一种提取叶绿素的方法
【专利摘要】本发明提供了一种提取叶绿素的方法，步骤包括：取绿色的植物茎或叶，沸水煮，阴干，粉碎；加入体积浓度为1-8％的triton?X-114水溶液，超声提取，取上清液，加入NaCl，搅拌均匀，静置，分离，去除下层水相，取上层加入甲醇，用超滤膜过滤，滤液浓缩至粘稠状；浓缩液中加入无水乙醇，振荡，过滤，滤液浓缩得浸膏。用紫外分光光度计测定叶绿素含量。该方法提取温度低、工艺设备简单、产品得率较高，具有经济、安全、高效、简便、省时、环保等优点。该方法提取过程中没有破坏叶绿素原有性质，保持了叶绿素中Mg2+的存在，所得叶绿素具有原有鲜绿的色泽。
【专利说明】一种提取叶绿素的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及叶绿素提取方法，具体属于一种浊点萃取法提取叶绿素的方法。
【背景技术】[0002]目前，叶绿素用途非常广泛，可运用于医药、保健品、化妆品、食品色素以及化工等领域(吴晶等，时珍国医国药，2005，16 (9):915-916)。在药用方面，叶绿素是强抗氧化剂，可防止各种氧自由基所致的氧化损害，从而减少DNA损伤，叶绿素还能有效抑制黄曲霉毒素的致癌效应，具有显著的抗癌作用。另外叶绿素以及叶绿素铜钠盐等还具有抗贫血、抗溃疡、抗菌、抗病毒、保肝排毒等诸多药理作用(郑国栋等，中南药学，2006,4(2):146-148)。在化妆品方面，近年来人工合成色素导致的皮肤病急剧增加，由合成色素而引起的皮肤功能障碍占43.9%，长期使用会对光线敏感，从而导致色素沉着，还伴有皮肤潮红、丘疹等炎症现象(吴晶等，时珍国医国药，2005，16 (9):915-916)。在食品色素方面，国内由于苏丹红事件，合成色素受到严格的限制，美国批准的合成色素从700种锐减到了 7种(沈国强等，染料与染色，2009，46 (I):7-10)。目前，人们越来越重视天然色素的应用。除上述应用之外，叶绿素还可应用于军事伪装和光动力学治疗癌症等方面(杨玉杰等，功能材料，2011，增刊II (42):374-376，381)、(柳新平等，中国肿瘤临床与康复，2007，14 (3):269-271)。
[0003]关于叶绿素提取方法，可分为几大类:溶剂提取法、超临界流体萃取法、超声波提取法、浸溃压榨法、生物工程法等。溶剂提取法最常使用，该方法工艺简单，但浸提、过滤时间长，产品得率低，溶剂消耗量大。超临界流体萃取法较好，但超临界萃取设备投资费用过高，影响其应用推广。超声波提取法虽然优点较多，但使用有机溶剂会带来安全问题。浸溃压榨法耗时长，提取率较低，而生物工程法步骤多，工作量较大(惠秋沙，北方药学，2011，8(5):3-4)。本发明使用triton X-114进行浊点萃取，结合超声波提取法优点，取得了满意结果。
【发明内容】
[0004]本发明的目的在于提供一种新的叶绿素提取方法，该方法工艺设备简单、无污染、能量消耗低、产品得率较高、且不破坏叶绿素原有性质，特别是要保持叶绿素中Mg2+的存在，从而使叶绿素保持原有鲜绿的色泽。
[0005]本发明提供的一种叶绿素提取方法，包括如下步骤:
[0006]I)取绿色的植物茎或叶，清洗干净，阴干，粉碎；加入体积浓度为1-8%的tritonX-114水溶液，料液比为1:5-15，搅拌混匀，然后超声，条件:功率150-400W，时间5_20min，温度4-24°C ;离心分离，取上清液；
[0007]2)上清液中加入NaCl，NaCl加入量为上清液重量的12-20%，搅拌均匀，将其倒入分液漏斗，静置分层，去除下层水相，取上层；
[0008]3)上层加入1-4倍体积的95%乙醇，用超滤膜过滤，滤液浓缩至粘稠状；
[0009]4)浓缩液中缓慢加入无水乙醇，振荡，至白色沉淀析出量无明显变化时停止加入无水乙醇，过滤，滤液浓缩得浸膏。用紫外分光光度计测定叶绿素含量。
[0010]所述步骤I)中triton X-114水溶液的浓度优选为1-6%。
[0011]所述步骤I)中料液比优选为1:6-12。
[0012]所述步骤I)中超声时间优选为8_15min。
[0013]所述步骤I)中超声温度优选为15_22°C。
