专利名称：一种高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及白藜芦醇的提取分离纯化工艺。
背景技术：
白藜芦醇，又名虎杖苷元，英文名Resveratrol，分子式CMH』3，分子量228. 25，化
学名3，5，4"-三羟基芪。其由寥科植物虎杖(Rhi薩a Polygoni Cuspidati)的根茎提取
精制而来，为无味、白色晶体粉末，难溶于水，易溶于乙醇，丙酮等有机溶剂。 白藜芦醇被认为是一种植物抗毒素，是在植物受到病原性进攻和环境恶化时产生
的。其药理作用有抗菌、抗氧化、预防心脏病、抗癌、抗血小板凝、保护肝脏、雌激素作用、防
辐射、免疫调节、抗艾滋病活性等。白藜芦醇已被喻为继紫杉醇之后又一新的绿色抗癌药
物，它在食品、医药、保健等方面应用也越来越广。 现有技术从中药虎杖中提取白藜芦醇的方法有酶解提取、溶剂提取、微波提取、超 声提取等等，但由于提取方式及采用的提取条件等的不同，存在适应性不强、操作复杂、提 取产物纯度不高、提取成本高等缺点。
发明内容
本发明的目的是克服白藜芦醇现有生产工艺中存在的不足，提供一种对生产设备
适应性强、易操作、可提高提取物纯度的白藜芦醇提取分离纯化工艺。 本发明的技术方案如下 本发明提出的白藜芦醇提取工艺的总过程为原料粉碎、发酵酶解、有机混合溶剂
提取、浓縮、醇沉、水沉、过滤、醇溶、柱层析、纯化、精制得98%产品。
其具体包括如下步骤 1、前处理选取虎杖干药材用振荡筛筛去泥沙，选出杂物及霉变药材后粉碎成粗 颗粒，待用。 2、发酵酶解将虎杖干药材颗粒用适量的温水充分浸润后，加入发酵酶，将虎杖干 药材颗粒和发酵酶的混合物物料水分调至40% _70%，充分搅拌均匀后放入发酵池中，密 封发酵时间大约3天-12天，得虎杖原料。发酵酶采用纤维素酶，用量为虎杖原料重量的 0. 3-2%。 3、提取将发酵酶解后的虎杖原料于4(TC-7(TC下用混合比例为6 : 1-1 : l的 混合有机溶剂提取1-3次，每次1-3小时，混合有机溶剂的体积(L)与虎杖原料重量(kg)
之比为i : l-8 : i，合并提取液，浓縮至出现大量固形物时(即得到第一次浓縮浸膏)，加
入70%以上(通常为70% -95% )的醇溶液溶解后调醇至35% -65% ，冷却至室温后离心 过滤去沉淀，取上清液。将上清液于4(TC-6(TC下减压浓縮至产生大量固形物(即得到第 二次浓縮浸膏)，水沉取沉淀，用高醇度醇溶液溶解，过滤，滤液过分离柱，以一定醇度的醇 溶液洗脱，将洗脱液于40°C _701:下浓縮至醇度为30度-40度，放置结晶，过滤，将结晶用 高醇度的醇溶液溶解，加入一定量的活性炭于40°C -e(TC脱色1-3小时，再过滤，将滤液于4(TC-6(TC下浓縮至醇度为35^以下重结晶，过滤，干燥即得白藜芦醇98^精品。结晶后的 母液还可进一步用于制备50% _60%的白藜芦醇产品。 上述方法中，混合有机溶剂的溶剂组合为甲醇乙酸乙酯、乙醇乙酸乙酯、乙醇 石油醚、乙酸乙酯石油醚。 减压浓縮压力为-0. 06Mpa-0. 04Mpa。 所述醇溶液为甲醇或乙醇的水溶液，用于调醇的醇溶液的醇度为70%以上，用于 溶解水沉沉淀的醇溶液醇度为67% _95%，上柱洗脱醇溶液所用醇度为65% -85%。
所述分离柱所用填充材料为氧化铝或硅胶。 所述溶解第一次浓縮浸膏的醇溶液体积(L)与浓縮浸膏重量(Kg)的比为
3:i-8: i，溶解水沉沉淀的醇溶液用量体积(L)与沉淀重量(Kg)比为5 : i-io : i。 溶解结晶的醇溶液体积(L)与结晶重量(Kg)的比为8 : 1-20 : i。水沉第二次浓縮浸膏
的水的重量是第二次浓縮浸膏重量的5-10倍。
本发明的优点或积极效果 本发明采用混合有机溶剂进行提取，能最大限度地选择性的将有效成分白藜芦醇
提出，而抑制无效成分的提出，为后续除杂步骤节省溶剂和时间。采用有机溶剂提取，时间 短，减少了提取工艺中的萃取步骤，从而縮短了生产时间，减少了生产设备，更易于生产操 作。
具体实施例方式
下面结合实施例来进行进一步说明本提取工艺，但并不作为对本发明的限定。
