专利名称：取代的异噁唑基噻吩化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的取代的异噁唑基噻吩化合物和含有这种化合物作为活性组分的药用组合物，该化合物有利于强化细胞分化诱导因子的作用。
已报道能通过强化存在于或给投到活体中的细胞分化诱导因子的作用从而起抗骨病或神经病疗效或预防效果的化合物包括在WO98/09958中公开的稠合噻吩衍生物，但是该报道中没有记载本发明的化合物。
本发明人通过广泛研究并发现一些取代的异噁唑基噻吩化合物能有效地治疗或预防骨病或神经病，并最终完成了本发明。
更具体地说，本发明涉及一种式(Ⅰ)所示的取代的异噁唑基噻吩化合物或其盐 其中R1和R2各自代表1-5个碳原子的烷基，R3代表氰基或基团CONR5R6(其中R5和R6各自代表H或1-10个碳原子的烷基)，R4代表1-5个碳原子的烷基或苯基，n为0-2的整数。
本文中所用的1-5个碳原子的烷基意思是直链或支链烷基并包括，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和正戊基。
本文中所用的1-10个碳原子的烷基意思是直链或支链烷基并包括，如甲基、乙基、正丙基、并丙基、正丁基、异丁基、正戊基、正己基和正辛基。
本文中所用的盐可以包括具有药用上可接受的酸(例如盐酸、硫酸、硝酸、酒石酸、柠檬酸、马来酸、富马酸等)的盐，及其水合物。
本发明还可以包括在给药之后能够通过体内新陈代谢产生本发明的活性化合物的化合物、或者能通过体内新陈代谢产生由本发明的化合物的新陈代谢产生的活性化合物本身的化合物。
本发明的化合物(Ⅰ)可以根据例如下面的方法制备1)其中R3为氰基并且n为0的化合物(Ⅰ)可以根据例如反应路线1所述的方法制备。
反应路线1 在反应路线1中，R1和R2具有如上所述的相同含义，并且R7为基团COCH3、COCH2R4或CH2COR4(其中R4具有如上所述的相同含义)。
反应路线1详述如下。
1)-(1)可以使用R7代表COCH3的二酮化合物(Ⅱ)作原料制备本化合物(Ⅰa)和(Ⅰb)。 更具体地说，可以在有碱的情况下将R7代表COCH3的二酮化合物(Ⅱ)与二硫化碳(CS2)缩合，然后通过来自二硫化碳的一个硫原子与如氯乙腈或溴乙腈的卤代乙腈以及剩余硫原子与R2-X1(其中R2具有如上所述相同的含义，X1为例如卤原子的离去基团，如氯原子或溴原子或者甲硫氧基)的硫醚化作用，同时进行分子内环化反应，将该缩合产物转换成R7代表COCH3的噻吩化合物(Ⅲ)。
可用于本反应中的碱可以包括碱金属氢氧化物(氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾等)、碱金属的碳酸盐(碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾等)、碱金属的碳酸氢盐(碳酸氢钠、碳酸氢钾等)、碱金属的氢化物(氢化钠、氢化钾等)、无机碱(金属钠、金属钾、氨化钠等)、碱金属的醇化物(甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾等)、有机碱(三乙胺、二异丙基乙胺、三正丁胺、1,5-二氮杂二环[4.3.0]-5-壬烯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]-7-十一碳烯、吡啶、N,N-二甲基氨基吡啶等)、有机金属化合物(正丁基锂、仲丁基锂、叔丁基锂、二异丙基氨基锂、二(三甲基甲硅烷基)氨化钠等)等。
该反应可以在有或者没有溶剂的情况下进行。可以使用的溶剂包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氢呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、环己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
所用的碱和溶剂以及是否使用溶剂应根据反应中所用的反应物和反应参数经过适当选择。
然后，将R7为基团COCH3的噻吩化合物(Ⅲ)中的R7与R4-OOOH(其中R4具有如上所述的相同含义)所代表的活化羧酸衍生物，例如甲酯或乙酯的烷基酯或酰基卤或酸酐缩合，从而将R7转换成基团COCH2COR4。接下来使用羟胺或其衍生物的缩合环化反应可以生产本发明的化合物(Ⅰa)或(Ⅰb)。
