专利名称：从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法
技术领域：
本发明涉及一种从红花中提取精制黄芪甲苷的方法。
背景技术：
黄苗为豆科植物蒙古黄苗Astragalus membranaceus ( Fisch. ) Bge. var.mongholicus (Bge. ) Hsiao 或膜荚黄苗Astragalus membranaceus ( Fisch. ) Bge.的干燥根。膜荚黄芪是中生植物，生于山地林缘、灌丛及疏林下。分布于我国新疆的阿尔泰山、东北的大、小兴安岭、完达山、张广才岭、老爷岭、长白山及辽宁东部山地和华北的燕山山脉、泰山、小五台山、恒山、五台山、黄土高原、太岳山、秦岭、横断山脉的北部；蒙古黄芪是旱中生植物，生于山地草原、灌丛、林缘、沟边等地。分布于内蒙古的锡林郭勒白音锡勒、克什克腾旗黄岗梁和白音敖包，华北地区的燕山山地、大青山、蛮汗山、小五台山、恒山、五台山、吕梁山北部。黄芪具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌等功效。经现代研究表明黄芪的药理活性多种多样，其对心血管系统有多方面的作用，同时还具有抗肿瘤和提高机体免疫功能、降低血糖、降血压、调节内分泌功能，而且其预防保健功能越来越受到人们的重视，因而应用十分广泛。黄芪的化学成分较多，主要有皂苷类、黄酮类和多糖等，其中皂苷类化合物有黄芪皂苷及其大豆皂苷，黄酮类化合物有黄酮、异黄酮、异黄烷和紫檀烷四大类。另外尚含单糖、氨基酸、蛋白质、咖啡酸、绿原酸、棕榈酸、￠-谷留醇、胡萝卜苷等成分。经研究表明，阜苷类化合物为黄苗药效物质基础的重要组成之一，而黄苗甲苷(astragatosideIV)则为黄芪的主要活性成分之一。黄芪甲苷是一种羊毛酯醇形的四环三萜皂苷，分子式为C14H68O14，相对分子质量为784，现代药理表明黄芪甲苷具有保护心血管、强心、保护神经系统和内皮屏障功能损伤、抗胃溃疡、抗衰老、护肝、镇痛镇静、利尿和促进胰岛素的分泌等作用。黄芪甲苷是目前评价黄芪药材及含黄芪药材制剂的重要的指标性成分，但是黄芪甲苷在黄芪药材中的含量很低，约为0. 04%，虽然比较稳定，但是提取分离很困难。随着研究的继续深入，有关黄芪甲苷的提取分离的新设备和新方法将会不断地涌现。中国专利申请号200310108915.6公开了一种从中药黄芪中制备黄芪甲苷的方法，将黄芪根粉碎、水回流提取、大孔树脂除杂、脱色、离心。但是此方法黄芪甲苷的转移率和纯度不高。中国专利申请号200710043678.8公开了一种黄芪甲苷制备方法，是以中药黄芪为原料，包括水提取、碱处理、大孔树脂除杂、结晶等步骤。此方法黄芪甲苷回收率低，所得黄芪甲苷纯度不高。中国专利申请号200410014786.9公开了一种黄芪甲苷的制备方法及其在制药中的新用途。是将黄芪粉末用乙醇回流提取、碱解、有机溶媒萃取、甲醇重结晶等。但是此方法应用了有机溶媒，黄芪甲苷的转移率和纯度也不高。中国专利申请号200910250347.0公开了一种黄芪甲苷的提取工艺。将原料切片或粗粉酶解、水提、萃取、精制。此发明应用可有机溶剂，且黄芪甲苷的收率和纯度不高。中国专利申请号201010101933. I公开了一种从中药黄芪中提取、分离和纯化黄芪甲苷的方法，采用酶解、碱水解、萃取、大孔树脂富集和硅胶柱层析等。此步骤应用了有机溶媒，而且黄芪甲苷的收率不高。中国专利申请号200910234071. 7公开了一种从黄芪中制备黄芪甲苷的方法。以黄芪为原料，石灰水水解、超滤除杂、大孔树脂除杂、重结晶。此方法黄芪甲苷的收率和纯度不高。中国专利申请号200510020977.0公开了一种黄芪甲苷纯品的制备方法。此方法以中药黄芪为原料，进行提取、富集、除杂、水解、萃取和精制等。该方法应用了有机溶媒，不利于大生产。中国专利申请号200610012687.6公开了一种黄芪甲苷的提取制备方法。此步骤为水提、醇沉、碱水解、脱色等。该方法黄芪甲苷的纯度不高。中国专利申请号200910078504. 4公开了一种黄芪甲苷的制备方法。此方法进行提取、大孔树脂柱分离、酸碱除杂、碱水解、重结晶等。该方法应用了有机溶媒且黄芪甲苷精品的颜色较深。中国专利申请号200410007963. 0公开了一种黄芪甲苷原料药的制备方法及其原料药和制剂。该方法采用提取、碱处理、萃取、精制等步骤。此发明应用了有机溶媒且黄芪甲苷的收率和纯度不高。中国专利申请号200910060581. 7公开了一种制 备黄芪甲苷的生产方法。该方法采用提取、离心、超滤等步骤。但是此方法黄芪甲苷的收率和纯度不高。中国专利申请号200910232203. 2公开了一种治疗糖尿病并发症肾病、周围神经炎的高纯度黄芪甲苷的制备方法。经乙醇提取、碱水解、除杂、硅胶纯化、重结晶等步骤。但是此方法应用了有机溶媒，不适合大生产，且黄芪甲苷的收率不高。
发明内容
本发明提供一种从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法，该方法包括如下步骤
a、提取称取黄芪饮片，每次加入6-12倍量60%-80%乙醇溶液，加热回流提取2_3次，每次lh-3h,首次浸泡20min-40min,过滤；提取的滤液合并,减压浓缩至无醇味，定容至药液药材体积重量比为1:1-2:1，得浓缩液；
b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，按照Ig药材中加入0.005g-0. 02gNa0H的比例加入lmol/L的NaOH溶液，加热至60°C _100°C，搅拌，连续回流2h_6h，用蒸馏水稀释至
0.04-0. 4g药材/ml，得碱水解液；
C、第一次纯化按照药材量树脂量重量比为2:1-1:2称取大孔吸附树脂，装入径高比为1:3-1:12的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为6倍柱体积/小时，饱和lh-3h;用10倍-20倍柱体积的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用10倍-20倍柱体积0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时,用蒸馏水冲至中性；用7倍柱体积40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用10倍-20倍柱体积60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为12倍柱体积/小时，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ；
