作为β－内分泌抑制剂用于治疗阿耳茨海默氏病的2,3,4,6－四取代吡啶衍生物的制作方法

专利名称：作为β－内分泌抑制剂用于治疗阿耳茨海默氏病的2,3,4,6－四取代吡啶衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类新的2，3，4，6-取代的吡啶衍生物，它们可用作β-分泌酶的抑制剂，适用于治疗与β-分泌酶有关的疾病，譬如阿耳茨海默氏病。
背景技术：
阿耳茨海默氏病的特征是淀粉样蛋白在脑中以细胞外噬斑和细胞内神经原纤维缠结的形式异常沉积。淀粉样蛋白蓄积的速率是形成、聚集和从脑外溢的速率的结合。人们普遍接受的是淀粉样蛋白噬斑的主要组成是4kD淀粉样蛋白(βA4，也称作Aβ，β-蛋白和βAP)，它是更大分子量前体蛋白的蛋白酶解产物。淀粉样蛋白前体蛋白具有受体样结构，带有大的胞外结构域、跨膜区和短胞质尾区。Aβ结构域包括APP的胞外和跨膜结构域两者的多个部分，因此其释放意味着存在两种不同蛋白水解途径来产生其NH2-和COOH-末端。至少存在两种从膜释放APP并且产生APP的可溶性COOH-截短形式(APPs)的分泌机制。从膜释放APP及其片段的蛋白酶称作分泌酶。大多数APPs是由公认的α-分泌酶释放的，其在Aβ蛋白内裂解释放α-APPs并且阻止了完整Aβ的释放。少部分的APPs蛋白是由β-分泌酶(“β-分泌酶”)释放的，其在APP的NH2-末端裂解并产生包含全部COOH-末端片段(CTFs)。
因此，β-分泌酶或β-位点淀粉样蛋白前体蛋白裂解酶(“BACE”)的活性造成APP的异常裂解，产生Aβ，以及β-淀粉样蛋白噬斑蓄积在脑中，后者是阿耳茨海默氏病的特征(参见R.N.Rosenberg，Arch.Neurol.，vol.59，Sep 2002，pp.1367-1368；H.Fukumoto等，Arch.Neurol.，vol.59，Sep 2002，pp.1381-1389；J.T.Huse等，J.Biol.Chem.，vol.277，No.18，2002年5月3日出版，pp.16278-16284；K.C.Chen和W.J.Howe，Biochem.Biophys.Res.Comm，vol.292，pp 702-708，2002)。所以，能够抑制β-分泌酶或BACE的治疗剂可以用于阿耳茨海默氏病的治疗。
本发明的化合物通过抑制β-分泌酶或BACE的活性，由此防止不溶性Aβ形成和阻止Aβ的产生而能够用于治疗阿耳茨海默氏病。
发明概述本发明涉及通式(I)所示的2，3，4，6-取代的吡啶基衍生物和其单一的对映体和非对映体，以及其药学上可接受盐，它们可用作β-分泌酶的抑制剂 本发明还涉及包含有效量式(I)化合物或其药学上可接受盐以及药学上可接受的载体的药物组合物。本发明也涉及治疗哺乳动物与β-分泌酶有关的疾病(如阿耳茨海默氏病)的方法以及本发明的化合物和组合物在治疗这类疾病中的应用。
发明详述本发明涉及式(I)化合物
其中X选自基团 Y选自基团(1)卤素，(2)氰基，(3)-C1-6烷基，和(4)-C6-10芳基；A选自(1)氢，(2)-C1-10烷基，和(3)-C2-10链烯基，其中所述烷基或链烯基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(a)卤素，(b)-C3-12环烷基，(c)-OH，(d)-CN，(e)-O-C1-10烷基，(f)苯基，或(g)杂芳基，并且所述苯基和杂芳基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(i)卤素，(ii)-OH，(iii)-CN，(iv)-O-C1-10烷基，(v)-C1-10烷基，或(vi)-C3-12环烷基；Q是-C0-3烷基，其中该烷基是未取代的或被一个或多个下列基团取代(1)卤素，(2)-C3-12环烷基，(3)-OH，(4)-CN，(5)-O-C1-10烷基，和(6)-C1-10烷基；R1选自(1)选自苯基和萘基的芳基，(2)杂芳基，(3)-C1-10烷基，和(4)-C3-8环烷基，该环烷基任选与C6-10芳基稠合，其中所述烷基、环烷基、芳基或杂芳基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(a)卤素，(b)-C1-10烷基，其中该烷基是未取代的或被卤素取代，(c)-OH，(d)-CN，(e)-O-C1-10烷基，(f)-C3-12环烷基，或(g)-NR10R11，其中R10和R11选自(i)氢，(ii)-C1-10烷基，和(iii)-C0-6亚烷基-C6-10芳基；R8和R9选自
(1)氢，(2)C1-10烷基，和(3)C0-6亚烷基-C6-10芳基；R4选自基团(1)-C1-10烷基，(2)杂芳基，和(3)-NR12R13，其中R12和R13选自(a)氢，(b)C1-10烷基，和(c)C0-6亚烷基-C6-10芳基，或者R12和R13代表4个、5个或6个选自CRaRb、S、NRc和O的环原子，并且与它们所连接的氮一起构成非芳族环，其中所述烷基、亚烷基和杂芳基是未取代的或被一个或多个下列基团取代(a)卤素，(b)-OH，(c)-CN，(d)-O-C1-10烷基，(e)-C1-10烷基(f)-C3-12环烷基，(g)选自苯基和萘基的芳基，(h)杂芳基，或(i)-C(＝O)-C1-10烷基，并且，其中所述芳基和杂芳基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(i)卤素，(ii)-OH，(iii)-CN，(iv)-O-C1-10烷基，(v)-C3-12环烷基，或(vi)-C1-10烷基；R7选自基团
(1)氢，(2)-C1-10烷基，(3)-C3-7环烷基，(4)-C6-10芳基，和(5)杂芳基，其中所述烷基、环烷基、芳基和杂芳基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(a)卤素，(b)-OH，(c)-CN，(d)-O-C1-10烷基，(e)-C3-12环烷基，(f)由4个、5个或6个选自CRaRb、S、NRc和O的环原子构成的非芳族环基，(g)选自苯基和萘基的芳基，或(h)-C5-12杂芳基，其中所述环烷基、芳基或杂环基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(i)卤素，(ii)-OH，(iii)-CN，(iv)-O-C1-10烷基，(v)-C3-12环烷基，或(vi)选自苯基和萘基的芳基；或者，R4和R7可以连接成-CH2CH2CH2-基团；R5和R6独立地选自(1)氢，(2)-C1-10烷基，(3)-C2-10烯基，(4)-C2-10炔基，和(5)-C1-10亚烷基-C3-12环烷基；其中所述烷基、亚烷基、环烷基、烯基或炔基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(a)卤素，(b)-OH，(c)-CN，(d)-C1-10烷基，(e)-C3-12环烷基，(f)-O-C1-10烷基，其中该烷基是未取代的或被-O-C1-10烷基-(-O-C1-10烷基)m取代，(g)杂芳基，其中该杂芳基可以是未取代的或被一个或多个以下基团取代(A)卤素，或(B)-C1-10烷基，(h)苯基，(i)-NR14R15，其中R14和R15选自(A)氢，(B)-C1-10烷基，和(C)-C0-6烷基-C6-10芳基，(j)-C(＝O)-OR16，其中R16选自(A)氢，(B)-C1-10烷基，和(C)-C0-6亚烷基-C6-10芳基，和(k)-C(＝O)-NR17R18，其中R17和R18选自(A)氢，(B)-C1-10烷基，和(C)-C0-6亚烷基-C6-10芳基，或者，R17和R18代表4个、5个或6个选自CRaRb、S、NRc和O的环原子，并且与它们所连接的氮一起构成非芳族环，和(l)-C(＝O)-R19，其中R19选自(A)-C1-10烷基，(B)-C3-7环烷基，和(C)-C0-6亚烷基-C6-10芳基，或者，R5和R6与它们所连接的氮原子一起连接成4-6元环，该环是未取代的或被一个或多个以下基团取代(a)-C1-10烷基，(b)-C3-12环烷基，(c)-(CH2)n-苯基，(d)-C2-10烯基，或(e)-C2-10炔基，其中所述烷基、烯基和炔基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(i)卤素，(ii)-OH，(iii)-CN，(iv)-O-C1-10烷基，或(v)-C3-12环烷基，并且所述环烷基和苯基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(i)卤素，(ii)-C1-10烷基，(iii)-OH，(iv)-CN，(v)-C3-12烷基，或(vi)-O-C1-10烷基；Ra、Rb和Rc各自独立地选自(1)氢，(2)卤素，(3)-C1-6烷基，和(4)-C(＝O)-C1-6烷基；m是0，1或2；n是0，1，2，3或4；和其药学上可接受盐，以及其单一的对映体和非对映体。
本发明进一步涉及制备用于抑制人或动物体中β-分泌酶活性的药物或组合物的方法，包括将本发明化合物与药学上可接受的载体或稀释剂混合。本发明还涉及制备用于治疗人类阿耳茨海默氏病的药物或组合物的方法，包括将本发明化合物与药学上可接受的载体或稀释剂混合。
在一个实施方案中，X为选自以下的二唑 在一个实施方案中，Y为卤素，优选为氯。
在一个实施方案中，本发明涉及其中R1是未取代的或取代的苯基，且Q优选为CH2的式(I)化合物。优选R1是未取代的苯基或4-氟苯基。
在一个实施方案中，R1是杂芳基。优选的R1杂芳基包括吡啶基、呋喃基、唑基和苯并唑基。
在其它实施方案中，R1是C1-12烷基或C3-8环烷基。优选的C1-12烷基R1基团包括C1-6烷基(优选未取代的C1-6烷基，包括甲基和异丙基在内)。优选的C3-8环烷基包括环丙基、环戊基和环己基，优选是未取代的。环烷基的两个环碳原子可以连接形成C6-12芳基。该实施方案的代表性稠合基团是 在另一个实施方案中，本发明涉及其中R8和R9都为氢的式(I)化合物。
在式(I)化合物的另一实施方案中，A是未取代的或取代的(优选未取代的)C1-10烷基，优选未取代的或取代的(优选是未取代的)C1-6烷基，更优选甲基。
在其它可选择的实施方案中，A可以是氢。
在一个实施方案中，R6是-C1-10亚烷基-C3-12环烷基，其中该环烷基优选被C1-10烷基取代。在优选的实施方案中，R6是-C1-3亚烷基-C3-6环烷基，其中该环烷基优选被C1-3烷基取代。
在一个实施方案中，R5是C1-10烷基，其任选被一个或多个以下基团取代(a)卤素，(b)-OH，(c)-CN，(d)-O-C1-10烷基，或(e)杂芳基。
在式(I)化合物的另一实施方案中，R5和R6与它们二者所连接的氮原子一起连接形成吡咯烷环。
在式(I)化合物的另一实施方案中，R4和R7为C1-10烷基，优选C1-6烷基。更优选的是，R4是甲基或异丙基以及R7是甲基。
在另一个实施方案中，R4是-C0-3亚烷基-杂芳基。优选的R4杂芳基包括吡啶基、异唑基、咪唑基和唑基。
在另一个实施方案中，R7是-C0-3亚烷基-杂芳基。优选的R7杂芳基包括吡啶基、异唑基和四唑基。
在另一个实施方案中，本发明涉及式(II)化合物和其药学上可接受盐以及其单一的对映体和非对映体 其中Y是卤素，且A、X、Q、R1、R4、R5、R7、R8和R9如上定义。
在一个实施方案中，X为二唑基
在一个实施方案中，Y为卤素，优选为氯。
在式(II)化合物的一个实施方案中，R1是苯基和Q为CH2。优选R1是未取代的苯基或是4-氟苯基。
在另一个实施方案中，本发明涉及其中R8和R9都为氢的式(II)化合物。
在式(II)化合物的另一实施方案中，A为C1-10烷基，优选C1-6烷基，更优选甲基。
在式(II)化合物的另一实施方案中，R4和R7为C1-10烷基，优选C1-6烷基。更优选的是，R4是甲基或异丙基以及R7是甲基。
在一个实施方案中，R5是C1-10烷基，其任选被一个或多个下列基团取代(a)-O-C1-10烷基，其中该烷基是未取代的或被-O-C1-10烷基-(-O-C1-10烷基)m取代，(b)杂芳基，或(c)-C(＝O)-R19，其中R19选自(i)-C1-10烷基，(ii)-C3-7环烷基，或(iii)-C0-6亚烷基-C6-10芳基。
在另一可选择的实施方案中，R5是氢。
在式(II)化合物的优选实施方案中，X是二唑，即如下面(III)所示的化合物和其药学上可接受盐以及其单一的对映体和非对映体 在式(III)化合物的一个实施方案中，Y是氯。
在式(III)化合物的一个实施方案中，R1是苯基和Q为CH2。
在式(III)化合物的另一实施方案中，R8和R9均为氢。
在式(III)化合物的另一实施方案中，A为甲基。
在式(III)化合物的另一实施方案中，R4和R7为C1-10烷基，优选C1-6烷基。更优选的是，R4是甲基或异丙基和R7是甲基。
在一个实施方案中，R5是C1-10烷基，其任选被一个或多个下列基团取代(a)-O-C1-10烷基，其中该烷基是未取代的或被-O-C1-10烷基-(-O-C1-10烷基)m取代，(b)杂芳基，或(c)-C(＝O)-R19，其中R19选自(i)-C1-10烷基，(ii)-C3-7环烷基，或(iii)-C0-6亚烷基-C6-10芳基。
在另一可选择的实施方案中，R5是氢。
式(II)和式(III)化合物的优选对映体构型在甲基-环丙基-甲基部分具有反式-S，S-构型，如下面式(II’)和(III’)中所示 本发明的另一实施方案包括选自后面实施例的标题化合物及其药学上可接受的盐。
如本文所用，术语“烷基”本身或作为另一取代基的组成部分，是指具有指定数目碳原子的直链或支链饱和烃基(例如C1-10烷基是指具有1-10个碳原子的烷基)。对于本发明的应用来讲，优选的烷基是具有1-6个碳原子的C1-6烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基，己基等。
如本文所用，术语“亚烷基”本身或作为另一取代基的组成部分，是指具有指定数目碳原子的饱和直链或支链二价烃基。术语C0亚烷基(例如，在基团“-C0亚烷基-C6-10芳基”中)是指亚烷基不存在。
如本文所用，术语“烯基”本身或作为另一取代基的组成部分，是指具有一个碳-碳双键和指定数目碳原子的直链或支链烃基(例如，C2-10烯基是指具有2-10个碳原子的烯基)。对于本发明的应用而言，优选的烯基是具有2-6个碳原子的C2-6烯基。烯基的实例包括乙烯基和丙烯基。
如本文所用，术语“炔基”本身或作为另一取代基的组成部分，是指具有一个碳-碳三键和指定数目碳原子的直链或支链烃基(例如，C2-10炔基是指具有2-10个碳原子的炔基)。对于本发明的应用而言，优选的炔基是具有2-6个碳原子的炔基。炔基的实例包括乙炔基和丙炔基。
如本文所用，术语“环烷基”本身或作为另一取代基的组成部分，是指具有指定数目碳原子的饱和单环、多环或桥环烃基(例如，C3-12环烷基是指具有3-12个碳原子的环烷基)。优选的环烷基包括C3-8环烷基，尤其是C3-8单环环烷基。单环环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。典型的桥状环烷基包括金刚烷基和降冰片基。
如本文所用，术语“芳基”本身或作为另一取代基的组成部分，是指具有指定数目碳原子的芳族或环状基团(例如，C6-10芳基是指具有6-10个碳原子的芳基)。对于本发明的应用而言，优选的芳基包括苯基和萘基。