该缩合反应优选在有碱的情况下进行。可用于该反应中的碱包括碱金属氢氧化物(氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾等)、碱金属的碳酸盐(碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾等)、碱金属的碳酸氢盐(碳酸氢钠、碳酸氢钾等)、碱金属的氢化物(氢化钠、氢化钾等)、无机碱(金属钠、金属钾、氨化钠等)、碱金属的醇化物(甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾等)、有机碱(三乙胺、二异丙基乙胺、三正丁胺、1,5-二氮杂二环[4.3.0]-5-壬烯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]-7-十一碳烯、吡啶、N,N-二甲基氨基吡啶等)、有机金属化合物(正丁基锂、叔丁基锂、二异丙基氨化锂、二(三甲基甲硅烷基)氨化钠等)等。
该反应可以在有或者没有溶剂的情况下进行。可以使用的溶剂包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氢呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、环己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
用于缩合环化反应的羟胺可以为盐酸、硫酸等的盐的形式，并且反应优选在有碱的情况下进行。可用于本反应的碱包括碱金属氢氧化物(氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾等)、碱金属的碳酸盐(碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾等)、碱金属的碳酸氢盐(碳酸氢钠、碳酸氢钾等)、碱金属的氢化物(氢化钠、氢化钾等)、无机碱(金属钠、金属钾、氨钠等)、碱金属的醇化物(甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾等)、有机碱(三乙胺、二异丙基乙胺、三正丁胺、1,5-二氮杂二环[4.3.0]-5-壬烯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]-7-十一碳烯、吡啶、N,N-二甲基氨基吡啶等)、有机金属化合物(正丁基锂、叔丁基锂、二异丙基氨化锂、二(三甲基甲硅烷基)氨化钠等)等。
该反应可以在有或者没有溶剂的情况下进行。可以使用的溶剂包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氢呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、环己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
所用试剂和溶剂以及是否使用溶剂应针对每一反应根据所用的反应物和反应参数经过适当选择。
1)-(2)可以根据反应路线1使用R7代表COCH2R4或CH2COR4的二酮化合物(Ⅱ)作原料制备本发明的化合物(Ⅰc-Ⅰf)。 更具体地说，可以根据1)-(1)的方法使用R7代表基团COCH2R4或(CH2COR4的二酮化合物(Ⅱ)制备R7代表COCH2R4或CH2COR4的噻吩化合物(Ⅲ)。
通过将R7代表基团COCH2R4或CH2COR4的噻吩化合物(Ⅲ)的R7转换成甲酰基、卤代亚甲基、烷氧基亚甲基或氨基亚甲基，接着使用羟胺或其衍生物进行缩合环化反应，可制得本发明的化合物(Ⅰc-Ⅰf)。
可以通过如下方法进行所述甲酰化反应第一种方法是在有碱的情况下缩合例如甲酸甲酯或甲酸乙酯的甲酰酯或者一氧化碳，或者第二种方法是将R7的羰基转换至具有仲胺如二甲胺、吡咯烷或吗啉的烯胺上，接着在有碳酰氯、磷酰氯、草酰氯或类似物的情况下与例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛或叔丁氧基(二甲氨基)甲烷的N,N-二甲基甲酰胺衍生物反应。
可以使用例如N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛或叔丁氧基(二甲氨基)甲烷的N,N-二甲基甲酰胺衍生物进行氨亚甲基形成反应。
可以通过将R7的羰基转换至具有仲胺如二甲胺、吡咯烷或吗啉的烯胺上，接着在有碱的情况下与例如氯仿的卤仿反应来进行卤代亚甲基形成反应。