[0014]与现有技术相比，本发明利用浊点萃取法从植物叶片中提取叶绿素，克服了原有溶剂提取法浸提和过滤时间长，产品得率低，溶剂消耗量大的缺点。该方法不使用有机溶剂，无污染、提取时间短、产品得率较高；同时提取温度低，使得叶绿素原有性质没有被破坏，保持了叶绿素中Mg2+的存在，所得叶绿素保持了原有鲜绿的色泽。
【专利附图】
【附图说明】
[0015]图1连翘叶叶绿素浊点萃取紫外光谱图。
【具体实施方式】
[0016]实施例1
[0017]I)采集连翘叶，清洗干净，阴干，粉碎；准确称取连翘叶粉末20g，加入体积浓度为4%的triton X-114水 溶液200mL，搅拌混匀，然后超声，条件:功率250W，时间llmin，温度20°C ;离心，转速4000rpm,时间15min,取上清液；
[0018]2)上清液中加入50g NaCl，搅拌均匀，将其倒入分液漏斗，静置分层，去除下层水相，取上层；
[0019]3)在上层中加入60mL的95%乙醇，用0.45 μ m滤膜过滤，滤液浓缩至粘稠状；
[0020]4)浓缩液中缓慢加入无水乙醇，振荡，至白色沉淀析出量无明显变化时停止加入无水乙醇，过滤，滤液浓缩得叶绿素浸膏。
[0021]取少量叶绿素浸膏，用95%乙醇稀释，用紫外可见分光光度计测定，结果见图1。由图可知，在410、430、610、665nm处均有吸收峰，与文献报道的叶绿素a出峰位置相一致。经计算叶绿素提取率为0.59%。
[0022]实施例2
[0023]I)采集连翘叶，清洗干净，阴干，粉碎；准确称取连翘叶粉末20g，加入体积浓度为1%的triton X-114水溶液160mL，搅拌混匀，然后超声，条件:功率250W，时间8min，温度20°C ;离心，转速4000rpm,时间15min,取上清液;
[0024]2)上清液中加入50g NaCl，搅拌均匀，将其倒入分液漏斗，静置分层，去除下层水相，取上层；
[0025]3)在上层中加入60mL的95%乙醇，用0.45 μ m滤膜过滤，滤液浓缩至粘稠状；
[0026]4)浓缩液中缓慢加入无水乙醇，振荡，至白色沉淀析出量无明显变化时停止加入无水乙醇，过滤，滤液浓缩得叶绿素浸膏物。经测定，叶绿素提取率为0.48%。
[0027]实施例3
[0028]I)采集连翘叶，清洗干净，阴干，粉碎；准确称取连翘叶粉末20g，加入体积浓度为8%的triton X-114水溶液240mL，搅拌混匀，然后超声，条件:功率250W，时间15min，温度20°C ;离心，转速4000rpm,时间15min,取上清液；[0029]2)上清液中加入50g NaCl，搅拌均匀，将其倒入分液漏斗，静置分层，去除下层水相，取上层；[0030]3)在上层中加入60mL的95%乙醇，用0.45 μ m滤膜过滤，滤液浓缩至粘稠状；
[0031]4)浓缩液中缓慢加入无水乙醇，振荡，至白色沉淀析出量无明显变化时停止加入无水乙醇，过滤，滤液浓缩得叶绿素浸膏物。经测定，叶绿素提取率为0.53%。
【权利要求】
1.一种叶绿素提取方法，其特征在于，包括如下步骤: 1)取绿色的植物茎或叶，清洗干净，阴干，粉碎；加入体积浓度为1-8%的tritonX-114水溶液，料液比为1: 5-15，搅拌混匀，然后超声，条件:功率150-400W，时间5-20min，温度4_24°C ;离心分离，取上清液； 2)上清液中加入NaCl，NaCl加入量为上清液重量的12-20%，搅拌均匀，将其倒入分液漏斗，静置分层，去除下层水相，取上层； 3)上层加入1-4倍体积的95%乙醇，用超滤膜过滤，滤液浓缩至粘稠状； 4)浓缩液中缓慢加入无水乙醇，振荡，至白色沉淀析出量无明显变化时停止加入无水乙醇，过滤，滤液浓缩得浸膏。
2.如权利要求1所述的一种叶绿素提取方法，其特征在于，所述步骤I)中tritonX-114水溶液的浓度为1-6%。
3.如权利要求1所述的一种叶绿素提取方法，其特征在于，所述步骤I)中料液比为I: 6-12。
4.如权利要求1所述的一种叶绿素提取方法，其特征在于，所述步骤I)中超声时间为8-15min。
5.如权利要求1所述的一种叶绿素提取方法，其特征在于，所述步骤I)中超声温度为15-22。。。
【文档编号】C07D487/22GK103923091SQ201410162725
【公开日】2014年7月16日 申请日期:2014年4月22日 优先权日:2014年4月22日
【发明者】陈廷贵, 栗亚云, 张立伟 申请人:山西大学