d、第二次纯化按照药材量树脂量重量比为3.2:1-1:1称取弱碱性阴离子交换树脂，装入径高比为1:3-1:10的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至PH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为3. 6倍柱体积/小时，收集流出液；用3倍-5倍柱体积60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至6. 4g药材/ml-16g药材/ml，得纯化液B ；
e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。本发明从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法优选为包括如下步骤a、提取称取黄芪饮片，每次加入12倍量80%乙醇溶液，加热回流提取2次，每次3h，首次浸泡20min，过滤；提取的滤液合并，减压浓缩至无醇味，定容至药液药材体积重量比为2:1，得浓缩液；
b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，按照Ig药材中加入0.005gNa0H的比例加入Imol/L的NaOH溶液，加热至60°C，搅拌，连续回流6h，用蒸馏水稀释至0. 4g药材/ml，得碱水解液；
C、第一次纯化按照药材量树脂量重量比为2:1称取大孔吸附树脂，装入径高比为I 3的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为6倍柱体积/小时，饱和3h;用20倍柱体积的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用10倍柱体积0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时，用蒸馏水冲至中性；用7倍柱体积40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用10倍柱体积60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为12倍柱体积/小时，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ；
d、第二次纯化按照药材量树脂量重量比为3.2:1称取弱碱性阴离子交换树脂，装入 径高比为1:10的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至pH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为3. 6倍柱体积/小时，收集流出液；用5倍柱体积60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至16g药材/ml，得纯化液B ；
e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。本发明从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法还优选为包括如下步骤
a、提取称取黄芪饮片，每次加入6倍量60%乙醇溶液，加热回流提取3次，每次lh，首次浸泡40min，过滤；提取的滤液合并，减压浓缩至无醇味，定容至药液药材体积重量比为1:1，得浓缩液；
b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，按照Ig药材中加入0.02gNa0H的比例加入lmol/L的NaOH溶液，加热至100°C，搅拌，连续回流2h，用蒸馏水稀释至0. 04g药材/ml，得碱水解液；
C、第一次纯化按照药材量树脂量重量比为1:2称取大孔吸附树脂，装入径高比为I 12的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为6倍柱体积/小时，饱和Ih;用10倍柱体积的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用20倍柱体积0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时，用蒸馏水冲至中性；用7倍柱体积40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用20倍柱体积60%的乙醇溶液进行洗脱,洗脱流速为12倍柱体积/小时，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ；
d、第二次纯化按照药材量树脂量重量比为1:1称取弱碱性阴离子交换树脂，装入径高比为1:3的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至pH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为3. 6倍柱体积/小时，收集流出液；用3倍柱体积60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至6. 4g药材/ml，得纯化液B ；
e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。
本发明从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法还优选为包括如下步骤
a、提取称取黄芪饮片，每次加入9倍量70%乙醇溶液，加热回流提取3次，每次2h，首次浸泡30min，过滤；提取的滤液合并，减压浓缩至无醇味，定容至药液药材体积重量比为I. 5:1，得浓缩液；
