一种具有手性的空壳‑卫星状结构纳米光敏剂的制备方法与流程

文档序号:12437877阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种具有手性的空壳-卫星状结构纳米光敏剂的制备方法,其特征在于包括金银纳米粒子的合成,银核-金卫星状结构的组装,空壳-卫星状结构的制备及修饰D-半胱氨酸的空壳-卫星状结构的制备,修饰D-半胱氨酸的空壳-卫星状结构纳米光敏剂产生单线态氧能力的测定;

步骤如下:

(1)15nm金纳米粒子的合成:用柠檬酸钠还原合成法合成;在洁净的250mL的锥形瓶中加195mL超纯水,加5mL质量浓度0.4%的氯金酸溶液,搅拌并加热至沸腾,7-8min 后加4.8mL质量浓度1%的柠檬酸三钠溶液,至溶液从无色变为酒红色后,停止加热,继续搅拌,直至冷却至室温,即得到粒径为15nm的金纳米粒子;

(2)18-20nm银纳米粒子的合成:取20mL超纯水与5mL质量浓度为1%的聚乙烯吡咯烷酮混合于锥形瓶中,再加0.6mL 0.1mol/L的硼氢化钠水溶液和0.6mL的质量分数为1%的柠檬酸三钠,并进行冰浴保护;然后,将5mL质量浓度为1%的聚乙烯吡咯烷酮水溶液和5mL质量浓度为0.17% 的硝酸银水溶液同时以30mL/h 的速度用注射泵加入到上述溶液中,边搅拌边加入,待加入结束后,放置于80℃水浴2h即得到黄色溶液,即18-20nm的银纳米粒子;

(3)银核-金卫星状结构的组装:

a、将步骤(1)制备所得的1mL的金纳米粒子溶液以10000rpm离心10min,除去上清,沉淀重悬于100μL pH=7.5、10mM的磷酸盐缓冲液中,得到金纳米粒子PB溶液,备用;

b、将步骤(2)制备所得1mL的银纳米粒子溶液以7500rpm离心15min,除去上清,沉淀重悬于200μL pH=7.5、10mM的Tris-HCl缓冲液中,得到银纳米粒子Tris-HCl溶液,备用;

c、取步骤a制备的金纳米粒子PB溶液100μL,向其中加入2μL、10μM的DNA1溶液混合均匀;取步骤b制备的200μL银纳米粒子Tris-HCl溶液,向其中加入2μL、100μM的DNA2溶液混合均匀,37℃摇晃反应12h,分别得到Au-DNA1复合体及Ag-DNA2复合体;

d、将步骤c所得Au-DNA1复合体以10000rpm离心10min,Ag-DNA2复合体以7500rpm离心15min,除去上清即多余的未偶联的DNA,然后将两者沉淀混合于100μL pH7.5 10mM的Tris-HCl中,摇晃使之充分杂交,反应12h,即得到银核-金卫星状结构组装体;

(4)空壳-卫星状结构的制备:在步骤(3)中制得的100μL银核-金卫星状结构组装体溶液中,加入1μL、10mM的HAuCl4溶液,充分混合,使银与HAuCl4发生Galvanic反应,充分震荡5s,使之成为空壳-卫星状结构纳米组装体;8000rpm离心15min,重悬于100μL pH=9 10mM的Tris-HCl溶液中,即得到空壳-卫星状结构纳米组装体;

(5)修饰有D-半胱氨酸的空壳-卫星状结构的制备:在100μL步骤(4)制备的重悬于pH为9的Tris-HCl溶液中的空壳-卫星状结构纳米组装体中,加入10μL 300μM的D-半胱氨酸,充分混合震荡15min,之后7500rpm离心15min,即得到手性可调节的空壳-卫星状结构纳米组装体;通过圆二色光谱仪测得其CD值,并通过透射电镜表征其空壳-卫星状结构;

(6)修饰D-半胱氨酸的空壳-卫星状结构纳米光敏剂产生单线态氧能力的测定:将步骤(5)中得到的材料离心并重悬于同样体积的PBS溶液中,与单线态氧荧光探针混合,并置于532nm右圆偏振光下光照20min,之后用荧光光谱仪检测其在504nm激发下的发射波谱。

2.根据权利要求1所述具有手性的空壳-卫星状结构纳米光敏剂的制备方法,其特征在于:所述DNA序列为DNA1:5’-AAAAAGCAGT TGATCCTTTG GAT-3’; DNA2:5’-AAAAAATCCA AAGGATCAAC TGC-3’。

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