结合趋化因子受体的杂环化合物的制作方法

专利名称：结合趋化因子受体的杂环化合物的制作方法
技术领域：
本发明一般涉及新颖化合物、药物组合物及其用途。本发明更具体的涉及与趋化因子受体(包括CXCR4和CCR5)结合的新颖杂环化合物，并显示抵抗靶细胞被人免疫缺陷病毒(HIV)感染的保护作用。
背景技术：
已描述了约40种人趋化因子，其(至少部分)通过调节一套复杂的和交错的生物活性而发挥功能，这些功能对淋巴细胞的活动和白血球的组织渗入和溢出(对刺激物的应答)很重要(见，如P.Ponath，Exp.Opin.Invest.Drugs，71-18，1998；Baggiolini，M.，Nature 392-565-568(1998；Locati等人，Annu.Rev.Med.50425-40(1999))。这些趋化细胞因子或趋化因子构成一类蛋白质，约8-10kDa大小。趋化因子看似具有共同的结构基序，由4个参与维持三级结构的保守半胱氨酸构成。有两种主要的趋化因子亚类“CC”或β-趋化因子和“CXC”或α-趋化因子。按构成受体天然配体的趋化因子将这些趋化因子的受体分类。β-趋化因子的受体命名为“CCR”；而α-趋化因子的受体命名为“CXCR”。
据信趋化因子是引发和维持炎症的主要介体(参见，Humana Press出版的“疾病中的趋化因子”(1999)，C.Herbert编辑；Murdoch等人，Blood 953032-3043(2000))。具体地说，已发现趋化因子在调节内皮细胞功能中有重要的作用，包括增殖、迁移和血管生成中的分化和受伤后的内皮再生(Gupta等人，Biolog.Chem.，74282-4287，1998；Volin等人，Biochem.BIophys Res.Commun.24246-53(1998))。已知在人免疫缺陷病毒(HIV)感染的病原学中涉及两种特殊的趋化因子。
在多数情况下，HIV最初通过其gp120包膜蛋白结合到靶细胞的CD4受体上。表现为在gp120中发生了构象改变，导致其随后结合于趋化因子受体(如CCR-5)(Wyatt等人，Science，2801884-1888(1998)；Rizzuto等人，Science 2801949-1953(1998)；Berger等人，Annu.Rev.Immunol.17657-700(1999))。感染后产生的HIV-1分离物结合到CXCR-4趋化因子受体上。
HIV和CD4最初的结合后，接着由趋化因子受体家族成员调节的病毒-细胞就发生融合，不同的成员充当导致HIV-1的巨噬细胞向性(M-向性)和T-细胞向性(T-向性)分离物的融合余因子(Carroll等人，Science，276273-276，1997；Feng等人，Science 272872-877(1996)；Bleul等人，Nature 382829-833(1996)；Oberlin等人，Nature 382833-835(1996)；Cocchi等人，Science 2701811-1815(1995)；Dragic等人，Nature 381667-673(1996)；Deng等人，Nature 381661-666(1996)；Alkhatib等人，Science 2721955-1958(1996))。在患者的感染过程中，表现为大部分HIV颗粒从M-向性转变为更具攻击性的T-向性表型(Blaak，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.971269-1274(200)；Miedema等人，Immune.Rev.，14035(1994)；Simmonds等人，J.Virol.708355-8360(1996)；Tersmette等人，J.Virol.622026-2032(1988)；Connor，R.I.，Ho.D.D.，J.Viol.684400-4408(1994)；Schuitemaker等人，J.Viol.661354-1360(1992))。M-向性病毒表型与结合到CCR-5受体后病毒进入细胞的能力有关，而T-向性病毒表型与病毒结合到CXCR-4受体和与其膜融合后病毒进入细胞的能力有关。疗程过程表明具有CCR-5遗传突变的患者能抵抗HIV的感染或少受感染(Liu等人，Cell 86367-377(1996)；Samson等人，Nature 382722-725(1996)；Michael等人，Nature Med.3338-340(1997)；Michael等人，J.Viol.726040-6047(1998)；Obrein等人，Lancet 3491219(1997)；Zhang等人，AIDS Res.Hum.Retroviruses 131357-1366(1997)；Rana等人，J.Virol.713219-3227(1997)；Theodorou等人，Lancet3491219-1220(1997))。尽管已报道的HIV介导进入细胞的趋化因子数量很多，仅CCR5和CXCR4表现为被各种主要的临床HIV-1株使用的生理相关的共受体(Zhang等人，J.Virol.729307-9312(1998)；Zhang等人，Virol.733443-3448(1999)；Simmonds等人，J.Virol.728453-8457(1998))。利用CXCR-4的T-向性病毒的融合和进入，被天然CXC-趋化因子基质细胞衍生的因子-1抑制，利用CCR5的M-向性的病毒的融合和进入被天然CC-趋化因子抑制(即调节正常表达和分泌的T-细胞的激活(RANTES)和巨噬细胞炎症蛋白(MIP-1α和β))。
除了作为HIV进入的辅助因子外，最近有人提出病毒的gp120和CXCR4的直接相互作用，可能造成CD8+T-细胞的细胞程序死亡和AIDS相关的痴呆(通过诱导神经元细胞的细胞程序死亡)(Hesselgesser等人，Curr.Biol.8595-598(1998)；Hesselgesser，等人，Curr.Biol.7112-121(1997)；Hesselgesser等人，“大脑中的趋化因子和趋化因子受体”，Humana Press(1999)出版的“疾病中的趋化因子”，C.Herbert编辑；Herbein等人，Nature 395189-194(1998)Buttini等人，Nature Med.4441-446(1998)；Ohagen等人，J.Virol.73897-906(1999)；Biard-Piechaczyk等人，Virology268329-344(2000)；Sanders等人，J.Neuroscience Res.59671-679(2000)；Bajetto等人，Neurochem.732348-2357(1999)；Zheng等人，J.Virol.738256-8267(1999))。
然而，趋化因子受体与它们天然配体的结合比仅作为HIV感染的中介体起着更大的进化的或中心的作用。天然配体前-B细胞生长刺激因子/基质细胞衍生的因子(PBSF/SDF-1)与CXCR-4趋化因子受体的结合，提供了重要的信号传导机制CXCR4或SDF-1剔除表现出小脑、心脏和肠胃道异常的小鼠并发生胎死(Zou等人，Nature 393591-594(1998)；Tachibana等人，Nature 393591-594(1998)；Nagasawa等人，Nature 382635-638(1996))。CXCR-4缺陷型小鼠还表现出造血缺陷(Nagasawa等人，Nature 382635-638(1996))；表达CXCR4的白细胞和造血祖细胞向SDF-1的迁移表现出对B-细胞系的维持和CD34+祖细胞在骨髓中定位非常重要(Bleul等人，J.Exp.Med.187753-762(1998)；Viardot等人，Ann.Hematol.77195-197(1998)；Auiti等人，J.Exp.Med.185111-120(1997)；Peled等人，Science 283845-848(1999)；Qing等人，Immunity 10463-471(1999)；Lataillade等人，Blood 95756-768(1999)；Ishii等人，J.Immunol.1633612-3620(1999)；Maekawa等人，Internal Medicine 3990-100(2000)；Fedyk等人，Leukocyte Biol.66667-673(1999)；Peled等人，Blood 953289-3296(2000))。
由SDF-1在与CXCR4结合时提供的信号，在肿瘤细胞的增生和调节与肿瘤生长相关的血管生成中也可能起重要的作用(参见，Humana Press(1999)出版的“趋化因子和癌”，B.J.Rollins编辑；Arenburg等人，J.Leukocyte Biol.62554-562(1997)；Moore等人，J.Invest.Med.46113-120(1998)；Moore等人，Trends Cardiovasc.Med.51-58(1998)；Seghal等人，J.Surg.Oncol.6999-104(1998))；已知的血管生长因子VEG-F和bFGF，内皮细胞中CXCR4的上调水平，和SDF-1能引发体内的新血管生成(Salcedo等人，Am.J.Pathol.1541125-1135(1999))；表达CXCR4的白血病细胞迁移并吸附于表达SDF-1的淋巴结和骨髓基质细胞(Burger等人，Blood943658-3667(1999)；Arai等人，Eur.J.Haematol.64323-332(2000)；Bradstock等人，Leukemia 14882-888(2000)；Burger等人，Blood 962655-2663(2000)；Morle，R.等人，Brit.J.Haematol.110561-582(2000))。
SDF-1与CXCR4的结合已涉及到动脉粥样硬化(Abi-Younes等人，Circ.Res.86131-138(2000))、肾异体移植排斥(Eitner等人，Transplantation 661551-1557(1998))、哮喘和过敏性呼吸道炎症(Yssel等人，Clinical and Experimenatl Allergy28104-109(1998)；等人，J.Immuno.1645935-5943(2000)；Gonzalo等人，J.Immunol.165499-508(2000))、阿尔茨海默病(Xia等人，J.Neurovirology 532-41(1999))和关节炎(Nanki等人，J.Immunol.1645010-5014(2000))的发病机理。
为了更好地了解趋化因子和它们受体间的关系，最近通过用单克隆抗体或小分子进行了实验，来阻断HIV通过CXCR4趋化因子受体的融合、进入和复制，这可能提出了一种有用的治疗性策略。(Schols等人，J.Exp.Med.1861383-1388(1997)；Schols等人，Antiviral Research 35147-156(1997)；Bridger等人，Med.Chem.423971-3981(1999)；Bridger等人，“作为HIV抑制剂的二环酰胺(bicyclam)衍生物”，抗病毒药物的设计发展，卷3，第161-229页，JAI press出版(1999)，E.DeClercq编辑)。小分子(如二环酰胺(bicyclam))表现为对CXCR-4而非CCR-5的特异性结合(Donzella等人，Nature Medicine，472-77(1998))。这些实验证明干扰体外HIV进入和膜融合到靶细胞。最近，二环酰胺还表现出抑制利用CXCR4进入的猫免疫缺陷病毒(FIV)的融合和复制(Egberink等人，J.Virol.736346-6352(1999))。
其它试验显示二环酰胺剂量-依赖性地抑制125I标记的SDF-1与CXCR4的结合和响应SDF-1的信号转导(由细胞内钙的增加显示)。因此，二环酰胺还具有作为基质衍生的因子或SDF-1α(CXCR4的天然趋化因子)结合而产生的信号转导的拮抗剂的功能。二环酰胺还抑制未受HIV感染的细胞内的HIV gp120(包膜)-诱导的细胞程序死亡(Blanco等人，Antimmicrobial Agents and Chemother，4451-56(2000))。
美国专利No.5,583,131、No.5,698,546、No.5,817,807、No.5,021,409和No.6,001,826(本文将它们全部纳入作为参考)，公开了在体外测试中具有抗HIV-1和HIV-2活性的环状化合物。随后在已出版的PCT申请PCT/CA99/00619(WO 00/029870)(本文将其纳入作为参考)中发现并进一步公开这些化合物以及其它结构较不复杂的化合物通过与在免疫系统某些细胞表面表达的趋化因子受体CXCR4和/或CCR5的结合，显示抗HIV活性。这种竞争性结合保护这些靶细胞不受利用CXCR-4受体侵入的HIV感染。另外，这些化合物拮抗CXCR4的天然配体(即趋化因子基质细胞衍生的因子1α(SDF-1))的结合、信号传导和趋化作用，而且通过体外与CCR5受体的结合保护靶细胞免受HIV感染。