b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，按照Ig药材中加入0.015gNa0H的比例加入Imol/L的NaOH溶液，加热至80°C，搅拌，连续回流4h，用蒸馏水稀释至0. 24g药材/ml，得碱水解液；
C、第一次纯化按照药材量树脂量重量比为1:1称取大孔吸附树脂，装入径高比为2:15的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为6倍柱体积/小时，饱和2h;用15倍柱体积的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用15倍柱体积0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时，用蒸馏水冲至中 性；用7倍柱体积40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用15倍柱体积60%的乙醇溶液进行洗脱,洗脱流速为12倍柱体积/小时，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ；
d、第二次纯化按照药材量树脂量重量比为2.I: I称取弱碱性阴离子交换树脂，装入径高比为2:13的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至pH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为3. 6倍柱体积/小时，收集流出液；用4倍柱体积60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至11. 2g药材/ml，得纯化液B ；
e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。本发明从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法中所使用的大孔吸附树脂优选为HPD722、HPD100、HPD910、AB-8、D101树脂中的一种，所使用弱碱性离子交换树脂优选为330树脂。本发明从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法进一步优选为包括如下步骤
a、提取称取黄芪饮片，每次加入8倍量80%乙醇溶液，加热回流提取3次，第一次I. 5h,后两次各Ih,首次浸泡20min,过滤；提取的滤液合并,减压浓缩至无醇味,定容至药液药材体积重量比为2:1，得浓缩液；
b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，按照Ig药材中加入0.OlgNaOH的比例加入Imol/L的NaOH溶液，加热至100°C，搅拌，连续回流6h，用蒸馏水稀释至0. Ig药材/ml，得碱水解液；
C、第一次纯化按照药材量树脂量重量比为2:1称取HPD722树脂，装入径高比为1:3的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为6倍柱体积/小时，饱和Ih;用10倍柱体积的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用10倍柱体积0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时，用蒸馏水冲至中性；用7倍柱体积40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用15倍柱体积60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为12倍柱体积/小时，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ；
d、第二次纯化按照药材量树脂量重量比为3. 2:1称取330弱碱性阴离子交换树脂，装入径高比为1:3的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至pH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为3. 6倍柱体积/小时，收集流出液；用3倍柱体积60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至6. 4g药材/ml，得纯化液B ；
e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。本发明从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法中的原料中药材黄芪的拉丁学名ASTRAGALI RADIX,为豆科植物蒙古黄苗 Astragalus membranaceus ( Fisch. ) Bge. var.mongholicus (Bge. ) Hsiao 或膜荚黄苗Astragalus membranaceus ( Fisch. ) Bge.的干燥根。本发明提取过程中的溶剂用量为药材的一定倍量，这里所述“倍量”是指药材与溶剂的重量体积比，比如“6倍量60%乙醇”是每公斤黄芪饮片加入6L60%乙醇，溶剂的体积为常温体积；纯化过程中的柱体积的倍数也是指常温体积。
采用本发明从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法，按照实施例I的参数连续生产五批黄芪甲苷，收率为0. 077%以上，纯度为99%以上。详细结果见表I
表I连续五批生产黄芪甲苷的纯度和转移率结果
批号 |含量％|收率％
081026~ 99. I 0. 085 08ITT7" 99. 5 0. 077 081201" 99. 0 0. 078 08l220~ 99. I 0. 084 090209 |99. 3 |o. 082
由此可见，本发明精制方法，工艺稳定可靠，易于工业化生产，生产出纯度99%以上，收率0. 07%以上的黄芪甲苷。并且具有以下优点
