合，与FITC偶联呈绿色荧光，主要分布在细胞膜和细胞质内。激光共聚焦扫描显微 镜下观察，空白组HepG2细胞伸展良好，形状不规则，可见大量毛刺伪足，细胞质内F-actin 纤维蛋白呈长条细丝状，结构完整，排列规则，绿色荧光较强。经翼核果素作用后，细胞缩 小，毛刺伪足减少，胞质中的F-actin纤维蛋白明显减少，丝状结构断裂，排列紊乱，胞浆可 见明显空泡化改变，破损的F-actin纤维断裂端呈堆积状，绿色荧光强弱不均。
[0022]与现有技术相比，本发明的积极效果是： 1、本发明的翼核果素是翼核果的生物活性成分之一，取材方便，纯天然。
[0023] 2、通过本发明的药效学试验，证实了翼核果素可明显抑制人肝癌HepG2细胞的增 殖，呈剂量依赖性，作用于HepG2细胞24h的IC5q值为124.77 umol · L-^HE染色、吖啶橙染色 及流式细胞术结果显示，翼核果素可诱导细胞凋亡，可将细胞周期阻滞在G2/M期。免疫荧光 法检测发现，翼核果素可引起细胞骨架蛋白F-actin解聚断裂，因此翼核果素具有较好的抗 肿瘤作用，能用于开发抗肿瘤药物，应用前景广阔。
[0024] 3、本发明以翼核果素作为抗肿瘤药物，能够最大限度地保护肝功能，恢复肝脏功 能，最大限度地减少并发症，对身体不会产生任何毒副作用，比传统的治疗恶性肿瘤的常用 手段手术治疗、化学治疗要好很多，手术治疗针对的普遍是肿瘤早期及中期，然而多数患者 就诊时已进入晚期，不适宜手术切除，又如化学治疗肿瘤在杀伤肿瘤细胞的同时，也将正常 细胞和免疫细胞一同杀灭，对病人的身体造成极大的伤害。
【附图说明】
[0025]图1不同浓度翼核果素对HepG2细胞的抑制作用(n=4, 土S ); 图2翼核果素对HepG2细胞形态的影响(HE X 100，空白对照组）； 图3翼核果素对他?62细胞形态的影响(册\100，翼核果素100 11111〇11/1); 图4翼核果素对他?62细胞形态的影响(册\100，翼核果素120 11111〇11/1); 图5翼核果素对HepG2细胞形态的影响（卩丫啶橙X 100,空白对照组）； 图6翼核果素对他?62细胞形态的影响（叮啶橙\100，翼核果素100 11111〇11/1); 图7翼核果素对他?62细胞形态的影响（叮啶橙\100，翼核果素120 11111〇11/1); 图8翼核果素诱导HepG2细胞凋亡的作用（空白对照组）； 图9翼核果素诱导HepG2细胞凋亡的作用(翼核果素80 umoll/1); 图10翼核果素诱导HepG2细胞凋亡的作用(翼核果素120 umoll/1); 图11翼核果素诱导HepG2细胞凋亡的作用(翼核果素180 umoll/1); 图12翼核果素阻滞HepG2细胞周期的作用（空白对照组）； 图13翼核果素阻滞HepG2细胞周期的作用(翼核果素80 umoll/1); 图14翼核果素阻滞HepG2细胞周期的作用(翼核果素120 umoll/1); 图15翼核果素阻滞HepG2细胞周期的作用(翼核果素180 umoll/1); 图16翼核果素对HepG2细胞骨架蛋白F-actin的影响（空白对照组）； 图17翼核果素对HepG2细胞骨架蛋白F-actin的影响(翼核果素120 umolL- 图18翼核果素对HepG2细胞骨架蛋白F-actin的影响(翼核果素180 umolL-1)。
【具体实施方式】
[0026] 实施例1 本发明提供的翼核果素由广西中医药研究院化学所分离获得，紫红色针状结晶，用 DMSO溶解成IOumol · ml/1储备液，过滤除菌，实验时用DMEM培养基稀释。
[0027]下面结合具体药效学实验，进一步阐述本发明提供的翼核果素抗肿瘤的效果。
[0028] 材料 1.1细胞株 人肝癌细胞株HepG2，购于湘雅医学院细胞库。
[0029]药物及试剂 翼核果素由广西中医药研究院化学所分离获得，紫红色针状结晶，用DMSO溶解成 IOumol · ml/1储备液，过滤除菌，实验时用DMEM培养基稀释;DMEM高糖培养基，博士德公司； 胎牛血清、二甲基亚砜(DMSO)，Giobco公司；四甲基偶氮唑蓝(MTT)，biotopped公司；HE染色 试剂盒、吖啶橙染色试剂盒，碧云天生物技术研究所;Annexin V FITC-PI细胞凋亡检测试 剂盒，life公司；细胞周期检测试剂盒，联科公司；4%多聚甲醛、Triton X-100,成都科龙化 工试剂厂;ActinGreen 488 Reddyprobes reagent染液、DAPI染液，life公司；抗焚光淬灭 封片剂，碧云天生物技术研究