述胶原蛋白溶液中的含量为2~IOwt %。在本发明中，通 过胶原蛋白和碱性成纤维细胞生长因子对R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜进行改 性处理，增强了复合纤维膜对创面细胞生长的促进，从而使本发明提供的胶原膜贴表现出 较高的创面愈合率。
[0034] 本发明通过采用胶原蛋白和碱性成纤维细胞生长因子对R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙 烯醇复合纤维膜进行改性处理，增强了复合纤维膜对创面细胞生长的促进，从而使本发明 提供的胶原膜贴表现出较高的创面愈合率。实验结果表明，将本发明提供的胶原膜贴覆盖 在创面1周后，创面的愈合率大于22% ;覆盖创面2周后，创面的愈合率大于83% ;覆盖创 面4周后，创面的愈合率大于99. 9%。
[0035] 本发明提供了一种胶原膜贴的制备方法，包括以下步骤：
[0036] a)、将R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜浸渍在含有碱性成纤维细胞生长 因子的胶原蛋白溶液中，得到浸渍有碱性成纤维细胞生长因子和胶原蛋白溶液的复合纤维 膜；
[0037] b)、步骤a)得到的复合纤维膜依次经过干燥和交联固化，得到胶原膜贴。
[0038] 在本发明提供的制备方法中，首先将RGD重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜浸 渍在含有碱性成纤维细胞生长因子的胶原蛋白溶液中。其中，所述RGD重组蛛丝蛋白-聚 乙烯醇复合纤维膜的孔隙率优选为75~90%，更优选为80~85%，最优选为80. 72~ 84. 89% ;所述R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜的吸湿率优选为3~5g/g，更优选 为3. 5~4. 5g/g，最优选为3. 981~4. 337g/g。所述RGD重组蛛丝蛋白-聚乙稀醇复合纤 维膜的溶胀率优选为2~3g/g，更优选为2. 2~2. 6g/g，最优选为2. 21~2. 526g/g。所 述R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜的渗出液在纤维间和纤维内的分布比值优选为 5~7g/g，更优选为5. 5~6. 5g/g，最优选为5. 647~6. 023g/g。
[0039] 在本发明中，对所述R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜的来源没有特别限 定，可以市售的，也可以按照以下方法制备得到：
[0040] I)、RGD重组蛛丝蛋白、聚乙烯醇和溶剂混合，得到纺丝液；
[0041] 2)、所述纺丝液进行纺丝，得到R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜。
[0042] 在本发明提供的RGD重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜的制备方法中，首先将 R⑶重组蛛丝蛋白、聚乙烯醇和溶剂混合。所述溶剂优选为甲酸。待R⑶重组蛛丝蛋白、聚 乙烯醇和溶剂混合均匀后，得到纺丝液。所述纺丝液中R⑶重组蛛丝蛋白的含量优选为5~ 15wt% ;所述纺丝液中聚乙稀醇的含量优选为5~15wt%。
[0043] 然后，将制得的纺丝液进行纺丝。所述纺丝的方式优选为静电纺丝。所述静电纺丝 采用的注射器规格优选为2mL注射器；所述静电纺丝的电压强度优选为60~80kV，更优选 为80~85kV ;所述静电纺丝的纺丝液流量优选为2~10mL/h，更优选为5~6mL/h ;所述 静电纺丝的注射器针头到纺丝收集屏表面的距离优选为10~30cm，更优选为20~25cm。 所述静电纺丝的温度优选为40~55°C，更优选为45~50°C。纺丝结束后，得到R⑶重组 蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜。
[0044] 在本发明中，所述含有碱性成纤维细胞生长因子的胶原蛋白溶液是由胶原蛋白、 碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和水混合得到的溶液。所述碱性成纤维细胞生长因子在 所述胶原蛋白溶液中的含量优选为100~2000IU/mL，更优选为500~1000IU/mL ;所述胶 原蛋白在所述胶原蛋白溶液中的含量优选为1~20wt%，更优选为2~10wt%。
[0045] 在本发明中，所述R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜在所述含有碱性成纤 维细胞生长因子的胶原蛋白溶液中浸渍的温度优选为30~40°C，更优选为37~40°C ;所 述浸渍的时间优选为20~60min，更优选为30~40min。
[0046] 浸渍完毕后，得到浸渍有碱性成纤维细胞生长因子和胶原蛋白溶液的复合纤维 膜，所述复合纤维膜进行干燥。所述干燥的方式优选为自然风干；所述干燥的时间优选为 1~12h，更优选为2~5h。在本发明中，浸渍有碱性成纤维细胞生长因子和胶原蛋白溶液 的复合纤维膜优选在模具中进行干燥，从而使干燥后的复合纤维膜具有特定形状和尺寸。