另外，已出版的PCT申请PCT/CA 00/00104(WO 00/45814)(本文将其纳入作为参考)，公开了在上述文献中所描述的环状聚胺抗病毒药具有增加白细胞产生的作用并表现出抗病毒特性。因此，这些药物可用于控制化疗的副作用、提高骨髓移植的成功率、加速伤口愈合和烧伤的治疗、以及在白血病中抵抗细菌感染。
已出版的PCT/CA 00/00321(WO 00/56729(本文将其纳入作为参考)，公开了其它杂环化合物，它们通过与在免疫系统某些细胞表面表达的趋化因子受体CXCR4和CCR5的结合，显示抗HIV活性。这种竞争性结合保护这些靶细胞不受利用CXCR-4或CCR5受体侵入的HIV感染。另外，这些化合物拮抗CXCR4的天然配体(即趋化因子基质细胞衍生的因子1α(SDF-1))和/或CCR5的天然配体(趋化因子RANTES)的结合、信号传导和趋化作用。
上述文献的引证并不作为对上文所述的为相关的已有领域的认可。所陈述的这些文献的日期或表述都是基于本申请人所能获得的信息，并不构成对这些文献的日期或内容正确性的任何承认。另外本文将本申请所引用的所有文献都全部纳入作为参考。
本发明公开了以和先前公开的大环化合物类似的方式，通过与趋化因子受体CXCR4或CCR-5结合，显示对靶细胞免受HIV感染的保护作用的新颖化合物，以及可用于其它上述化合物所针对的病症的化合物。
发明概述本发明提供了新颖化合物，它们与趋化因子受体结合并干涉其天然配体与其的结合，而且当将这些化合物用作药剂时，显示保护靶细胞免受HIV感染的作用。本发明的化合物可以用作趋化因子受体拮抗剂或激动剂的，且这些化合物表现出抑制趋化因子与其受体结合的能力。
因此，本发明提供具有分子式1的化合物及其药学上可接受的盐和保护的形式V-CR2-Ar1-CR2NR-(CR2)x-Ar2(1)其中V是9-24元取代的杂环，且其含有2-4个任选地被取代的、彼此被2个或多个任选地被取代的碳原子隔开的胺氮(amine nitrogen)原子，且V可任选地包括稠合芳环或杂芳环；且其中(a)所述的杂环含有至少一个O或S，且所述的O或S与任何相邻的杂原子距离至少2个碳原子，且所述的S任选地被氧化或(b)所述的环中至少一个碳原子被吸电子取代基取代，或(c)(a)和(b)二者；且其中各R分别是H或含有1-6C的直链、支链或环烷基；x是0-4；Ar1是未取代的或取代的芳族或杂芳族部分；和Ar2是未取代的或取代的芳族或杂环基团。
本发明的其它方面涉及含有治疗有效量的式1化合物的药物组合物，以及治疗人或其它哺乳动物身体疾病的方法，这种方法包括施用含有治疗有效量的式1的化合物的药物组合物或兽医学组合物。另一方面，本发明涉及通过让趋化因子受体接触有效量式1的化合物来阻断或干扰趋化因子受体与其天然配体结合的方法。
另一方面，本发明涉及式1的化合物用于制备一种药物的用途，该药剂用于治疗疾病，其中有利地阻断或干扰趋化因子受体与其天然配体结合，还可用于保护含有趋化因子受体的靶细胞，阻断或干扰导致疾病或病理的趋化因子受体与病原体的结合。本发明还涉及上述治疗的方法。
发明详述本发明针对式1的化合物，它们能用作调节趋化因子受体活性的药剂。这些趋化因子受体包括(但不限制于)CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8和CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR-4和CXCR5。
式1的化合物显示对靶细胞具有保护其免受HIV感染的作用，作用方式是通过与趋化因子受体特异性结合，从而影响天然配体或趋化因子与受体如CXCR4和/或CCR5的结合。式1的化合物也可以用作药剂，影响趋化因子受体，如CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8和CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR-4和CXCR5，其中所述趋化因子受体作为重要的调节剂已与许多人类炎症和免疫调节疾病联系起来。因此，调节这些趋化因子受体活性的式1的化合物可用于治疗或预防这些疾病。
本文所用的术语“调节剂”包括拮抗剂、促效剂、部分拮抗剂和/或部分促效剂、抑制剂和活化剂。在本发明的优选例中，式1的化合物显示了通过抑制HIV与靶细胞的趋化因子受体如CXCR4和/或CCR5的结合，对HIV感染起保护作用。
抑制趋化因子受体的式1的化合物可用于治疗与血细胞生成相关的疾病，这些疾病包括(但不限制于)控制化疗后的副作用、提高骨髓抑制的成功率、加速伤口的愈合和烧伤的治疗、以及在白血病中抵抗细菌感染。
式1的化合物也可用于治疗与炎症相关的疾病，这些疾病包括(但不限制于)炎症或过敏性疾病，如哮喘、过敏性鼻炎、超敏性肺部疾病、超敏性肺炎、嗜酸细胞性肺炎，迟发型超敏反应、间质性肺病(ILD)(如原发性囊性纤维病变、或与类风湿性关节炎相关的ILD、系统性红斑狼疮、强直性脊柱炎、Sjogren′s综合征、多肌炎或皮肌炎)；全身性过敏反应或超敏反应、药物过敏、昆虫叮咬过敏；自身免疫病，如类风湿性关节炎、牛皮癣、系统性红斑狼疮、重症肌无力、初期糖尿病；肾小球肾炎、自身免疫性甲状腺炎(throiditis)、移植排斥，包括同种异体移植排斥或抑制物抗宿主病；炎症性肠道疾病，如Crohn病和溃疡性结肠炎；脊椎关节病；硬皮病；牛皮癣(包括T细胞介导的牛皮癣)和炎症性皮肤病如皮炎、湿疹、特应性皮炎、变应性接触性皮炎、荨麻疹；脉管炎(如坏死性、皮肤、和超敏性脉管炎)；嗜酸细胞性肌炎(myotis)，嗜酸细胞性筋膜炎；和癌症。
本发明的激活或促进趋化因子受体功能的化合物可用于治疗与免疫抑制相关的疾病，如个体经受化疗、放疗、增强伤口愈合和烧伤治疗、自身免疫病或其他药物治疗(如皮质类甾醇治疗)，或与用于自身免疫病和同种异体移植/移植排斥治疗的导致免疫抑制的传统药结合；由于受体功能的先天缺陷或其他原因导致的免疫抑制；和感染性疾病，如寄生虫病，包括但不限于蠕虫感染，如线虫(round worm)；蛲虫、蛔虫、钩虫、类圆线虫、旋毛虫、丝虫、吸虫、内脏蠕虫、内脏幼虫移行(如弓蛔虫)、嗜酸性细胞胃肠炎(如异尖线虫、鼠润肠线虫(Phocanema spp.))、皮肤幼虫移行(巴西钩虫(Ancylostona braziliense))、犬钩虫(Ancylostoma canium))、导致疟疾的原生动物间日疟原虫(Plasmodium vivax)、人巨细胞病毒、松鼠猴疱疹病毒(Herpesvirus saimiri)、和Kaposi肉瘤肝病毒，也称为人肝病毒8，和痘病毒触染性软疣病毒(Moluscum contagiosum)。
式1的化合物可用于与任何其他药物组合物联合，只要这种联合治疗可用于调节趋化因子受体活性，从而预防和治疗炎症和免疫调节疾病，包括如与一种或多种用于预防或治疗HIV的药物联合。这些药物的例子包括(1)核苷酸反转录酶抑制剂，如叠氮胸苷、地丹诺辛、拉米夫定、扎西他宾、阿巴卡韦、斯塔夫定、阿得弗韦(adefovir)、阿得弗韦二新戊酯(adefovir dipivoxil)、福西夫定妥多酯(fozivudine todoxil)等；(2)非核苷酸反转录酶抑制剂(包括具有如伊米诺卡(imminocal)、奥替普拉等的抗氧化活性的药物)，如奈韦拉平、地拉夫定、埃弗韦恩、洛韦利得(loviride)、伊米诺卡、奥替普拉等；和(3)蛋白酶抑制剂如沙奎那韦、利托那韦、印地那韦、那非那韦、安泼那韦、帕利那韦(palinavir)、拉西那韦(lasinavir)、KaletraTM(拉波那韦(lopinavir)/利托那韦(ritonavir))等。
在这些联合中本发明的化合物和其他HIV药剂可分别或联合施用；一种药剂的施用可在另一种药剂施用之前、之中或之后。
本发明式1的化合物可通过口、胃肠外(如肌肉内、隔膜内、静脉内、脑池内注射或滴注、皮下注射或植入)，通过吸入喷剂、鼻部、阴道、直肠、舌下或外用的施药途径，单独或一起以合适的剂量单位制剂(含有常规无毒性药物学上可接受的载体、佐剂和适用于各施药途径的运载体)施用。
式1的化合物可用于治疗动物，包括小鼠、大鼠、马、牛、羊、狗、猫和猴而且对人也是有效的。
式1的化合物可以“前药”或被保护形式的式1化合物形式施用，在施给病人后释放该化合物。例如，该化合物可带有保护基，它通过在体液(如血液)中水解而分开，从而释放活性化合物，或在体液中被氧化或还原，从而释放该化合物。前药的讨论可在“Smith and Williams′Introduction to the Principles of Drug Design”，H.J.Smith，Wright，第二版，London 1988中找到。
酸加成盐是药物学上可接受的，如和无机碱形成的盐、和有机碱形成的盐、和无机酸形成的盐、和有机酸形成的盐、和碱性或酸性氨基酸形成的盐等，且无毒的金属复合物也在本发明的范围之内。与无机碱形成的盐包括与碱金属(如钠、钾等)、碱土金属(如钙、镁等)、铝、铵等形成的盐。与有机碱形成的盐包括与三甲胺、三乙胺、吡啶、皮考啉、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺、N，N′-二苄基亚乙基二胺等形成的盐。与无机酸形成的盐的例子包括和盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸等形成的盐。与有机酸形成的盐包括与甲酸、草酸、乙酸、酒石酸、甲磺酸、苯磺酸、苹果酸、甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸等形成的酸。与碱性氨基酸形成的盐的例子包括与精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸等形成的盐。与酸性氨基酸形成的盐的例子包括与天冬氨酸、谷氨酸等形成的盐。现在时态的无毒性必须根据未经处理的感染病人的预后来加以考虑。铜和锌的复合物是优选的，但也可以使用其它金属如镍、钴或rhubidium。
本发明式1的化合物可形成水合物或溶剂化物。式1的某些化合物可以区域异构体(regioisomer)、构型异构体、构象异构体、非对映异构体形式和非对映异构体形式的混合物存在，如果需要，可以用已知的分离和纯化方法分离各异构体。本发明包括这些立体异构体的混合物以及分离形式的化合物的混合物。该混合物可含有任何比例的立体异构体。本发明化合物也包括外消旋体，它可通过光学拆分分离为(S)-化合物和(R)-化合物，各光学异构体及其混合物都包括在本发明的范围内。
可单独施用式1的化合物，或和药物学可接受的载体(如固态制剂，如片剂、胶囊、丸剂、粉剂等；液态制剂如糖浆、针剂等)混合的混合物口服或非口服施用。非口服制剂的例子包括针剂、滴剂、栓剂、子宫托。
在以上的式1中，V含有2-4个N，宜为3-4个N，如果没有其它杂原子。V的优选环大小为9-18元，更佳地为12-16元。V还可包括稠合的芳环或杂芳环，宜为1，2或1，3、或1，4亚苯基或2，6或2，5或2，4或2，3亚吡啶基(pyrimidinylene)。稠合环可以是如2，5或2，6亚嘧啶基(pyrimidinylene)或2，4或2，3亚吡咯基(pyrrolylene)。
在上式1中，所需的存在于环V至少一个碳原子上的吸电子取代基可以是卤素、硝基、氰基、羧酸基、羧酸酯(含有1-6C醇)或由0-12C胺形成的酰胺、磺酸或亚磺酸、或磺酸或亚磺酸酯或酰胺、CF3等。优选的吸电子取代基是＝O和卤素。
卤素的例子包括氟、氯、溴、碘等，优选氟和氯。
在上式1中，Ar2是任选取代的杂环基团或芳基。芳基的例子包括苯和萘、或二氢萘和四氢萘。杂环基的例子包括5-6元饱和、部分饱和、或芳族杂环，含有1-4个选自氮、氧和硫的杂原子。杂环可以是吡啶、喹啉基、异喹啉基、咪唑、苯并咪唑、氮杂苯并咪唑、苯并三唑、呋喃、苯并呋喃、噻唑、苯并噻唑、噁唑、苯并噁唑、吡咯、吲哚、二氢吲哚、吲唑、吡咯烷、吡咯烷酮、吡咯啉、哌啶、哌嗪、四氢喹啉、四氢异喹啉、吡唑、噻吩、异噁唑、异噻唑、三唑、四唑、噁二唑、噻二唑、吗啉、硫代吗啉、吡唑烷、咪唑烷、咪唑啉、四氢吡喃、二氢吡喃、苯并吡喃、二噁烷、二噻烷(dithiaen)、四氢呋喃、四氢噻吩、二氢呋喃、二氢噻吩等。含氮和硫的杂环氧化物也包括在本发明中。
Ar2上的任选取代基包括(1-6C)烷基、(1-6C)链烯基、(1-6C)炔基、卤素、硝基、氰基、羧酸、由1-6C醇形成的羧酸酯基或0-12C胺形成的酰胺基、磺酸、亚磺酸、磺酸或亚磺酸酯或酰胺、OR、SR、NR2、OCR、OOCR、NRCOR，其中所有R都是氢或直链或支链(1-6C)烷基、任选取代的芳基或杂环基、CF3等。
优选的取代基包括烷基、OR、NR2和卤素。Ar2优选的例子包括苯基、吡啶基、嘧啶基和咪唑基。
在式1中，Ar1是5-6元芳族体系，为二价苯、吡啶、噻吩、嘧啶等。Ar1可以任选地被以下基团取代烷基、烯基、卤素、硝基、氰基、CF3、COOR、CONR2、OCR、OOCR、NRCOR、OR、NR2、SR(其中R是H或1-6C烷基)、磺酸基或磺酸、酯或酰胺等。Ar1的优选例子为亚苯基(尤其是1，3和1，4亚苯基)和亚吡啶基(尤其是2，6亚吡啶基和3，5亚吡啶基)。优选的取代基是烷基、OR、NR2和卤素。
另外，在式1的化合物中，较佳地各R基团是氢或1-2C烷基，优选氢。在另一实施例中，偶合于氮的R基团是氢或1-6C烷基，优选直链1-3C烷基，更优选的是H或甲基。在另一实施例中，1、2、3、4、或5个R是甲基或乙基，其余的R基团是氢。
