一种山油柑碱的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种山油柑碱的制备方法，其制备方法是：（1）取山油柑根粗粉，70-95%的乙醇溶液连续逆流超声提取，得到提取液；（2）将提取液浓缩，再经氧化铝柱层析；（3）制备型液相色谱分离；（4）氯仿-丙酮重结晶，得到高纯度的山油柑碱结晶产品。本发明方法简单、得率高，可得到高纯度产品，具有较高的经济价值和学术价值。
【专利说明】一种山油柑碱的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明属于天然植物提取领域，具体涉及一种山油柑碱的制备方法。
【背景技术】
[0002]山油柑碱(Acronyci ne),分子式C2tlH19NO3,分子量321.36,难溶于水,可溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。
[0003]山油柑碱是从芸香科植物山油柑Acronychia pedunculata (L.)Miq.根中提取分离的一种生物碱类化合物。实验研究表明，山油柑碱具有能抑制细胞的有丝分裂和降低吉田腹水瘤细胞分裂指数。能影响癌细胞核酸的生成，显著降低L615小鼠脾中RNA的含量，而对正常动物组织中RNA和DNA的含量无显著影响。抗动物癌谱较广，在17种瘤谱中，对其中12种瘤谱有显著抑制作用，对目前临床使用的化疗药物不敏感的髓性白血病C-1498，浆细胞骨髓瘤X_5563(接近人体肿瘤)和Shingi癌-115均有抑制作用。
[0004]目前，国内尚未见山油柑碱的提取纯化方法方面的报道。
【发明内容】
[0005]本发明的目的在于提供一种山油柑碱的制备方法，该方法操作简单、得率高、安全环保，可快速大量分离高纯度山油柑碱。
[0006]为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下:
(1)提取:取山油柑根粉碎成粗粉，用5-10倍量70-95%的乙醇溶液，25-55°C下进行连续逆流超声提取20-100min，得到乙醇提取液；
(2)氧化铝柱层析:上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集山油柑碱流分，浓缩；
(3)制备型液相色谱分离:上述浓缩液采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集山油柑碱组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得山油柑碱粗晶；
(4)重结晶:将山油柑碱粗晶用氯仿-丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度山油柑碱晶体。
[0007]步骤(1)所述超声频率为50-80KHZ。
[0008]步骤(2)所述氧化铝为80-120目，氯仿-丙酮体积比为1:1，用量为柱体积的4_7倍。
[0009]步骤(3)所述制备型液相色谱的流动相为乙腈-0.15%乙二胺水溶液，体积比为32:68，紫外检测波长为228nm。
[0010]步骤(4)所述氯仿-丙酮的体积比为2-3:1。
[0011]本发明的优点在于:1)操作简单、耗时短，易于产业化放大；2)提取、柱层析、制备液相分离等步骤中的溶剂用量少，并可回收再利用；3)具有较高的经济效益和学术价值，本发明所得产品纯度高，可为山油柑碱的进一步开发提供药理原料和实践支持。
【具体实施方式】
[0012]下面结合具体实施例对本发明进一步说明:
实施例1:
取山油柑根1kg，粉碎成粗粉，从连续逆流超声提取设备头部进料口进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入口加入10倍95%乙醇溶液，55°C下进行连续逆流超声提取20min，超声频率为80KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝(120目)拌匀、干燥后装柱，用7倍柱体积的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脱，薄层检测，收集山油柑碱流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经0.45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈-0.15%乙二胺水溶液为流动相，体积比为32:68，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10 μ m，柱长为15cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为25ml,控制流速为50ml/min,紫外在线检测,检测波长为228nm,收集目标成分,减压回收试剂得山油柑碱粗晶，用氯仿-丙酮(2.5:1)重结晶，冷冻干燥得到高纯度山油柑碱晶体，经HPLC检测，纯度96.5%。
[0013]实施例2:
取山油柑根1kg，粉碎成粗粉，从连续逆流超声提取设备头部进料口进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入口加入10倍80%乙醇溶液，45°C下进行连续逆流超声提取10min,超声频率为60KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，加氧化铝(80目)拌匀、干燥后装柱，用4倍柱体积的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脱，薄层检测，收集山油柑碱流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经0.45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈-0.15%乙二胺水溶液为流动相，体积比为32:68,色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10 μ m，柱长为10cm、直径为1cm，六通阀进样，进样体积为5ml，控制流速为10ml/min，紫外在线检测，检测波长为228nm，收集目标成分，减压回收试剂得山油柑碱粗晶，用氯仿-丙酮(3:1)重结晶，冷冻干燥得到高纯度山油柑碱晶体，经HPLC检测，纯度97.8%。
[0014]实施例3:
取山油柑根10kg，粉碎成粗粉，从连续逆流超声提取设备头部进料口进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入口加入6倍70%乙醇溶液，35°C下进行连续逆流超声提取50min，超声频率为50KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，加氧化铝(100目)拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脱，薄层检测，收集山油柑碱流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经0.45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈-0.15%乙二胺水溶液为流动相，体积比为32:68,色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10 μ m，柱长为25cm、直径为4cm，六通阀进样，进样体积为20ml，控制流速为20ml/min，紫外在线检测，检测波长为228nm，收集目标成分，减压回收试剂得山油柑碱粗晶，用氯仿-丙酮(2:1)重结晶，冷冻干燥得到高纯度山油柑碱晶体，经HPLC检测，纯度98.5%。
[0015]实施例4:
取山油柑根10kg，粉碎成粗粉，从连续逆流超声提取设备头部进料口进料，从连续逆流超声提取设备尾部溶剂加入口加入5倍80%乙醇溶液，25°C下进行连续逆流超声提取SOmin,超声频率为60KHz，得到提取液，提取液减压回收试剂得浸膏，加氧化铝(100目)拌匀、干燥后装柱，用7倍柱体积的氯仿-丙酮(1:1)混合溶液洗脱，薄层检测，收集山油柑碱流分，浓缩得浓缩液。将浓缩液加入甲醇至刚好溶解，溶解后的溶液经0.45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液取滤液进样，以乙腈-0.15%乙二胺水溶液为流动相，体积比为32:68，色谱柱以C8键合相为填料，粒径为10 μ m，柱长为50cm、直径为5cm，六通阀进样，进样体积为50ml，控制流速为150ml/min，紫外在线检测，检测波长为228nm，收集目标成分，减压回收试剂得山油柑碱粗晶 ，用氯仿-丙酮(2:1)重结晶，冷冻干燥得到高纯度山油柑碱晶体，经HPLC检测，纯度97.2%。
【权利要求】
1.一种山油柑碱的制备方法，其特征在于它包括以下步骤: (1)提取:取山油柑根粉碎成粗粉，用5-10倍量70-95%的乙醇溶液，25-55°C下进行连续逆流超声提取20-100min，得到乙醇提取液； (2)氧化铝柱层析:上述提取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集山油柑碱流分，浓缩； (3)制备型液相色谱分离:上述浓缩液采用制备型液相色谱分离，紫外检测器在线监测，收集山油柑碱组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得山油柑碱粗晶； (4)重结晶:将山油柑碱粗晶用氯仿-丙酮重结晶，冷冻干燥得到高纯度山油柑碱晶体。
2.根据权利要求1所述的山油柑 碱的制备方法，其特征在于步骤(1)所述超声频率为50-80KHz。
3.根据权利要求1所述的山油柑碱的制备方法，其特征在于步骤(2)所述氧化铝为80-120目，氯仿-丙酮体积比为1:1，用量为柱体积的4-7倍。
4.根据权利要求1所述的山油柑碱的制备方法，其特征在于步骤(3)所述制备型液相色谱的流动相为乙腈-0.15%乙二胺水溶液，体积比为32:68，紫外检测波长为228nm。
5.根据权利要求1所述的山油柑碱的制备方法，其特征在于步骤(4)所述氯仿-丙酮的体积比为2-3:1。
【文档编号】C07D491/052GK104072502SQ201410266313
【公开日】2014年10月1日 申请日期:2014年6月16日 优先权日:2014年6月16日
【发明者】刘东锋, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司