此生产工艺简单易行，无污染，适合于大生产；且得到的目标化合物颜色浅、纯度和收率都较高。
具体实施例方式下述实施例用于举例说明本发明从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法，但其不能对本发明的范围构成任何限制。实施例I :
a、提取称取黄芪饮片20kg，每次加入240L80%乙醇溶液，加热回流提取2次，每次3h，首次浸泡20min，过滤；提取的滤液合并，减压浓缩至无醇味，定容至40L，得浓缩液；
b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，加入2.5L lmol/L的NaOH溶液，加热至60°C，搅拌，连续回流6h，用蒸馏水稀释至50L，得碱水解液；
C、第一次纯化称取AB-8树脂10kg，装入直径为20 cm,高度为60 cm,体积为19L的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为114L/h，饱和3h;用380L的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为228L/h ;用190L0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为228L/h，用蒸馏水冲至中性；用133L40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为228L/h ;用190L 60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为228L/h，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ；
d、第二次纯化称取D311弱碱性阴离子交换树脂6. 25kg，装入直径为11cm，高度为111cm，体积为10. 6L的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至PH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为38. 2L/h，收集流出液；用53L60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至1250ml，得纯化液B ;
e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。结果得黄芪甲苷15. 4g，含量为99. 1%，收率为0. 077%。实施例2:
a、提取称取黄芪饮片5kg，每次加入30L60%乙醇溶液，加热回流提取3次，每次lh，首次浸泡40min，过滤；提取的滤液合并，减压浓缩至无醇味，定容至5L，得浓缩液；
b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，加入2.5Llmol/L的NaOH溶液，加热至100°C，搅拌，连续回流2h，用蒸馏水稀释至12. 5L，得碱水解液；
C、第一次纯化称取大孔吸附树脂HPD100树脂10kg，装入直径为13cm，高度为143cm，体积为19L的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为114L/h，饱和Ih ;用190L的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为228L/h ;用380L0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为228L/h，用蒸馏水冲至中性；用133L40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为228L/h ;用380L60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为228L/h，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ；
d、第二次纯化称取5Kg弱碱性阴离子交换树脂D301树脂，装入直径为15.5cm,高度为46cm，体积为8. 7L的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至PH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为31. 3L，收集流出液；用26. 1L60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至 780ml，得纯化液B ;
e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。结果得黄芪甲苷4. 05g，含量为99. 0%，收率为0. 081%。实施例3:
a、提取称取黄芪饮片10kg，每次加入90L70%乙醇溶液，加热回流提取3次，每次2h，首次浸泡30min，过滤；提取的滤液合并，减压浓缩至无醇味，定容至15L，得浓缩液；
b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，加入3.75L lmol/L的NaOH溶液，加热至80°C，搅拌，连续回流4h，用蒸馏水稀释至41. 7L，得碱水解液；
C、第一次纯化称取IOkg大孔吸附树脂HPD910树脂，装入直径为15cm，高度为113cm，体积为20L的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为120L/h，饱和2h;用300L的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为240L/h ;用300L0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为240L/h，用蒸馏水冲至中性；用140L40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为240L/h ;用300L60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为240L/h，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ；