因此，在一优选例中式1的化合物为式V-CH2-Ar1-CH2NR-CH2-Ar2，其中V是(a)被卤素或＝O取代的，或(b)含有O或S或(c)(a)和(b)二者，且其中Ar1是未取代的1，3或1，4-亚苯基，R是H、甲基或乙基，和Ar2是未取代的苯基或吡啶基。
x的优选例为0-2和1-2。
在治疗或预防需要趋化因子受体调节的病况下，合适的剂量水平通常是每日约0.01-500毫克/公斤体重，可单剂或多剂施用。优选的剂量水平是每日约0.1-250毫克/公斤。应理解任何具体病人的具体剂量水平和剂量频率可变化，并将依赖于各种因素，包括所用特定化合物的活性，该化合物作用的代谢稳定性和长度、年龄、体重、健康状况、性别、饮食、给药模式和时间、排泄速率、药物联合、具体情况的严重程度、和经受治疗的病人。
因此，按熟知的原理，将这些活性化合物以配制好的药物组合物形式给予，并将化合物(较佳地以单元剂量形式)与药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂组合。这些组合物可以溶液或悬浮液的形式用于注射或冲洗，或以胶囊、片剂、糖衣丸或其它固态组合物或溶液或悬浮液用于口服，或制成阴道栓或栓剂，或上述任何药物的持续缓释形式以供植入。适合的稀释剂、载体、赋形剂和其它组分是熟知的。也可期望制成局部给药的组合物，如软膏或乳膏。本发明的化合物可以组合物的形式使用或单独使用。
本发明的药物组合物可用普通的制药方法确定制成单位剂量，适宜在人体或动物中提供剂量范围为0.01-100mg/kg体重/天的活性化合物，以单剂量或若干次较少的剂量给药。优选的剂量范围为0.01-30mg/kg体重/天(静脉(iv)或腹膜腔内(ip))。其它活性化合物可用于组合物或这些活性化合物，或辅助治疗可包括在治疗疗程中。包括治疗有效剂量的新化合物(所述的化合物有效地结合于趋化因子受体)的药物组合物对治疗患者是有用的。
本发明还考虑用这些组合物制成药物以治疗受HIV或FIV感染的患者，和/或治疗受内皮细胞功能调节的疾病和/或治疗与肠胃道血管生成、造血或小脑发育相关的疾病。
在治疗受HIV或FIV感染的患者的方法中，以包含在药学上可接受的载体中的治疗有效剂量的药物组合物的形式，将药物组合物给予所述的患者。在治疗患有与内皮细胞功能调节相关的疾病的患者的方法中，以包含在药学上可接受的载体中的治疗有效剂量的药物组合物的形式，将药物组合物给予所述的患者。通过给予所述的患者以包含在药学上可接受载体中的治疗有效剂量的药物组合物，本发明还尝试了治疗与肠胃道血管生成、造血或小脑发育相关的疾病。
通过给予所述的患者以包含在药学上可接受载体中的治疗有效剂量的药物组合物，本发明还尝试了治疗与基础白血球流动或溢出和应答刺激剂的白血球组织侵入相关的疾病。通过给予所述患者以包含在药学上可接受载体中的治疗有效剂量的药物组合物，本发明的方法还尝试了治疗该患者，其中所述的化合物有效地结合于趋化因子受体。
本发明还进一步尝试了用于治疗人或动物的以下疾病的药物组合物和方法肾异体移植排斥、炎症、癌、中枢神经系统发育疾病、HIV、脉管发育疾病、造血和其它受趋化因子调节的疾病或失调。本发明还提供对以下疾病(但不限制于)的治疗关节炎、多发性硬化症、受HIV或FIV感染的痴呆、帕金森病、阿耳茨海默氏病和炎症。本发明的药物组合物和方法还可治疗癌症(但不限制于)实体瘤、淋巴瘤、转移性肿瘤、成胶质细胞瘤、白血病和其它恶性肿瘤。本发明的药物组合物还提供对以下癌症(但不限制于)的治疗非小细胞肺癌、肺癌、乳房癌、前列腺癌和其它器官的癌。
用本发明的药物组合物还可完成对其它疾病或失调的治疗，包括(但不限制于)用抑制或促进血管生成或诱导血管生成的停滞法治疗的失调；由趋化因子调节的发育失调。
本发明还提供了预防患者得疾病或失调的方法，通过给予一位患者以治疗有效剂量的本发明的药物组合物足够的一段时间以有效预防疾病或失调。
用以下实施例说明本发明，但对本发明无任何限制作用。
实施例1制备N-[4-(11-氟-1，4，7-三氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(AM8897，

图1)乙酸7-乙酰基-4-羟基-庚酯 0℃在庚-1，4，7-三醇(162mg，1.09mmol)的吡啶(4ml)溶液中加入乙酸酐(216mg，2.28mmol)。在0℃，搅拌此混合物4小时，然后用乙酸乙酯(100ml)稀释。用饱和NaHCO3、盐水洗涤此有机溶液，用Na2SO4干燥。蒸发掉溶剂，在硅胶上柱层析纯化残留物(使用30％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状标题化合物(120mg，50％)。1HMR(CDCl3)δ1.41-1.86(m，8H)，2.05(s，6H)，3.62-3.70(m，1H)，4.11(t，4H，J＝6.6Hz)；13C NMR(CDCl3)δ21.01，24.92，33.82，64.41，71.06，171.20。
乙酸7-乙酰基-4-氟-庚酯 -78℃，在(二乙氨基)-三氟化硫(571mg，3.54mmol)的CH2Cl2溶液中加入乙酸7-乙酰基-4-羟基-庚酯(403mg，1.74mmol)的CH2Cl2(l0ml)溶液。在-78℃搅拌此混合物15分钟，然后在室温搅拌30分钟，随后用乙酸乙酯(300ml)稀释。用饱和NaHCO3、盐水洗涤此有机溶液，用Na2SO4干燥。蒸发掉溶剂，在硅胶上柱层析纯化残留物(使用15％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状标题化合物(386mg，94％)。1HMR(CDCl3)δ1.55-1.83(m，8H)，2.05(s，6H)，4.05-4.15(m，4H)，4.39-4.63(m，1H)；19FNMR(CDCl3)δ-106.44-105.27(m)；ES-MS m/z 257.3(M+Na)。
4-氟-庚-1，7-二醇 将用无水NH3气饱和的甲醇(15ml)加到用玻璃塞封闭的圆底烧瓶中的乙酸7-乙酰基-4-氟-庚酯中。在室温搅拌此混合物28小时，然后将其浓缩。在硅胶上柱层析纯化残留物(使用5％甲醇的CH2Cl2溶液)，得到纯无色油状标题化合物(320mg，100％)。1HMR(CDCl3)δ1.59-1.83(m，8H)，3.67(t，4H，J＝5.7Hz)，4.47-4.67(m，1H)；13C NMR(CDCl3)δ28.73，28.75，31.78，32.06，62.88，93.56，95.98；ES-MS m/z 173.2(M+Na)。
1，7-二(甲苯-4-磺酸)-4-氟-庚酯
在预冷(冰浴)的4-氟-庚-1，7-二醇(320mg，2.13mmol)和三乙胺(1.0ml，6.90mmol)的CH2Cl2(10ml)溶液中加入对-甲苯磺酰氯(812mg，4.27mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液。室温搅拌此混合物18小时，然后用乙酸乙酯(200ml)稀释。用饱和NaHCO3、盐水洗涤此有机溶液，用Na2SO4干燥。蒸发掉溶剂，在硅胶上柱层析纯化残留物(使用20％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状标题化合物(627mg，100％)。1HMR(CDCl3)δ1.31(ddd，6H，J＝0.6，7.2，7.2Hz)，1.65-1.89(m，8H)，3.22-3.46(m，12H)，3.93-4.14(m，4H)，7.60-7.65(m，2H)，7.68-7.75(m，4H)，7.99-8.05(m，2H)；13CNMR(CDCl3)δ16.54，16.64，22.65，22.74，29.66，29.95，47.04，47.37，47.43，50.22，63.17，63.25，91.38，93.62，124.59，131.67，131.96，132.06，134.22，148.69；19F NMR(CDCl3)δ-99.84--99.41(m)；ES-MS m/z 724.6(M+H)。-膦酸二乙酯 80℃、N2下，在搅拌的二-[2-(2-硝基-苯磺酰基氨基)-乙基]-磷酰胺酸二乙酯(1.07g，1.75mmol)和无水Cs2CO3(1.5g，4.60mmol)的无水DMF(100ml)溶液中加入1，7-二(甲苯-4-磺酸)-4-氟-庚-酯(687mg，1.49mmol)的DMF(10ml)溶液，为时10小时。在85℃搅拌此反应混合物30小时，冷却至室温，然后浓缩。用200ml乙酸乙酯稀释残留物，用饱和NaHCO3、盐水洗涤此有机溶液，用Na2SO4干燥。蒸发掉溶剂，在硅胶上柱层析纯化残留物(使用50％乙酸乙酯的CH2Cl2溶液)，得到呈浅黄色固体的标题化合物(560mg，55％)。1HMR(CDCl3)δ1.31(ddd，6H，J＝0.6，7.2，7.2Hz)，1.65-1.89(m，8H)，3.22-3.46(m，12H)，3.93-4.14(m，4H)，4.67-4.83(m，1H)，7.60-7.65(m，2H)，7.68-7.75(m，4H)，7.99-8.05(m，2H)；13C NMR(CDCl3)δ16.54，16.64，22.65，22.74，29.66，29.95，47.04，47.37，47.43，50.22，63.17，63.25，91.38，93.62，124.59，131.67，131.96，132.06，134.22，148.69；19F NMR(CDCl3)δ-99.84--99.41(m)；ES-MS m/z 724.6(M+Na)。
11-氟-1，7-二-(2-硝基-苯磺酰基)-1，4，7-三氮杂环十四烷 将用无水溴化氢(气体)饱和的乙酸(15ml)加入在用玻璃塞密封的圆底烧瓶中的[11-氟-1，7-二(2-硝基-苯磺酰基)-1，4，7-三氮杂环十四烷-4-基]-膦酸二乙酯(560mg，0.77mmol)中。在室温搅拌此混合物18小时，然后加入乙醚(50ml)。让形成的白色沉淀沉降于烧瓶的底部，倾析掉乙醚溶液。将此白色固体再次溶解于甲醇中，用K2CO3(固体)搅拌30分钟，然后用100ml乙酸乙酯稀释，过滤除去固体。蒸发滤液得到白色泡沫状的标题化合物(454mg，100％)。1HMR(CDCl3)δ1.75-1.99(m，8H)，2.90(t，4H，J＝5.0Hz)，3.26-3.39(m，8H)，4.61-4.77(m，1H)，7.60-7.65(m，2H)，7.68-7.72(m，4H)，7.94-7.97(m，2H)；ES-MS m/z 588.3(M+H)。 N2下，在搅拌的11-氟-1，7-二-(2-硝基-苯磺酰基)-1，4，7-三氮杂环十四烷(454mg，0.77mmol)和无水K2CO3(400mg，2.89mmol)的无水CH3CN(7ml)溶液中加入N-[1-亚甲基-4-(氯亚甲基)亚苯基]-N-(2-硝基苯磺酰基)-2-(氨基甲基)吡啶(Bridger等人，U.S.Ser.No.09/111,895)(743mg，1.72mmol)。85℃搅拌此混合物18小时，然后浓缩。用100ml乙酸乙酯稀释残留物，用饱和NaHCO3洗涤，然后再用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。蒸发掉溶剂，在硅胶上柱层析纯化残留物(使用50％乙酸乙酯的CH2Cl2溶液)，得到白色泡沫状标题化合物(454mg，59％)。1HMR(CDCl3)δ1.67-1.83(m，8H)，2.69-2.76(m，4H)，3.19(td，4H，J＝8.1，8.1Hz)，3.34(t，4H，J＝6.2Hz)，3.75(s，2H)，4.50(s，2H)，4.60(s，2H)，4.59-4.80(m，1H)，7.08-7.20(m，7H)，7.51-7.73(m，9H)，7.81(dd，2H，J＝1.8，7.5Hz)，8.01(d，1H，J＝7.8Hz)，8.38(d，1H)；19F NMR(CDCl3)δ-99.61--98.50(m)；ES-MS m/z 983.3(M+Na)。
N-[4-(11-氟-1，4，7-三氮杂环十四烷)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(AMD8897) N2下，在搅拌的如上中间体(445mg，0.45mmol)和无水K2CO3(750mg，5.43mmol)的无水DMF(6ml)的溶液中逐滴加入苯硫酚(348mg，3.17mmol)。在室温搅拌此反应混合物4小时，然后浓缩。用100ml乙酸乙酯稀释残留物，用硅藻土短柱过滤除去固体。蒸发掉溶剂，用硅胶(1mm板)层析(chromatron)纯化残留物，用1∶1∶98的甲醇/NH4OH/CH2Cl2洗脱，得到AMD8897(80mg，62％)。1H NMR(CDCl3)δ1.52-1.85(m，8H)，2.53-2.63(m，12H)，3.57(s，2H)，3.83(s，2H)，3.93(s，2H)，5.07-5.30(m，1H)，7.14-7.33(m，6H)，7.64(ddd，1H，J＝1.8，7.8，7.8Hz)，8.55-8.57(m，1H)；13C NMR(CDCl3)δ24.43，32.13，32.41，47.32，48.47，52.44，53.21，54.52，58.92，121.94，122.32，128.26，128.87，136.42，137.80，139.04，149.33，159.75；19FNMR(CDCl3)δ-102.3--103.00(m)；ES-MS m/z 428.3(M+H)；(C25H38FN5)的分析计算值C，70.22；H，8.96；N，16.38。实测值C，69.99；H，8.96；N，16.42。
