专利名称：含有转葡糖苷酶的清洁组合物的制作方法
技术领域：
01本发明提供包括转葡糖苷酶和天然树胶多糖的组合物，其中所述
天然树胶多糖是所述转葡糖苷酶的底物。本发明还提供使用转葡糖苷酶降 解天然树胶多糖的方法。在一些优选的实施方案中，发现该组合物和方法 可用于清洁应用中。
背景技术：
02洗涂剂和其他清洁组合物往往包括有效成分的复杂组合。例如， 许多清洁产品含有表面活性剂体系、清洁酶、漂白剂、助洗剂、抑泡剂、 污垢悬浮剂、去污剂、荧光增白剂、柔软剂、M剂、染料转移抑制化合 物、研磨剂、杀菌剂和香料。然而，尽管当前洗涤剂如此复杂，但是有很 多污渍仍难以去除。因此，本领域中依然存在对有效清洁各种污渍的组合 物和方法的需求。
发明概述结合附图
可以最佳地理解以下详细描述的某些方面。需要强调的是，按照通常的做法，附图的各个特征不是按规定比例绘制的。相反，为清楚起见各个特征的尺寸是可任意地扩大或减少。图4为显示在50mM Hepes緩冲液(pH7.4 )中和在AATCC HDL 洗涤剂(pH7.4)中，Trip-TG对瓜尔胶弄脏的微布样(microswatches) (上图)和色拉酱弄脏的微布样(下图)的清洁性能的图。图5提供了剂量反应实验的图，显示在AATCC HDL中Trip-TG 在l-5ppm浓度时对色拉酱弄脏的微布样是有作用的。对于此处所用的数值范围，应理解，除非另有说明，当提供一个 数值范围时，介于其上限和下限之间的中间值(其精确度至该下限单位的 十分之一)也被明确公开。在任何设定值间的每个较小范围或在设定范围 内的中间值以及在该设定范围内的任何其他设定或中间值都涵盖在发明 内。这些较小范围的上限和下限可独立地被包含在该范围内或被排除在该 范围外，并且其中各个其范围的上限和下限之一包括在该较小范围内、上 限和下限都不包括在该较小范围内和上限和下限都包括在该较小范围内 的每个范围也都涵盖在本发明内，受到设定范围内任何特定地排除的限 制。凡设定范围包括界限之一或两个界限，排除所包括的一个或两个界限 的范围也落在本发明内。
本文中所使用，术语"硬表面清洁组合物"，指清洁如地板、墙壁、瓷砖、浴室和厨房设备等硬表面的清洁剂组合物。这类组合物可以任何形式提供，包括但不限于固体、液体、乳液等。本文中所使用，"餐具洗涤组合物"指清洁餐具的一切形式的组合物，包括但不限于凝胶、颗粒和液体形式。本文中所使用的"转葡糖苷酶的有效量"指在具体应用(如清洁組合物等)中达到所需酶活性必需的转葡糖苷酶的量。这种有效量容易由通过本领域的普通技术之一而确定，并且是基于许多因素，如使用的特定变种的酶，清洁应用，清洁组合物的具体组成，以及液体或干(例如，粒状，条状)组合物是否是必需的，等等。术语"转葡糖苷酶"指游离或结合于1，4-a-D-葡聚糖的酶，其转移1，4-a-D-葡聚糖上的a-D-葡糖基到葡萄糖的一级羟基上。本文所述的转葡糖苷酶具有根据IUBMB酶命名法，描述为EC2.4.1.24的活性。本文所述的转葡糖苷酶的系统名称是1，4-a-D-葡聚糖:l，4-a-D-葡聚糖(D-葡萄糖)6-a-D-葡糖基转移酶。这种酶在某些公开中可以称为a-葡萄糖苷酶。术语"天然树胶多糖"指天然来源的非淀粉多糖，其能够在较低 浓度下造成溶液粘度大幅度增加。这种多糖是普遍用于食品工业，并在许 多食品(如调味料、奶油、奶制品、冰淇淋、木斯、奶昔、沙拉酱等)中， 作为增稠剂、胶凝剂、乳化剂和稳定剂使用。瓜尔豆胶(食品添加剂E412 ), 从豆科植物瓜尔豆灌木中提取的可食用增稠剂，和黄原胶(食品添加剂 E415)， 一种由葡萄糖或蔗糖(例如，野油菜黄单胞菌(AT"w,/^附0"fls omi/^^^))发酵产生的多糖，是天然树胶多糖的例子。