术语“卤”或“卤素”包括氟、氯、溴和碘。
如本文所用，术语“杂芳基”本身或作为另一取代基的组成部分，是指具有环碳原子和至少一个环杂原子(O、N或S)的芳族环状基团。优选的杂芳基具有5-12个环原子。更优选的杂芳基具有5或6个环原子。对于本发明的应用而言，代表性的杂芳基包括苯并吡喃基、呋喃基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、咪唑基、苯并咪唑基、吲唑基、吲哚基、indynyl、二唑基、唑基、苯并唑基、异唑基、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、噻唑基、噻吩基(thienyl)、噻吩基(thiophenyl)、苯并噻吩基、三嗪基和三唑基。
术语“杂芳基”也包括部分芳香性的稠合芳族环状基团(即，稠合环之一是芳香性而其它环是非芳香性的)。部分芳香性的杂芳基实例包括四氢喹啉基、二氢苯并呋喃基和二氢吲哚基。
当本文定义的杂芳基被取代时，所述取代基可以与杂芳基的环碳原子键合，或键连在环杂原子(即氮)上，它们具有允许取代的化合价。优选地，所述取代基与环碳原子键合。同样地，当杂芳基在此定义为取代基时，连接位置可以在杂芳基的环碳原子上，或在环杂原子(即氮、氧或硫)上，它们具有允许取代的化合价。
本发明的一些化合物具有至少一个不对称中心。根据分子上不同取代基的性质可能存在另外的不对称中心。具有不对称中心的化合物产生对映异构体(旋光异构体)、非对映异构体(构型异构体)或两者，并且所有可能的对映异构体和非对映异构体，无论是在混合物中还是作为纯化或部分纯化的化合物形式，预计都包括在本发明的范围之内。本发明包括这些化合物的所有此类异构形式。
对映异构或非对映异构富集化合物的独立合成，或其色谱分离，可以按照本领域已知的方法通过适当改进本文公开的方法获得。它们的绝对立体化学可以利用结晶产物或中间体结晶的x-射线结晶学测定，必要时，其中的中间体用含有已知构型的不对称中心的试剂衍生化。
如果需要，可以对所述化合物的外消旋混合物进行分离，从而离析出单一对映体。分离可以采用本领域公知的方法进行，例如使化合物的外消旋混合物与对映体纯化合物偶联形成非对映体混合物，随后采用标准方法分离单一的非对映异构体，例如分级结晶或色谱法。偶联反应通常利用对映体纯的酸或碱形成盐。非对映体衍生物然后可以通过裂解附加的手性残基转化为纯净对映体。化合物的外消旋混合物也可以直接通过色谱方法采用手性固定相分离，这类方法是本领域公知的。
另一方面，使用已知构型的旋光纯原料或试剂通过立体有择合成，也可以获得通式I化合物的任何对映异构体。
在式(I)和(II)的化合物中，与R2、A和Q键合的碳原子通常为手性碳。结果，式(I)和(II)化合物可以以外消旋体形式，或者以立体化学纯的(R)或(S)形式存在。式(I)化合物的异构形式如下所示 优选上面所示的第一种构型(一般为(R)构型，例如，当A是CH3，R2是NH2，Q是-CH2-和R1是苯基时)。
本发明所述的化合物可以按照下列通用方法和具体实施例所述制备。
本发明所述的化合物可以按照下列通用方法制备。
在路线方案1中，1.1类型的氨基酸衍生物被转化为相应的Boc-酸1.2。为获得没有市售的氨基酸衍生物，可以采用甘氨酸席夫碱1.3的两步烷基化反应。用于合成1.4而进行的1.3的烷基化反应如文献所述按对映选择性方式完成(参见K.Maruoka等，J.Am.Chem.Soc.2000，122，5228-5229和M.North等，Tetrahedron Lett.2003，44，2045-2048)。
路线方案1 在路线方案2中，使用就地产生的BH3还原氨基酸1.1，生成相应的氨基醇，然后进行N-保护反应得到化合物2.1。氧化2.1生成醛2.2。将2.2进行环氧化反应，接着用氨开环，得氨基醇2.3。
路线方案2 路线方案3概括了环丙基甲基胺衍生物(NR5R6)的合成，该类化合物用于后面的路线方案中。以3.1类型的环丙基羧酸为原料，经EDC偶联和硼烷还原生成苄基胺3.2。氢化得到伯胺3.3。经还原甲基化、氢化反应生成甲基胺3.3。经酰胺偶联、硼烷还原和氢化苄基对3.2进一步加工，生成3.6类型的取代胺，其也用作偶联子。另一方法是，用不同的醛还原性胺化3.2、接着氢化，生成3.7类型的胺。
路线方案3 路线方案4描述了中间体4.2a-c和4.3a-c的制备，这些中间体用于不同种类杂环的加工中。尽管c类中间体在适当的位置已经完全地引入了R7NSO2R4和R6R5N部分，但a和b类中间体依然可以在对杂环加工后引入这些部分。
路线方案4 路线5描述了5.1a-c和5.2a-c类型二唑的制备，即先偶联1.2类型的氨基酸衍生物与酰肼4.3a-c、接着用三苯膦和四溴化碳进行环化脱氢反应。氯化物5.1a，b经钯化作用和脱保护而先后转化成5.1c和5.2c。
路线方案5 路线方案6描述了6.2类型唑的制备偶联氨基醇2.3与酸4.2，接着氧化成酮酰胺6.1，再进行环化脱氢反应。
路线方案6
路线方案7描述了7.5类型的呋喃的制备。
路线方案7 路线8描述了NCS介导的二唑、唑和呋喃衍生物的氯化反应，生成衍生物8.1-4。
路线方案8 路线9描述了由二唑衍生物生成9.2-4类型化合物的氟化反应与氰化反应(后者经溴化和Pd介导的氰化反应完成)。注意的是，中间体9.3提供了经Pd介导的官能化反应获得大量的3-取代吡啶化合物的途径，从而得到9.5类型的3-烷基和3-芳基取代衍生物。
路线方案9
路线方案10描述了10.2类型的二唑-席夫碱的制备，该类化合物允许后期经烷基化反应引入-Q-R1。
路线方案10 术语“基本纯”是指通过本领域已知的分析技术测定，分离物质的纯度至少为90％，优选至少95％的纯度，更优选至少99％的纯度。
术语“药学上可接受的盐”是指由可药用的无毒碱或酸(包括无机或有机碱以及无机或有机酸)制备的盐。本发明化合物可以是单、二或三盐，这取决于游离碱形式化合物中存在的酸官能团的数目。游离碱以及由无机碱衍生的盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、镁盐、三价锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐、锌盐等。特别优选铵盐、钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。固体形式的盐可能存在多于一种的晶体结构，并且还可以是水合物的形式。由可药用的无毒有机碱衍生得到的盐包括伯胺、仲胺或叔胺、取代胺包括天然存在的取代胺、环胺以及碱性离子交换树脂的盐，例如下列胺的盐精氨酸、甜菜碱、咖啡碱、胆碱、N，N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、哈胺、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、多胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。当本发明化合物是碱性时，盐可用药学上可接受的无毒的酸(包括无机和有机酸)制备。这些酸包括乙酸、三氟乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、乙磺酸、富马酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、苦杏仁酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特别优选柠檬酸、氢溴酸、盐酸、三氟乙酸、马来酸、磷酸、硫酸、富马酸和酒石酸。
本发明涉及本文所述化合物作为β-分泌酶活性或β-位点淀粉样蛋白前体蛋白-裂解酶(“BACE”)活性的抑制剂在需要这种抑制作用的患者或受治疗者例如哺乳动物中的应用，包括施用有效量的所述化合物。术语“β-分泌酶”、“β-位点淀粉样蛋白前体蛋白-裂解酶”和“BACE”在本说明书中可以互换使用。除了人类之外，多种其他哺乳动物也可以按照本发明方法进行治疗。
本发明化合物在治疗、缓解、控制或减轻阿耳茨海默氏病的危险中具有效用。例如，本发明化合物可以用于预防阿耳茨海默型痴呆症，以及用于治疗早期、中期或晚期阿耳茨海默型痴呆症。本发明化合物也可以用于治疗、缓解、控制或减轻淀粉样蛋白前体蛋白(又称APP)的异常裂解引起的疾病的危险性，以及通过抑制2-分泌酶而能得以治疗或预防的其他病症。这些病症包括轻度认知损伤、Trisomy 21(唐氏综合症)、脑淀粉样蛋白血管病、变性痴呆、伴随Dutch-型淀粉样变性的遗传性脑出血(HCHWA-D)、Creutzfeld-Jakob病、朊病毒病、肌萎缩性侧索硬化、进行性核上麻痹、头部创伤、中风、唐氏综合症、胰腺炎、包埋性体肌炎、其他外周淀粉样变性、糖尿病和动脉粥样硬化。
给药本发明化合物的受治疗者或患者通常是需要抑制β-分泌酶活性的人类(男性或女性)，但也可以包括需要抑制β-分泌酶活性或治疗上述病症的其他哺乳动物，例如狗、猫、小鼠、大鼠、牛、马、羊、兔、猴、黑猩猩或其他无尾猿或灵长类。
本发明化合物可以与一种或多种其他药物联合用于本发明化合物所适用的疾病或病症的治疗，其中这些药物在一起联用比单用任一种药物要更安全或更有效。另外，本发明化合物可以与一种或多种能用于治疗、预防、控制、缓解或减轻本发明化合物的副作用或毒性风险的其他药物联合使用。此类其他药物可以通过其通常使用的途径和用量与本发明化合物同时或顺序给药。另外，本发明的药物组合物包括除本发明化合物外还含有一种或多种其他活性成分的那些组合物。这类联用药物可以作为单位剂型联合产品的一部分给药，或者作为药盒或治疗套餐(treatment protocol)给药，其中一种或多种附加药物以分离剂型作为治疗方案的一部分给药。
本发明化合物与其他药物组成的单位剂量或药物形式的联用药物的实例包括与抗阿耳茨海默氏病剂形成的联用药物，例如其他的β-分泌酶抑制剂或γ-分泌酶抑制剂；tau磷酸化抑制剂；M1受体正别构调节剂；Aβ寡聚物形成阻断剂；5-HT调节剂，例如PRX-03140，GSK742467，SGS-518，FK-962，SL-65.0155，SRA-33和扎利罗登(xaliproden)；p25/CDK 5抑制剂；NK1/NK3受体拮抗剂；COX-2抑制剂；HMG-CoA还原酶抑制剂；包括布洛芬在内的NSAIDs；维生素E；抗淀粉样蛋白抗体，包括抗淀粉样蛋白人源化单克隆抗体；抗炎化合物如(R)-氟比洛芬、硝基氟比洛芬(nitroflurbiprofen)，罗格列酮，ND-1251，VP-025，HT-0712和EHT-202；CB-1受体拮抗剂或CB-1受体反向激动剂；抗生素如脱氧土霉素和利福平；N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂，例如美金刚胺和neramexane；胆碱酯酶抑制剂如加兰他敏，雷司替明，独尼匹次，他克林，pheneserine，ladostigil和ABT-089；生长激素促分泌剂如伊布莫仑，甲磺酸伊布莫仑，和capromorelin；组胺H3拮抗剂如ABT-834，ABT829和GSK 189254；AMPA激动剂或AMPA调节剂，例如CX-717，LY 451395和S-18986；PDE IV抑制剂；GABAA反向激动剂；神经元烟碱样激动剂；选择性M1激动剂；微管亲和调节激酶(MARK)配体；或影响受体或酶的其他药物，它们要么能提高本发明化合物的效力、安全性、方便性，要么能降低本发明化合物的不良副作用或毒性。上面列出的联合药物仅仅是举例说明，而不以任何方式产生限定。
同许多蛋白酶抑制剂一样，据认为本发明化合物在体内被细胞色素P-450单加氧酶所代谢。细胞色素P-450是影响药物代谢的同工酶家族。细胞色素P-450同工酶(包括CYP3A4同工酶)在体内通常通过氧化对药物分子进行转化。细胞色素P-450引起的代谢通常产生不希望的药代动力学，这样与期望的情形相比需要更频繁给药和更高的剂量。这些药物与能抑制细胞色素P-450引起的代谢的药剂联合使用可以改善药物的药代动力学(即增加半衰期，增长达到血药峰浓度的时间，增高血液水平)。
在一个实施方案中，本发明涉及联合或共同给药本发明化合物与细胞色素P-450抑制剂。本发明还涉及改善被细胞色素P-450单加氧酶代谢的本发明化合物的药代动力学，包括同时给药本发明化合物和细胞色素P-450抑制剂。
P-450抑制剂和本发明化合物的联用药物可以作为单位剂型联合产品的组成部分给药，或者作为药盒或治疗套餐给药，其中一种或多种P450抑制剂以分离剂型作为治疗方案的一部分给药。
代表性的p450抑制剂包括酮康唑，甲基红霉素，红霉素，异烟肼，氟西汀，咪哒唑仑，地拉韦定，茚地那韦，利托那韦，双肼苯哒嗪，异博定，醋竹桃霉素，他莫昔芬和伊立替康。其他的p450抑制剂在下列文献中公开Pea等，Clin Pharmacokinet 2001，40(11)，833-868；Zhou等，Current Drug Metabolism 2004，5，415-442；和Wienkers，J.Pharm.Toxicol Methods 2001，4579-84。优选的p450抑制剂是利托那韦。
本文使用的术语“组合物”包括含有预定的量或比例的特定组分的产品，以及由特定含量的特定组分的组合直接或间接地得到的任何产品。与药物组合物有关的该术语包括了包含一种或多种活性成分和任选的载体的产品(所述载体包括惰性成分)，以及任何直接或间接地由任意两种或多种组分的组合、复合或聚集得到的产品，或者由一种或多种组分的离解得到的产品，或者由一种或多种组分的其他类型反应或相互作用得到的产品。通常，药物组合物通过均匀和致密地将活性成分与液体载体或细碎固体载体或二者一起混合来制备，随后视需要将产物成型成需要的剂型。在药物组合物中，活性目标化合物以足以对疾病的过程或状况产生预期作用的量存在。因此，本发明的药物组合物包括通过混合本发明化合物与药学上可接受的载体制成的任何组合物。
供口服使用的药物组合物可以按照本领域已知的制备药物组合物的任何方法制备，并且该类组合物可以包含一种或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的物质，以便提供药学上美观和可口的制剂。片剂可以包含活性成分以及与其混合的适合于制备片剂用的无毒可药用赋形剂。这些赋形剂可以是例如惰性赋形剂，譬如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉、或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶，以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的，或者它们可以用已知技术进行包衣以延迟在胃肠道内的崩解和吸收，从而获得更长的缓释作用。
供口服使用的组合物也可以是硬明胶胶囊的形式，其中活性成分与惰性固体稀释剂如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者是软明胶胶囊的形式，其中的活性成分与水或油介质例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