[0047] 干燥完毕后，干燥后的复合纤维膜进行交联固化。所述交联固化的过程具体为：干 燥后的所述复合纤维膜在交联剂溶液中进行交联固化。其中，所述交联剂优选为1-(3-二 甲氨基丙基）-3_乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC · HC1);所述交联剂溶液中交联剂的含量浓度 优选为〇· Ol~〇· 〇5mol/L，更优选为0· 03mol/L ;所述交联固化的时间优选为5~12h，更 优选为8~9h。交联固化结束后，得到胶原膜贴。
[0048] 制得胶原膜贴后，将胶原膜贴放入无菌包装袋中，灭菌，保存。
[0049] 本发明提供的制备方法通过采用胶原蛋白和碱性成纤维细胞生长因子对RGD重 组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜进行改性处理，增强了复合纤维膜对创面细胞生长的促 进，从而使本发明制得的胶原膜贴表现出较高的创面愈合率。实验结果表明，将本发明提供 的胶原膜贴覆盖在创面1周后，创面的愈合率大于22% ;覆盖创面2周后，创面的愈合率大 于83% ;覆盖创面4周后，创面的愈合率大于99. 9%。
[0050] 为更清楚起见，下面通过以下实施例进行详细说明。
[0051] 实施例1
[0052] 1)制备RGD重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜
[0053] 将RGD重组蛛丝蛋白（暨南大学提供）和聚乙烯醇（平均聚合度为2400~2500) 溶于98wt%的甲酸溶液中，配制成含有5wt% RGD重组蛛丝蛋白和5wt%聚乙烯醇的纺丝 液。
[0054] 把纺丝液吸入2mL规格的注射器中，利用静电纺织技术，在SOkV(电压强度）、 20cm(注射器针头距收集屏表面）、5ml/h (纺丝液流量）、45°C条件下，将纺丝液制备成RGD 重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜。
[0055] 对上述制得的R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜的物化参数进行检测，具 体如下：
[0056] 孔隙率的测定：
[0057] 在恒温条件下，往5ml比重瓶中装满无水乙醇，称重（Wl)，将复合纤维膜称重 (Ws)。并将膜置于比重瓶中，静置15min，利用真空栗进行脱气，直至无气泡逸出，使乙醇充 分扩散到膜的孔隙中，加满乙醇，称重（W2)。把浸满乙醇的样品取出，对剩余的乙醇与比重 瓶进行称重（W3)。计数公式：孔隙率=(W2-W3-WsV(Wl-W3)，得出复合纤维膜的孔隙率为 82. 65% ；
[0058] 吸湿性测定：
[0059] A溶液的配制：16. 6gNaCl，0· 554gCaCl2，用CldH2O在容量瓶中定容至200ml，使用时 将其稀释10倍。
[0060] 在恒温条件下37°C下，测定复合纤维膜的干重（W)，称取40倍膜重量的A溶液，将 膜置于A溶液中，37°C下放置30min，将膜取出垂直悬挂lmin，测定湿重（Wl)，计算公式：单 位重量膜的吸湿性为（11-1)/1(单位$/^)，测定本复合纤维膜的吸湿率为3.9818/^;
[0061] 渗出液在纤维间和纤维内的分布比和溶胀率的测定：
[0062] A溶液的配制：16. 6gNaCl，0· 554gCaCl2，用CldH2O在容量瓶中定容至200ml，使用时 将其稀释10倍。
[0063] 在恒温条件下37°C下，测定复合纤维膜的干重（W)，称取40倍膜重量的A溶液，用 烧杯称取40倍膜重的A溶液，把膜分成均等两份，置于A溶液中，37°C下放置30min，将膜取 出垂直悬挂30s，测定湿重（Wl);放在一只50ml离心管里，离心管底部铺有滤纸，以便吸收 从纤维上离心脱去的水份，400g，20°C，离心20min，测定脱水后膜的重量（W2)，把离心脱水 后的膜在70°C下干燥至恒重，称量膜干重（W3)。计算公式，渗出液在纤维间和纤维内的分 布比=(W1-W2V(W2-W3)，得出分布比为5.647g/g ;膜的溶胀率=(Wl-W2)/W3,得出膜的溶 胀率为2. 21g/g。
[0064] 对上述制得的R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜进行安全性测试，具体过 程为：
[0065] 以大鼠为测试对象，在其背部脱毛，面积为3cm2，将制得的R⑶重组蛛丝蛋白-聚 乙烯醇复合纤维膜取6cm 2浸入2ml生理盐水中，37°C恒温放置24h，以5wt%的甲醛溶液为 阳性对照组，生理盐水为阴性对照组，R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜浸提液为实 验组，将各实验组的滤纸斑贴，用20mmX 20mm的4层纱布进行覆盖，包扎固定。4h后，除去 斑贴物，标记斑贴部位，用温水或70%乙醇清洁后吸干。在移去斑贴物后24h、48h和72h持 续观察得出如下结论表1 :
[0066] 表1R⑶重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜对皮肤的刺激性计分结果
[0068] 通过表1可以看出，本实施例制得的RGD重组蛛丝蛋白-聚乙烯醇复合纤维膜对 皮肤无刺激。
[0069] 2)配制bFGF-胶原蛋白溶液
[0070