可以通过在有例如原甲酸甲酯或原甲酸乙酯的原甲酸烷基酯和乙酸酐存在的情况下加热来进行烷氧基亚甲基形成反应。
可以使用例如N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛或叔丁氧基(二甲氨基)甲烷的N,N-二甲基甲酰胺衍生物进行氨亚甲基形成反应。
可用于甲酰化和卤代亚甲基形成反应中的碱包括碱金属氢氧化物(氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾等)、碱金属的碳酸盐(碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾等)、碱金属的碳酸氢盐(碳酸氢钠、碳酸氢钾等)、碱金属的氢化物(氢化钠、氢化钾等)、无机碱(金属钠、金属钾等)、碱金属的乙酸盐(乙酸钠等)、碱金属的醇化物(甲醇钠、乙醇钠、叔丁醇钾等)、有机碱(三乙胺、二异丙基乙胺、三正丁胺、1,5-二氮杂二环[4.3.0]-5-壬烯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]-7-十一碳烯、吡啶、N,N-二甲基氨基吡啶等)、有机金属化合物(正丁基锂、仲丁基锂、叔丁基锂、二异丙基氨化锂、二(三甲基甲硅烷基)氨化钠等)等。
所述甲酰化反应、卤代亚甲基形成反应、烷氧基亚甲基形成反应和氨基亚甲基形成反应可以在有或者没有溶剂的情况下进行。可以使用的溶剂包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氢呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、环己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
在每个反应中所用的试剂和溶剂以及是否使用该溶剂应所用的反应物和反应参数经过适当选择。
2)本发明的化合物(Ⅰg)，为R3代表基团CONR5R6(其中R5和R6具有如上所述的相同含义)且n为0的化合物(Ⅰ)，可以通过在酸性或碱性条件下水解化合物(Ⅰa-Ⅰf)的氰基制成。 本反应中的所述水解反应可以按照水解氰基的常规反应进行，例如单独使用或任选组合地使用盐酸、硫酸、乙酸、磷酸、多磷酸等的酸水解，以及使用氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氨水等的碱水解。
该反应可以在有或者没有溶剂的情况下进行。可以使用的溶剂包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氢呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、环己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
用于该反应中的试剂和溶剂以及是否使用所述溶剂应根据所用的反应物和反应参数经过适当选择。
所述化合物(Ⅰg)可以根据以下方法制备上面1)-(1)中，通过用例如溴乙酸甲酯或溴乙酸乙酯的卤代乙酸酯代替在制备化合物(Ⅰa-Ⅰf)的中间噻吩化合物(Ⅲ)的步骤中来自二硫化碳的一个硫原子的硫醚化作用所用的例如氯乙腈或溴乙腈的卤代乙腈可以制备烷氧羰基代替氰基的噻吩化合物(Ⅲ)。
然后，在酸性或碱性条件下将所述噻吩化合物(Ⅲ)的烷氧羰基水解成羧基，接着使用羟胺进行缩合环化反应，从而制备羧基代替了上面1中的氰基的化合物(Ⅰa-Ⅰf)。
上述的水解可以通过水解酯的常规反应进行，例如单独使用或任选组合地使用盐酸、硫酸、乙酸、磷酸、多磷酸等的酸水解，以及使用氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、氨水等的碱水解。
该反应可以在有或者没有溶剂的情况下进行。可以使用的溶剂包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氢呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、环己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
用于该反应中的试剂和溶剂以及是否使用溶剂应根据所用的反应物和反应参数经过适当选择。
HNR5R6(其中R5和R6具有如上所述的相同含义)所示氨基化合物酰胺化羧基可以最终得到本发明的化合物(Ⅰg)。
