专利名称：一种美沙酮人工抗原的制备方法
技术领域：
本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一种美沙酮人工抗原的制备方法。
背景技术：
美沙酮(MTD)又称美散痛，非那痛，阿米酮，属于麻醉镇痛药，为μ阿片受体激动齐U，药效与吗啡类似，具有镇痛作用，并可产生呼吸抑制、缩瞳、镇静等作用。与吗啡比较，具有作用时间较长、药物依赖性低的特点，是二战期间德国合成的替代吗啡的麻醉性镇痛药。其结构式为
权利要求
1.一种美沙酮人工抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤 (I)制备人工半抗原 (a)将二苯乙腈与2-氯-N，N-二甲基丙胺盐酸盐以摩尔比为1:1.6加入圆底烧瓶中，100°C下搅拌反应6小时；反应结束后反应液用乙醚提取，转干，经重结晶得到白色固体产物I ;TLC :层析液为乙酸乙酯，产物Rf =0. 5^0. 7 ； (b)将70%的硫酸与产物I以摩尔比为3.6:1加入圆底烧瓶中，130°C下搅拌反应2小时；反应结束后，将溶剂转干，用乙醚提取得产物II ；TLC :层析液为乙酸乙酯 ，产物Rf=03 O. 5 ； (C)将产物II与98%的硫酸以摩尔比为1:8溶于无水甲醇中，68°C回流反应18小时，反应结束后加入碳酸氢钠固体中和，过滤，将滤液转干，加入四氢呋喃提取，得到黄色油状物III ；TLC :层析液为95%乙醇，产物Rf =0. 9 ； (d)将黄色油状物III与氢化铝锂以摩尔比为1:1. 5溶于无水四氢呋喃中，氮气保护，68°C回流反应18小时；反应结束后，用氢氧化钠溶液调至碱性，过滤转干得到白色油状物IV ；TLC :层析液为95%乙醇，产物Rf =0. 7 ； Ce)将白色油状物IV与丁二酸酐以摩尔比为1:2溶于无水吡啶中，100°C反应20小时；反应结束后减压蒸馏，薄层层析法纯化得到美沙酮半抗原V ；TLC :层析液为95%乙醇，产物Rf=O. 4 O. 5 ；(2)制备美沙酮人工抗原 (f)将美沙酮半抗原V与N-羟基琥珀酰亚胺、环己基碳酰二亚胺以摩尔比为I: I. 5:1. 5溶于N，N- 二甲基甲酰胺中，室温搅拌反应18小时，反应结束后离心取上清液记为A液； (g)将氯化钠与十二水磷酸氢二钠、二水磷酸二氢钠以摩尔比为78.3:4. 2:1溶于双蒸水中，制备钠离子浓度为O. lmol/L的PBS缓冲液，pH为7. 2 . 4 ； (h)将牛血清蛋白溶于PBS缓冲液中，得到浓度为5mg/ml的B液； (i)将A液缓慢滴加到B液，A液与B液的体积比为1:5，得到的混合液在4°C条件下静置保存过夜，得到人工抗原混合液； U)将人工抗原混合液于PBS缓冲液中透析，透析结束后离心取上清液即得到人工抗原美沙酮-牛血清蛋白。
全文摘要
本发明提供了一种美沙酮人工抗原的制备方法，第一步为半抗原的制备及检测以2-氯-N,N-二甲基丙胺与二苯乙腈为原料通过缩合，氧化，酯化，还原在1位上引入羟基，和丁二酸酐反应得到含羧基的半抗原；第二步为人工抗原的制备与检测通过碳二亚胺法使之与牛血清蛋白(BSA)结合制备美沙酮的人工抗原即美沙酮-牛血清蛋白。所制备的美沙酮人工抗原可进行动物免疫，取得相应的美沙酮抗体，可用于各种美沙酮类免疫分析法的研究，为美沙酮的检测提供更加方便快速准确的途径。
文档编号C07C213/06GK102617730SQ20121010560
公开日2012年8月1日 申请日期2012年4月11日 优先权日2012年4月11日
发明者王百龙, 邵越水 申请人:杭州培乐生物技术有限公司