实施例2制备N-[4-(11，11-二氟-1，4，7-三氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(AMD8880，图2)4，4-二氟-庚二酸二乙酯 室温，在塑料瓶中的(二乙氨基)-三氟化硫(2.02g，12.55mmol)的净溶液中加入4-氧代-庚二酸二乙酯(2.56g，11.13mmol)。搅拌此混合物12天，然后用乙酸乙酯(500ml)稀释。用饱和NaHCO3洗涤，然后再用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。蒸发掉溶剂，在硅胶上柱层析纯化残留物(使用20％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到纯无色油状的标题化合物(1.2g，43％)。1H NMR(CDCl3)δ1.26(t，6H，J＝8.0Hz)，2.11-2.28(m，4H)，2.52(t，4H，J＝7.8Hz)，4.16(q，4H，J＝4H)；19F NMR(CDCl3)δ-25.78--25.42(m)；13C NMR(CDCl3)δ14.16，27.09，27.16，27.22，31.52，31.85，32.19，60.80，120.18，123.38，126.58，172.26；ES-MS m/z 275.1(M+Na)。
4，4-二氟-庚-1，7-二醇 0℃、N2下，在4，4-二氟-庚二酸二乙酯(1.3g，5.65mmol)的二乙醚(35ml)溶液中缓慢加入固体LAH(638mg，11.80mmol)。室温搅拌此混合物30分钟，然后加热回流2小时。冷却后，加入水(0.5ml)，再加入15％NaOH(0.5ml)和水(1.5ml)。室温搅拌此混合物2小时，然后用乙酸乙酯(500ml)稀释。用Na2SO4干燥此有机溶液，而无需水处理。蒸发掉溶剂后得到纯无色油状的标题化合物(646g，68％)。1H NMR(CDCl3)δ1.71-1.80(m，4H)，1.87-2.03(m，4H)，3.69(t，4H，J＝6.0Hz)；19F NMR(CDCl3)δ-22.6--22.28(m)；13C NMR(CDCl3)δ25.81，25.87，25.92，32.99，33.33，33.67，122.38，125.56，128.74。
1，7-二(甲苯-4-磺酸)-4，4-二氟-庚-酯 在预冷(冰浴)的4，4-二氟-庚-1，7-二醇(450mg，2.67mmol)和三乙胺(1.2ml，8.31mmol)的CH2Cl2(5ml)溶液中加入对-甲苯磺酰氯(1.13g，5，94mmol)的CH2Cl2(2ml)溶液。室温搅拌此混合物18小时，然后用乙酸乙酯(200ml)稀释。用饱和NaHCO3、盐水洗涤有机溶液，用Na2SO4干燥。蒸发掉溶剂，在硅胶上柱层析纯化残留物(使用20％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到无色油状的标题化合物(1.1g，83％)。1H NMR(CDCl3)δ1.75-1.90(m，8H)，2.44(s，6H)，4.01-4.05(m，4H)，7.33(d，4H，J＝8.1Hz)，7.75(d，4H，J＝8.1Hz)；19F NMR(CDCl3)δ-24.27(t)；13C NMR(CDCl3)δ22.06，22.22，22.28，22.34，32.80，33.14，33.48，33.71，69.96，70.07，121.06，124.26，127.46，128.27，130.36，133.18，145.42.ES-MS m/z 477.1(M+H)。-膦酸二乙酯 80℃、N2下，在搅拌的二-[2-(2-硝基苯磺酰基氨基)-乙基]-磷酰胺酸二乙酯(1.5g，2.46mmol)和无水Cs2CO3(2.2g，6.74mmol)的无水DMF(150ml)溶液中加入1，7-二(甲苯-4-磺酸)-4，4-二氟-庚-酯(1.07mg，2.25mmol)的DMF(10ml)溶液，为时10小时。在85℃搅拌此反应混合物30小时，冷却至室温，然后浓缩。用200ml乙酸乙酯稀释残留物，用饱和NaHCO3、盐水洗涤，用Na2SO4干燥。蒸发掉溶剂，在硅胶上柱层析纯化残留物(使用50％乙酸乙酯的CH2Cl2溶液)，得到呈浅黄色固体的标题化合物(311mg，19％)。1H NMR(CDCl3)δ1.32(t，6H，J＝7.1Hz)，1.72-1.79(m，4H)，1.95-2.05(m，4H)，3.30(s，4H)，3.32(s，4H)，3.40(t，4H，J＝6.15)，3.96-4.08(m，4H)，7.60-7.66(m，2H)，7.69-7.76(m，4H)，7.99-8.05(m，2H)；19F NMR(CDCl3)δ-14.87--14.61(m)；13C NMR(CDCl3)δ16.54，16.63，22.52，32.07，32.42，32.77，47.16，47.89，47.95，50.17，63.19，63.27，122.42，124.65，124.87，125.67，128.87，131.55，131.60，132.16，134.44，148.72；ES-MS Im/z 742.2(M+H)。
11，11-二氟-1，7-二-(2-硝基苯磺酰基)-1，4，7-三氮杂环十四烷 将用无水溴化氢(气体)饱和的乙酸(10ml)加入在用玻璃塞密封的圆底烧瓶中的[11，11-二氟-1，7-二(2-硝基-苯磺酰基)-1，4，7-三氮杂环十四烷-4-基]-膦酸二乙酯(311mg，0.41mmol)中。在室温搅拌此混合物18小时，然后加入乙醚(50ml)。让形成的白色沉淀沉降于烧瓶的底部，倾析掉乙醚溶液。将此白色固体再次溶解于甲醇中，用K2CO3(固体)搅拌30分钟，然后用100ml乙酸乙酯稀释，过滤除去固体。蒸发滤液得到白色泡沫状的标题化合物(239mg，94％)。1H NMR(CDCl3)δ1.82-1.91(m，4H)，1.99-2.15(m，4H)，2.91(t，4H，J＝5.1Hz)，3.30-3.38(m，8H)，7.60-7.63(m，2H)，7.69-7.75(m，4H)，7.90-7.94(m，2H)；13C NMR(CDCl3)δ23.25，32.22，32.57，32.90，50.22，50.86，50.96，123.50，124.60，126.71，129.89，130.73，132.02，132.22，134.27，148.94；19F NMR(CDCl3)δ-14.12(t)；ES-MS m/z 606.3(M+H)。 N2下，在搅拌的11，11-二氟-1，7-二-(2-硝基苯磺酰基)-1，4，7-三氮杂环十四烷(239mg，0.39mmol)和无水K2CO3(320mg，2.30mmol)的无水CH3CN(4ml)溶液中加入N-[1-亚甲基-4-(氯亚甲基)亚苯基]-N-(2-硝基苯磺酰基)-2-(氨基甲基)吡啶(Bridger等人，U.S.Ser.No.09/111,895)(512mg，1.18mmol)。85℃搅拌此混合物18小时，然后浓缩。用100ml乙酸乙酯稀释残留物，用饱和NaHCO3洗涤，然后再用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。蒸发掉溶剂，在硅胶上柱层析纯化残留物(使用50％乙酸乙酯的CH2Cl2溶液)，得到白色泡沫状标题化合物(289mg，73％)。1H NMR(CDCl3)δ1.73-1.77(m，4H)，1.89-1.99(m，4H)，2.75(t，4H，J＝6.8Hz)，3.24(t，4H，J＝7.5Hz)，3.34(t，4H，J＝6.3Hz)，3.58(s，2H)，4.56(s，2H)，4.59(s，2H)，7.08-7.18(m，6H)，7.52-7.75(m，10H)，7.83(dd，2H，J＝1.5，7.8Hz)，7.99(d，1H，J＝7.8Hz)，8.40(d，1H)；13C NMR(CDCl3)δ22.43，32.32，46.84，48.99，51.71，52.36，54.65，59.30，122.90，122.96，124.57，124.61，128.93，129.76，130.35，131.12，131.49，132.12，132.24，133.83，134.14，134.29，134.45，134.84，137.06，138.30，148.33，148.63，149.68，155.96；19F NMR(CDCl3)δ-14.52(t)；ES-MS m/z 1001.3(M+H)。
N-[4-(11，11-二氟-1，4，7-三氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(AMD8880) N2下，在搅拌的如上中间体(289mg，0.29mmol)和无水K2CO3(478mg，3.46mmol)的无水DMF(4ml)的溶液中逐滴加入苯硫酚(222mg，2.02mmol)。在室温搅拌此反应混合物4小时，然后浓缩。用100ml乙酸乙酯稀释残留物，用硅藻土短柱过滤除去固体。蒸发掉溶剂，用硅胶(1mm板)层析(chromatron)纯化残留物，用1∶1∶98的甲醇/NH4OH/CH2Cl2洗脱，得到浅黄色油状的AMD8880(80mg，62％)。1HNMR(CDCl3)δ1.63-1.72(m，4H)，2.00-2.15(m，4H)，2.60-2.65(m，12H)，3.57(s，2H)，3.83(s，2H)，3.93(s，2H)，7.14-7.18(m，1H)，7.20-7.34(m，5H)，7.60-7.67(m，1H)，8.55(d，1H，J＝4.8Hz)；13C NMR(CDCl3)δ23.47，32.64，32.98，33.32，47.69，48.66，53.61，54.21，54.94，59.67，122.32，122.71，127.03，128.59，129.28，136.81，138.49，139.36，149.71，160.16；19F NMR(CDCl3)δ-15.50(q，J＝12.65Hz)；ES-MS m/z 446.4(M+H)；(C25H37F2N5)的分析计算值C，67.39；H，8.37；N，15.72。实测值C，67.52；H，8.49；N，15.43。
实施例3制备N-[4-(1，4，7-三氮杂环十四烷-2-酮)-基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(氢溴酸盐)(AMD8748，图3) 将硝基苯磺酰基(Nosyl)氮丙啶11.7g(51.3mmol)的无水THF(80ml)溶液逐滴加入搅拌的1，7-二氨基庚烷33.4g(256.3mmol)的无水THF(220ml)溶液中。添加完毕后，室温氮气中搅拌此混合物20分钟。真空浓缩得到黄色油状的粗产物。在硅胶上快速层析纯化此油，用5％MeOH、5％NH4OH、90％CH2Cl2洗脱，得到黄色油状的所需的胺(10.9g，59％)。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ1.27-1..50(m，10H)，2.09(s，4H)，2.47(t，J＝6.0Hz，2H)，2.68(t，J＝7，5Hz，2H)，2.75(t，J＝6.0Hz，2H)，3.13(t，J＝6.0Hz，2H)，7.72-7.75(m，2H)，7.75-7.87(m，1H)，8.13-8.16(m，1H)；C15H26N4O4S计算得到的准确质量358，实测值m/z 359[M+H]+。 -78℃，在上述胺(7.0g，19.5mmol)和4.3ml(29.3mmol)Et3N的THF搅拌溶液中逐滴加入4.3g(19.5mmol)Boc2O的THF(100ml)溶液。1小时后，用EtOAc稀释此反应混合物，用NaHCO3水溶液冲洗，干燥(MgSO4)并真空浓缩。在硅胶上快速层析纯化，用5％MeOH、95％CH2Cl2洗脱，得到5.6g(63％)浅黄色油状的所需BOC中间体。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ1.26-1.27(m，10H)，1.36-1.44(m，9H)，2.47(t，J＝7.5Hz，2H)，2.75(t，J＝6.0Hz，2H)，3.00(br s，2H)，3.06-3.16(m，4H)，4.50(br s1H)，7.72-7.76(m，2H)，7.86-7.89(m，1H)，8.13-8.16(m，1H)；C20H34N4O6S计算的准确质量458，实测值m/z 459[M+H]+。 在上述BOC中间体(1.6g，3.49mmol)和1.5ml(10.5mmol)Et3N的100ml无水CH2Cl2搅拌的溶液中加入504μl(19.5mmol)DepCl，在氮气下搅拌此反应混合物24小时。减压下除去溶剂，将残留物溶解于EtOAc中，用NaHCO3水溶液洗涤，干燥(Na2SO4)并真空浓缩。