酰胺化作用包括与胺的酯基转移作用、得自水解羧酸与胺的缩合反应等。缩合剂包括，例如，如亚硫酰氯的酰基卤、如氯碳酸乙酯的氯碳酸烷基酯、如二环己基碳二亚胺、1-乙基-3-(3-二甲氨基)丙基碳二亚胺的碳二亚胺、如甲磺酰氯的磺酰氯化合物、如亚磷酸二苯酯、二苯基磷酰氯、三苯膦-氮杂二羧酸二乙酯的含磷化合物、N,N’-碳二咪唑。
该反应可以在有或者没有溶剂的情况下进行。可以使用的溶剂包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氢呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、环己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
用于该反应中的试剂和溶剂以及是否使用溶剂应根据所用的反应物和反应参数经过适当选择。
3)通过常规氧化反应将化合物(Ⅰa-Ⅰg)中烷硫基(-S-R2)的硫原子氧化成亚砜或砜，可以制备n为1或2的本发明化合物(Ⅰ)。可用于该氧化反应的氧化剂包括例如，过氧化氢、叔丁基过氧化物、间氯过苯甲酸、过乙酸、间过碘酸钠、亚溴酸钠盐、次氯酸钠、全碘苯等。
该反应可以在有或者没有溶剂的情况下进行。可以使用的溶剂包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇、二噁烷、四氢呋喃、乙醚、石油醚、正己烷、环己烷、苯、甲苯、二甲苯、氯苯、吡啶、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、水等。
用于该反应中的试剂和溶剂以及是否使用所述溶剂应根据所用的反应物和反应参数经过适当选择。
本发明的化合物具有有效强化骨生成的活性，并且可单独或与骨修复用的载体混合用作修复或移植骨或牙槽骨的骨生成强化剂。
本发明的化合物，当其用作骨生成强化剂时，可以片剂、粉剂、溶液、注射液、栓剂等剂量形式经口或肠胃外给药。还可以直接施加到已经手术除去的骨头上。可以通过综合考虑患者的年龄、性别、体重等来选择最佳剂量。
本发明的化合物，当其与骨修复用的载体混合使用时，可以粘附在由金属、陶瓷或聚合物制成的人造骨上或包含其中。优选将所述人造骨制成具有多孔表面，以便当将所述骨头移植到骨头的缺损部分时将根据本发明的成骨细胞分化强化剂释放到活组织中。
通过以下实施例和测定实施例更全面地解释本发明。
然后将所得残余物溶于N,N-二甲基甲酰胺(80ml)，加入无水碳酸钾(12.1g,87.6mmol)并在室温下将该混合物搅拌10小时。向反应溶液中加入水，将沉淀物过滤出，冲洗(用水)，干燥，然后从乙酸乙酯-正己烷中重结晶，获得3-甲基-5-甲硫基-4-丙酰噻吩-2-甲酸乙酯(7.3g,31％)无色晶体。
熔点114.0-115.0℃b)3,4’-二甲基-4-(异嚼唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸向用正己烷(5ml)冲洗了3次的60％氢化钠(2.14g,53.6mmol)中于室温下依次加入甲酸乙酯(22ml)和在四氢呋喃(54ml)中的3-甲基-5-甲硫基-4-丙酰噻吩-2-甲酸乙酯(7.0g,25.7mmol)溶液，然后在80℃下边搅拌边将该混合物加热1小时。将反应溶液冷却到室温，并通过加入氯化铵的饱和水溶液使其呈酸性，用乙酸乙酯萃取，并将有机层用水冲洗，干燥(在无水硫酸镁上)并在减压下浓缩。
向所得残余物中加入乙醇(22ml)和6N氢氧化钠水溶液(7.3ml)，在60℃下边搅拌边将该混合物加热1小时。将所得反应溶液冷却到室温，通过加入3N盐酸使其为酸性，用乙酸乙酯萃取，并将有机层用水冲洗，干燥(在无水硫酸镁上)并在减压下浓缩。
向所得残余物中加入吡啶(11ml)和羟胺盐酸盐(1.83g,26.4mmol)并在80℃下边搅拌边将混合物加热1小时。将反应溶液冷却，用水稀释，然后加入12N盐酸使其呈酸性并用乙酸乙酯萃取。将有机层冲洗(依次用水和氯化钠的饱和水溶液)，干燥(在无水硫酸镁上)，并在减压下浓缩，得到粗晶体，然后在乙酸乙酯-正己烷中再结晶，获得3,4’-二甲基-4-(异噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸(5.56g,80％)无色晶体。