d、第二次纯化称取21Kg弱碱性阴离子交换树脂D900树脂，装入直径为11. 8cm,高度为76. 7cm，体积为8. 3 L的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至PH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为30L/h，收集流出液；用33. 2L60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至892. 8ml，得纯化液B ;
e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。结果得黄芪甲苷7. 9g，含量为99. 3%，收率为0. 079%。实施例4:
a、提取称取黄芪饮片15Kg，每次加入120L80%乙醇溶液，加热回流提取3次，首次
I.5h,后两次各Ih,首次浸泡20min,过滤；提取的滤液合并,减压浓缩至无醇味，定容至30L，得浓缩液；
b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，加入3.75Llmol/L的NaOH溶液，加热至100°C，搅 拌，连续回流6h，用蒸馏水稀释至150L，得碱水解液；
C、第一次纯化称取15KgHPD722树脂，装入直径为18cm，高度为54cm，体积为15L的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为90L/h，饱和Ih;用150L的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为180L/h ;用150L0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为180L/h，用蒸馏水冲至中性；用105L40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为180L/h ;用225L60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为180L/h，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ；
d、第二次纯化称取4.69Kg330弱碱性阴离子交换树脂，装入直径为15. 2cm，高度为45. 6cm，体积为8. 3 L的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至PH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为30L/h，收集流出液；用25L60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至2344ml，得纯化液B ；
e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。结果得黄芪甲苷12. 45g，含量为99. 4%，收率为0. 083%。实施例5
a、提取称取黄芪饮片10kg，每次加入90L70%乙醇溶液，加热回流提取3次，每次2h，首次浸泡30min，过滤；提取的滤液合并，减压浓缩至无醇味，定容至15L，得浓缩液；
b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，加入3.75Llmol/L的NaOH溶液，加热至80°C，搅拌，连续回流4h，用蒸馏水稀释至41. 7L，得碱水解液；
C、第一次纯化称取IOkg大孔吸附树脂DlOl树脂，装入直径为15cm，高度为113cm，体积为20L的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为120L/h，饱和2h;用300L的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为240L/h ;用300L0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为240L/h，用蒸馏水冲至中性；用140L40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为240L/h ;用300L60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为240L/h，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ；
d、第二次纯化称取21Kg弱碱性阴离子交换树脂330树脂，装入直径为11. 8cm,高度为76. 7cm，体积为8. 3 L的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至PH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为30L/h，收集流出液；用33. 2L60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至892. 8ml，得纯化液B ;e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。
结果得黄芪甲苷8. lg，含量为99. 1%，收率为0. 081%。
权利要求