其他天然树胶多 糖包括，但不限于琼脂(E406)、海藻酸(E400) 、 p-葡聚糖、角叉藻聚 糖(E407 )、糖胶树胶、达玛胶、胶凝糖(E418 )、葡甘露聚糖(E425 )、 阿拉伯树胶(E414 )、印度树胶、黄耆胶(E413 )、刺梧桐树胶(E416 )、 刺槐豆芙胶(E410 )、乳香胶、海藻酸钠(E401)、云杉胶和塔拉胶(E417 )。术语"非淀粉食品多糖降解酶，，指酶，其降解非淀粉食物的多糖。 典型的酶包括，但不限于，半纤维素酶、甘露聚糖酶、果胶酶、木聚糖酶、 P-半乳糖苷酶和a-半乳糖苷酶。
0621术语"工作pH值"是指洗涤剂使用过程中的pH值。例如，洗 衣用洗涤剂的工作pH值是当用洗衣机和/或手洗过程中用于洗涤织物时洗 涤剂的pH值。同样，餐具洗涤剂的工作pH值是在洗碗机中使用和/或在 手洗餐具时该洗涤剂的pH值。在一些实施方案中，浓缩或固体形式的洗 涤剂，在洗衣用洗涤剂的pH处于其工作pH之前，被稀释或溶解。
063术语"工作浓度"指洗衣用洗涤剂中酶在其使用过程中的浓度。 例如，洗衣用洗涤剂中酶的工作浓度是当洗衣用洗涤剂用来在洗衣机中和 /或手洗清洗织物时该酶的浓度。同样，在餐具洗涤剂中酶的工作浓度是用 于洗碗机中和/或手洗餐具过程中该餐具洗涤剂中酶的浓度。在一些实施方 案中，在洗涤剂中的酶处于其工作浓度之前，稀释或溶解浓缩或固体形式 的洗涤剂。
13发明详述
064本发明提供组合物，包括转葡糖苷酶和天然树胶多糖，其中，天然树胶多糖是转葡糖苷酶的底物。本发明还提供使用转葡糖苷酶降解天然树胶多糖的方法。在一些优选的实施方案中，发现该组合物和方法可用于清洁应用。事实上，本发明提供多种含有转葡糖苷酶的组合物，以及使用这些组合物的方法。
含转葡糖苷酶的组合物
065如上所述，本发明提供含有转葡糖苷酶的组合物。在一些实施方案中，该组合物包括至少一种转葡糖苷酶，和天然树胶多糖，其中天然树胶多糖是转葡糖苷酶的底物。在一些优选的实施方案中，该酶通常以约0.01ppm (百万分之 一，w/v )至约100ppm的浓度存在于组合物中(如约0.01ppm至约0.05ppm， 约0.05ppm到约O.lppm，约O.lppm至约0.5ppm，约0.5ppm到约lppm， 约lppm至约5ppm，约5ppm至约10ppm,约10ppm至约100ppm )。)。在一些实施方案中，并在本公开的实施例部分所进一步描述中， 转葡糖苷酶使用其自己的信号序列而得到分泌(即AGL1， AGL2或AGL3 信号序列)。)或里氏木霉纤维二糖水解酶I ( CBHI)那些。在一些实 施方案中，载体蛋白是截短型的里氏木霉CBH1蛋白，其包括CBH1核心 区域和部分CBH1连接区域。因此，在一些实施方案中，使用编码融合蛋白的核酸，该融合蛋白从M末端到g末端包含，信号序列，载体蛋白 和有效连接的主题酶。)或容易推导的，这样可以 很容易地设计编码待表达的转葡糖苷酶M酸序列的核酸。在一些实施方案中，其中里氏木霉宿主细胞用于表达转葡糖苷 酶，该细胞进行遗传修饰以减少细胞内源性的分泌蛋白表达。在一些实施 方案中，细胞包含一个或多个天然基因，特别是编码分泌蛋白质的基因， 其已4皮删除或失活。例如，在一些实施方案中， 一个或多个蛋白酶编码基 因(例如，天冬氨酰基编码基因；见，Berka等人，Gene 86: 153-162 [19卯； 和US Pat No. 6,509,171)或纤维素酶编码基因被册J除或失活。