其他的药物组合物包括水混悬剂，其包含与适合于制备水混悬剂用赋形剂混合的活性成分。此外，油性混悬剂可以通过将活性成分悬浮在植物油例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油中或悬浮在矿物油例如液体石蜡中配制。油性混悬剂还可以包含各种赋形剂。本发明的药物组合物也可以是水包油型乳剂，它也可以含有赋形剂例如甜味剂和调味剂。
本发明的药物组合物可以是无菌可注射的水性或油性混悬剂的形式，其可以按照本领域已知的方法配制，或者可以以直肠给药用的栓剂形式给药。
本发明的化合物还可以借助本领域已知的吸入装置吸入给药或者通过透皮贴剂给药。
“药学上可接受的”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂中的其他成分相容，并且对接受者无害。
术语“化合物的给药”或“给药化合物”应理解为是指将本发明化合物以这样的形式提供给需要治疗的个体，即使化合物能够以治疗有用形式和治疗有用量的方式进入到个体体内，这样的形式包括但不限于口服剂型，例如片剂、胶囊剂、糖浆剂、混悬剂等；可注射剂型，例如IV、IM、或IP等；透皮剂型，包括霜剂、冻胶剂、粉剂或贴剂；经颊剂型；吸入粉剂，喷雾剂，混悬剂等；以及直肠栓剂。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指由研究人员、兽医、医生或其它临床医师寻找到的主体化合物在组织、系统、动物或人体中引起生物学或医学反应的量。
本文使用的术语“…的治疗”或“治疗…”是指给药本发明的化合物并且包括(1)在经历或表现出疾病的病理或症状的动物中抑制该疾病(即阻止病理和/或症状的进一步发展)，或(2)在经历或表现出疾病的病理或症状的动物中改善疾病(即逆转该病理和/或症状)。术语“控制”包括预防性治疗、根除、改善或降低受控制病症的严重性。
含本发明化合物的组合物宜以单位剂型形式存在，并且可以通过药学领域公知的方法制备。术语“单位剂型”是指其中所有活性与非活性成分结合为适当体系的单一剂型，从而使得患者或将该药物给药于患者的人可以打开其中含有全部剂量的单个容器或包装，并且不需要将取自两个或更多个容器或包装的任何组分混合在一起。单位剂型的典型实例有供口服用的片剂或胶囊剂，注射用单剂量小瓶，或直肠给药用栓剂。上面列举的单位剂型不产生任何限定作用，仅仅是单位剂型的代表性实例。
含有本发明化合物的组合物宜以药盒的形式存在，由此两种或多种组分，其可以是活性成分或非活性成分、载体、稀释剂等，与配制实际剂型的说明书一起提供给患者或者给患者给药的人。这类药盒在其中提供所有必需的物质和组分，或者它们可以包括供使用或制备所要物质或组分用的说明书，这些物质和组分是患者或给药于患者的人必须独立获得的。
在治疗、改善、控制或降低阿耳茨海默氏病或本发明化合物所指出的其他疾病的危险时，当本发明化合物以约0.1mg-约100mg/kg动物体重的日剂量给药时通常能获得满意的结果，这些剂量优选以单一日剂量或每天2-6次分剂量的形式或以缓释放形式给用。总日剂量为每kg体重约1.0mg-约2000mg，优选约0.1mg-约20mg。对于70kg的成人，总日剂量通常为约7mg-约1,400 mg。为获得最佳治疗反应，可以对该剂量方案进行调整。本发明化合物可以采用每天1-4次的方案给药，优选每天给药1或2次。
本发明化合物或其药学上可接受的盐的具体给药剂量包括1mg，5mg，10mg，30mg，80mg，100mg，150mg，300mg和500mg。本发明的药物组合物可以以含有约0.5mg-1000mg活性成分的制剂形式提供；更优选其包含约0.5mg-500mg活性成分；或0.5mg-250mg活性成分；或1mg-100mg活性成分。用于治疗的特定药物组合物可包含约1mg，5mg，10mg，30mg，80mg，100mg，150mg，300mg和500mg的活性成分。
但应当理解，对于任何具体患者而言，具体的剂量水平和给药次数是可以变化的，并且取决于多种因素，包括所用具体化合物的活性、该化合物的代谢稳定性和作用长短、年龄、体重、健康状况、性别、饮食情况、给药方式和时间、排泄率、药物联用情况、特定病症的严重程度以及宿主接受的疗法。
本发明化合物作为β-分泌酶活性抑制剂的效力可以用本发明已知的方法学证实。酶抑制作用测定如下。
ECL测定法采用均相终点电化学分光测定法，使用生物素化BACE底物。底物的Km大于100μM并由于该底物溶解度的限制不能测定。典型的反应物包含约0.1nM酶，0.25μM底物，和缓冲液(50mMNaOAc，pH4.5，0.1mg/ml BSA，0.2％CHAPS，15mM EDTA和1mM去铁胺)，总反应体积100μl。反应进行30分钟，随后加入25μL 1MTris-HCl，pH8.0中止。所得酶产物通过加入钌化抗体进行分析，该抗体能特异性识别该产物的C-末端残基。向溶液中加入链霉素包衣磁珠，将样品进行M-384(Igen Inc.，Gaithersburg，MD)测定。在这些条件下，小于10％的底物被BACE 1处理。这些研究中使用的酶是在杆状病毒表达体系中产生的可溶性(不包括垮膜结构域和胞质延伸)人蛋白。为测定化合物的抑制效价，反应混合物(DMSO终浓度为10％)中含有抑制剂在DMSO中的溶液(12种抑制剂浓度，从100μM开始通过三倍连续稀释法制备)。所有的试验都是在室温下采用上述标准反应条件进行。为测定化合物的IC50，使用四参数方程进行曲线拟合。再现解离常数的误差一般小于两倍。
HPLC测定法均相终点HPLC测定采用底物(香豆素-CO-REVNFEVEFR)，它被BACE 1裂解释放出与香豆素连接的N-末端片段。该底物的Km大于100μM并由于该底物溶解度的限制不能被测定。典型的反应物包含约2nM酶，1.0μM底物，和缓冲液(50mMNaOAc，pH4.5，0.1mg/ml BSA，0.2％CHAPS，15mM EDTA和1mM去铁胺)，总反应体积100μl。反应进行30分钟，随后加入25μL 1MTris-HCl，pH8.0中止。将所得反应混合物加载到HPLC上，通过5分钟线性梯度洗脱使产物与底物分开。在这些条件下，小于10％的底物被BACE 1处理。这些研究中使用的酶是在杆状病毒表达体系中产生的可溶性(不包括垮膜结构域和胞质延伸)人蛋白。为测定化合物的抑制效价，反应混合物(DMSO终浓度为10％)中含有抑制剂在DMSO中的溶液(制备12种抑制剂浓度，浓度范围取决于根据ECL预测的效价)。所有的试验都是在室温下采用上述标准反应条件进行。为测定化合物的IC50，使用四参数方程进行曲线拟合。再现解离常数的误差一般小于两倍。
具体讲，下列实施例的化合物在一种或两种上述测定中具有抑制β-分泌酶的活性，一般具有约1nM-100μM的IC50。这样的结果是本发明化合物作为β-分泌酶活性抑制剂使用时内在活性的指标。
制备本发明化合物用的若干方法在本文给出的路线方案和实施例中举例说明。起始原料按照本领域公知的方法或本文所列举的方法制备。为了更全面地了解本发明提供了以下实施例，但这些实施例仅仅是说明性的，不得以任何方式解释为是对本发明的限制。
中间体1.2.1N 2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-甲基-3-吡啶-4-基丙酸(路线方案1) 步骤A席夫碱的形成向丙氨酸甲酯盐酸盐(10.0g 71.6mmol)在100mL CH2Cl2中的溶液内加入二苯酮亚胺(12.0mL，71.6mmol)。使反应在室温下进行15小时，溶液中逐渐析出白色沉淀。反应物用H2O和CH2Cl2稀释，分离各层，将有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤、浓缩，得到N-(二苯基亚甲基)丙氨酸甲酯，为粘性油体，其无需进一步纯化即可使用。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.62(m，2H)，7.47-7.29(m，6H)，7.19-7.16(m，2H)，4.16(q，J＝6.8Hz，1H)，3.7(s，3H，1.40(d，J＝6.8Hz，3H).
步骤B烷基化于0℃、20分钟内，向步骤A的N-(二苯基亚甲基)丙氨酸甲酯(9.78g，36.6mmol)在60ml DMF中的溶液内加入1M双(三甲基甲硅烷基)氨化钠的THF溶液(45.72ml，45.72mmol)。30分钟后，通过套管在25分钟内向反应物中加入4-氯甲基吡啶盐酸盐(3.00g，18.29mmol)在40ml DMF中的热源。温热反应物到室温，搅拌5小时。用饱和氯化铵水溶液中止反应，继用EtOAc(3x)提取。合并的有机层用3M LiCl(2x)和盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。经硅胶色谱法(0-40％ EtOAc/己烷)纯化，得到2-[(二苯基亚甲基)氨基]-2-甲基-3-吡啶-4-基丙酸甲酯，为白色固体(5.28g，81％)。
LCMS[M+H]＝359.2.1H NMR(d4-MeOH)δ8.51(dd，J＝4.5，1.5Hz，2H)，7.56(dd，J＝8.4，1.4Hz，2H)，7.40-7.37(m，4H)，7.34-7.30(m，2H)，7.26-7.23(m，2H)，7.10-7.07(m，2H)，3.33(A of AB，d，J＝13.0Hz，1H)，3.27(s，3H)，3.18(B of AB，d，J＝12.9Hz，1H)，1.32(s，3H).
步骤C席夫碱的除去向步骤B的2-[(二苯基亚甲基)氨基]-2-甲基-3-吡啶-4-基丙酸甲酯(5.28g，14.73mmol)在75ml 1∶1 MeOH/THF中的悬浮液内加入6NHCl(3.68ml，22.10mmol)。室温搅拌1.5小时后，真空浓缩反应物。使用离子交换色谱(SCX筒)纯化得到2-氨基-2-甲基-3-吡啶-4-基丙酸甲酯，为黄色油体(2.76g，97％)。
LCMS[M+H]＝195.3.1H NMR(d4-MeOH)δ8.43(dd，J＝4.6，1.6Hz，2H)，7.24(dd，J＝4.6，1.5Hz，2H)，3.70(s，3H)，3.09(A of AB，d，J＝12.9Hz，1H)，2.90(B of AB，d，J＝13.0Hz，1H)，1.39(s，3H).
步骤DBoc保护于0℃，向步骤C的2-氨基-2-甲基-3-吡啶-4-基丙酸甲酯(2.76g，14.21mmol)在70ml THF中的悬浮液内加入二碳酸二叔丁酯(4.03g，18.47mmol)。30分钟后，温热反应到室温过夜。反应物用EtOAc稀释，继用饱和氯化铵水溶液、水、盐水洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。经硅胶色谱法(0-60％ EtOAc/CH2Cl2)纯化得到2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-甲基-3-吡啶-4-基丙酸甲酯，为黄色固体(3.22g，77％)。
LCMS[M+H]＝295.2.1H NMR(400MHz，d4-MeOH)δ8.43(d，J＝5.1Hz，2H)，7.21(d，J＝5.9Hz，2H)，3.73(s，3H)，3.44(A of AB，d，J＝13.2Hz，1H)，3.12(B of AB，d，J＝13.2Hz，1H)，1.46(s，9H)，1.30(s，3H).
步骤E皂化向步骤D的2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-甲基-3-吡啶-4-基丙酸甲酯(0.25g，0.85mmol)在4.25ml 1∶1 MeOH/THF中的溶液内加入3NNaOH(0.43ml，1.27mmol)。使反应在50℃进行1小时，然后冷却到室温，用6N HCl(0.21ml，1.27mmol)中止反应。真空浓缩反应物，得到2-[(叔丁氧基羰基)氨基]-2-甲基-3-吡啶-4-基丙酸NaCl，为白色固体。
LCMS[M+H]＝281.3.1H NMR(400MHz，d4-MeOH)δ8.44(d，J＝5.3Hz，2H)，7.28(d，J＝5.9Hz，2H)，3.43(A of AB，d，J＝12.6Hz，1H)，3.33(B of AB，d，J＝12.3Hz，1H)，1.47(s，9H)，1.41(s，3H).
中间体1.2.2N-(叔丁氧羰基)-2，5-二甲基正亮氨酸(路线方案1) N-(叔丁氧羰基)-2，5-二甲基正亮氨酸以异丁基碘和丙氨酸席夫碱为原料按照制备中间体1.2.1所述方法制备。
中间体2.3.1(3R-氨基-1-苄基-2RS-羟基-1-甲基丙基)氨基甲酸叔丁酯(路线方案2)
步骤A还原室温下，向D-α-甲基-苯基丙氨酸(1.74g，9.71mmol)在30mL THF中的溶液内一次性加入NaBH4(0.92g，24.27mmol)。冷却所得溶液到0℃。在30分钟内逐滴加入在5mL THF中的碘(2.46g，9.71mmol)。加料完毕后，加热回流反应2天。随后冷却反应物至0℃，通过加入甲醇来中止反应直至停止冒泡。反应混合物通过加入6N HCl酸化至pH1，于50℃搅拌30分钟，真空浓缩。利用离子交换色谱(SCX筒)进行纯化，得到白色固体2R-氨基-2-甲基-3-苯基丙-1-醇。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.35-7.18(m，5H)，3.36(A of AB，d，J＝10.4Hz，1H)，3.31(B of AB，d，J＝10.4Hz，1H)，2.70(s，2H)，1.04(s，3H).
步骤BBoc保护室温下搅拌2R-氨基-2-甲基-3-苯基丙-1-醇(4.14g，25mmol)与二碳酸二叔丁酯(7.1g，32.5mmol)的溶液16小时，浓缩得到(1-苄基-2R-羟基-1-甲基乙基)氨基甲酸叔丁酯，为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.35-7.15(m，5H)，4.48(br s，1H)，4.17(br s，1H)，3.76-3.62(m，2H)，3.19(A of AB，d，J＝13.6Hz，1H)，2.81(B of AB，d，J＝13.6Hz，1H)，1.47(s，9H)，1.07(s，3H).
步骤C氧化向(1-苄基-2R-羟基-1-甲基乙基)氨基甲酸叔丁酯(6.7g，25.2mmol)在DCM(100mL)与DMSO(25mL)中的溶液内加入三乙胺(10.5mL，75.7mmol)和三氧化硫-吡啶(10g，63.1mmol)。在室温下搅拌反应混合物3.5小时，用EtOAc稀释，继用10％KHSO4、饱和NaHCO3、水、盐水和LiCl水溶液洗涤，硫酸钠干燥，真空浓缩，并且通过快速色谱纯化(硅胶，0-20％ EtOAc/己烷)，得到(1-苄基-1-甲基-2R-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯，为白色固体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 9.53(s，1H)，7.35-7.22(m，3H)，7.12-7.00(m，2H)，4.84(br s，1H)，3.17(A of AB，d，J＝13.6 Hz，1H)，3.08(B of AB，d，J＝13.6Hz，1H)，1.51(s，9H)，1.27(s，3H).