1.一种从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法，该方法包括如下步骤 a、提取称取黄芪饮片，每次加入6-12倍量60%-80%乙醇溶液，加热回流提取2_3次，每次lh-3h,首次浸泡20min-40min,过滤；提取的滤液合并,减压浓缩至无醇味，定容至药液药材体积重量比为1:1-2:1，得浓缩液； b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，按照Ig药材中加入0.005g-0. 02gNa0H的比例加入lmol/L的NaOH溶液，加热至60°C _100°C，搅拌，连续回流2h_6h，用蒸馏水稀释至0.04-0. 4g药材/ml，得碱水解液； C、第一次纯化按照药材量树脂量重量比为2:1-1:2称取大孔吸附树脂，装入径高比为1:3-1:12的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为6倍柱体积/小时，饱和lh-3h;用10倍-20倍柱体积的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用10倍-20倍柱体积0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时,用蒸馏水冲至中性；用7倍柱体积40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用10倍-20倍柱体积60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为12倍柱体积/小时，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ； d、第二次纯化按照药材量树脂量重量比为3.2:1-1:1称取弱碱性阴离子交换树脂，装入径高比为1:3-1:10的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至PH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为3. 6倍柱体积/小时，收集流出液；用3倍-5倍柱体积60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至6. 4g药材/ml-16g药材/ml，得纯化液B ； e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。
2.根据权利要求I所述的从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法，其特征在于该方法包括如下步骤 a、提取称取黄芪饮片，每次加入12倍量80%乙醇溶液，加热回流提取2次，每次3h，首次浸泡20min，过滤；提取的滤液合并，减压浓缩至无醇味，定容至药液药材体积重量比为、2:1，得浓缩液； b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，按照Ig药材中加入0.005gNa0H的比例加入Imol/L的NaOH溶液，加热至60°C，搅拌，连续回流6h，用蒸馏水稀释至0. 4g药材/ml，得碱水解液； 、C、第一次纯化按照药材量树脂量重量比为2:1称取大孔吸附树脂，装入径高比为I 3的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为6倍柱体积/小时，饱和3h;用20倍柱体积的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用10倍柱体积0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时，用蒸馏水冲至中性；用7倍柱体积40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用10倍柱体积60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为12倍柱体积/小时，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ； d、第二次纯化按照药材量树脂量重量比为3. 2:1称取弱碱性阴离子交换树脂，装入径高比为1:10的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至pH值为、7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为3. 6倍柱体积/小时，收集流出液；用5倍柱体积60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至16g药材/ml，得纯化液B ； e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。
3.根据权利要求I所述的从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法，其特征在于该方法包括如下步骤 a、提取称取黄芪饮片，每次加入6倍量60%乙醇溶液，加热回流提取3次，每次lh，首次浸泡40min，过滤；提取的滤液合并，减压浓缩至无醇味，定容至药液药材体积重量比为1:1，得浓缩液； b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，按照Ig药材中加入0.02gNa0H的比例加入lmol/L的NaOH溶液，加热至100°C，搅拌，连续回流2h，用蒸馏水稀释至0. 04g药材/ml，得碱水解 液； C、第一次纯化按照药材量树脂量重量比为1:2称取大孔吸附树脂，装入径高比为I 12的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为6倍柱体积/小时，饱和Ih;用10倍柱体积的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用20倍柱体积0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时，用蒸馏水冲至中性；用7倍柱体积40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用20倍柱体积60%的乙醇溶液进行洗脱,洗脱流速为12倍柱体积/小时，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ； d、第二次纯化按照药材量树脂量重量比为1:1称取弱碱性阴离子交换树脂，装入径高比为1:3的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至pH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为3. 6倍柱体积/小时，收集流出液；用3倍柱体积60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至6. 4g药材/ml，得纯化液B ； e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。