在硅胶上快速层析纯化，用5％MeOH、95％CH2Cl2洗脱，得到1.4g(67％)浅黄色油状的所需Dep中间体。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ1.23-1.34(m，16H)，1.44(s，9H)，2.88-2.94(m，2H)，3.08-3.11(m，2H)，3.22(d，J＝6.0Hz，4H)，4.00-4.09(m，4H)，4.50(br s，1H)，6.11(br s，1H)，7.72-7.75(m，2H)，7.83-7.84(m，1H)，8.10-8.13(m，1H)；C24H43N4O9SP计算得到的准确质量594，实测值m/z 595[M+H]+。 在上述Dep中间体(1.0g，1.74mmol)的30ml无水CH2Cl2的搅拌溶液中加入10mlTFA，室温在氮气下搅拌此反应混合物40分钟。减压下除去TFA和溶剂。将残留物溶解于MeOH中。在此溶液中加入K2CO3，室温搅拌此混合物10分钟。用50ml CH2Cl2稀释此混合物，用硅藻土过滤，并真空浓缩。在硅胶上快速层析纯化，用5％MeOH、95％CH2Cl2洗脱，得到731mg(85％)浅黄色油状的胺。1HNMR(CDCl3，300 MHz)δ1.28-1.33(m，12H)，1.42-1.46(m，4H)，2.60-2.67(m，5H)，2.91(q，J＝8.7Hz，2H)，3.20-3.22(m，4H)，4.03(q，J＝7.5Hz，4H)，7.70-7.73(m，2H)，7.81-7.82(m，1H)，8.09-8.12(m，1H)；C19H35N4O7SP计算得到的精确质量494，实测值m/z 495[M+H]+。 在上述胺(731mg，1.48mmol)的31ml无水THF搅拌的溶液中加入1.6g(14.7mmol)Na2CO3，将此混合物冷却至-15℃。在此混合物中逐滴加入155μl溴代乙酰溴(1.78mmol)的THF(1.61)溶液。1小时后，在此溶液中加入第二批51μl的溴代乙酰溴(0.59mmol)。在-15℃，氮气下搅拌此反应混合物30分钟。用50mlCH2Cl2稀释此反应混合物，用硅藻土过滤，并真空浓缩。在硅胶上快速层析纯化，用5％MeOH、95％CH2Cl2洗脱，得到807mg(89％)浅黄色油状的所需的酰胺。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ1.25-1.34(m，14H)，1.48-1.53(m，2H)，2.94(q，J＝3Hz，2H)，3.21-3.31(m，6H)，3.88(s，2H)，4.01-4.09(m，4H)，6.14(br s，1H)，6.58(br s，1H)，7.72-7.75(m，2H)，7.83-7.84(m，1H)，8.10-8.13(m，1H)；C21H36NO8SPBr计算得到的精确质量616，实测值m/z 617[M+H]+。 在上述酰胺(369mg，0.60mmol)的1000ml无水乙腈的搅拌溶液中加入417mg(3.1mmol)K2CO3，在60℃氮气下搅拌此混合物24小时。减压下浓缩此溶液。在硅胶上快速层析纯化，用5％MeOH、95％CH2Cl2洗脱，得到290mg(90％)浅黄色油状所需的大环化合物。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ1.28(t，J＝7.5Hz，6H)，1.30-1.37(m，10H)，2.94-2.95(m，2H)，3.27-3.45(m，6H)，3.96-4.04(m，4H)，4.05(s，2H)，6.58(t，J＝6.0Hz，1H)，7.66-7.68(m，1H)，7.73-7.76(m，2H)，8.16-8.19(m，1H)；C21H35N4O8SP计算得到的精确质量534，实测值m/z 535[M+H]+。 在上述大环化合物(290mg，0.54mmol)的5ml无水DMF的搅拌溶液中加入374mg(2.71mmol)的K2CO3和167μl(1.63mmol)苯硫酚。室温氮气下，搅拌此混合物4小时。减压下浓缩此溶液。将残留物溶解于CH2Cl2，用硅藻土过滤，并真空浓缩。在硅胶上快速层析纯化，用3％MeOH、5％NH4OH、92％CH2Cl2洗脱，得到145mg(77％)浅黄色油状所需的大环胺。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ 1.31(t，J＝7.5Hz，6H)，1.33-1.59(m，10H)，2.70(t，J＝7.5Hz，2H)，2.96-2.99(m，2H)，3.20-3.34(m，5H)，3.31(s，2H)，3.96-4.05(m，4H)，7.40(br s，1H)，C15H32N3O4P计算的精确质量349，实测值m/z 350[M+H]+. 在上述大环胺(152mg，0.44mmol)的4ml无水乙腈的搅拌溶液中加入180mg(1.31mmol)K2CO3和237mg(0.61mmol)N-[1-亚甲基-4-(氯亚甲基)亚苯基]-N-(二乙氧基磷酰基)-2-(氨甲基)吡啶(Briger等人，US Ser.No.09/111,895)。83℃搅拌此混合物18小时。减压下浓缩此溶液。将残留物溶解于CH2Cl2中，用硅藻土过滤，并真空浓缩，得到黄色油状的粗产物。在硅胶上快速层析纯化，用3％MeOH、97％CH2Cl2洗脱，得到257mg(85％)浅黄色泡沫状所需的中间体。1HNMR(CDCl3)δ1.25-1.30(m，12H)，1.31-1.61(m，10H)，2.50-2.55(m，2H)，2.80-2.94(m，2H)，2.97(s，2H)，3.25-3.50(m，5H)，3.97(s，2H)，4.02-4.12(m，8H)，4.21(dd，J＝16.5Hz，J＝10.5Hz，4H)，7.04-7.26(m，5H)，7.36(d，J＝6.0Hz，1H)，7.62(t，J＝3Hz，1H)，8.50(d，J＝3.0Hz，1H)；C33H55N5O7P2计算得到的精确质量695，实测值m/z 696[M+H]+。 AMD 8748N-[4-(1，4，7-三氮杂环十四烷-2-酮)-基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(溴化氢盐)(AMD8748)将上述的中间体(257mg，0.37mmol)溶解于3mlHBr/AcOH中，在室温搅拌此溶液24小时。在此混合物中加入乙醚，形成黄色沉淀。过滤收集固体，用乙醚洗涤，真空干燥得到白色泡沫状AMD8748(182mg，60％)。1HNMR(D2O，300MHz)δ1.38-1.74(m，10H)，3.15(t，J＝7.5Hz，2H)，3.26-3.28(m，2H)，3.45-3.59(m，4H)，3.84(s，2H)，4.47(s，2H)，4.58(s，2H)，7.62-7.76(m，5H)，7.79(d，J＝8.7Hz，1H)，8.23(t，J＝6.0Hz，1H)，8.73(d，J＝5.1Hz，1H)；13C NMR(D2O，75.5 MHz)δ167.59，148.23，147.32，142.85，132.44，132.21，131.34，126.44，126.39，59.72，54.77，51.20，50.19，49.45，45.49，40.38，39.05，26.89，24.85，23.37，23.16，21.66；C25H37N5O计算得到的精确质量423，实测值m/z 424 [M+H]+；(C25H37N5O)2.5(H2O)3.9(HBr)0.4(C4H10O)的分析计算值C，39.26；H，6.18，N，8.61；Br，38.29，实测值C，39.15，H，5.99，N，8.53；Br，38.45。
实施例4制备N-[12-(5-氧杂-1，9-二氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(溴化氢盐)(AMD8922，图4) 制备2-(4-氰基-苄基)-丙二酸二甲酯 室温将丙二酸二甲酯(10.00g，75.7mmol)加入NaH(60％油液，3.33g，83.3mmol)的THF(100ml)的悬浮液中，为时20分钟。将此混合物在80℃加热15分钟，然后加入α-溴甲苯腈(14.84g，75.69mmol)的THF(100ml)溶液。继续在80℃加热1小时，然后在50℃加热64小时。加入水(30ml)，用EtOAc(3×20ml)提取水相。干燥(MgSO4)合并的有机相并浓缩。在硅胶上纯化粗产物(25％EtOAc/己烷)，得到呈无色晶体的标题化合物(8.49g，45％)。1HNMR(CDCl3)δ3.27(d，2H，J＝9.0Hz)，3.67(t，1H，J＝9.0Hz)，3.70(s，6H)，7.32(d，2H，J＝9.0Hz)，7.58(d，2H，J＝9.0Hz)。
N-[4-(3-羟基-2-羟甲基-丙基)苄基]-2-硝基-N-吡啶-2-基甲基苯磺酰胺 0℃，在2-(4-氰基-苄基)-丙二酸二甲酯(8.47g，34.3mmol)的THF(30ml)的溶液中加入LiAlH4(1.0M的THF溶液，206ml，206mmol)，加热回流此混合物19.5小时。将此混合物冷却至0℃，并逐滴加入H2O(8ml)，随后加入NaOH(aq)(8ml)和H2O(24ml)。室温搅拌此混合物45分钟，然后干燥(MgSO4)并过滤。浓缩滤液得到黄色油(5.16g)。
0℃搅拌粗制二醇(5.13g)的CH2Cl2(105ml)溶液，同时加入Et3N(4.00ml，28.7mmol)，随后再加入2-硝基苯磺酰氯(5.90g，26.6mmol)。室温搅拌此溶液17小时，然后用盐水(70ml)冲洗。用CH2Cl2(3×20ml)提取水相。干燥(MgSO4)合并的有机相并浓缩。在硅胶上纯化粗产物(80％THF/己烷)得到黄色固体(3.06g)。
在乙腈中加热回流保护的二醇(2.87g)、2-吡啶甲基氯盐酸盐(1.36g，8.29mmol)、K2CO3(3.13g，22.6mmol)和KBr(90mg，0.76mmol)17.5小时。加入水(30ml)，用EtOAc(100ml)提取此混合物。用盐水(20ml)洗涤有机提取物，用EtOAc(3×20ml)提取合并的有机相。在硅胶上纯化粗产物(10∶10∶1 CH2Cl2/EtOAc/MeOH)，得到黄色油状标题化合物(1.83克，三步后9％)。1HNMR(CDCl3)δ2.00(m，1H)，2.56(d，2H，J＝7.5Hz)，3.64(m，2H)，3.78(m，2H)，4.57(s，2H)，4.60(s，2H)，7.02-7.14(m，5H)，7.23(d，1H，J＝7.8Hz)，7.56(m，2H)，7.67(d，2H，J＝3.9Hz)，7.97(d，1H，J＝7.8Hz)，8.41(d，1H，J＝4.8Hz)。
N-[4-(3-氰基-2-氰甲基-丙基)-苄基]-2-硝基-N-吡啶-2-基甲基-苯磺酰胺 0℃，在N-[4-(3-羟基-2-羟甲基-丙基)苄基]-2-硝基-N-吡啶-2-基甲基苯磺酰胺(1.80g，3.82mmol)和Et3N(1.30ml，9.33mmol)的CH2Cl2(30ml)溶液中加入MsCl(0.65ml，8.4mmol)。室温搅拌此溶液30分钟，然后浓缩。加入EtOAc(50ml)，然后用H2O(20ml)、饱和NaHCO3(aq)(2×15ml)和盐水(15ml)洗涤此混合物，然后干燥(MgSO4)并浓缩，得到黄色油(2.36g)。
加热回流在2∶1苯/H2O(30ml)中的粗制甲磺酸酯(2.36g)、十六烷基三甲基溴化铵(137mg，0.376mmol)和NaCN(1.3g，27mmol)的混合物18小时。用EtOAc(100ml)稀释此混合物，用H2O(20ml)、NaHCO3(aq)(2×20ml)和盐水(10ml)洗涤，然后干燥(MgSO4)并浓缩。在硅胶上纯化粗产物(80％EtOAc/己烷)，得到黄色油状的标题化合物。1HNMR(CDCl3)δ2.31-2.55(m，5H)，2.79(d，2H，J＝6.0Hz)，4.59(s，2H)，4.60(s，2H)，7.04-7.25(m，6H)，7.51-7.64(m，2H)，7.69(m，2H)，8.03(d，1H，J＝7.8Hz)，8.41(d，1H，J＝4.8Hz)。
甲磺酸5-甲磺酰基氧基-3-(4-{[(2-硝基-苯磺酰基)-吡啶-2-基甲基-氨基]-甲基}-苄基)-戊酯 加热回流在4∶1浓HCl(aq)/AcOH(25ml)中的N-[4-(3-氰基-2-氰甲基-丙基)-苄基]-2-硝基-N-)吡啶-2-基甲基-苯磺酰胺(2.36g，4.82mmol)17小时。加入水(80ml)，用EtOAc(5×25ml)提取此混合物。用饱和NaHCO3(5×20ml)和H2O(2×20ml)提取有机相。用浓HCl(aq)酸化合并的水提取物(pH1-2)，并用EtOAc(5×25ml)提取。干燥(MgSO4)合并的有机提取物，并浓缩得到棕色泡沫(1.25g)。
在粗制的二酸(1.25g)的THF(20ml)溶液中加入BH3Me2S(10M的BH3溶液，2.9ml，29mmol)。加热回流此混合物30分钟。加入甲醇(30ml)，并浓缩此溶液。将残留物溶解于MeOH(30ml)中，浓缩此溶液得到黄色泡沫(1.04g)。