熔点190.0-191.5℃c)3,4’-二甲基-4-(异噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酰胺在室温下向含3,4’-二甲基-4-(异噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸(4.13g,15.3mmol)的四氢呋喃(15ml)中加入N,N-二甲基甲酰胺(0.5ml)和亚硫酰氯(2.0g,16.9mmol)。将混合物搅拌20分钟之后，向其中加入25％的氨水(10ml)并将反应溶液用乙酸乙酯萃取。然后将有机层冲洗(依次用水和氯化钠的饱和水溶液)，干燥(在无水硫酸镁上)，并在减压下浓缩。这样获得的残余物通过硅胶柱色谱法提纯(展开剂正己烷/乙酸乙酯=1∶1)，并在乙醚-正己烷中重结晶，从而获得3,4’-二甲基-4-(异噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酰胺(2.19g,53％)无色晶体。
熔点140.0-141.0℃实施例23-乙基-4-(4-甲基异噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-腈a)3-乙基-5-甲硫基-4-丙酰噻吩-2-腈在冰冷却下向在二甲亚砜(100ml)中含有2,4-庚二酮(10.0g,78.0mmol)的溶液中依次滴加含有氢氧化钾(10.3g,156.0mmol)的85％水溶液(10ml)和二硫化碳(5.9g,78.0mmol)，然后在该温度下将该混合物搅拌30分钟。接着，在冰冷却下在5分钟内滴加在二甲亚砜(10ml)中含有氯乙腈(5.3g,70.2mmol)的溶液，在该温度下将混合物搅拌20分钟。然后加入碳酸钾(10.8g,78.0mmol)和碘代甲烷(12.2g,85.8mmol)，并将所述混合物再搅拌30分钟。用乙酸乙酯萃取反应溶液，并将有机层冲洗(依次用水和饱和氯化钠水溶液)、干燥(在无水硫酸镁上)、过滤并在减压下浓缩。这样获得的残余物通过硅胶柱色谱法提纯(展开剂正己烷/乙酸乙酯=10∶1)，并将如此获得的结晶用正己烷冲洗，获得3-乙基-5-甲硫基-4-丙酰噻吩-2-腈(14.8g,88％)无色棱晶。
熔点66.0-67.0℃b)3-乙基-4-(4-甲基异噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-腈于室温下向苯(20ml)中含有甲醇钠(1.08g,20.0mmol)的悬浮液中依次加入甲酸乙酯(1.48g,20.0mmol)和在苯(20ml)中的3-乙基-5-甲硫基-4-丙酰噻吩-2-甲酸乙酯(2.39g,10.0mmol)溶液，然后在室温下将该混合物搅拌30分钟。然后加入四氢呋喃(20ml)中含有甲酸乙酯(1.48g,20.0mmol)的溶液并将所述混合物再搅拌16小时。将反应溶液冲洗(依次用3N盐酸、水和氯化钠饱和水溶液)，干燥(在无水硫酸镁上)并在减压下浓缩。
向所得残余物中加入吡啶(20ml)和羟胺盐酸盐(0.76g,11.0mmol)并在80℃下边搅拌边将混合物加热45分钟。将反应溶液冷却到室温，用水稀释，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层冲洗(依次用水和氯化钠的饱和水溶液)，干燥(在无水硫酸镁上)，并在减压下浓缩，如此获得的残余物通过硅胶柱色谱法提纯(展开剂正己烷/乙酸乙酯=4∶1-3∶1)，从而获得3-乙基-4-(4-甲基异噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-腈(0.87g,33％)，为黄色油状物。NMR(200MHz,CDCl3)δ:1.08(t,3H,J=7.5Hz),2.01(s,3H),2.55(s,3H),2.66(q,2H,J=7.5Hz),8.22(s,1H)
熔点93.5-94.5℃
熔点105.0℃
熔点120.0-121.0℃(重结晶溶剂乙酸乙酯-正己烷)
熔点108.0-109.0℃(重结晶溶剂乙醚-正己烷)
熔点136.5-138.0℃(重结晶溶剂乙醚)
熔点111.5-112.5℃(重结晶溶剂乙醚)
4-(4-苯基异噁唑-5-基)-5-甲硫基-3-(1-丙基)-噻吩-2-甲酰胺按照实施例1中所述的方法，只是使用1-苯基-2,4-戊二酮代替2,4-己二酮作原料，制得的标题化合物为无色结晶。
熔点140.0-141.0℃(重结晶溶剂乙醚)