实施例1 以20Kg虎杖干药材为例，将虎杖干药材粉碎成l-3mm的颗粒待用，将待用料放入 发酵池，加入0. 4kg纤维素酶，将物料中水分调至40% _70%，拌匀自然发酵7天。将发酵 后的虎杖原料用80L的混合有机溶剂(石油醚乙酸乙酯=1 : 1)于4(TC下提取3次，每 次1小时，合并提取液，将提取液减压浓縮至出现大量固形物即第一次浓縮浸膏，将第一次 浓縮浸膏加80L 85%的乙醇溶解，再加水调至含醇量为60% ，冷却后将调醇的醇沉上清液 离心去除沉淀物，取上清液于45t:下减压浓縮至产生大量固形物即第二次浓縮浸膏，加入 第二次浓縮浸膏5倍重量的水进行水沉，离心过滤，再沉淀用85%乙醇溶解，醇溶液用量体 积(L)与沉淀重量(Kg)比为5 : 1，然后过滤，再将滤液上氧化铝柱，又用70%乙醇洗脱，将 洗脱液于5(TC下减压真空浓縮至含醇量为30%，然后放置结晶，过滤，将结晶用醇度80% 乙醇溶解过滤，醇溶液体积(L)与结晶重量(Kg)的比为10 : 1，再加入结晶重量10%的活 性炭于5(TC脱色1小时，过滤，将滤液于5(TC下浓縮至醇度为35度以下重结晶，过滤，最后 将结晶真空干燥即得98%产品。结晶用母液可循环套用或制备60% _70%的产品。
实施例2 以20Kg虎杖干药材为例，将虎杖干药材粉碎成2-4mm的颗粒待用，将待用料放入 发酵池，加入0. 2kg纤维素酶，将物料中水分调至40% _70%，拌匀自然发酵10天。将发酵 后的虎杖原料用100L的混合有机溶剂(石油醚乙酸乙酯=1 : 4)于6(TC下提取3次， 每次1小时，合并提取液，将提取液减压浓縮至出现大量固形物得第一次浓縮浸膏，将第一 次浓縮浸膏加100L80 %的甲醇溶解，加水调至含醇量为50% ，冷却后将调醇的醇沉液离心
4去除沉淀物，取上清液于6(TC下减压浓縮至产生大量固形物得第二次浓縮浸膏，然后加入 第二次浓縮浸膏10倍重量的水进行水沉，离心过滤，用85%甲醇溶解，醇溶液用量体积(L) 与沉淀重量(Kg)比为7 : l，再过滤，将滤液上装填硅胶的分离柱，再用70%甲醇洗脱，将 洗脱液于5(TC下减压真空浓縮至含醇量为35%放置结晶，然后过滤，将结晶用醇度85%的 甲醇溶解过滤，醇溶液体积(L)与结晶重量(Kg)的比为15 : 1，在滤液中加入20g活性炭 于4(TC下脱色2小时，然后过滤，将滤液于6(TC下浓縮至醇度为35度重结晶，再过滤，最后 将结晶真空干燥即得98%产品。结晶用母液可循环套用或制备60% _70%的产品。
实施例3 以20Kg虎杖干药材为例，将虎杖干药材粉碎成l-3mm的颗粒待用，将待用料放入 发酵池，加入0. 4kg纤维素酶，将物料中水分调至40% -70% ，拌匀自然发酵7天。将发酵后
的虎杖原料用120L的混合有机溶剂(石油醚乙醇=1 : i)于55t:下提取3次，每次i小
时，合并提取液，将提取液减压浓縮至出现大量固形物得第一次浓縮浸膏，第一次浓縮浸膏 加80L90%的乙醇溶解，加水调至含醇量为45%，冷却后将调醇的醇沉液离心去除沉淀物， 取上清液于6(TC下减压浓縮至产生大量固形物即得第二次浓縮浸膏，然后加入第二次浓縮 浸膏6倍重量的水进行水沉，离心过滤，用80%乙醇醇溶解，醇溶液用量体积(L)与沉淀重 量(Kg)比为8 : 1 ;再过滤，将滤液上装填硅胶的分离柱，再用70%乙醇洗脱，将洗脱液于 5(TC下减压真空浓縮至含醇量为35%放置结晶，然后过滤，将结晶用体积20倍量85%乙醇 溶解，醇溶液体积(L)与结晶重量(Kg)的比为20 : l，过滤，在滤液中加入结晶重量10% 的活性炭于4(TC下脱色2小时，然后过滤，将滤液于6(TC下浓縮至醇度为35度重结晶，再 过滤，最后将结晶真空干燥即得98%产品。结晶用母液可循环套用或制备60% -70%的产
Cl 实施例4 以20Kg虎杖干药材为例，将虎杖干药材粉碎成2-4mm的颗粒待用，将待用料放入 发酵池，加入0. lkg纤维素酶，将物料中水分调至40% -70% ，拌匀自然发酵12天。将发酵 后的虎杖原料用150L的混合有机溶剂(乙酸乙酯甲醇=1 : 2)于6(TC下提取2次，每 次1小时，合并提取液，将提取液减压浓縮至出现大量固形物即得第一次浓縮浸膏，将第一 次浓縮浸膏加100L90%的甲醇溶解，加水调至含醇量为55% ，冷却后将调醇的醇沉液离心 去除沉淀物，取上清液于6(TC下减压浓縮至产生大量固形物即得第二次浓縮浸膏，然后加 入第二次浓縮浸膏10倍重量的水进行水沉，离心过滤，用70%甲醇醇溶解，醇溶液用量体 积(L)与沉淀重量(Kg)比为IO : 1，再过滤，将滤液上装填硅胶的分离柱，再用70%甲醇洗 脱，将洗脱液于5(TC下减压真空浓縮至含醇量为35^放置结晶，然后过滤，将结晶用醇度 80%甲醇溶解，醇溶液体积(L)与结晶重量(Kg)的比为15 : l，过滤，在滤液中加入结晶重 量10%的活性炭于4(TC下脱色2小时，然后过滤，将滤液于6(TC下浓縮至醇度为35度重结 晶，再过滤，最后将结晶真空干燥即得98%产品。结晶用母液可循环套用或制备60%-70% 的产品。