0℃，在粗制的二醇(1.00g)和Et3N(1.4ml，10mmol)的CH2Cl2(20ml)溶液中加入MsCl(0.70ml，9.0mmol)。室温搅拌此混合物20分钟然后浓缩。残留物在EtOAc(30ml)和饱和NaHCO3(aq)(15ml)间分配。用饱和NaHCO3(aq)(15ml)和盐水(5ml)洗涤有机相，然后干燥(MgSO4)并浓缩。在硅胶上纯化此粗产物(10∶10∶1 CH2Cl2/EtOAc/MeOH)得到黄色油性的标题化合物(450mg，15％，3步)。1H NMR(CDCl3)δ1.75(m，4H)，2.01(m，1H)，2.59(d，2H，J＝7.2Hz)，3.00(s，6H)，4.23(m，4H)，4.58(s，2H)，4.59(s，2H)，7.02(d，2H，J＝8.1Hz)，7.11(m，3H)，7.25(d，1H，J＝8.4Hz)，7.53-7.61(m，2H)，7.69(m，2H)，8.00(m，1H)，8.42(m，1H)。 在二(3-氨基丙基)醚(1.40ml，10mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中加入三乙胺(4.2ml，30mmol)和2-硝基苯磺酰氯(5.42g，24mmol)。室温搅拌此溶液4小时。然后加入氯化铵水溶液(50ml)，有机层和水层分开，用二氯甲烷提取水层2次。然后干燥合并的有机层并浓缩，在硅胶上冲洗纯化得到的粘性黄色油，用5％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱液，得到所需从产物即呈浅黄色油状的二(3-硝基苯磺酰基氨基丙基)醚，收率为3.3g(66％)。1H NMR(CDCl3)δ1.79(qi，4H，J＝7.1Hz)，3.16(t，4H，J＝7.0Hz)，3.47(t，4H，J＝7.1Hz)，5.82(br s，2H)，7.71(m，8H)，7.83(d.2H，J＝6.6Hz)，8.11(d，2H，J＝6.6Hz)。 在无水DMF(60ml)中加热二(3-硝基苯磺酰基氨基丙基)醚(190mg，0.38mmol)和磨碎的并刚用炉烤干的碳酸铯(320mg，1.14mmol)溶液。然后用注射泵在反应液中加入甲磺酸、5-甲磺酰基氧基-3-(4-{[(2-硝基-苯磺酰基)-吡啶-2-基甲基-氨基]-甲基}-苄基)-戊酯(250mg，0.38mmol)的DMF(20ml)溶液，为时30小时。添加完毕后，再搅拌此反应混合物30小时。然后冷却此混合物，用300ml乙酸乙酯稀释，并用水反复提取。然后干燥并浓缩有机相，在硅胶上柱层析纯化残留物，用25％乙酸乙酯的二氯甲烷为洗脱液得到所需的产物(203mg，51％)。1H NMR(CDCl3)δ1.47-1.71(m，9H)，2.42(d，2H，J＝6.1Hz)，3.15-3.32(m，12H)，4.53(s，2H)，4.55(s，2H)，6.94(d，2H，J＝6.4Hz)，7.03(d，2H，J＝6.4Hz)，7.05(d，1H，J＝5.8Hz)，7.52(m，4H)，7.64(m，6H)，7.91(m，5H)，8.44(d，1H，J＝5.4Hz)。 将上述中间体(203mg，0.203mmol)的乙腈(8ml)溶液用碳酸钾(450mg，3.05rmol)和苯硫酚(0.25ml，2.44mmol)处理，室温搅拌此混合物过夜。标准处理程序后，在硅胶上层析纯化此粗制混合物(85∶12∶3二氯甲烷∶甲醇∶氢氧化铵)，得到白色泡沫状所需的产物(47mg，57％)。1H NMR(CDCl3)δ1.44-1.89(m，8H)，1.93(m，3H)，2.51(m，4H)，2.68(m，2H)，2.72(m，2H)，3.10(br s，2H(NH))，3.54(m，4H)，3.81(s，2H)，3.91(s，2H)，7.09(d，2H，J＝6.1Hz)，7.13(m，1H)，7.29(d，2H，J＝6.1Hz)，7.32(m，1H)7.64(t，1H，J＝5.8Hz)，8.54(d，1H，J＝5.4Hz)。
然后将此白色泡沫转化成相应的溴化氢盐得到AMD8922(42mg)。1H NMR(D2O)δ1.73(m，4H)，2.00(m，5H)，2.65(d，2H，J＝7.2Hz)；3.04-3.19(m，8H)，3.51(br s，4H)，4.38(s，2H)，4.58(s，2H)，7.32(d，2H，J＝7.5Hz)，7.43(d，2H，J＝7.5Hz，7.85(t，1H，J＝6.9Hz)，7.89(d，1H，J＝8.4Hz)，8.34(d，1H，J＝7.5Hz)，8.74(d，1H，J＝5.1Hz)；13C NMR(CDCl3)δ24.01，26.30，34.51，39.35，41.88，44.74，47.47，51.58，69.66，127.05，127.16，128.44，130.47(2C)，130.72(2C)，141.74，144.62，146.00，147.25。ES-MS m/z 411(M+H)；分析值(C25H38N4Ox4.0 HBrx3.5H2O)C，37.66；H，6.19；N，7.03；Br 40.09的实测值C，37.67；H，6.06；N，6.92；Br，40.24。
实施例5制备N-[4-(11-氧杂-1，7-二氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(溴化氢盐)(AMD8799，图5) 在二(3-氨丙基)醚(513mg，3.88mmol)和三乙胺(1.7ml，11.78mmol)的CH2Cl2(15ml)溶液中加入2-硝基苯磺酰氯(97％纯度，1.95g，8.53mmol)的CH2Cl2(5ml)溶液。标准处理程序后，在硅胶上层析纯化此粗制混合物(10∶90 EtOAc∶CH2Cl2)，得到黄色油状所需的产物(1.80g，92％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.79-1.87(tt，J＝6.0，6.0Hz，4H)，3.20-3.26(dt，J＝6.0，6.0Hz，4H)，3.49-3.53(t，J＝6.0Hz，4H)，5.75-5.79(t，J＝6.0Hz，2H)，7.29-7.76(m，4H)，7.86-7.88(m，2H)，8.13-8.16(m，2H)。 用标准大环环化条件(Bridger等人，J.Med.Chem.1995，38，366-378)制备所需的大环在加热至80℃上述中间体(1.8g，3.59mmol)的DMF(l80ml)(含有无水Cs2CO3(3.6g，11.05mmol))的溶液中逐滴加入N-(二乙氧基磷酰基)-O，O’-二(2-甲基磺酰基)二乙醇胺(Bridger等人，J.Med.Chem.1995，38，366-378)(1.9g，4.78mmol)的DMF(20ml)溶液。蒸发掉溶剂，在硅胶上柱层析纯化残留物(30∶70乙酸乙酯/CH2Cl2)，得到浅黄色泡沫状所需的大环化合物(1.25g，55％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.25-1.35(m.6H).1.87-1.91(m，4H)，3.05-3.14(m，4H)，3.41-3.48(m，12H)，3.96-4.07(m，4H)，7.61-7.63(m，2H)，7.68-7.71(m，4H)，8.05-8.09(m，2H)；13C(CDCl3，75.5MHz)δ16.51，16.60，30.63，44.68，44.74，44.92，47.24，63.07，63.14，67.69，124.52，131.34，132.26，133.58，134.11，148.32；C26H38N5O12PS2的精确质量m/z分析值707.17，测量值[M+H]+708.5。 将无水溴化氢(气体)的乙酸(8ml)饱和溶液加到用玻璃塞封闭的圆底烧瓶中的上述大环化合物(1.25g，1.77mmol)中。室温搅拌此溶液过夜，加入50ml二乙醚。让形成的白色沉淀沉降于烧瓶的底部，倾析掉上清液。将此白色固体溶解于30ml甲醇中，用过量K2CO3搅拌30分钟并浓缩。用300ml乙酸乙酯稀释残留物，用硅藻土短柱过滤除去固体。蒸发滤液，在硅胶上柱层析纯化(3∶3∶94甲醇/NH4OH/CH2Cl2)得到浅黄色油状所需的中间体(736mg，74％)。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ1.87-1.91(b，4H)，2.85-2.88(b，4H)，3.39-3.91(t，J＝6.0Hz，4H)，3.49-3.56(m，8H)，7.59-7.70(m，6H)，7.98-8.01(m，2H)；13C(CDCl3，75.5MHz)δ29.61，47.90，48.71，68.36，124.37，131.07，132.17，133.45，133.77，148.65；C22H29N5O9S2的精确质量m/z分析值571.14，测量值[M+H]+572.20。 将上述中间体(736mg，1.29mmo1)与N-[1-亚甲基-4-(氯亚甲基)亚苯基]-N-(2-硝基苯磺酰基)-2-(氨甲基)吡啶(Bridger等人，US Ser.No.09/111,895)(980mg，2.27mmol)和K2CO3(560mg，4.06mmol)在CH3CN(13ml)中反应，然后在硅胶上柱层析纯化此粗制的中间体(10∶90乙酸乙酯/CH2Cl2)，得到所需的浅黄色泡沫状的中间体(799mg，64％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.80-1.84(b，4H)，2.58-2.62(t，J＝7.1Hz，4H)，3.38-3.42(m，8H)，3.50-3.55(m，6H)，4.59(b，4H)，7.06(b，4H)，7.11-7.15(m，1H)，7.18-7.21(d，J＝7.8Hz，1H)，7.54-7.70(m，10H)，7.87-7.89(d，J＝7.8Hz.2H)，7.99-8.01(d，J-7.8Hz，1H)，8.41(d，1H)；13C(CDCl3，75.5MHz)δ29.93，44.77，46.17，51.28，52.00，52.30，59.46，67.21，122.57，124.11，128.46，128.82，130.48，131.06，131.71，133.38，133.53，133.61，134.07，136.67，138.20，147.93，149.26，155.62；C42H46N8O13S3的精确质量m/z分析值966.23，测量值[M+H]+967.20。
AMD8779N-[4-(11-氧杂-1，7-二氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(溴化氢盐) 将上述中间体(780mg，0.81mmo1)和无水K2CO3(1.36g，9.86mmol)和苯硫酚(644mg，5.84mmol)在无水DMF(8ml)中反应。在硅胶(2mm板)上层析(chromatron)纯化此粗制产物，用3∶3∶94 CH3OH/NH4OH/CH2Cl2得到浅黄色油性的游离胺(170mg，51％)。将此游离胺再溶解于无水溴化氢(气体)饱和的乙酸(5ml)中，室温搅拌此溶液30分钟，然后加入50ml乙醚。让形成的白色沉淀沉降于烧瓶的底部，倾析掉上清液。用乙醚倾析(5次)洗涤白色沉淀，残留的痕量溶剂通过用氮气吹净烧瓶除去，然后在50℃真空干燥过夜，得到呈白色固体的AMD8879(140mg，46％)。1HNMR(D2O，300MHz)δ1.99-2.03(b，4H)，2.85-2.88(b，4H)，3.25-3.29(b，8H)，3.73-3.76(t，J＝5.3Hz，4H)，3.82(s，2H)，4.41(s，2H)，4.55(s，2H)，7.39-7.41(d，J＝8.1Hz，2H)，7.52-7.55(d，J＝8.1HZ，2H)，7.76-7.79(m，2H)，8.22-8.24(m，1H)，8.68-8.70(m，1H)；13C(D20，75.5MHz)δ25.58，44.74，46.92，49.16，49.98，51.33，55.08，70.39，126.57，130.48，130.95，131.41，137.27，143.11，47.01，147.92；C24H37N5O的精确质量m/z分析值411.30，测量值[M+H]+412.30；分析值(C24H37N5O·4.1HBr·4.1H2O)C，35.28，H，6.08；N，8.57；Br，40.09。测量值C，35.42；H，6.07；N，8.50；Br.39.92。