步骤D环氧化反应向(1-苄基-1-甲基-2R-氧代乙基)氨基甲酸叔丁酯(1g，3.80mmol)的乙腈(15mL)溶液中加入6滴水、三甲基碘化锍(775mg，3.80mmol)和氢氧化钾(511mg，9.11mmol)。将该反应在60℃下密封搅拌1.5小时，再加入三甲基碘化锍(775mg，3.80mmol)和氢氧化钾(511mg，9.11mmol)，并且将反应在60℃下密封搅拌3小时。将反应混合物用EtOAc稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液、盐水洗涤，硫酸镁干燥和真空浓缩，得到油状物(1-甲基-1-环氧乙烷-2R-基-2-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯。MS(ES，M+H)278.
步骤E环氧化物的开环将(1-甲基-1-环氧乙烷-2R-基-2-苯基乙基)氨基甲酸叔丁酯(986mg，3.56mmol)在EtOH(35mL)与NH4OH(35mL)中的溶液于60℃密封搅拌16小时，真空浓缩并且通过快速色谱纯化(硅胶，0-30％(10％ NH4OH/MeOH)/CH2Cl2)，得到(3R-氨基-1-苄基-2RS-羟基-1-甲基丙基)氨基甲酸叔丁酯，为粘稠油体。
1H NMR(400MHz，CD3OD，1∶1非对映体混合物)δ7.30-7.14(m，5H)，4.01(br d，J＝9.2Hz，0.5H)，3.54(dd，J＝10.0，2Hz，0.5H)，3.39(br s，0.5H)，3.36(br s，0.5H)，2.94-2.56(m，4H)，1.47(s，9H)，1.03(s，1.5H)，0.99(s，1.5H).
中间体3.2.1N-苄基-1-(2-反式-甲基环丙基)甲胺(路线方案3)
步骤A偶联将2-甲基环丙烷羧酸(77.74g，777mmol)、苄胺(93.3mL，854mmol)和DIPEA(141.5mL，854mmol)溶解在1200mL二氯甲烷中。在室温下向该溶液中分批加入固体EDC-HCl(163.7g，854mmol)，搅拌过夜。将反应混合物倒入0.3M HCl中。分离各层，再次用0.3M HCl洗涤一次，并且用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次。有机层随后依次用水、盐水洗涤，硫酸钠干燥，残留物用EtOAc/己烷重结晶，得到偶联加成物，为白色结晶。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.28(m，5H)，5.81(br s，1H)，4.43(dd，J＝5.6，2.4Hz，2H)，1.37(m，1H)，1.17(m，1H)，1.07(d，J＝6.0Hz，3H)，1.04(重迭多峰m，1H)，0.56(m，1H).
任选进行制备手性HPLC，得到优选的反式-S，S对映异构体。在下列中间体和实施例中，无论是优选的反式-S，S对映异构体还是反式-S，S与反式-R，R的外消旋混合物都无需鉴别即可使用。为简化起见，甲基-环丙基-甲基部分绘制成反式-外消旋形式。
步骤B还原在500mL烧瓶内加入N-苄基-反式-2-甲基环丙烷甲酰胺(步骤B，3.9g，20.6mmol)的THF(80mL)溶液。通过滴液漏斗滴加BH3-THF(1.0M，105mL，105mmol)。加料完毕(10分钟)后回流混合物5小时。使混合物冷却到室温，小心用MeOH(15mL)中止。浓缩混合物至干，再溶于二氯甲烷，用3M KOH洗涤。分离有机层，用盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥，再浓缩至干。粗物质用1N HCl/二烷在50℃下处理1小时。浓缩混合物，得到盐酸盐，为白色固体。将该固体溶于饱和碳酸氢钠水溶液(80mL)，用CHCl3(2×150mL)提取。合并的有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，通过旋转蒸发除去溶剂，真空干燥后得到N-苄基-1-(2-反式-甲基环丙基)甲胺，为灰白色半固体(定量)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.28(m，5H)，3.80(s，2H)，2.50(d，J＝6.8Hz，2H)，2.4(br s，1H)，1.02(d，J＝6.0Hz，3H)，0.69(m，1H)，0.52(m，1H)，0.23(m，2H).中间体3.3.1N-甲基-1-(2-反式-甲基环丙基)甲胺(路线方案3) 向N-苄基-1-(2-反式-甲基环丙基)甲胺(8g，45.6mmol，中间体VI)在DCE(240mL)和MeOH(120mL)中的溶液内加入甲醛(34mL，456mmol，37％水溶液)和NaBH(OAc)3(19.3g，91mmol)。室温搅拌反应混合物1小时，用饱和碳酸氢钠水溶液处理，浓缩近干，用水稀释，继用EtOAc(3x)提取。合并的有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，再用HCl(50mL，50mmol，1M Et2O)处理，真空浓缩得到N-苄基-甲基-1-(2-反式-甲基环丙基)甲胺的盐酸盐，进而在20％Pd(OH)2/C(616mg)的存在下在EtOH(400mL)中于60℃和1atm H2下氢化2小时。过滤，真空浓缩得到N-甲基-1-(2-反式-甲基环丙基)甲胺的盐酸盐。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ2.88(d，J＝7.3Hz，2H)，2.69(s，3H)，1.09(d，J＝5.7Hz，3H)，0.78-0.70(m，2H)，0.52-0.50(m，1H)，0.50-0.40(m，1H).
中间体3.4.12-反式-甲基环丙基)甲胺(路线方案3) 向N-苄基-1-(2-反式-甲基环丙基)甲胺(中间体3.2.1，255mg，1.46mmol)的EtOH(20mL)溶液中加入1N HCl(1.53mL，1.53mmol)。将该溶液用氩气脱气，然后加入Pd(OH)2(30mg)。在1atm氢气压下于60℃搅拌反应混合物16小时。在硅藻土上过滤，浓缩得到2-反式-甲基环丙基)甲胺的盐酸盐。
1H NMR(400MHz，CD3OD+CDCl3)δ2.90-2.60(m，2H)，1.09(bs，3H)，0.90-0.70(m，2H)，0.60-0.35(m，2H).
中间体3.6.1(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]胺(路线方案3)
步骤A偶联向N-苄基-1-(2-反式-甲基环丙基)甲胺盐酸盐(中间体3.2.1，10g，47.2mmol)的CHCl3(150mL)溶液中加入二异丙基乙胺(9.87mL，56.7mmol)、甲氧基乙酸(4.35mL，56.7mmol)、HOAt(1.29g，9.5mmol)和EDC(10.87g，56.7mmol)，室温搅拌反应混合物18小时。真空浓缩反应混合物，用EtOAc稀释，继用10％KHSO4、NaHCO3水溶液和盐水洗涤，硫酸钠干燥和真空浓缩，得到反式N-苄基-2-甲氧基-N-[(2-甲基环丙基)甲基]乙酰胺，其直接用于下一步骤。
步骤B还原向冷却到0℃的反式N-苄基-2-甲氧基-N-[(2-甲基环丙基)甲基]乙酰胺(12.18g，49.2mmol)的THF(100mL)溶液中缓慢加入硼烷-THF(123.1mL，123.1mmol，1M THF)。将反应混合物在70℃下搅拌2小时。冷却反应混合物至0℃，小心用MeOH中止。再加入MeOH(20mL)，在回流状态下搅拌所得混合物0.5小时。真空浓缩至约200mL后，加入HCl(g)饱和的MeOH(25mL)，混合物于50℃搅拌1小时。再加入HCl(g)饱和的MeOH(25mL)，并于50℃搅拌混合物1小时。真空浓缩反应混合物，从EtOH、MeOH和DCM中再浓缩数次，得到反式N-苄基-2-甲氧基-N-[(2-甲基环丙基)甲基]乙胺盐酸盐，为无色粘稠油体，其直接用于下一步骤。
步骤C氢化将反式N-苄基-2-甲氧基-N-[(2-甲基环丙基)甲基]乙胺盐酸盐(16g，59.3mmol)的EtOH(400mL)的溶液用氩气脱气，然后加入Pd(OH)2(830mg，20％)，将混合物在1atm H2下室温搅拌4小时。反应混合物用N2冲洗，在N2保护下通过硅藻土过滤，真空浓缩，并且在真空下用P2O5干燥，得到反式(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]胺盐酸盐，为白色泡沫体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.46(bs，2H)，3.84(t，J＝5.1Hz，2H)，3.40(s，3H)，3.23(bt，J＝5.1Hz，2H)，3.08-2.88(m，2H)，1.09(d，J＝6.1Hz，3H)，1.02-0.91(m，1H)，0.86-0.78(m，1H)，0.65-0.57(m，1H)，0.50-0.42(m，1H).
中间体3.6.2(2，2-二氟乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]胺 以N-苄基-1-(2-反式-甲基环丙基)甲胺盐酸盐和二氟乙酸为原料，采用中间体3.6.1制备中描述的类似方法制备。
1H NMR(400MHz，CD3OD)d6.35(tt，48，3Hz，1H)，3.56(td，J＝15.6，3.1Hz，2H)，3.03(m，2H)，1.11(d，J＝5.9Hz，3H)，0.83(m，2H)，0.60(m，1H)，0.50(m，1H).
中间体3.6.3(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)[(2-甲基环丙基)-甲基]胺 以(叔丁基)(二甲基)甲硅烷氧基)乙胺和2-甲基环丙烷羧酸为原料，采用制备中间体3.2.1所述的类似方法制备。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ3.74(t，J＝5.3Hz，2H)，2.76(m，2H)，2.52(m，2H)，1.04(d，J＝6.0Hz，3H)，0.90(s，9H)，0.68(m，1H)，0.55(m，1H)，0.29(m，1H)，0.24(m，1H)，0.07(s，6H).
中间体3.6.4{(1S)-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]乙基}胺
步骤A(2E)-1，1-二乙氧基丁-2-烯将丁烯醛(23.64mL，285.35mmol)、原甲酸三乙酯(57.02mL，342.42mmol)和硝酸铵(2.28g，28.54mmol)在60mL EtOH中混合。在室温下22小时后，将该反应物用EtOAc(60mL)稀释，继用饱和碳酸氢钠溶液(40mL)洗涤。水层用EtOAc(20mL)反提取。合并的有机相用盐水(40mL)洗涤，硫酸钠干燥，过滤并且真空浓缩，得到36.5g％(89％)1，1-二乙氧基丁-2-烯。
1H NMR(CDCl3，400MHz)5.84(m，1H)；5.54(m，1H)；4.82(d，J＝5.7Hz，1H)；3.64(m，2H)；3.49(m，2H)；1.73(m，3H)；1.21(m，6H).
步骤B.(4S，5S)-2-[(1E)-丙-1-烯基]-1，3-二氧戊环-4，5-二羧酸二异丙酯将(2E)-1，1-二乙氧基丁-2-烯(32.20g，223.27mmol)、D-酒石酸(-)-二异丙酯(64.64mL，245.60mmol)和甲苯磺酸吡啶(2.24g，8.93mmol)在100mL苯中的溶液加热到95℃，蒸馏除去溶剂和生成的EtOH。在95℃下7小时后，将反应物冷却至室温，真空浓缩。经正相色谱纯化(10-＞30％ EtOAc/己烷)得到35.37g(55％)(4S，5S)-2-[(1E)-丙-1-烯基]-1，3-二氧戊环-4，5-二羧酸二异丙酯，为橙色油体。
1H NMR(CDCl3，400MHz)6.03(m，1H)；5.86(m，2H)；5.12(m，2H)；4.71(d，J＝3.84Hz，1H)；4.63(d，J＝3.84Hz，1H)；1.78(m，3H)；1.30(d，J＝6.23Hz，12H)；LC/MS[M+H]+＝287.
步骤C.(4S，5S)-2-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]-1，3-二氧戊环-4，5-二羧酸二异丙酯向中间体(4S，5S)-2-[(1E)-丙-1-烯基]-1，3-二氧戊环-4，5-二羧酸二异丙酯(4.10g，14.32mmol)在60mL己烷中的-20℃溶液内加入1M的二乙基锌己烷溶液(42.96mL，42.96mmol)。在剧烈搅拌下滴加二碘甲烷(6.92mL，85.92mmol)。在-20℃下1小时后，将该反应物在-5℃下冷冻。在-5℃下17小时后，再于0℃搅拌反应5小时，然后用饱和氯化铵冷溶液(100mL)中止，继用Et2O(100mL×3)提取。合并的有机相用硫代硫酸钠水溶液(100mL)和盐水(100mL)洗涤，过滤，硫酸钠干燥，再次过滤，然后真空浓缩。经正相色谱纯化(10-＞30％EtOAc/己烷)得到3.85g(89％)(4S，5S)-2-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]-1，3-二氧戊环-4，5-二羧酸二异丙酯，为黄色油体。
1H NMR(CDCl3，400MHz)5.12(m，2H)；4.78(d，J＝6.41Hz，1H)；4.66(d，J＝4.21Hz，1H)；4.57(d，J＝4.22Hz，1H)；1.30(m，12H)；1.09(d，J＝5.68Hz，3H)；0.94(m，2H)；0.67(m，1H)；0.39(m，1H)；LC/MS[M+H]+＝301.
步骤D.2-甲基-N-{(1E)-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]亚甲基}丙烷-2-亚磺酰胺向(4S，5S)-2-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]-1，3-二氧戊环-4，5-二羧酸二异丙酯(0.450g，1.50mmol)在5mL CH2Cl2/200μL H2O中的溶液内加入对甲苯磺酸(0.071g，0.38mmol)。将该反应在50℃下加热回流。在50℃下16小时后，冷却反应至室温。除去在该反应物顶部生成的水滴。加入硫酸铜(II)(0.507g，2.85mmol)和(R)-(+)-叔丁基亚磺酰胺(0.173g，1.43mmol)。在室温下5.5小时后，通过硅藻土垫过滤反应物。将该硅藻土用CH2Cl2(200mL)洗涤并且真空浓缩滤液。经正相色谱纯化(10-＞50％ EtOAc/己烷)得到0.235g(92％)2-甲基-N-{(1E)-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]亚甲基}丙烷-2-亚磺酰胺，为清亮无色残留物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)7.46(d，J＝7.69Hz，1H)；1.62(m，1H)；1.25(m，2H)；1.10(m，12H)；0.82(m，1H)；LC/MS[M+H]+＝188.
步骤E.2-甲基-N-{(1S)-1-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]乙基}丙烷-2-亚磺酰胺向2-甲基-N-{(1E)-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]亚甲基}丙烷-2-亚磺酰胺(0.300g，1.60mmol)在5mL CH2Cl2中的-78℃溶液内加入3M在Et2O中的甲基溴化镁(1.07mL，3.20mmol)。在-78℃下2小时后，温热反应至室温。在室温下1小时后，用饱和氯化铵溶液(15mL)中止反应，继用EtOAc(30mL×2)提取。合并的有机相用盐水(15mL)洗涤，硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。经正相色谱纯化(0-＞80％ EtOAc/己烷)得到0.224g(69％)2-甲基-N-{(1S)-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]乙基}丙烷-2-亚磺酰胺，为清亮无色残留物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)2.77(m，1H)；1.31(d，J＝6.50Hz，3H)；1.21(s，9H)；1.03(d，J＝5.77Hz，3H)；0.54(m，3H)；0.30(m，1H)；LC/MS[M+H]+＝204.