权利要求
一种高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其包括以下步骤(1)前处理先对虎杖干药材进行筛选，然后粉碎成颗粒；(2)发酵将虎杖干药材颗粒加入发酵酶，发酵酶用量为虎杖干药材重量的0.3-2％，将虎杖干药材颗粒和发酵酶的混合物料水分调至40％-70％，密封发酵3-12天，得到虎杖原料；(3)提取分离纯化将发酵后的虎杖原料用混合有机溶剂提取1-3次，混合有机溶剂的体积与虎杖原料重量之比为1∶1-8∶1；合并提取液，减压浓缩至出现固形物，得第一次浓缩浸膏；将第一次浓缩浸膏用醇溶液溶解，用水调节醇度，将调醇后的浓缩液去沉淀，取上清液减压浓缩，得第二次浓缩浸膏，加入水对第二次浓缩浸膏进行水沉，沉淀用醇溶液溶解，过滤，将滤液上分离柱，再用醇溶液洗脱，对洗脱液浓缩结晶，又将结晶用醇溶液溶解后，加活性炭脱色，过滤，再加工滤液浓缩重结晶，即得白藜芦醇精品。
2. 根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于所述发酵 酶采用纤维素酶。
3. 根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于所述每次 的提取时间为1-3小时，提取温度为40°C _70°C。
4. 根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于所述混合有机溶剂的溶剂组合为甲醇乙酸乙酯、乙醇乙酸乙酯、乙醇石油醚或乙酸乙酯石 油醚，它们的混合质量比例为6 : i-i : i。
5. 根据权利要求i所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于所述减压浓縮压力为-0. 06Mpa—0. 04Mpa，温度为40% -70%。
6. 根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于所述醇溶 液为甲醇或乙醇的水溶液。
7. 根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于所述调醇用的醇溶液醇度为70%以上，调醇后的醇度为35% -65% ;用于溶解水沉沉淀的醇溶液醇 度为67% -95% ;上柱洗脱醇溶液所用醇度为65% -85%。
8. 根据权利要求l所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于所述溶 解第一次浓縮浸膏的醇溶液体积与浓縮浸膏重量的比为3 : 1-8 : l;用于溶解沉淀的醇溶液用量体积与沉淀重量比为5 : i-io : i ;溶解结晶的醇溶液体积与结晶重量的比为 8 : 1-20 : i。
9. 根据权利要求1所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于水沉第二次浓縮浸膏的水的重量是第二次浓縮浸膏重量的5-10倍。
10. 根据权利要求l所述的高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其特征在于所述分离柱所用填充材料为氧化铝或硅胶。
全文摘要
本发明提出一种高纯度白藜芦醇提取分离纯化工艺，其总过程为原料粉碎、发酵酶解、有机混合溶剂提取、浓缩、醇沉、水沉、过滤、醇溶、柱层析、纯化、精制得98％产品。本发明采用混合有机溶剂进行提取，能最大限度地选择性的将有效成分白藜芦醇提出，而抑制无效成分的提出，为后续除杂步骤节省溶剂和时间。采用有机溶剂提取，时间短，减少了提取工艺中的萃取步骤，从而缩短了生产时间，减少了生产设备，更易于生产操作。
文档编号C07C37/68GK101792373SQ20101012714
公开日2010年8月4日 申请日期2010年3月18日 优先权日2010年3月18日
发明者申文求 申请人:重庆科瑞南海制药有限责任公司