实施例6制备N-[4-(11-硫杂-1，7-二氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(溴化氢盐)(AMD8834，图6) 将3，3’-硫代二丙腈(1.81g，12.91mmol)的THF溶液与BH3/Me2S(10M，4.5ml，45mmol)反应，用6N盐酸(30ml)标准处理后，用10N NaOH(18ml)处理，蒸发掉溶剂后得到粗制二胺(1.4g，73％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.18-1.26(m，4H)，1.68-1.79(m，4H)，2.55-2.60(t，J＝7.5Hz.4H)，2.77-2.81(t，J＝6.0Hz，4H)。无需进一步处理，直接将其用于下一步骤。 将上述二胺(1.41g，9.51mmol)与2-硝基苯磺酰氯(97％纯度，4.7g，20.57mmol)的CH2Cl2(40ml)(含有三乙胺(4.2ml，29.01mmol)反应，随后在硅胶上柱层析纯化此粗制产物(10∶90 EtOAc/CH2Cl2)得到所需的黄色油性硝基苯磺酰基衍生物(4.5g，91％)。1HNMR(CDCl3，300MHz)δ1.78-1.87(tt，J＝6.8，6.8Hz，4H)，2.52-2.57(t，J＝7.5m，4H)，3.18-3.25(dt，J＝6.0，6.0Hz.4H)，5.45-5.49(t，J＝6.0Hz，2 H)，7.75-7.78(m，4H)，7.78-7.86(m，2H)，8.13-8.16(m，2H)。 如实施例5所述进行大环环化将上述中间体(2.6g，5.01mmol)和无水Cs2CO3(4.9g，15.04mmol)的DMF(250ml)溶液与必需的二甲磺酸酯(2.4g，6.04mmol)的DMF(20ml)溶液反应。蒸发溶剂，在硅胶上柱层析纯化粗产物(30∶70乙酸乙酯/己烷)，得到黄色泡沫状所需的大环化合物(810mg，23％)。1HNMR(CDC13，300MHz)δ1.11-1.33(m，6H)，1.92-1.97(m，4H)，2.61-2.65(t，J＝6.0Hz，4H)，3.20-3.25(m，4H)，3.40-3.50(m，8H)，3.97-4.05(m，4H)，7.63-7.73(m，6H)，8.05-8.09(m，2H)。 将上述中间体(810mg，1.12mmol)溶解于无水溴化氢(气体)的乙酸(10ml)饱和溶液中。蒸发溶剂后得到粗制胺(596mg，91％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.96-2.05(m，4H)，2.60-2.65(t，J＝7.5Hz，4H)，2.89-2.93(t，J＝6.0Hz，4H)，3.35-3.38(t，J＝4.5Hz，4H)，3.42-3.46(t，J＝6.0Hz，4H)，7.63-7.73(m，6H)，7.96-7.99(m，2H)。无需进一步纯化，可将其直接用于下一步骤。 将上述胺(596mg，1.01mmol)与N-[1-亚甲基-4-(氯亚甲基)亚苯基]-N-(2-硝基苯磺酰基)-2-(氨甲基)吡啶(Bridger等人，US Ser.No.09/111,895)(750mg，1.78mmol)和K2CO3(500mg，3.62mmol)的CH3CN溶液反应。在硅胶上层析纯化粗产物(10∶90乙酸乙酯/CH2Cl2)，得到浅黄色油性的所需中间体(400mg，40％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.94-2.05(m，4H)，2.58-2.62(t，J＝6.0Hz，4H)，2.68-2.73(t，J＝7.5Hz，4 H)，3.31-3.36(t，J＝7.5Hz，4H)，3.43-3.48(t，J＝7.5Hz，4H)，3.56(s，2H)，4.60(s，2H)，4.75(s，2H)，7.10-7.20(m，7H)，7.58-7.71(m，9H)，7.82(d，2H)，8.0(d，1H)，8.45(d，1H)。
AMD8834N-[4-(11-硫杂-1，7-二氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(溴化氢盐) 将上述中间体(400mg，0.41mmol)和无水K2CO3(674g，4.88mmol)和苯硫酚(322mg，2.92mmol)在无水DMF(8ml)中反应。在硅胶(2mm板)上快速层析纯化粗产物，用3∶3∶94 CH3OH/NH4OH/CH2Cl2得到浅黄色油状的游离胺(107mg，61％)。将此游离胺重新溶解于饱和无水溴化氢(5ml)的乙酸溶液中，在室温搅拌此溶液30分钟，然后加入50m1乙醚。让形成的白色沉淀沉降于烧瓶底部，倾析掉上清液。用乙醚倾析(5次)洗涤固体，残留的痕量溶剂通过用氮气吹净烧瓶除去，然后在50℃真空干燥干燥，得到呈白色固体的AMD8834(196mg，89％)。1HNMR(D2O，300MHz)δ2.03-2.07(m，4H)，2.88(m，8H)，3.29-3.32(m，4H)，3.35-3.39(t，J＝6.2Hz，4H)，3.80(s，2H)，4.43(s，2H)，4.61-4.62(d，J＝3.0Hz，2H)，7.45-7.48(d，J＝7.8Hz，2H)，7.52-7.55(d，J＝7.8Hz 2H)，7.84-7.95(m，2H)，8.34-8.42(m，1H)，8.75(m，1H)；13C(D2O，75.5MHz)δ24.30，30.12，45.09，47.92，48.41，50.27，51.55，55.48，127.27，127.42，130.33，130.99，131.60，137.59，145.10，145.76，146.96；C24H37N5S的精确质量m/z分析值427.28，测量值[M+H]+428.30；分析值(C24H37N5S)4.3 HBr 2.6 H2O)C，35.05；H，5.70；N，8.52；S，3.90；Br，41.78。测量值C，35.18；H，5.52，N，8.48；S，3.89；Br，41.53。
实施例7制备N-[4-(11-硫杂(sulfoxo)-1，7-二氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(AMD9424，图7)将Oxone(504mg，0.82mmol)的水(15ml)溶液逐滴加入冷冻(-10℃)搅拌的N-[4-(11-硫杂-1，7-二氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(350mg，0.82mmol)的甲醇(15ml)溶液中。在-10℃搅拌此混合物10分钟，然后将其倾倒入饱和的NaHCO3溶液(40ml)中，用CHCl3(4×50ml)提取。干燥合并的有机层(MgSO4)并真空浓缩。在硅胶上层析纯化粗产物(3％MeOH/CH2Cl2)，得到AMD9424(75mg，21％)。1HMR(CDCl3，300MHz)δ1.90-2.01(m，2H)，2.06-2.17(m，2H)，2.59-2.85(m，14H)，3.07-3.18(m，2H)，3.57(s，2H)，3.83(s，2H)，3.92(s，2H)，7.17(dd，J＝7.5，4.7Hz，2H)，7.23(d，J＝7.7Hz，2H)，7.32(d，J＝7.7Hz，2H)，7.65(td，J＝7.5，1.7Hz，1H)，8.56(d，J＝4.9Hz，1H)；13C(CDCl3，75.5MHz)δ24.36(2)，47.52(2)，48.30(2)，52.38(2)，52.81(2)，53.55，54.87，59.11，122.35，122.73，128.67(2)，129.23(2)，136.85，138.00，139.43，149.68，160.07；C24H37N5O-S的精确计算质量443，实测值m/z 444[M+H]+；(C24H37N5OS·0.6C4H10O·0.4H2O)的分析计算值C，64.02；H，8.91；N，14.14，实测值C，64.06，H，8.72，N，13.98。
实施例8制备N-[4-(11-硫杂(sulfono)-1，7-二氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(溴化氢盐)(AMD9408，图8)将二碳酸二-叔-丁酯(278mg，1.3mmol)加入N-[4-(11-硫杂-1，7-二氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(136mg，0.32mmol)的THF(3.5ml)和H2O(0.1ml)溶液中，并在室温氮气下搅拌此混合物过夜。浓缩此混合物，残留物在CH2Cl2(20ml)和H2O(10ml)间分配。用H2O(3×10ml)和饱和NaCl溶液(10ml)洗涤分开的有机层，干燥(MgSO4)，并真空浓缩。在硅胶上快速层析(3％MeOH/CH2Cl2)，得到澄清油状的所需的BOC中间体(240mg，100％)。1HMR(CDCl3，300MHz)δ1.31-1.58(m，27H)，1.82-1.91(m，4H)，2.58-2.80(m，8H)，3.29-3.44(m，8H)，3.62(s，2H)，4.43(s，2H)，4.51(d，J＝7.4Hz，2H)，7.12-7.23(m，6H)，7.65(t，J＝7.5，1H)，8.54(d，J＝4.0Hz，1H)。
将Oxone(197mg，0.32mmol)的水(2ml)溶液逐滴加入冷冻(-10℃)搅拌的上述BOC中间体(232mg，0.32mmol)的甲醇(2ml)溶液中。在-10℃搅拌此混合物10分钟，然后将其倾倒入饱和的NaHCO3溶液(5ml)中，用CHCl3(4×10ml)提取。干燥分开的有机层(MgSO4)并真空浓缩。在硅胶上层析纯化粗产物(3％MeOH/CH2Cl2)，得到所需的砜(73.3mg，30％)。1HMR(CDCl3，300MHz)δ1.39-1.50(m，27H)，2.06-2.14(m，4H)，2.60-2.68(m，4H)，3.10(t，J＝7.5Hz，1H)，3.29-3.44(m，8H)，3.62(s，2H)，4.43(s，2H)，4.52(d，J＝4.8Hz，2H)，7.15-7.21(m，6H)，7.65(t，J＝7.5，1H)，8.54(d，J＝4.4Hz，1H)；C39H61N5O8S的确切计算值759，实测值m/z 760[M+H]+。
将此砜(73mg，0.96mmol)溶解于最小量的乙酸中，并用HBr的乙酸(5ml)饱和溶液处理。在氮气下、室温搅拌此混合物60小时，加入乙醚(100ml)。形成沉淀，并让其沉降于烧瓶底部，倾析掉上清液。用乙醚(5×100ml)洗涤白色固体，残留的痕量溶剂通过用氮气吹净烧瓶除去，然后在55℃真空干燥过夜，得到呈白色固体的AMD9408(70mg，84％)。1HMR(CDCl3，300MHz)δ2.36-2.44(m，4H)，2.84-2.87(m，4H)，3.21-3.23(m，4H)，3.38(t，J＝5.4Hz，4H)，3.67-3.70(m，4H)，3.73(s，2H)，4.34(s，2H)，4.39(s，2H)，7.44-7.51(m，6H)，7.93(td，J＝7.8，1.7Hz，1H)，8.58(d，J＝6.1Hz，1H)；13C(CDCl3，75.5MHz)δ18.76(2)，45.41(2)，47.04(2)，47.79，50.57(2)，51.83，51.88(2)，56.71，127.90，128.23，130.07，131.03(2)，131.29(2)，138.44，144.62，145.95，146.77；C24H37N5O2-S的精确计算质量459，实测值m/z 460[M+H]+；(C24H37N5O2S·4HBr·3H2O)的分析计算值C，33.14；H，5.49；N，8.05，Br，40.42，实测值C，33.36，H，5.39，N，7.70，Br，40.25。
实施例9N-[4-(3-羧杂(carboxo)-1，4，7-三氮杂环十四烷基)-1，4-亚苯基二(亚甲基)]-2-(氨甲基)吡啶(图9)按以上实施例所用的方法合成此化合物。图9提供了这种化合物的结构。
实施例10在FLIPR(分子装置)上测得的趋化因子诱导的Ca流的抑制试剂加样染料将Fluo-3，AM(分子探针F-1241)溶于无水DMSO中，分成等份冰冻储藏。为了提高染料在加样介质中的溶解度，在就使用前在Fluo-3储藏溶液中加入10％(w/v)复合酸(pluronic acid)(Molecular Probes F-127)。
流动缓冲液HBSS+20mM Hepes缓冲液+0.2％BSA，pH7.4。HBSS 10x[(w/o酚红和碳酸氢钠(Gibco 14 065-049)]；Hepes缓冲液1M(Gibco 15 630-056)，BSA(Sigma A3675)。真空过滤该流动缓冲液，冷藏最多5日。在实验中使用前，在水浴中将缓冲液在37℃温热。
拮抗剂用流动缓冲液稀释测试化合物，并加到黑色微量滴定板的4个孔中(每种化合物平行测量4次)。使用了下列对照孔100％响应对照(无抑制)，加入流动缓冲液；100％抑制对照以诱导Ca流所需的浓度的5倍加入趋化因子。
激动剂(趋化因子)板的制备用流动缓冲液将趋化因子稀释到比刺激细胞所需的浓度高4倍的浓度(即对于SDF-1α，2.5nM)。在未处理的96-孔Sero孔化合物平板(International Medical，Sterilin code 611F96)中加入趋化因子。在阴性对照孔(基线监测)中，加入流动缓冲液而不是趋化因子。作为检查染料负荷效率的阳性对照，还加入了20μM毛地黄皂苷(最终浓度)。在FLIPR(37℃)中培育激动剂平板15-30分钟。