在一些实施 方案中，木霉属物种宿主细胞是含有灭活缺失cbhl， cbh2和egll和egl2 基因的里氏木霉宿主细胞，如WO 05/001036描述。在一些实施方案中，上述描述的核酸存在于木霉属物种宿主细胞的核基因组中，而在其他的实 施方案中，存在于在木霉属宿主细胞中复制的质粒中。; Fliess等人，Eur. J. Appl. Microbiol" Biotechnol. 17:314 [1983]; Bhikhabhai等人，J. Appl. Biochem.， 6:336 [1984；和Ellouz等人, Chromatogr.， 396:307 [1987])，包括使用高分辨率能力材料的离子交换 (Medve等人，J. Chromatogr. A 808: 153 [1998;疏水作用色i普(Tomaz 和Queiroz， J. Chromatogr. A 865: 123 [1999]; X5^目分配(Brumbauer等 人，Bios印aration 7:287 [1999)；乙醇沉淀；反相高效液相色语；在珪胶 或在阳离子交换树脂(如DEAE )上的层析，色i普聚焦，SDS-PAGE电泳； 硫酸铵沉淀；或凝胶过滤(例如，使用葡聚糖凝胶G-75)。在一些实施方 案中，使用未经从培养基其他成分中纯化的转葡糖苷酶。在这些实施方案 中的一些，培养基经简单地浓缩然后使用，无需从生长培养基的成分中进 一步纯化蛋白质，而在其他的实施方案中，其未经任何进一步的修饰或处 理而4吏用。[080本发明还提供了降解天然树胶多糖的方法。在一些实施方案中， 该方法包括在使得天然树胶多糖被降解的条件下将转葡糖苷酶与天然树 胶多糖结合(如混合)。适宜于转葡糖苷酶活性的条件(如适合于转葡糖 苷酶活性的温度范围，pH值范围，和其他反应成分)是本领域已知的。
清洁方法在一些优选的实施方案中，这些方法中所用的清洁组合物是织物 清洁组合物(例如，洗衣用洗涤剂)，表面清洁组合物，餐具清洁组合物， 自动洗碗^^洗涤剂组合物等。可用于本发明的清洁组合物的多种制剂，包 括，但不局限于在WO 0001826中非常详细描述的那些，其在此引入本文 作为参考的。在一些实施方案中，该所述清洁组合物是固体(例如，粉末或片 剂的形式)，液体或凝胶。在一些优选的实施方案中，组合物进一步包括 至少一种緩沖液(例如、碳酸钠或碳酸氢钠)、洗涤助剂、漂白剂、漂白
19活化剂、酶、酶稳定剂、增泡剂、抑制剂、防晦暗剂、抗腐蚀剂、污垢悬
浮剂、去污剂、杀菌剂、pH调整剂、非助洗剂威复源、螯合剂、有机或 无枳Jt真料、溶剂、增容剂、荧光增白剂、染料和/或香水。在一些实施方案 中，清洁组合物作为洗衣添加剂使用前与洗涤剂结合。在一些实施方案中，为清除其他污渍，清洁组合物进一步包含至 少一种非淀粉食物多糖降解酶(例如半纤维素酶、甘露聚糖酶、果胶酶、 木聚糖酶、或果胶酸裂合酶)，并可选地， 一种或更多种其他酶(例如， 蛋白酶，如枯草杆菌蛋白酶和/或SSI蛋白；脂肪酶，淀粉酶，纤维素酶， cutinase，脂肪酶，氧化还原酶等)。在一些实施方案中，酶稳定剂也可用于本文提供的该清洁组合 物。这种稳定剂包括，但不限于丙二醇(优选是大约1%至约10% )，甲 酸钠(优选是从大约0.1 %至约1% )和曱酸4丐(优选是从大约0.1 %至大 约1 % )。提供以下实施例以便为那些本领域普通技术人员提供如何制造 和使用本发明的完整的公开及描述，但并不意味着是对发明人所认为的本 发明范围的限制，也不意味着以下实验代表全部或仅完成的实验。为确保 有关数字(如数量，温度等)使用方面的准确性已经作出努力，但应考虑 一些试验误差和偏差。除另有说明外，部分为按重量计的部分，分子量为 重量平均分子量，温度是摄氏度，压力是或接近大气压。