4.根据权利要求I所述的从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法，其特征在于该方法包括如下步骤 a、提取称取黄芪饮片，每次加入9倍量70%乙醇溶液，加热回流提取3次，每次2h，首次浸泡30min，过滤；提取的滤液合并，减压浓缩至无醇味，定容至药液药材体积重量比为I. 5:1，得浓缩液； b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，按照Ig药材中加入0.015gNa0H的比例加入Imol/L的NaOH溶液，加热至80°C，搅拌，连续回流4h，用蒸馏水稀释至0. 24g药材/ml，得碱水解液； C、第一次纯化按照药材量树脂量重量比为1:1称取大孔吸附树脂，装入径高比为2:15的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为6倍柱体积/小时，饱和2h;用15倍柱体积的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用15倍柱体积0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时，用蒸馏水冲至中性；用7倍柱体积40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用15倍柱体积60% 的乙醇溶液进行洗脱,洗脱流速为12倍柱体积/小时，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ； d、第二次纯化按照药材量树脂量重量比为2. I: I称取弱碱性阴离子交换树脂，装入径高比为2:13的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至pH值为.7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为3. 6倍柱体积/小时，收集流出液；用4倍柱体积60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至11. 2g药材/ml，得纯化液B ； e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。
5.根据权利要求1-4任一项所述的从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法，其特征在于所述大孔吸附树脂为HPD722、HPD100, HPD910、AB_8、DlOl树脂中的一种，所述弱碱性离子交换树脂330树脂。
6.根据权利要求I所述的从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法，其特征在于包括如下步骤 a、提取称取黄芪饮片，每次加入8倍量80%乙醇溶液，加热回流提取3次，第一次I.5h,后两次各Ih,首次浸泡20min,过滤；提取的滤液合并,减压浓缩至无醇味,定容至药液药材体积重量比为2:1，得浓缩液； b、碱水解将浓缩液加入提取罐中，按照Ig药材中加入0.OlgNaOH的比例加入Imol/L的NaOH溶液，加热至100°C，搅拌，连续回流6h，用蒸馏水稀释至0. Ig药材/ml，得碱水解液； C、第一次纯化按照药材量树脂量重量比为2:1称取HPD722树脂，装入径高比为1:3的层析柱，用95%乙醇和蒸馏水处理干净；将碱水解液上样，吸附流速为6倍柱体积/小时，饱和Ih;用10倍柱体积的蒸馏水进行洗脱除糖，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用10倍柱体积0. lmol/L的NaOH溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时，用蒸馏水冲至中性；用7倍柱体积40%的乙醇溶液除杂，洗脱流速为12倍柱体积/小时；用15倍柱体积60%的乙醇溶液进行洗脱，洗脱流速为12倍柱体积/小时，收集60%的乙醇洗脱液，得纯化液A ； d、第二次纯化按照药材量树脂量重量比为3.2:1称取330弱碱性阴离子交换树脂，装入径高比为1:3的层析柱，用酸碱处理弱碱性阴离子交换树脂，最终用蒸馏水冲洗至pH值为7 ;将纯化液A流过弱碱性阴离子交换树脂床，流速为3. 6倍柱体积/小时，收集流出液；用3倍柱体积60%乙醇溶液流过弱碱性阴离子树脂柱，收集流出液；将两部分的流出液合并浓缩至6. 4g药材/ml，得纯化液B ； e、精制将纯化液B放置冰箱中三天，然后过滤，滤饼用蒸馏水转溶后冻干，冻干后的样品放入真空干燥器中干燥，95%乙醇重结晶，即得黄芪甲苷。
全文摘要
本发明公开了一种从黄芪中提取精制黄芪甲苷的方法。黄芪甲苷是一种羊毛酯醇形的四环三萜皂苷的化合物，富含于中药材黄芪(ASTRAGALIRADIX)之中，本发明采用乙醇回流提取，碱水解，大孔吸附树脂除杂，离子交换树脂脱色，重结晶等一系列高效的提取、分离和纯化的技术手段，得到的目标化合物为白色粉末，收率大于0.07%，纯度可达到99%以上。此生产工艺简单易行，无污染，适合于大生产。
文档编号C07J53/00GK102746362SQ20111009733
公开日2012年10月24日 申请日期2011年4月19日 优先权日2011年4月19日
发明者姚道鲁, 宋剑, 王宗权, 贾继明, 赵韶华 申请人:河北以岭医药研究院有限公司