步骤F.(1S)-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]乙烷氯化铵向2-甲基-N-{(1S)-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]乙基}丙烷-2-亚磺酰胺(0.210g，1.03mmol)在4mL MeOH中的0℃溶液内加入2M在Et2O中的HCl(0.52mL，1.03mmol)。从0℃至室温搅拌反应18小时，然后真空浓缩，将所得物质溶于Et2O(4mL)，真空浓缩两次，得到(1S)-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]乙烷氯化铵，为白色固体。
1H NMR(CDCl3，400MHz)2.60(m，1H)；1.37(d，J＝6.59Hz，3H)；1.08(d，J＝6.04Hz，3H)；0.77(m，1H)；0.64(m，2H)；0.42(m，1H)；LC/MS[M+H]+＝100.
中间体3.6.5{(1R)-1-[(1S，2S)-2-甲基环丙基]乙基}胺 采用制备中间体3.6.4所述方法制备，其改进之处是在步骤D中使用(S)-(+)-叔丁烷亚磺酰胺。LC/MS[M+H]+＝100。
中间体3.6.6(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]胺 以2-(2-甲氧基乙氧基)乙胺和反式-2-甲基环丙烷羧酸为原料，利用合成中间体3.6.1所述方法中的步骤A和B制备。
中间体3.6.7(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]胺 以2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙胺和反式-2-甲基环丙烷羧酸为原料，利用合成中间体3.6.1所述方法中的步骤A和B制备。MS(ES，M+H)232。
中间体3.6.8(1-(反式-2-甲基环丙基(-N-[(1-甲基-1H-吡唑-3-基)甲基]甲胺 以中间体3.4.1和1-甲基-1H-吡唑-3-羧酸为原料，利用合成中间体3.6.1所述方法中的步骤A和B制备。
中间体3.6.91-(反式-2-甲基环丙基)-N-[(1-甲基-1H-咪唑-2-基)甲基]甲胺 以中间体3.4.1和1-甲基-1H-咪唑-2-羧酸为原料，利用合成中间体3.6.1所述方法中的步骤A和B制备。
中间体3.6.101-(反式-2-甲基环丙基)-N-[(1-甲基-1H-吡唑-4-基)甲基]甲胺
以中间体3.4.1和1-甲基-1H-吡唑-4-羧酸为原料，利用合成中间体3.6.1所述方法中的步骤A和B制备。
中间体3.7.1N-[(反式-2-甲基环丙基)甲基]甘氨酸乙酯 步骤A还原性胺化将中间体3.2.1的盐酸盐(2.0g，9.45mmol)的DCE溶液(50mL)冷却至0℃，依次用乙醛酸乙酯(1.01g，2.2mL，9.92mmol，50％甲苯溶液)、NaHB(OAc)3(2.83g，13.2mmol)处理。温热所得溶液至室温，搅拌过夜。此时加入碳酸氢盐水溶液，进一步搅拌该溶液20分钟。将混合物用EtOAc重复提取，合并的有机层用盐水洗涤。在用硫酸钠干燥后除去溶剂，再进一步减压干燥，得到2.0g N-苄基-N-[(反式-2-甲基环丙基)甲基]甘氨酸乙酯，为白色半固体。LC/MS[M+H]＝262.2。
步骤B氢化在250mL烧瓶内加入在75mL EtOH中的上述反应物(2.0g，7.6mmol)，用N2冲洗10分钟。向该溶液中依次加入10％Pd(OH)2(80mg)、HCl(2.0mL，7.6mmol，4.0N二烷溶液)。利用氢气罐将内容物置于氢气氛围中。搅拌过夜后将混合物通过硅藻土过滤。再加入等量的HCl，浓缩所得混合物，真空干燥得到1.6g上述标题产物的盐酸盐(灰白色固体)1H NMR(CD3OD，400MHz)δ4.28(q，J＝7.2Hz，2H)；3.95(s，2H)；2.95(m，2H)；1.29(t，J＝7.2Hz，3H)；1.07(d，J＝5.6Hz，3H)；0.82(m，2H)；0.55(m，1H)；0.45(m，2H)；LC/MS[M+H]＝176.3.
中间体4.2a.12-氯-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯和甲基(甲磺酰基)胺为原料按照制备中间体4.2c.1的步骤A和B所述制备。
中间体4.2b.12-氯-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸和中间体3.6.1为原料按照制备中间体4.2c.1，步骤C所述的相似方法制备。MS M+1＝299。
中间体4.2b.22-氯-6-{(2-甲基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸和中间体3.3.1为原料按照制备中间体4.2c.1，步骤C所述的相似方法制备。MS M+1＝255。
中间体4.2c.12-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4) 步骤A磺酰胺引入向氩气冲洗过的干燥烧瓶内加入2，6-二氯异烟酸甲酯(25g，121.3mmol)、甲基(甲磺酰基)胺(3.18g，29.12mmol)、磷酸钾(38.6g，182mmol)、Xantphos(4.2g，7.28mmol)和三(二亚苄基丙酮)二钯(2.22g，2.43mmol)。加入二烷(1200mL)，将所得溶液用氩气脱气，然后加热到100℃反应16小时。冷却反应至室温，通过硅藻土过滤，真空蒸发。快速层析(硅胶，0-50％0-40％ EtOAc/己烷)得到2-氯-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸甲酯，为黄色油体1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.88(s，1H)，7.68(s，1H)，3.96(s，3H)，3.44(s，3H)，3.11(s，3H).
步骤B水解向2-氯-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸甲酯(90.2g，323.6mmol)在1∶1 THF∶MeOH(1L)中的溶液内加入NaOH(388mL，388mmol，1N)。室温搅拌反应混合物2小时，用1N HCl酸化至pH3-4，以二氯甲烷(x2)提取，硫酸钠干燥并且真空浓缩，得到2-氯-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(中间体4.2c.1)，为白色固体。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.88(s，1H)，7.63(s，1H)，3.39(s，3H)，3.13(s，3H).
步骤C胺的引入将2-氯-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(20g，75.6mmol)、反式(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]胺盐酸盐(17.65g，98.2mmol)、磷酸钾(48.12g，226.7mmol)在DMA(300mL)中的悬浮液用氩气脱气10分钟。加入Pd(PtBu3)2(1.93g，3.78mmol)，再将反应混合物用氩气脱气10分钟。然后于110℃搅拌反应混合物24小时。冷却反应至室温，通过硅藻土过滤，用EtOAc冲洗，加水稀释，用1N HCl调节pH至3-4，再用EtOAc(x3)提取。有机层用LiCl水溶液洗涤，硫酸钠干燥并且真空浓缩，得到2-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.05(s，1H)，7.02(s，1H)，3.76(t，J＝6.3Hz，2H)，3.60(t，J＝6.3Hz，2H)，3.52-3.43(m，1H)，3.39(s，3H)，3.36(s，3H)，3.38-3.30(m，1H)，3.18(s，3H)，1.23(d，J＝6.1Hz，3H)，0.82-0.64(m，2H)，0.46-0.39(m，1H)，0.32-0.25(m，1H).
中间体4.2c.22-{苄基[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、甲基(甲磺酰基)胺和中间体3.2.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.88(s，1H)，7.63(s，1H)，3.39(s，3H)，3.13(s，3H).
中间体4.2c.32-{甲基[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4)
以2，6-二氯异烟酸甲酯、甲基(甲磺酰基)胺和中间体3.3.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.02(s，1H)，6.96(s，1H)，3.55(A of ABX，dd，J＝14.4，6.0Hz，1H)，3.29(B of ABX，dd，J＝14.4，7.2Hz，1H)，3.35(s，3H)，3.15(s，3H)，3.12(s，3H)，1.03(d，J＝6.0Hz，3H)，0.82-0.66(m，2H)，0.48-0.41(m，1H)，0.28-0.22(m，1H).
中间体4.2c.42-{(2，2-二氟乙基)[(2-反式-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[(2-甲氧基乙基)(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、2-甲氧基乙基(甲磺酰基)胺和中间体3.6.2为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝422.
中间体4.2c.52-{(2-甲氧基乙基)[(2-反式-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[(2-甲氧基乙基)(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、2-甲氧基乙基(甲磺酰基)胺和中间体3.6.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝416.
中间体4.2c.62-{(2-甲氧基乙基)[(2-反式-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[(2-甲氧基乙基)(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4)
以2，6-二氯异烟酸甲酯、2-甲氧基乙基(甲磺酰基)胺和中间体3.3.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝372.
中间体4.2c.72-(1，1-二氧化异噻唑烷-2-基)-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、异噻唑烷1，1-二氧化物和中间体3.6.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝384.
中间体4.2c.82-{苄基[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-(1，1-二氧化异噻唑烷-2-基)异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、异噻唑烷1，1-二氧化物和中间体3.2.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝416.
中间体4.2c.92-{(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧基}乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、甲基(甲磺酰基)胺和中间体3.6.3为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝472.
中间体4.2c.102-({(1R)-1-[(2S)-2-甲基环丙基)乙基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、甲基(甲磺酰基)胺和中间体3.6.5为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝328.
中间体4.2c.112-{苄基[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(异丙基磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4)
以2，6-二氯异烟酸甲酯、甲基(异丙基磺酰基)胺和中间体3.2.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝432.
中间体4.2c.122-{苄基[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(乙基磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、甲基(乙基磺酰基)胺和中间体3.2.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝418.
中间体4.2c.132-[苄基(甲磺酰基)氨基]-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、苄基(甲磺酰基)胺和中间体3.6.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝448.
2-氯-6-(甲基氨基)异烟酸甲酯
步骤A甲胺偶联向2，6-二氯异烟酸(25g，130.2mmol)在52mL水中的溶液内加入60mL 40％甲胺水溶液。在100℃下加热回流反应物。16小时后，冷却反应物至室温。将反应物用1N HCl(200mL)酸化，继用EtOAc(300mL×4)提取。合并的有机物用盐水(150mL)洗涤，硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩得到24.2g(100％)2-氯-6-(甲基氨基)异烟酸，为棕色固体。LC/MS[M+H]+＝187.0.
步骤B酯化向2-氯-6-(甲基氨基)异烟酸(18.1g，97mmol)在600mL MeOH中的溶液内极其缓慢地加入亚硫酰氯(7.783mL，107mmol)(剧烈释出HCl气体)。回流反应至65℃2小时。2小时后，真空浓缩反应。将残留物溶于EtOAc(400mL)，用饱和NaHCO3溶液(300mL)中和。将该水溶液用EtOAc(150mL×3)提取。合并的有机相用盐水(150mL)洗涤，硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩。通过正相色谱(5％EtOAc/己烷，然后20％EtOAc/己烷)纯化得到11.3g(58％)2-氯-6-(甲基氨基)异烟酸甲酯，为棕黄色固体。
1H NMR(CDCl3，400mHz)7.08(d，J＝0.91Hz，1H)；6.84(d，J＝0.73Hz，1H)；5.09(s，NH)；3.92(s，3H)；2.96(d，J＝5.31Hz，3H)；LC/MS[M+H]+＝201.0.
中间体4.2.c.142-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(吡啶-3-基磺酰基)氨基]异烟酸 步骤A磺化向2-氯-6-(甲基氨基)异烟酸甲酯(2.00g，9.97mmol)在3∶1 CH2Cl2∶吡啶(总计100mL)中的溶液内加入3-吡啶磺酰氯盐酸盐(6.40g，29.9mmol)和二甲氨基吡啶(0.609g，4.98mmol)。在50℃加热回流反应。36小时后，冷却反应至室温。加CH2Cl2(200mL)稀释，继用1N HCl(150mL)溶液洗涤。水溶液用CH2Cl2(100mL×2)提取。合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，硫酸镁干燥，过滤，真空浓缩。经正相色谱纯化(20-＞40％EtOAc/己烷)得到3.12g(92％)2-氯-6-[甲基(吡啶-3-基磺酰基)氨基]异烟酸甲酯，为黄色残留物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)8.95(d，J＝0.64Hz，1H)；8.82(m，1H)；8.03(m，2H)；7.67(m，1H)；7.45(m，1H)；3.99(s，3H)；3.39(s，3H)；LC/MS[M+H]+＝341.9.
步骤B水解向2-氯-6-[甲基(吡啶-3-基磺酰基)氨基]异烟酸甲酯(3.12g，9.13mmol)在1∶1 MeOH∶THF(总计60mL)中的溶液内加入1N NaOH溶液(27mL，27.4mmol)。1小时后，真空浓缩反应。将反应物用EtOAc(100mL)稀释，进而以1N HCl(50mL)溶液酸化。水溶液用EtOAc(100mL×3)提取。合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，硫酸镁干燥，过滤并进行真空浓缩，得到2.63g(88％)2-氯-6-[甲基(吡啶-3-基磺酰基)氨基]异烟酸，为白色固体。LC/MS[M+H]+＝328.1.
中间体4.2c.152-[[(3，5-二甲基异唑-4-基)磺酰基](甲基)氨基]-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}异烟酸 以2-氯-6-(甲基氨基)异烟酸甲酯和3，5-二甲基异唑-4-磺酰氯为原料按照制备中间体4.2c.14所述方法制备。MS M+1＝453.
中间体4.2c.162-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-{甲基[(1-甲基-1H-咪唑-4-基)磺酰基]氨基}异烟酸 以2-氯-6-(甲基氨基)异烟酸甲酯和1-甲基-1H-咪唑-4-磺酰氯为原料按照制备中间体4.2c.14所述方法制备。MS M+1＝438.
中间体4.2c.172-[({4-[(苄氧基)羰基]哌嗪-1-基}磺酰基)(甲基)氨基]-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、4-[(甲基氨基)磺酰基]哌嗪-1-羧酸苄酯和中间体3.6.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MSM+1＝576.
中间体4.2c.182-[[(1，2-二甲基-1H-咪唑-4-基)磺酰基](甲基)氨基]-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}异烟酸
以2-氯-6-(甲基氨基)异烟酸甲酯和1，2-二甲基-1H-咪唑-4-磺酰氯为原料按照制备中间体4.2c.14所述方法制备。MS M+1＝576.
中间体4.2c.192-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(吗啉-4-基磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案4) 以2，6-二氯异烟酸甲酯、N-甲基吗啉-4-磺酰胺和中间体3.6.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝443.
中间体4.2c.202-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-(甲基{[(3-甲基异唑-5-基)甲基]磺酰基}氨基)异烟酸 以2，6-二氯异烟酸甲酯、N-甲基-1-(3-甲基异唑-5-基)甲磺酰胺和中间体3.6.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。
MS M+1＝453.
中间体4.2c.212-[[(二甲基氨基)磺酰基](甲基)氨基]-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}异烟酸 以2，6-二氯异烟酸甲酯、N，N，N’-三甲基磺酰胺和中间体3.6.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝401.
中间体4.2c.222-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(吡咯烷-1-基磺酰基)氨基]异烟酸 以2，6-二氯异烟酸甲酯、N-甲基吡咯烷-1-磺酰胺和中间体3.6.1为原料按照制备中间体4.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝427.