实施例1
里氏木霉中黑曲霉转葡糖苷酶的表达图3表明，木霉属(Trip-TG)和曲霉(Mega-TG)产生的转葡糖 苷酶在50mM醋酸緩沖液(pH6.0)加AATCC高效液体洗涤剂中显示出 对于黄原胶有显著的还原糖活性。
实施例3转葡糖苷酶去除染色补丁上的污渍图5显示获自Trip-TG剂量反应微布样实验的结果。0.15% AATCC高效液体中，lppm Trip-TG清除了沙拉酱污渍。以上实施例表明，转葡糖苷酶有效地降解黄原胶，并从棉布样 去除某些污渍。这里已经广泛而概括性地描述了本发明。落在概括性公开内的 各个更窄的范围和下位的归类也形成本发明的一部分。这包括带有限制的 本发明的概括性描述或者从归类中排除任何主题的反对性限制，而无论排 除的材料是否在本文被特别引用。
权利要求
1.一种组合物，包括a)转葡糖苷酶；和b)天然树胶多糖；其中所述天然树胶多糖是所述转葡糖苷酶的底物。
2. 权利要求l的组合物，其中所述天然树胶多糖是黄原胶。
3. 权利要求1的组合物，其中所述转葡糖苷酶具有根据IUBMB命名 法定义为EC2.4.1.24的活性。
4. 权利要求l的组合物，其中所述转葡糖苷酶具有与曲霉属转葡糖苷 酶的氨基酸至少约90%同一性的#^酸序列。
5. 权利要求1的组合物，其中所述组合物进一步包括至少一种表面活 性剂。
6. 权利要求l的组合物，其中所述天然树胶多糖作为物体上的污渍存在。
7. 权利要求6的组合物，其中所述物体是织物。
8. —种方法，包括将转葡糖苷酶与天然树胶多糖相组合以降解所述天 然树胶多糖。
9. 权利要求8的方法，其中所述转葡糖苷酶具有根据IUBMB命名法 定义为EC2.4.1.24的活性。
10. 权利要求8的方法，其中所述天然树胶多糖是黄原胶。
11. 一种清洁方法，包括a) 将天然树胶多糖弄脏的物体与包含转葡糖苷酶的清洁组合物接触；和b) 在足以有效降解所述天然树胶多糖条件下保持所述物体和清洁组 合物，从而清洁所述物体。
12. 权利要求ll的清洁方法，其中所述物体是由含天然树胶多糖的食 物弄脏的。
13. 权利要求ll的清洁方法，其中所述天然树胶多糖包括黄原胶。
14. ;t又利要求ll的清洁方法，其中所述物体选自织物和硬表面。
15. 权利要求ll的清洁方法，其中所述转葡糖苷酶具有与曲霉属转葡 糖苷酶的氩基酸至少约90%同一性的M酸序列。
16. 权利要求ll的清洁方法，其中所述清洁組合物进一步包括至少一 种表面活性剂。
17. 权利要求11的清洁方法，其中所述清洁组合物还包括至少一种酶， 其选自蛋白酶，淀粉酶，纤维素酶，脂肪酶，cutinases,甘露聚糖酶，果 胶酶，果胶酸裂合酶和氧化还原酶，以降解其他污渍成分。
18. 权利要求11的清洁方法，其中所述清洁组合物的pH为约pH5.0 至约pH11.5。
19. 权利要求11的清洁方法，其中所述清洁组合物包括浓度范围在大 约0.01ppm至大约100ppm的所述酶。
全文摘要
本发明提供包含转葡糖苷酶和天然树胶多糖的组合物，其中天然树胶多糖是该转葡糖苷酶的底物。本发明还提供用转葡糖苷酶降解天然树胶多糖的方法。在一些优选的实施方案中，发现该组合物和方法可用于清洁应用中。
文档编号C11D3/22GK101641433SQ200880009337
公开日2010年2月3日 申请日期2008年3月21日 优先权日2007年3月22日
发明者A·J·保罗斯, H·C·麦克唐纳, J·K·舍蒂 申请人:丹尼斯科美国公司