用于测量SUP-T1细胞中SDF-1α诱导的Ca流抑制的细胞负荷方案在室温(RT)下离心SUP-T1细胞，重新悬浮在负荷培养液(RPMI-1640，含有2％FBS和4μM Fluo-3，AM)中。室温培育细胞45分钟，然后用流动缓冲液洗涤2次，然后在流动缓冲液中室温下培育10分钟。离心细胞，以3×106细胞/毫升的密度重新悬浮在流动缓冲液中。在各黑色微量滴定板(Costar 3603)孔中加入100微升等份的细胞悬液(3×105细胞)，各孔已含有50微升测试化合物的溶液(浓度是所需最终化合物浓度的3倍)。然后室温下温和离心微量滴定板。用显微镜确认细胞均匀铺展在微量滴定板孔的底部，测试前在FLIPR(37℃)中培育微量滴定板10分钟。
在FLIPR上作为时间的函数的荧光测量值调节FLIPR设定值(照相机曝光时间和激光功率)，获得在8,000-10,000单位之间的最初荧光值。监测20秒基线后，通过具有黑色滴管头的自动化移液管，加入激动剂(趋化因子)(50微升)。在微量滴定板的所有孔中每隔2秒(开始的2分钟)，然后每隔6秒(另2分钟)同时测量荧光。用FLIPR软件计算每组4个相同孔(1个测试样品)中的平均Ca流。
用上述方法在SUP-T1细胞中测试了本发明的化合物对SDF-1α诱导的Ca-流的抑制。实施例1-9所述的化合物在20微克/毫升时抑制SDF-1α诱导的Ca流大于50％。
实施例11在MT-4细胞中抑制HIV-1(NL4.3)复制的试验如前所述(Bridger等，J.Med.Chem.1999，42，3971-3981；De Clercq等，Proc.Natl.Acad.Sci.1992，89，5286-5290；De Clercq等，Antimicrob.AgentsChemother.1994，38，668-674；Bridger等，J.Med.Chem.1995，38，366-378)进行HIV-1 NL4.3(或IIIB)复制的抑制试验。平行进行抗HIV活性和细胞毒性测量。它们基于在不同浓度的测试化合物存在下，已感染HIV的MT-4细胞的存活率。MT-4细胞增殖5日后，用基于四唑(鎓)的显色溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基四唑溴化鎓(MTT)法在96-孔微量滴定板中定量测定存活细胞的数量。在所有这些试验中，病毒输入(病毒感染复数，MOI)是0.01，或者是50％细胞培养感染剂量(CCID50)的100倍。EC50定义为保护50％病毒感染的细胞不受病毒使细胞致病所需的浓度。
如上测试本发明的化合物。实施例1-9所述的化合物抑制HIV-1复制的EC50范围为0.003-33.3μg/ml。
实施例12对胶原诱导的关节炎的抑制证明与本发明化合物相关的化合物可抑制突变型小鼠模型中胶原诱导的关节炎(CIA)。
试验动物的处理如下所述将胶原注射到由十只小鼠组成的对照组。由八只小鼠组成的处理组也注射胶原，在胶原注射后的14天期间内以5mg/ml的浓度，用渗透泵静脉注射1，1′-[1，4-亚苯基二(亚甲基)]二-1，4，8，11-四氮杂环十四烷(AMD 3100，见图10)(200μl，Alga，0.5μl/小时)进行处理。
突变型小鼠Huang S等人，Science 2591742，(1993)已描述了编码IFN-γ受体(IFN-γRKO)α链的基因被破坏的突变型小鼠品系(129/Sv/Ev)的传代和基本特征。将这些IFN-γRKO小鼠与DBA/1野生型小鼠回交10代，得到用于本研究的DBA/1 IFN-γRKO小鼠。在Leuven大学的实验动物中心进行IFN-γRKO小鼠和野生型小鼠的交配。实验是在8到12周龄大的小鼠上进行的，但在每个实验中，突变型小鼠和野生型小鼠年龄匹配的限制为5天。每个实验组中雄性和雌性小鼠的比例保持在0.8和1.3之间。
胶原诱导的关节炎的诱导和关节炎的临床确认用以下方法进行胶原诱导的关节炎(见Vermeire等人，Int.J.Immunol.1585507-5513，(1997))。6℃，以2mg/ml通过搅拌将天然鸡胶原II(EPC.Owensville.MO)溶解在0.05M醋酸中过夜，然后用等体积的含有1.5mg/ml热致死乳酪分枝杆菌(Difco，Detroit，MI)的不完全弗氏佐剂(IFA)或完全弗氏佐剂(CFA)乳化。通过在尾底部单次皮内注射100μl乳剂致敏小鼠。每天检查小鼠患关节炎的征兆。对每条肢体用计分系统记录病重情况。计分0正常；计分1一个关节红色和/或肿胀；计分2多于一个关节红色和/或肿胀；计分3整个爪子红色和/或肿胀；计分4畸形或僵硬。
组织学检查在缓冲过的盐水-B5固定剂(10％带汞的福尔马林)中固定脾和前肢及后肢。或者，在10％福尔马林或纯甲醇中固定组织(见Vermeire等人，J.Immunol.，158，5507-5513，1997)。然后用甲酸将四肢脱钙过夜。用苏木精和曙红染色4微米厚的石蜡切片。用以下三个参数评估关节炎的严重度单形和分叶核细胞的渗入、滑膜的增生和parmus的形成。每个参数都以0-3量度的计分(无；弱、中等和严重)记录。
体内抗体处理通过对姥鲛烷致敏的无胸腺裸鼠的腹腔内接种(nu/nu NMRI背景)生长的杂交瘤产生单克隆抗体。通过在小鼠抗大鼠κ链单克隆抗体上的亲和层析纯化抗MuIFN-γ(F3，率IgG24)的中和单克隆抗体(Billiau A等人，J.Immunol.1401506，(1988))。中和滴度(终点稀释度，相应于30单位/ml小鼠IFN-γ对由门果病毒攻击的小鼠I929细胞的抗病毒作用中和的50％)是1053U/ml(IgG含量，1.4mg/ml)。用杂交瘤C17.8(由Dr.G.Trinchieri，Wistar Institute，Philadelphia，PA，友情提供)产生IgG24抗体对鼠科IL-12的中和率。在蛋白质G(Pharmacia Uppsala，Sweden)上亲和层析抗体。从用20F3(大鼠x小鼠)杂交瘤(美国典型培养物保藏中心，MD)接种的胸腺较少的裸鼠腹水制备抗鼠科IL-6抗体。在抗大鼠κ链单克隆抗体-琼脂糖凝胶柱上亲和层析大鼠IgG抗体。中和滴度(终点稀释度，相应于10U鼠科1L6/ml对细胞生长作用中和的50％)为1055(IgG含量2.9mg/ml)。用无关的大鼠IgG24作为同位素对照，它是从大鼠浆细胞瘤(经Dr.H.Bazin，University of Louvain.Medical School.Brussels.Belgium允许得到的)的腹水制备的。用在Hiload Q琼脂糖凝胶上的阴离子交换层析纯化IgG，并在Superdex 200(Pharmacia)上作凝胶过滤。用显色鲎变形细胞裂解物测定法(LabiVitrum，Stockholm，Sweden)测试抗IFNγ、抗IL-12、抗IL-6和不相关IgG24的内毒素含量，发现内毒素均少于2ng/ml。用200μl无热原盐水注射。
处理14天后，对照组的10只大鼠中有七只证实患了关节炎，而用AMD3100处理的动物(8只)中只有1只证明患有关节炎。处理后20天，唯一的那只被处理的动物(患病的)不发展关节炎病理。另外，接受处理的动物与对照动物相比证明没有任何明显的体重减少。另外，接受处理的动物维持了健康动物(没有注射胶原)的体重。
实施例13成胶质细胞瘤的治疗可将本发明的化合物用于治疗成胶质细胞瘤、纤维瘤、星形细胞瘤或骨髓瘤(侵袭中枢神经系统的)。这些化合物的用法可按照标准临床实践和流程，按上述实施例提供的剂量，并按照临床目的(如显影、免疫学或其它方法)。
例如，Sehgal等人，J.of Surg.Oncolo.6999-104(1998)(″Sehgal I″)和Sehgal等人，J.of Surg.Oncolo.69239-248(1998)(″Sehgal II″)已报道了在成胶质细胞瘤肿瘤细胞增殖中趋化因子受体结合的病原学或与其相关的内容。CXCR4与其受体的结合对成胶质细胞瘤细胞形成和/或增殖具有重要的作用。用本发明的化合物抑制CXCR4与其天然受体配体的结合，为中枢神经系统的肿瘤(由趋化因子如CXCR4调节或与其相关)的治疗提供了一种新药。
实施例14非小细胞肺癌的治疗可将本发明的化合物用于治疗非小细胞肺癌。这些化合物的用法可按照标准临床实践和流程，按上述实施例提供的剂量，并按照临床目的(如显影、免疫学或其它方法)。
例如，已发现在非小细胞肺癌中CXC趋化因子调节血管生成或与其有关(见Arenbgerg等人，J.of Leukocyte Biol62554-562(1997)；和Moore等人，TCM，vol8(2)51-58(1998)Elsevier Science.Inc.)。CXC趋化因子与它们各自受体的结合对非小细胞肺癌形成和/或增殖(由增加的生成血管活性促进)具有重要的作用。用本发明的化合物抑制CXC趋化因子与它们天然受体配体的结合，为肿瘤如非小细胞肺癌(由趋化因子水平的增加调节或与其相关)的治疗提供了一种新药。
权利要求
1.如通式的大环化合物，和其药学上可接受的盐和受保护的形式V-CR2-Ar1-CR2NR-(CR2)x-Ar2其特征在于，其中V是9-24元取代的杂环，且其含有2-4个任选地被取代的、彼此被2个或多个任选地被取代的碳原子隔开的胺氮原子，且所述杂环可任选地包括稠合的芳环或杂芳环；且其中(a)所述的杂环含有至少一个O或S，且所述的O或S与任何相邻的杂原子距离至少2个碳原子，且所述的S任选地被氧化，或(b)所述的环中至少一个碳原子被吸电子取代基取代，或(c)(a)和(b)二者；且其中各R分别是H或含有1-6C的直链、支链或环烷基；x是0-4；Ar1是未取代的或取代的芳族或杂芳族部分；和Ar2是未取代的或取代的芳族或杂环基团。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的各R分别是H或甲基。
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的x为1。
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的Ar1是1，3或1，4-亚苯基。
5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的Ar2是苯基或吡啶基。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的V是12-16元杂环。
7.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的V含有O或S作为环成员。
8.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的x是0-2。
9.如权利要求8所述的化合物，其特征在于，所述的x为1-2。
10.如权利要求7所述的化合物，其特征在于，所述的S被氧化。
11.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的V中至少一个碳原子被1-2个卤素基团取代。
12.如权利要求9所述的化合物，其特征在于，所述的卤素基团是氟基。
13.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的V中至少一个碳原子被＝O取代。
14.权利要求1所述的化合物的用途，其特征在于，可用于治疗受趋化因子受体介导的疾病。
15.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述的受体是CXCR4或CCR5。
16.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述的疾病是关节炎。
17.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述的疾病是多发性硬化。
18.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述的疾病是哮喘。
19.如权利要求12所述的用途，其特征在于，所述的疾病是癌症。
20.如权利要求17所述的用途，其特征在于，所述的癌症与实体瘤、淋巴瘤、转移性肿瘤、成胶质细胞瘤、和其它恶性肿瘤相关。
21.如权利要求17所述的用途，其特征在于，所述的癌症是非小细胞肺癌、肺癌、乳房癌、前列腺癌、和其它器官的癌症。
22.如权利要求17所述的用途，其特征在于，所述的癌症是白血病或淋巴瘤。
23.如权利要求13所述的用途，其特征在于，所述的疾病是HIV或FIV。
24.一种药物组合物，其特征在于，所述的组合物含有权利要求1所述的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂。
全文摘要
本发明涉及新的抗病毒化合物、药物组合物及其用途。具体地说，本发明涉及单环多胺，其在标准抗HIV或FIV感染细胞试验中具有活性，而且还具有其它关于结合调节若干哺乳动物胚胎发育过程的趋化因子受体配体的生物活性。
文档编号C07D403/12GK1411456SQ00817330
公开日2003年4月16日 申请日期2000年12月15日 优先权日1999年12月17日
发明者G·J·布里杰, E·M·伯林格, 王忠仁, D·斯科斯, R·T·斯基勒, D·E·博古茨基 申请人:阿诺麦德股份有限公司