中间体4.3c.1N-(4-(肼基羰基)-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺(路线方案4)
步骤A偶联向2-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(14.05g，37.8mmol)的DCM(150mL)溶液中加入二异丙基乙胺(7.91mL，45.4mmol)、Boc-肼(6g，45.4mmol)、HOAt(1.03g，7.6mmol)和EDC(8.7g，45.4mmol)，并且在室温下搅拌反应混合物16小时。反应混合物加EtOAc稀释，继用10％KHSO4、碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，硫酸钠干燥，真空浓缩，并且通过快速色谱纯化(硅胶，30％-70％EtOAc/己烷)，得到2-{2-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酰基}肼羧酸叔丁酯。MS M+1＝486.
步骤BBoc的除去向冷却到0℃的2-{2-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酰基}肼羧酸叔丁酯(13.6g，28mmol)的DCM(50mL)溶液中通入HCl(g)。经LC确认反应完成后，真空浓缩反应混合物，得到N-(4-肼基羰基)-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-N-甲基甲磺酰胺的盐酸盐。
1HNMR(400MHz，CD3OD)δ6.89(s，1H)，6.88(s，1H)，3.79(t，J＝6.1Hz，2H)，3.62(t，J＝6.3Hz，2H)，3.52-3.48(m，1H)，3.42-3.35(m，1H)，3.33(s，3H)，3.31(s，3H)，3.16(s，3H)，1.04(d，J＝5.9Hz，3H)，0.85-0.70(m，2H)，0.51-0.42(m，1H)，0.31-0.23(m，1H).
附注每一种4.2c类型的酸中间体都可以转化为相应的4.3c类型的酰肼。
中间体5.2c.1N-(4-[5-(1R-氨基-1-甲基-2-苯基乙基)-1，3，4-二唑-2-基]-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺(路线方案5) 步骤偶联向N-(4-(肼基羰基)-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺盐酸盐(中间体4.3c.1，11.81g，28mmol)的DMF(100mL)溶液中加入二异丙基乙胺(9.75mL，56mmol)、Boc-D-α-甲基-苯基丙氨酸(8.6g，30.8mmol)、HOAt(1.9g，14mmol)和EDC(8.05g，42mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应混合物加EtOAc稀释，继用10％KHSO4、碳酸氢钠水溶液和LiCl水溶液洗涤，硫酸钠干燥，真空浓缩并且通过快速色谱纯化(硅胶，30％-70％EtOAc/己烷)，得到[(1R)-1-苄基-2-氧代-(2-{2-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酰基}肼基)-1-甲基乙基]氨基甲酸叔丁酯。MS M+1＝647.
步骤B环化脱水向[(1R)-1-苄基-2-氧代-(2-{2-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酰基}肼基)-1-甲基乙基]氨基甲酸叔丁酯(16.2g，25mmol)、三苯膦(7.88g，30.1mmol)和咪唑(2.05g，30.1mmol)在DCM(150mL)中的0℃冷溶液内加入四溴化碳(9.97g，30.1mmol)，将反应混合物在室温下搅拌16小时。真空浓缩反应混合物，通过快速色谱纯化(硅胶，20％-50％EtOAc/己烷)得到[(1R)-1-(5-{2-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯。MS M+1＝629.
步骤CBoc的除去向冷却到0℃的[(1R)-1-(5-{2-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯(14.65g，23.3mmol)的DCM(95mL)溶液中加入TFA(35mL)，室温搅拌反应混合物3小时，真空浓缩，再利用MeOH浓缩，随后再利用DCM浓缩数次，得到N-(4-[5-(1R-氨基-1-甲基-2-苯基乙基)-1，3，4-二唑-2-基]-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺的TFA盐。
MS M+1＝529.1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.32-7.26(m，3H)，7.21(s，1H)，7.09(s，1H)，7.08-7.02(m，2H)，3.82(t，J＝5.5Hz，2H)，3.75(t，J＝5.5Hz，2H)，3.54-3.47(m，2H)，3.45(s，3H)，3.42(s，3H)，3.42-3.36(m，2H)，3.16(s，3H)，1.96(s，3H)，1.05(d，J＝5.8Hz，3H)，0.79-0.70(m，2H)，0.50-0.44(m，1H)，0.42-0.35(m，1H).
中间体5.2c.2N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-2-(4-氟苯基)-1-甲基乙基]-1，3，4-二唑-2-基]-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺(路线方案5) 步骤偶联向N-(4-(肼基羰基)-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺盐酸盐(中间体4.3c.1，10.16g，24.1mmol)的DMF(240mL)溶液中加入二异丙基乙胺(8.39mL，48.2mmol)、Boc-D-α-甲基-4-氟苯基丙氨酸(7.88g，26.5mmol)、HOAt(1.64g，12.0mmol)和EDC(6.92g，36.1mmol)，并且将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应混合物加EtOAc稀释，继用10％KHSO4、碳酸氢钠水溶液和LiCl水溶液(x3)洗涤，硫酸钠干燥，真空浓缩得到[(1R)-1-(4-氟苯基甲基)-2-氧代-(2-{2-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酰基}肼基)-1-甲基乙基]氨基甲酸叔丁酯。MS M+1＝665.
步骤B环化脱水向[(1R)-1-(4-氟苯基甲基)-2-氧代-(2-{2-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酰基}肼基)-1-甲基乙基]氨基甲酸叔丁酯(16.64g，25.0mmol)、三苯膦(7.89g，30.1mmol)和咪唑(2.05g，30.1mmol)在DCM(150mL)中的0℃冷溶液内加入四溴化碳(9.98g，30.1mmol)，将反应混合物在室温下搅拌16小时。过滤反应混合物，真空浓缩，且通过快速色谱纯化(硅胶，20％-50％EtOAc/己烷)，从而得到[(1R)-2-(4-氟苯基)-1-(5-{2-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯。MSM+1＝647.
步骤CBoc的除去向冷却到0℃的[(1R)-2-(4-氟苯基)-1-(5-{2-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯(11.58g，17.9mmol)的DCM(75mL)溶液中加入TFA(25mL)，在室温搅拌反应混合物16小时，真空浓缩，再从DCM中浓缩数次，得到N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-2-(4-氟苯基)-1-甲基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺的TFA盐。
MS M+1＝547.1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.10(m，5H)，7.01(s，1H)，3.82(t，J＝5.86Hz，2H)，3.64(t，J＝5.86，2H)，3.50(AB重迭多峰m，4H)，3.39(s，3H)，3.35(s，3H)，3.18(s，3H)，1.88(s，3H)，1.05(d，J＝5.86，3H)，0.78(m，2H)，0.49(m，1H)，0.30(m，1H).
其中X为二唑的其他中间体如表1所述制备。
表I二唑中间体




中间体6.2.1[(1R)-1-(2-{2-(苄基{[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3-唑-5-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸酯 步骤A偶联向中间体4.2c.2(0.452g，1.121mmol)和中间体2.3.1(0.300g，1.019mmol)在12mL DMF中的溶液内加入EDC(0.240g，1.253mmol)和HOAt(0.153g，1.121mmol)。15小时后，加水和EtOAc稀释反应，随后用10％KHSO4、饱和NaHCO3、3M LiCl(3x)和盐水洗涤。有机相用硫酸钠干燥，过滤，浓缩，得到[(1R)-1-苄基-3-({2-(苄基{[反式-(1S，2S)-甲基环丙基]甲基}氨基)-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酰基}氨基)-2-羟基-1-甲基丙基]氨基甲酸叔丁酯，为两种非对映体的混合物，该产物无需进一步纯化而直接使用。LCMS(M+H)＝680.
步骤B氧化向步骤A的[(1R)-1-苄基-3-({2-(苄基{[反式-(1S，2S)-甲基环丙基]甲基}氨基)-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酰基}氨基)-2-羟基-1-甲基丙基]氨基甲酸叔丁酯(0.693g，1.019mmol)和三乙胺(0.426mmL，3.058mmol)在10mL CH2Cl2中的溶液内加入在2.5mL DMSO中的三氧化硫吡啶配合物(0.406g，2.55mmol)。15小时后，加EtOAc稀释反应，随后用10％KHSO4、饱和NaHCO3、3M LiCl和盐水洗涤，之后再用硫酸钠干燥，过滤并浓缩，残留物使用正相硅胶色谱纯化(10-＞40％EA/己烷)，得到[(1R)-1-苄基-3-({2-(苄基{[反式-(1S，2S)-甲基环丙基]甲基}氨基)-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酰基}氨基)-1-甲基-2-氧代丙基]氨基甲酸叔丁酯，为白色泡沫体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.32-7.26(m，5H)，7.23-7.19(m，3H)，7.10(d，J＝11.7Hz，2H)，6.81(s，1H)，6.80(s，2H)，4.86(m，2H)，4.62(m，2H)，4.48(m，2H)，3.56(m，2H)，3.33-3.28(m，5H)，3.05(d，J＝13.7Hz)，2.84(s，3H)，1.55(s，3H)，1.31(s，9H)，0.98(d，J＝5.9Hz，3H)，0.62(m，1H)，0.60(m，1H)，0.36(m，1H)，0.26(m，1H).LCMS(M+H)＝678.
步骤C脱水向[(1R)-1-苄基-3-({2-(苄基{[反式-(1S，2S)-甲基环丙基]甲基}氨基)-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酰基}氨基)-1-甲基-2-氧代丙基]氨基甲酸叔丁酯(0.230g，0.339mmol)在4mL 1，2-二氯乙烷中的溶液内加入甲氧基羰基氨基磺酰基三乙基氢氧化铵(0.485g，2.04mmol，Burgess试剂)。反应在100℃下用微波处理40分钟，然后直接通过正相硅胶色谱纯化(10-＞40％EtOAc/己烷)，得到[(1R)-1-(2-{2-(苄基{[(1S，2S)-2-甲基环丙基]甲基}氨基)-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3-唑-5-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸酯，为白色泡沫体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)□7.31-7.19(m，9H)，7.05-7.02(m，3H)，6.93(s，1H)，4.89(m，2H)，3.57(dd，J＝14.8，5.9Hz，1H)，3.47(m，1H)，3.34-3.30(m，4H)，3.11(d，J＝13.2Hz，1H)，2.88(s，3H)，1.59(s，3H)，1.34(s，9H)，0.98(d，J＝5.9Hz，3H)，0.82(m，1H)，0.61(m，1H)，0.36(m，1H)，0.27(m，1H).LCMS(M+H)＝660.
中间体6.2.2[(1R)-1-(2-{2-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3-唑-5-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯酯 以中间体4.2c.1和2.3.1为原料采用制备中间体6.2.1所述的相似方法制备。MS M+1＝628.
中间体8.4.1N-{4-(5-{(1R)-1-[(叔丁氧羰基)氨基]-1-甲基-2-苯基乙基}-1，3，4-二唑-2-基)-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-2-基}-N-[(反式-2-甲基环丙基)甲基]甘氨酸(路线方案8) 步骤A氯化室温下，在加有中间体5.2c.22(1.9g，3.41mmol)和DCM(34mL)的烧瓶中加入N-氯代琥珀酰亚胺(455g，3.41mmol)。搅拌反应至起始原料消失为止(根据LC/MS检测)。此时浓缩混合物至干，使用AcCN/H2O线性梯度液通过RP-HPLC纯化。汇集含有产物的部分，冻干得到780mg 3-氯产物。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ7.27(m，3H)；7.13(s，1H)；7.08(m，2H)；4.37(s，2H)；4.17(q，J＝7.1Hz，2H)；3.55(dd，J＝14.8，5.9Hz，2H)；3.35(m，2H)；3.20(s，3H)；3.18(s，3H)；1.60(s，3H)；1.41(s，9H)，1.24(t，J＝7.1Hz，3H)；1.05(d，J＝6.7，3H)；0.80(m，2H)；0.47(m，1H)；0.32(m，1H)；LC/MS[M+H]＝691.0步骤B水解将上面步骤A的中间体(750mg，1.09mmol)溶于11mL THF。向该溶液中加入5mL 4.0N LiOH。搅拌过夜后用1N HCl中和混合物的pH至4.0。将混合物重复用EtOAc(3×25mL)提取，合并的各层继续用碳酸氢钠水溶液、水和盐水洗涤。硫酸钠干燥，随后减压除去溶剂，得到标题中间体，为黄色泡沫体。
1H NMR(CD3OD，400MHz)δ7.27(m，3H)；7.18(m，3H)；4.32(s，2H)；3.50(m，2H)；3.35(m，2H)；3.20(s，3H)；3.18(s，3H)；1.60(s，3H)；1.41(s，9H)；1.09(d，J＝6.3，3H)；0.80(m，2H)；0.47(m，1H)；0.32(m，1H)；LC/MS[M+H]＝663.0.
中间体8.4.2[(1R)-1-(5-{2-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯(路线方案8) 按照中间体8.4.1的制备所述，以中间体5.1c.2为原料，使用NCS制备。MS M+1＝615.
中间体9.1.13-氟-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-2-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案9) 将2-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(中间体4.2c.1，0.05g，0.135mmol)的乙腈(3mL)溶液用1-氯甲基-4-氟-1，4-二氮杂二环[2.2.2]辛烷双(四氟硼酸盐)(0.047g，0.134mmol)处理，室温搅拌16小时。反应通过反相LC纯化，得到3-氟-6-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}-2-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸，为淡黄色固体LCMS[M+H]+＝390.3.
中间体9.1.26-{苄基[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-3-氟-2-[甲基(甲磺酰基)氨基]异烟酸(路线方案9)
以中间体4.2c.2为原料采用制备中间体9.1.1所述的相似方法制备。MS M+1＝422.
中间体9.3.1[(1R)-1-(5-{3-溴-6-{[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-2-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯(路线方案9) 向[(1R)-1-甲基-1-(5-{2-{[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯(Boc除去之前的中间体5.2c.3，250mg，0.438mmol)在8mL CH2Cl2中的溶液内加入NBS(78mg，0.438mmol)。2小时后，浓缩该反应物，通过正相硅胶色谱纯化(20-＞40％EtOAc/己烷)，得到[(1R)-1-(5-{3-溴-6-{[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-2-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯，为黄色固体。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.31-7.26(m，3H)，7.06-7.04(m，2H)，6.90(s，1H)，4.94(m，1H)，3.57(d，J＝13.2Hz，1H)，3.42(d，J＝13.1Hz，1H)，3.24(s，3H)，3.23(s，3H)，3.18(m，1H)，3.07(m，1H)，1.71(s，3H)，1.43(s，9H)，1.09(d，J＝6.0Hz，3H)，0.80(m，1H)，0.70(m，1H)，0.41(m，1H)，0.33(m，1H).LCMS(M+H)＝649，651(溴图案).
