本发明属于环境修复技术领域，特别涉及一种利用微生物——白腐真菌粗酶液降解双酚af的方法。
背景技术：
白腐真菌作为一种能够降解多种难降解化合物的微生物，在生物制浆、废水处理、环境修复等方面有着广泛的应用。
氟弹性体由于其多功能性被广泛应用，但一般存在着交联差的缺点。双酚af（六氟双酚a，c15h10f6o2，bpaf）是一种双酚a的氟化衍生物，被广泛的用作氟弹性体的交联剂和硫化剂，以增强氟弹性体的性能。bpaf也常被用作多种聚合物如聚酰亚胺、聚酰胺、聚酯、聚碳及其它特殊聚合物的改型单体，其做为单体常用于电子设备、塑料光纤灯的生产。双酚af和其它双酚类物质如双酚a一样是一种典型的内分泌干扰物，已有研究结果表明，一定量的bpaf对斑马鱼的致畸率为100%。不同于双酚a的是，氟代有机物往往更难分解，在环境中具有更高的稳定性和持久性。作为新兴的环境污染物，bpaf已在各种环境基质中被检出，它通过多种暴露途径进入生物体内，对生态与人类健康存在潜在风险。近年来，bpaf的潜在毒性和内分泌干扰效应已成为环境领域研究的重点，如何去除环境中的双酚af也成为热点问题。目前为止，对双酚af的降解报道较少，已有的二氧化钛光催化降解双酚af法是利用二氧化钛溶液对双酚af进行光催化降解，但该方法降解时间长，处理量较低，受限制较多，操作步骤复杂且成本较高。
基于白腐真菌能够主要依赖于胞外酶来降解污染物的原理，提出了一种运用微生物——白腐真菌分解双酚af的新方法。白腐真菌生长繁殖快、培养条件温和、操作较为简便。白腐真菌廉价易得且绿色安全，其分泌的胞外酶相对含量较丰富。酶促反应具有催化特效，绿色安全等特点，而且作用底物广泛，可以去除低浓度物质，处理物质浓度范围也较为广泛，运用白腐真菌分解双酚af可以大大提高降解效果，降低降解成本，其在催化去除含双酚af类物质的废水处理技术上具有突出优势，能达到有效地去除环境污染物修复环境的目的。
技术实现要素：
本发明的目的是针对在现有技术对双酚af降解过程中存在的工作量大、成本高、处理量低、步骤繁琐等问题，提供一种利用白腐真菌粗酶液降解双酚af的方法。
具体步骤为：
(1)白腐真菌的培养
接种白腐真菌冻干粉于土豆葡萄糖琼脂斜面培养基，在35~39℃培养3~7d后，在无菌条件下于2~6℃保存，作为活化后的菌种孢子待用，接种时用无菌水将待用的活化后的菌种孢子冲下，接种至液体土豆葡萄糖培养基，置于34~39℃、110~140r/min条件下振荡培养4~6d，接种时控制od值为1.5，得到接种有白腐真菌的培养基。
(2)白腐真菌胞外粗酶液的制备
将步骤(1)得到的接种有白腐真菌的培养基移至离心杯，以2500~3500r/min的速度离心5~15min，得到上清液和菌丝体，去除下层菌丝体，将上清液在3~4℃下以8000~9000r/min的速度离心6~20min，上清液的离心操作次数为1~2次，离心操作后的上清液经0.45μm滤膜过滤得到白腐真菌胞外粗酶液，0~6℃保存备用。
(3)双酚af的降解
将0~2ml浓度为1~2mmol/l的mnso4溶液、0~0.3ml体积百分比浓度为20%~40%的h2o2、1.0~1.5mlph值为4.5的酒石酸-酒石酸钠缓冲溶液、6~8ml步骤(2)制得的白腐真菌胞外粗酶液和4~5μl浓度为10g/l的双酚af-甲醇溶液混合，建立总体积为10ml的胞外酶液反应体系混合液，经2~5d，即实现双酚af的降解。
本发明方法利用白腐真菌依靠胞外酶降解环境污染物的特点，设计了一种利用白腐真菌粗酶液降解双酚af的方法，所选取的处理材料仅为微生物，生长繁殖快、方便取用、成本低廉，生物酶具有高效催化能力。此外，操作较为简便，而且成本比较低，处理量较大。
具体实施方式
实施例：
为了使本发明实现的技术手段、达成目的与作用更加清楚及易于了解，下面结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，所列实施例仅在于说明本发明而不限制本发明。
(1)白腐真菌的培养
接种白腐真菌冻干粉于土豆葡萄糖琼脂斜面培养基，在37℃培养5d后，在无菌条件下于4℃保存，作为活化后的菌种孢子待用，接种时用无菌水将待用的活化后的菌种孢子冲下，接种至液体土豆葡萄糖培养基，置于37℃、130r/min条件下振荡培养5d，接种时控制od值为1.5，得到接种有白腐真菌的培养基。
(2)白腐真菌胞外粗酶液的制备
将步骤(1)得到的接种有白腐真菌的培养基移至离心杯，以3000r/min的速度离心10min，得到上清液和菌丝体，去除下层菌丝体，将上清液在4℃下以9000r/min的速度离心10min，离心操作后的上清液经0.45μm滤膜过滤得到白腐真菌胞外粗酶液，4℃保存备用。
(3)双酚af的降解
将1ml浓度为1mmol/l的mnso4溶液、0.1ml体积百分比浓度为30%的h2o2、1.4mlph值为4.5的酒石酸-酒石酸钠缓冲溶液、7.5ml步骤(2)制得的白腐真菌胞外粗酶液和5μl浓度为10g/l的双酚af-甲醇溶液混合，建立胞外酶液反应体系混合液，经3d，即实现双酚af的降解。
经测试，本实施例中双酚af的降解率为84.4%。