专利名称：一种穆萨树甙Ⅱ的提纯方法
技术领域：
本发明属于天然植物技术领域，涉及一种穆萨树甙II的提纯方法。
背景技术：
穆萨树甙II (Butrom),又名紫矿春，分子式为C27H32O15,分子量为596.54，mp.19CTC。穆萨树式II是从豆科植物紫铆及/iea monospeerma (Lam.) Kuntze的花中分离得到的一种黄酮苷类化合物。穆萨树的树皮提取物穆萨树甙II和异穆萨树甙II在印度多用于治疗肝病。麦军利通过在氯仿和半乳糖胺引起的肝细胞损害的实验表明，穆萨树的树皮提取物显示有护肝作用，并证实可增强小鼠干细胞核的RNA合成，从而提高部分肝切除小鼠干细胞的再生率。麦军利分离穆萨树甙II是通过溶剂层析、TLC和HPLC分离，该方法制备量小，成本高，仅 适用于实验室化学成分分析少量制备。经检索，尚未发现适宜于大量制备穆萨树甙II的工业化方法的专利或文献报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种穆萨树甙II的提纯方法，成品穆萨树甙II含量高、生产成本低，可适用于工业化生产。本发明是通过如下技术方案实现的:
(1)以穆萨树的树皮为原料，加8-12倍量5(Γ70%乙醇水溶液微波提取2-3次，微波功率为2_8kw，收集提取液；
(2)将提取液通过超滤膜系统，得透过液；
(3)将透过液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用水洗脱，再用50-65%的乙醇水溶液洗脱，收集目标成分，减压浓缩，离心，将清液干燥，得粗提物；
(4)以乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，将上述得到的粗提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化，即得到高纯度的穆萨树甙II。步骤(2)中所述超滤膜为中空超滤膜，材质为聚醚砜，截留分子量为2000-3000道尔顿。步骤(3)中所述乙酸乙酯-甲醇-水的体积比为(4-7):(2-4): (6-11)。本发明的有益效果是:采用微波提取，提取率高，耗时短，且避免目标产品的损失，是一种低耗能环保的提取方法；聚酰胺树脂吸附洗脱，提高了产品的纯度；采用高速逆流色谱法进行穆萨树甙II的分离纯化，与以往技术手段相比，具有分离能力强、分离时间短、样品损失小、广品质量闻等优点。
具体实施方式
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下面结合具体实施方式
对本发明进行进一步说明。实施例1:
取200g穆萨树的树皮粉碎过20目筛，加入8倍量70%乙醇微波提取lOmin，提取2次，微波功率为4kw，合并提取液，再用2000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用水洗脱，再用6BV50%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例4:2:6混合，静置分层，两相分别微波脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机,调节分离柱转速为950rpm,将流动相以2.5ml/min的流速泵入,将150mg穆萨树式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到穆萨树甙II，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，穆萨树甙II的含量为98.2%。实施例2:
取Ikg穆萨树的树皮粉碎过40目筛，加入9倍量60%乙醇微波提取30min，提取2次，微波功率为2kw，合并提取液，再用2000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用水洗脱，再用5BV50%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例4:2:10混合，静置分层，两相分别微波脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相以10ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机,调节分离柱转速为900rpm,将流动相以3ml/min的流速泵入,将200mg穆萨树式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到穆萨树甙II，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，穆萨树甙II的含量为
98.6%。实施例3:
取2kg穆萨树的树皮粉碎过20目筛，加入10倍量65%乙醇微波提取15min，提取3次，微波功率为5kw，合并提取液，再用3000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰`胺树脂柱吸附，先用水洗脱，再用4BV65%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例7:3:11混合，静置分层，两相分别微波脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相以4ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机,调节分离柱转速为850rpm,将流动相以3ml/min的流速泵入,将200mg穆萨树式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到穆萨树甙II，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，穆萨树甙II的含量为
99.2 %。实施例4:
取2kg穆萨树的树皮粉碎过60目筛，加入12倍量50%乙醇微波提取20min，提取3次，微波功率为5.5kw，合并提取液，再用3000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用水洗脱，再用5BV55%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例5:4:7混合，静置分层，两相分别微波脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相以10ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机,调节分离柱转速为IOOOrpm,将流动相以3ml/min的流速泵入，将200mg穆萨树式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到穆萨树甙II，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，穆萨树甙II的含量为98.1%。实施例5:
取IOkg穆萨树的树皮粉碎过40目筛，加入10倍量50%乙醇微波提取lOmin，提取2次，微波功率为8kw，合并提取液，再用2000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用水洗脱，再用4BV55%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例6:3:8混合，静置分层，两相分别微波脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机,调节分离柱转速为900rpm,将流动相以3.5ml/min的流速泵入,将150mg穆萨树式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，使用分步收集器 收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到穆萨树甙II，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，穆萨树甙II的含量为98.2%。实施例6:
取20kg穆萨树的树皮粉碎过20目筛，加入9倍量65%乙醇微波提取25min，提取2次，微波功率为2kw，合并提取液，再用3000道尔顿的中空聚醚砜超滤膜过滤，透过液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用水洗脱，再用6BV65%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到粗提物。取乙酸乙酯、甲醇、水按比例5:3:9混合，静置分层，两相分别微波脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相以10ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机,调节分离柱转速为850rpm,将流动相以3ml/min的流速泵入,将200mg穆萨树式II粗提物溶于IOml上相和IOml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到穆萨树甙II，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，穆萨树甙II的含量为98.0%。
权利要求
1.一种穆萨树甙II的提纯方法，其特征在于包括以下步骤: (1)以穆萨树的树皮为原料，加8-12倍量5(Γ70%乙醇水溶液微波提取2-3次，微波功率为2-8kw，收集提取液； (2)将提取液通过超滤膜系统，得透过液； (3)将透过液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，先用水洗脱，再用50-65%的乙醇水溶液洗脱，收集目标成分，减压浓缩，离心，将清液干燥，得粗提物； (4)以乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，将上述得到的粗提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化，即得到高纯度的穆萨树甙II。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中所述超滤膜为中空超滤膜，材质为聚醚砜，截留分子量为2000-3000道尔顿。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中所述乙酸乙酯-甲醇-水的体积比为 (4-7): (2-4): (6-11)。
全文摘要
本方法提供一种穆萨树甙Ⅱ的提纯方法，其特征在于包含以下步骤(1)以穆萨树的树皮为原料，加8-12倍量50~70%乙醇水溶液微波提取2-3次，收集提取液；(2)将提取液通过超滤膜系统，得透过液；(3)将透过液减压浓缩至无醇，加水分散，加入聚酰胺树脂柱吸附，乙醇水溶液洗脱，收集目标成分，减压浓缩，离心，将清液干燥，得粗提物；(4)以乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，上相为固定相，下相为流动相，将上述得到的粗提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化，即得到高纯度的穆萨树甙Ⅱ。
文档编号C07H1/08GK103242389SQ20131018870
公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月21日 优先权日2013年5月21日
发明者刘东锋, 万冬梅 申请人:南京泽朗医药科技有限公司