中间体10.2.1N-[3-氯-4-(5-{1-[(二苯基亚甲基)氨基]乙基}-1，3，4-二唑-2-基)-6-((3-甲氧基丙基){反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲磺酰胺(路线方案10) 步骤A氯化向N-[4-[5-(1-氨基乙基)-1，3，4-二唑-2-基]-6-((2-甲氧基乙基){[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲磺酰胺三氟乙酸盐(中间体10.1.1，3.600g，6.51mmol)在100mL CH2Cl2中的溶液内加入N-氯代琥珀酰亚胺(0.870g，6.51mmol)。12小时后，浓缩反应物，所得残留物由3∶1期望的∶非期望的氯位置异构体的混合物组成，采用HPLC纯化(Sunfire C18 Prep OBD柱，30×150mm，35mL/min)得到所需化合物。将包含所需氯位置异构体的组分分配到EtOAc和饱和NaHCO3中，分离各层，有机层用盐水洗涤，浓缩得到N-[4-[5-(1-氨基乙基)-1，3，4-二唑-2-基]-3-氯-6-((2-甲氧基乙基){[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲磺酰胺，为黄色泡沫体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.12(s，1H)，4.40(br s，1H)，3.71(m，2H)，3.54(m，2H)，3.43(dd，J＝14.8，6Hz，1H)，3.33-3.28(m，4H)，3.24(s，3H)，3.19(s，3H)，1.61(d，J＝5.9Hz，3H)，1.02(d，J＝5.9Hz，3H)，0.74-0.64(m，2H)，0.41(m，1H)，0.29(m，1H).LCMS[M+H]+＝473(氯图案)。
步骤B盐酸盐的形成在0℃下，向N-[4-[5-(1-氨基乙基)-1，3，4-二唑-2-基]-3-氯-6-((2-甲氧基乙基){[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲磺酰胺(0.060g，0.102mmol)在1mL CH2Cl2中的溶液内加入4M的HCl二烷溶液(0.038mL，0.153mmol)。浓缩该反应物得到N-[4-[5-(1-氨基乙基)-1，3，4-二唑-2-基]-3-氯-6-((2-甲氧基乙基){[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲磺酰胺盐酸盐，为黄色泡沫体。LCMS[M+H]+＝473(氯图案(chlorine pattern))。
步骤B席夫碱的形成向步骤B的产物(0.720g，1.413mmol)的CH2Cl2溶液中加入二苯甲酮亚胺(0.356mL，2.12mmol)。在室温下进行反应15小时，然后加水稀释，继用EtOAc(3x)提取。合并的有机相用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩。将残留物通过硅胶色谱纯化(5-＞50％EtOAc/己烷)，得到N-[4-(5-{1-[(二苯基亚甲基)氨基]乙基}-1，3，4-二唑-2-基)-6-((2-甲氧基乙基){[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲磺酰胺，为黄色泡沫体。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.62(d，J＝7.1Hz，2H)，7.52-7.45(m，2H)，7.40-7.37(m，2H)，7.33-7.24(m，4H)，7.14(s，1H)，4.93(q，J＝6.4Hz，1H)，3.71(m，2H)，3.54(t，J＝6.1Hz，2H)，3.45-3.42(m，1H)，3.34-3.27(m，4H)，3.24(s，3H)，3.20(s，3H)，1.68(d，J＝6.6Hz，3H)，1.01(d，J＝5.9Hz，3H)，0.89-0.64(m，2H)，0.40(m，1H)，0.26(m，1H).LCMS[M+H]+＝637(氯图案).
实施例1N-(4-[5-(1R-氨基-1-甲基-2-苯基乙基)-1，3，4-二唑-2-基]-3-氯-6-{{反式-2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺(路线方案8)
将N-(4-[5-(1R-氨基-1-甲基-2-苯基乙基)-1，3，4-二唑-2-基]-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基丙烷-2-磺酰胺三氟乙酸盐(中间体5.2c.1，10.77g，16.75mmol)的DCM(145mL)溶液用NCS(2.35g，17.6mmol)处理，并且在室温下搅拌该溶液24小时。再加入115mg NCS，在室温下继续搅拌反应8小时。真空蒸发反应物，随后通过反相HPLC纯化，得到N-(4-[5-(1R-氨基-1-甲基-2-苯基乙基)-1，3，4-二唑-2-基]-3-氯-6-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺三氟乙酸盐，为淡黄色固体。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.34(t，J＝3.11，3H)，7.12(s，1H)，7.08(m，2H)，3.79(t，J＝5.9Hz，2H)，3.62(t，J＝5.7Hz，2H)，3.53(dd，J＝14.8，5.9Hz，1H)，3.44(s，2H)，3.40(dd，J＝15.0，7.0Hz，1H)，3.34(s，3H)，3.26(s，3H)，3.24(s，3H)，1.87(s，3H)，1.05(d，J＝5.9Hz，3H)，0.79(m，2H)，0.49(m，1H)，0.31(m，1H).LCMS[M+H]+＝563.3.
使用中间体3.2.1，步骤A的优选的反式-S，S对映体，实现优选的对映体纯的S，S，R实施例的制备。
实施例2N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-2-(4-氟苯基)-1-甲基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氯-6-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺(路线方案8) 将N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-2-(4-氟苯基)-1-甲基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺三氟乙酸盐(中间体5.2c.2，9.79g，17.9mmol)在DCM(250mL)中的溶液用NCS(2.39g，17.9mmol)处理，并且在室温下搅拌该溶液60小时。在室温搅拌反应的同时再于72小时内分三份加入360mg NCS。真空蒸发反应物，随后通过反相HPLC纯化来分离需要的氯异构体。将所得物质进一步通过快速色谱纯化(硅胶，0％-3％异丙醇/CHCl3)，得到N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-2-(4-氟苯基)-1-甲基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氯-6-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲磺酰胺。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.13(s，1H)，7.02(m，2H)，6.93(m，2H)，3.74(t，J＝6.05，2H)，3.57(t，J＝6.04，2H)，3.41(AB重迭多峰m，5H)，3.28(m，4H)，3.22(s，3H)，3.07(B of AB重迭多峰m，1H)，1.86(s，2H)，1.64(s，3H)，1.05(d，J＝5.86，3H)，0.78-0.67(m，2H)，0.43(m，1H)，0.31(m，1H).LCMS[M+H]+＝581.0.
如下面表2所述制备更多的带有二唑基团的3-Cl取代吡啶衍生物。
表2-3-Cl衍生物





实施例37N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氯-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基-1-吡啶-2-基甲磺酰胺 步骤AMitsunobu在0℃下，向(1R)-1-(5-{3-氯-6-((2-甲氧基乙基){[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)-2-[(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基氨基甲酸叔丁酯(中间体8.4.2，0.028g，0.043mmol)的甲苯(1ml)溶液中加入2-(羟甲基)吡啶(0.004ml，0.043mmol)和三苯膦(0.011g，0.043mmol)，接着加入偶氮二羧酸二异丙酯(0.008ml，0.043mmol)。移去冰浴，室温搅拌溶液过夜。次日真空浓缩该溶液，再吸收到DMF中，然后过滤。产物通过反相HPLC纯化，得到0.015g(1R)-1-(5-{3-氯-6-((2-甲氧基乙基){[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)-2-[(甲磺酰基)(吡啶-2-基甲基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基氨基甲酸叔丁酯，LCMS[M+H]740.2.
步骤BBoc的除去向(1R)-1-(5-{3-氯-6-((2-甲氧基乙基){[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)-2-[(甲磺酰基)(吡啶-2-基甲基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基氨基甲酸叔丁酯的CH2Cl2(1ml)溶液中加入TFA(0.5ml)，在室温下搅拌30分钟。蒸发溶剂得到0.008g N-[4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氯-6-((2-甲氧基乙基){[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-(吡啶-2-基甲基)甲烷磺酰胺。LCMS[M+H]640.2。C31H38ClN7O4S的精确质谱计算值640.2468；实测值640.2482。
表3 3-Cl衍生物

实施例49N-(4-{5-[1-氨基-2-(3，5-二溴苯基)-1-甲基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氨-6-{(2-甲氧基乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺(路线方案10) 在0℃下，向N-[4-(5-{1-[(二苯基亚甲基)氨基]乙基}-1，3，4-二唑-2-基)-6-((2-甲氧基乙基){[反式-(1S，2S)-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲烷磺酰胺(0.106g，0.162mmol)在2mL DMF中的溶液内加入在THF中的1M NaHMDS(0.211mL，0.211mmol)。5分钟后，通过套管向生成的深蓝色溶液中加入在1mL DMF中的3，5-二溴苄基溴(0.072g，0.219mmol)，溶液在经套管加料完毕后变为黄色。30分钟后，加入1mL 1N HCl，让反应进行15小时以完成席夫碱的水解。将反应物倒入10g SCX离子交换酮上，先用150mL MeOH洗脱，继用150mL在MeOH中的2M NH3洗脱，得到分析纯的N-[4-{5-[(1R)-1-氨基-2-(3，5-二溴苯基)-1-甲基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氯-6-((2-甲氧基乙基){[反式-(1S，2S)-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲烷磺酰胺，为黄色泡沫体。由该烷基化产生的非对映异构体可以采用ChiralPak AD手性固定相分离。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.55(s，J＝7.1Hz，1H)，7.17(s，2H)，7.04(s，1H)，3.71(m，2H)，3.52(t，J＝5.9Hz，2H)，3.42(dd，J＝14.8，5.7Hz，1H)，3.33-3.29(m，4H)，3.24(s，3H)，3.19(s，3H)，1.80(s，3H)，1.01(d，J＝5.9Hz，3H)，0.72-0.65(m，2H)，0.40(m，1H)，0.28(m，1H)。LCMS [M+H]+＝721(配合物图案)。C26H34Br2ClN6O4S的精确质谱计算值719.0412；实测值719.0446。
如下面表3所述，使用适当的烷基化剂，制备其他带有二唑基和替换的Q-R1基团的3-Cl取代吡啶衍生物。
表4-3-Cl衍生物


实施例66N2-{4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-5-氯-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-2-基}-N，N-二甲基-N2-[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基]甘氨酰胺 步骤A偶联向装有中间体8.4.1(25mg，0.04mmol)、二甲胺(5.1mg，0.11mmol)、HOAt(2.6mg，0.02mmol)和DMF(0.2mL)的13×100mm螺旋盖试验管中加入EDC-HCl(10.2mg，0.05mmol)。搅拌3小时后，加KHSO4稀释反应物，继用EtOAc(2×10mL)提取。有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，浓缩至干，得到Boc-保护酰胺粗品LC/MS[M+H]＝689.1(氯图案)步骤BBoc的除去将上面步骤A的酰胺溶于0.3mL CH2Cl2，在冰浴上冷却，用TFA(16μL，0.2mmol)处理。起始原料消失后在氮气流下浓缩反应物，并且通过RP-HPLC纯化。冻干包含产物的部分，得到白色固体标题化合物1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.32(m，3H)，7.10(s，1H)，7.08(m，2H)，4.54(s，2H)，3.55(dd，J＝(br s，1H)，3.71(m，2H)，3.54(m，2H)，3.45(s，3H)，3.33-3.28(m，2H)，3.19(s，3H)，3.13(s，3H)，3.14(s，3H)，2.92(s，3H)，1.87(s，3H)，1.05(d，J＝5.9Hz，3H)，0.80(m，2H)，0.48(m，1H)，0.32(m，1H)；LC/MS[M+H]＝590.0表5-酰胺衍生物
实施例71N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氯-6-{(2-环丙基-2-氧代乙基)[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺 步骤AWeinreb酰胺的形成在实施例66所述的类似条件下，偶联中间体8.4.1与N，O-二甲基羟胺，得到Weinreb酰胺LC/MS[M+H]＝706.0.
步骤B格利雅加成室温下，在含有步骤A的Weinreb反应物(40mg，0.06mmol)和甲苯(0.5mL)的烧瓶中一次性加入5当量的环丙基格利雅(0.29mmol，1.0M乙醚)。20分钟后，加入2mL NH4Cl水溶液，随后再加入H2O和EtOAc。分离有机层，用盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，减压浓缩。所得粗品经RP-HPLC纯化得到被保护的酮LC/MS[M+H]＝680.7.
步骤CBoc的除去将步骤B的中间体(10mg，0.01mmol)溶于1.0mL CH2Cl2，在冰浴中冷却，且用TFA(10μL)处理。待起始原料消失后在氮气流下减压浓缩反应，再通过RP-HPLC纯化。冻干包含产物的部分，得到白色固体标题化合物1H MR(400MHz，CD3OD)δ7.31(m，3H)，7.06(m，3H)，4.65(s，2H)，3.52(m，2H)，3.42(br s，2H)，3.17(s，3H)，3.13(s，3H)，2.16(m，1H)，1.85(s，3H)，1.02(d，J＝6.0Hz，3H)，0.98(m，4H)，0.70(m，2H)，0.45(m，1H)，0.30(m，1H)；LC/MS[M+H]＝587.0.
实施例72N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氯-6-{[(反式-2-甲基环丙基)甲基][2-(5-甲基-1，3，4-二唑-2-基)-2-氧代乙基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺 步骤A偶联8.4.1和乙酰肼在实施例66所述的类似条件下，偶联中间体8.4.1与乙酰肼，得到双酰化肼LC/MS[M+H]＝719.0
步骤B环化脱水向含有步骤A的反应物(60mg，0.08mmol)、聚苯乙烯键合三苯膦(100mg，0.13mmol，1.3mmol/g，200目)、和咪唑(8mg，0.12mmol)的0℃CH2Cl2溶液中一次性加入CBr4(39mg，0.12mmol)。搅拌反应48消失。此时将该混合物过滤，浓缩并通过RP-HPLC纯化。汇集包含产物的部分，在用碳酸氢钠水溶液/EtOAc后处理后进行分离。最后的有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，浓缩得到环化的中间体LC/MS[M+H]＝701.0.
步骤CBoc的除去将步骤B的中间体(56mg，0.08mmol)溶于6.0mL CH2Cl2，在冰浴中冷却，并用TFA(100μL)处理。待起始原料消失后在氮气流下减压浓缩反应，再通过RP-HPLC纯化。冻干包含产物的部分，得到白色固体标题化合物LC/MS[M+H]＝600.9(氯图案)。
实施例73N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氯-6-{[(2-甲基环丙基)甲基][2-(1，3，4-二唑-2-基)-2-氧代乙基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺 按照制备N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氯-6-{[(反式-2-甲基环丙基)甲基][2-(5-甲基-1，3，4-二唑-2-基)-2-氧代乙基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺(实施例72)所述，以中间体8.4.1和甲酰肼为原料制备。MS M+1＝587.
实施例74
N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3-唑-2-基}-3-氯-6-({[反式-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲烷磺酰胺 步骤A脱苄基化向[(1R)-1-(2-{2-(苄基{[反式-(1S，2S)-2-甲基环丙基]甲基}氨基)-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3-唑-5-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯(中间体6.2.1，0.050g，0.076mmol)在5mL EtOH中的溶液内加入三氟乙酸(0.006mL，0.076mmol)和20％Pd(OH)2-碳(0.011g)。连接氢气罐，抽空烧瓶，开通H2(3x)。15小时后，再次抽空反应物，接通氩气(3x)，通过硅藻土垫过滤，浓缩得到[(1R)-1-甲基-(2-{2-({[反式-(1S，2S)-2-甲基环丙基]甲基}氨基)-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3-唑-5-基)-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.31-7.26(m，4H)，7.12(s，1H)，7.04-7.03(m，2H)，6.98(s，1H)，3.50(m，1H)，3.43-3.34(m，4H)，3.23-3.13(m，4H)，3.11(d，J＝13.2Hz，1H)，1.60(s，3H)，1.41(s，9H)，1.09(d，J＝5.9Hz，3H)，0.85(m，1H)，0.72(m，1H)，0.48(m，1H)，0.39(m，1H).LCMS(M+H)＝570.
步骤BBoc脱保护向[(1R)-1-甲基-(2-{2-({[反式-(1S，2S)-2-甲基环丙基]甲基}氨基)-6-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3-唑-5-基)-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯(0.040g，0.070mmol)在0.5mL CH2Cl2中的溶液内加入0.5mL三氟乙酸。1小时后，冻干该反应物，得到N-[4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3-唑-2-基}-6-({[(1S，2S)-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲烷磺酰胺，为黄色固体。
1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δ7.29-7.26(m，3H)，7.22(s，1H)，7.06(d，J＝1.1Hz，1H)，7.03-7.01(m，2H)，6.95(d，J＝1.1Hz，1H)，3.47(d，J＝13.4Hz，1H)，3.37(s，3H)，3.28-3.23(m，3H)，3.19(s，3H)，1.72(s，3H)，1.06(d，J＝5.9Hz，3H)，0.85(m，1H)，0.71(m，1H)，0.43(m，1H)，0.27(m，1H).LCMS(M+H)＝470.
步骤C氯化向N-[4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3-唑-2-基}-6-({[(1S，2S)-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲烷磺酰胺(0.009g，0.015mmol)在0.3mL CH2Cl2中的溶液内加入0.09mL 0.15MNCS的二氯甲烷储备溶液。15小时后，进一步加入0.10mL CH2Cl2和0.1mL 0.15M NCS的二氯甲烷储备溶液。24小时后，浓缩反应物，再溶于DMF，经制备HPLC纯化得到N-[4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3-唑-2-基}-3-氯-6-({[(1S，2S)-2-甲基环丙基]甲基}氨基)吡啶-2-基]-N-甲基甲烷磺酰胺，为黄色固体。
1HNMR(400MHz，d4-MeOH)δ7.30-7.29(m，3H)，7.24(s，1H)，7.04-7.02(m，3H)，3.47(d，J＝13.3Hz，1H)，3.28(s，3H)，3.26-3.20(m，5H)，1.71(s，3H)，1.06(d，J＝5.9Hz，3H)，0.85(m，1H)，0.71(m，1H)，0.43(m，1H)，0.27(m，1H).LCMS(M+H)＝505(氯图案).
实施例75N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3-唑-2-基}-3-氯-6{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺 以中间体6.2.2为原料按照以下顺序制备如上所述的Boc的除去和NCS氯化。MS M+1＝562.
实施例76N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3-唑-2-基}-3-氯-6-{(2-甲氧基乙基)[(2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺 以中间体9.1.1和Boc-D-α-甲基-苯丙氨酸为原料，采用如制备中间体5.2c.1所述的相似方法制备。MS M+1＝547.
实施例77N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氟-6-{[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺(路线方案9) 以中间体9.1.2和Boc-D-α-甲基-苯丙氨酸为原料，采用如制备中间体5.2c.1所述的相似方法制备，但在Boc除去之前要进行氢化介导的脱苄基化反应。MS M+1＝489.
实施例78N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氰基-6-{[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺(路线方案9) 向[(1R)-1-(5-{3-溴-6-{[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-2-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯(中间体9.3.1，18mg，0.028mmol)中加入Zn(CN)2(7mg，0.055mg)、Zn粉(一刮刀端量，～1mg，～0.014mmol)和Pd(t-Bu3)2(3mg，0.006mmol)。加入脱过气的二甲基乙酰胺(0.3mL)。反应物进一步用氩气脱气，然后在130℃下用微波处理90分钟。过滤反应物，经反相制备HPLC纯化得到[(1R)-1-(5-{3-氰基-6-{[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}-2-[甲基(甲磺酰基)氨基]吡啶-4-基}-1，3，4-二唑-2-基)-1-甲基-2-苯基乙基]氨基甲酸叔丁酯和最终化合物N-(4-{5-[(1R)-1-氨基-1-甲基-2-苯基乙基]-1，3，4-二唑-2-基}-3-氰基-6-{[(反式-2-甲基环丙基)甲基]氨基}吡啶-2-基)-N-甲基甲烷磺酰胺的混合物。使用1∶1的TFA/CH2Cl2溶液将前者加工成后者衍生物。
1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.34-7.32(m，3H)，7.15(br s)，7.10-7.07(m，3H)，3.45(s，，2H)，3.34(s，3H)，3.33(m，2H)，3.27(s，3H)，1.87(s，3H)，1.06(d，J＝5.9Hz，3H)，0.83(m，1H)，0.71(m，1H)，0.46(m，1H)，0.31(m，1H)；LCMS(2M+H)＝991；C24H30N7O3S的精确质谱计算值496.126；实测值496.2149.
本文中使用下列缩写Me 甲基Bu 丁基i-Bu异丁基t-Bu叔丁基
Et 乙基Pr 丙基i-Pr异丙基Ar 芳基Ph 苯基Py 吡啶Ac 乙酰基NaHMDS六甲基二硅烷基氨化钠EDC 乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亚胺HOAt1-羟基-7-氮杂苯并三唑DMF N，N1-二甲基甲酰胺THF 四氢呋喃DMSO二甲亚砜EDTA乙二胺四乙酸Boc叔丁氧羰基BOP六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)磷CHAPS3-[(3-胆酰胺基丙基)二甲基铵基]-2-羟基-1-丙烷磺酸盐TFA 三氟乙酸NCS N-氯代琥珀酰亚胺DCE 二氯乙烷DIPEA二异丙基乙胺DCM 二氯甲烷DMA N，N-二甲基乙酰胺aq 含水rt 室温HPLC高效液相色谱虽然本发明已经参考某些具体实施方案进行了描述和说明，但本领域技术人员应当理解的是，在不偏离本发明的精神与范围的情形下，可以对其方法和方案进行各种修改、改变、修饰、替代、省略或添加。因此，本发明由后面的权利要求的范围加以限定，并且这些权利要求要合理地广义解释。
权利要求
1.式(I)的化合物和其药学上可接受盐，以及其单一的对映体和非对映体 其中X选自 Y选自(1)卤素，(2)氰基，(3)-C1-6烷基，和(4)-C6-10芳基；A选自(1)氢，(2)-C1-10烷基，和(3)-C2-10链烯基，其中所述烷基或链烯基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(a)卤素，(b)-C3-12环烷基，(c)-OH，(d)-CN，(e)-O-C1-10烷基，(f)苯基，或(g)杂芳基，并且所述苯基和杂芳基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(i)卤素，(ii)-OH，(iii)-CN，(iv)-O-C1-10烷基，(v)-C1-10烷基，或(vi)-C3-12环烷基；Q是-C0-3烷基，其中该烷基是未取代的或被一个或多个下列基团取代(1)卤素，(2)-C3-12环烷基，(3)-OH，(4)-CN，(5)-O-C1-10烷基，和(6)-C1-10烷基；R1选自(1)选自苯基和萘基的芳基，(2)杂芳基，(3)-C1-10烷基，和(4)-C3-8环烷基，该环烷基任选与C6-10芳基稠合，其中所述烷基、环烷基、芳基或杂芳基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(a)卤素，(b)-C1-10烷基，其中该烷基是未取代的或被卤素取代，(c)-OH，(d)-CN，(e)-O-C1-10烷基，(f)-C3-12环烷基，或(g)-NR10R11，其中R10和R11选自(i)氢，(ii)-C1-10烷基，和(iii)-C0-6亚烷基-C6-10芳基；R8和R9选自(1)氢，(2)C1-10烷基，和(3)C0-6亚烷基-C6-10芳基；R4选自(1)-C1-10烷基，(2)杂芳基，和(3)-NR12R13，其中R12和R13选自(a)氢，(b)C1-10烷基，和(c)C0-6亚烷基-C6-10芳基，或者R12和R13代表4个、5个或6个选自CRaRb、S、NRc和O的环原子，并且与它们所连接的氮一起构成非芳族环，其中所述烷基、亚烷基和杂芳基是未取代的或被一个或多个下列基团取代(a)卤素，(b)-OH，(c)-CN，(d)-O-C1-10烷基，(e)-C1-10烷基(f)-C3-12环烷基，(g)选自苯基和萘基的芳基，(h)杂芳基，或(i)-C(＝O)-C1-10烷基，并且，其中所述芳基和杂芳基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(i)卤素，(ii)-OH，(iii)-CN，(iv)-O-C1-10烷基，(v)-C3-12环烷基，或(vi)-C1-10烷基；R7选自基团(1)氢，(2)-C1-10烷基，(3)-C3-7环烷基，(4)-C6-10芳基，和(5)杂芳基，其中所述烷基、环烷基、芳基和杂芳基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(a)卤素，(b)-OH，(c)-CN，(d)-O-C1-10烷基，(e)-C3-12环烷基，(f)由4个、5个或6个选自CRaRb、S、NRc和O的环原子构成的非芳族环基，(g)选自苯基和萘基的芳基，或(h)-C5-12杂芳基，其中所述环烷基、芳基或杂环基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(i)卤素，(ii)-OH，(iii)-CN，(iv)-O-C1-10烷基，(v)-C3-12环烷基，或(vi)选自苯基和萘基的芳基；或者，R4和R7可以连接成-CH2CH2CH2-基团；R5和R6独立地选自(1)氢，(2)-C1-10烷基，(3)-C2-10烯基，(4)-C2-10炔基，和(5)-C1-10亚烷基-C3-12环烷基；其中所述烷基、亚烷基、环烷基、烯基或炔基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(a)卤素，(b)-OH，(c)-CN，(d)-C1-10烷基，(e)-C3-12环烷基，(f)-O-C1-10烷基，其中该烷基是未取代的或被-O-C1-10烷基-(-O-C1-10烷基)m取代，(g)杂芳基，其中该杂芳基可以是未取代的或被一个或多个以下基团取代(A)卤素，或(B)-C1-10烷基，(h)苯基，(i)-NR14R15，其中R14和R15选自(A)氢，(B)-C1-10烷基，和(C)-C0-6烷基-C6-10芳基，(j)-C(＝O)-OR16，其中R16选自(A)氢，(B)-C1-10烷基，和(C)-C0-6亚烷基-C6-10芳基，和(k)-C(＝O)-NR17R18，其中R17和R18选自(A)氢，(B)-C1-10烷基，和(C)-C0-6亚烷基-C6-10芳基，或者，R17和R18代表4个、5个或6个选自CRaRb、S、NRc和O的环原子，并且与它们所连接的氮一起构成非芳族环，和(l)-C(＝O)-R19，其中R19选自(A)-C1-10烷基，(B)-C3-7环烷基，和(C)-C0-6亚烷基-C6-10芳基，或者，R5和R6与它们所连接的氮原子一起连接成4-6元环，该环是未取代的或被一个或多个以下基团取代(a)-C1-10烷基，(b)-C3-12环烷基，(c)-(CH2)n-苯基，(d)-C2-10烯基，或(e)-C2-10炔基，其中所述烷基、烯基和炔基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(i)卤素，(ii)-OH，(iii)-CN，(iv)-O-C1-10烷基，或(v)-C3-12环烷基，并且所述环烷基和苯基是未取代的或被一个或多个以下基团取代(i)卤素，(ii)-C1-10烷基，(iii)-OH，(iv)-CN，(v)-C3-12烷基，或(vi)-O-C1-10烷基；Ra、Rb和Rc各自独立地选自(1)氢，(2)卤素，(3)-C1-6烷基，和(4)-C(＝O)-C1-6烷基；m是0，1或2；n是0，1，2，3或4。
2.权利要求1的化合物，其中X为二唑基团
3.权利要求1或2的化合物，其中Y为卤素。
4.权利要求1-3中任一项的化合物，其中R1是苯基，Q是CH2，R8和R9都是氢，且A为C1-6烷基。
5.权利要求1-4中任一项的化合物，其中R4和R7是C1-10烷基。
6.权利要求5的化合物，其中R4是甲基或异丙基和R7是甲基。
7.权利要求1的化合物，其是式(II)化合物 其中A、X、Y、Q、R1、R4、R5、R7、R8和R9如权利要求1中定义，和其药学上可接受的盐，以及其单一的对映体和非对映体。
8.权利要求7的化合物，其中X是二唑基团
9.权利要求7或8的化合物，其中R1是苯基，Q是CH2，R8和R9都是氢，且A为C1-6烷基。
10.权利要求7-9中任一项的化合物，其中R5是氢或C1-10烷基，其中所述C1-10烷基是未取代的或被一个或多个下列基团取代(a)-O-C1-10烷基，其中该烷基是未取代的或被-O-C1-10烷基-(-O-C1-10烷基)m取代，(b)杂芳基，或(c)-C(＝O)-R19，其中R19选自(i)-C1-10烷基，(ii)-C3-7环烷基，或(iii)-C0-6亚烷基-C6-10芳基。
11.权利要求1的化合物，其是式(III)化合物 其中A、X、Y、Q、R1、R4、R5、R7、R8和R9如权利要求1中定义，和其药学上可接受的盐，以及其单一的对映体和非对映体。
12.权利要求11的化合物，其中R1是苯基，Q是CH2，R8和R9都是氢，且A为C1-10烷基。
13.权利要求11或12的化合物，其中R5是氢或C1-10烷基，其中所述C1-10烷基是未取代的或被一个或多个下列基团取代(a)-O-C1-10烷基，其中该烷基是未取代的或被-O-C1-10烷基-(-O-C1-10烷基)m取代，(b)杂芳基，或(c)-C(＝O)-R19，其中R19选自(i)-C1-10烷基，(ii)-C3-7环烷基，或(iii)-C0-6亚烷基-C6-10芳基。
14.权利要求13的化合物，其选自 和其药学上可接受的盐。
15.一种药物组合物，其包括治疗有效量的权利要求1的化合物或其药学上接受的盐以及药学上可接受的载体。
16.权利要求15的药物组合物，其进一步包括P-450抑制剂。
17.权利要求16的药物组合物，其中所述P-450抑制剂是利托那韦。
18.一种治疗患者阿耳茨海默氏病的方法，该方法包括对需要这种治疗的患者给药治疗有效量的权利要求1的化合物或其可药学上可接受的盐。
19.权利要求18的方法，其中所述的权利要求1的化合物是与P-450抑制剂一起给药的。
全文摘要
本发明涉及2，3，4，6－四取代的吡啶基衍生物，它们是β－分泌酶的抑制剂且可用于与β－分泌酶有关的疾病例如阿耳茨海默氏病的治疗。本发明还涉及包含这些化合物的组合物以及这些化合物和组合物在治疗与β－分泌酶有关的疾病中的应用。
文档编号C07D413/00GK101061113SQ200580039720
公开日2007年10月24日 申请日期2005年11月18日 优先权日2004年11月23日
发明者P·G·南特梅特, M·G·斯坦顿, H·A·拉亚帕克斯, H·G·塞尔尼克, J·C·巴罗, S·R·斯陶菲尔, J·P·瓦卡, K·P·穆尔, S·J·施塔赫尔 申请人:默克公司