熔点76-77℃(重结晶溶剂乙醚-正己烷)b)3-甲基-5-甲硫基-4-(3-氧代丁酰基)噻吩-2-甲酸乙酯于室温下向四氢呋喃(5ml)中含有60％氢化钠(0.64g,15.9mmol)和乙酸乙酯(8.16g,92.9mmol)的悬浮液中依次加入在四氢呋喃(10ml)中含有4-乙酰基-3-甲基-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸乙酯(2.0g,7.7mmol)和乙醇(0.5ml)的溶液和在四氢呋喃(5ml)中含有二苯并-18-冠醚-6(0.04mg)的溶液，在回流下将所述混合物加热2小时。将反应溶液冷却到室温，通过加入3N盐酸使其呈酸性，用乙酸乙酯萃取。将有机层冲洗(依次用水和氯化钠饱和水溶液)，干燥(在无水硫酸镁上)并在减压下浓缩。这样获得的残余物通过硅胶柱色谱法提纯(展开剂正己烷/乙酸乙酯=20∶1)，从而获得3-甲基-5-甲硫基-4-(3-氧代丁酰基)噻吩-2-甲酸乙酯(1.91g,82％)，为黄色晶体。
熔点51-52℃c)3,3’-二甲基-4-(异噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸向3-甲基-5-甲硫基-4-(3-氧代丁酰基)噻吩-2-甲酸乙酯(1.13g,3.76mmol)中加入吡啶(11ml)和羟胺盐酸盐(0.29g,4.14mmol)并边搅拌边将所述混合物在80℃下加热1小时。将反应溶液冷却，用水稀释并用乙醚萃取。将有机层冲洗(依次用水、3N盐酸和氯化钠饱和水溶液)，干燥(在无水硫酸镁上)并在减压下浓缩。于室温下向溶于四氢呋喃-乙醇(1∶1)的所得残余物溶液(7.4ml)中加入20％氢氧化钠水溶液(3.7ml)，并且边搅拌边将所述混合物在80℃下加热1小时。
将反应溶液冷却到室温，通过加入3N盐酸使其呈酸性，将沉淀物过滤回收并用水冲洗。将如此获得的粗结晶溶于四氢呋喃(200ml)中，干燥(在无水硫酸镁上)并在减压下浓缩。这样获得的残余物从乙醚-正己烷中重结晶，从而获得3,3’-二甲基-4-(异噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酸(0.90g,88％)，为黄色结晶。
熔点248.0-249.0℃d)3,3’-二甲基-4-(异噁唑-5-基)-5-(甲硫基)噻吩-2-甲酰胺按照实施例1-c)中所述的方法进行酰胺化，从而得到标题化合物，为浅黄色到无色的针状物。
熔点208.5-209.0℃(重结晶溶剂四氢呋喃-正己烷)
熔点98-99.5℃(重结晶溶剂乙醚)
熔点152.0-153.0℃
熔点182.0-183.0℃试验实施例1测定本发明的化合物用于诱导碱性磷酸酶在来自大鼠胎儿顶骨的成骨细胞中产生的强化活性。测定化合物以2.5μg/ml的浓度用于诱导碱性磷酸酶产生的强化活性，当与没有测定化合物时的活性比较时，分别为，实施例1为195％、实施例3为155％，实施例7为187％和实施例9为134％。试验实施例2测定本发明的化合物用于在来自大鼠胎儿顶骨的成骨细胞中小结诱导的强化活性。结果分别为实施例1中以1.0μg/ml时为342％、实施例3中以2.5μg/ml时为501％、实施例7中以2.5μg/ml时为576％和实施例9中以2.5μg/ml时为550％。
本发明能够提供一种低分子量化合物，它通过特定强化体内存在的细胞分化诱导因子的作用可用于治疗或预防各种骨病或神经病。具体地说，本发明的化合物可用作骨质疏松症的预防或治疗剂或者作为骨质疏松症中修复或移植骨或牙槽骨的强化剂。
权利要求
1．下式所示的取代的异噁唑基噻吩化合物或其盐 其中R1和R2各自代表1-5个碳原子的烷基，R3代表氰基或基团CONR5R6，其中R5和R6各自代表H或1-10个碳原子的烷基，R4代表1-5个碳原子的烷基或苯基，n为0-2的整数。
2．一种化合物，能在给药之后通过体内新陈代谢产生权利要求1中所述化合物、或者能通过体内新陈代谢产生由权利要求1中所述化合物的新陈代谢产生的活性化合物本身相同的化合物。
3．一种药用组合物，含有权利要求1中所述的化合物或其盐作为活性组分。
4．一种强化细胞分化诱导因子的作用的试剂，含有权利要求1中所述的化合物或其盐作为活性组分。
5．权利要求1中所述的化合物作为药物的用途。
6．权利要求1中所述的化合物用于生产强化细胞分化诱导因子的药物的用途。
全文摘要
本发明提供了一种下式所示的取代的异噁唑基噻吩化合物或其盐:其中R
文档编号C07D413/04GK1321156SQ99811631
公开日2001年11月7日 申请日期1999年9月29日 优先权日1998年9月30日
发明者原田真宏, 武田顺子, 中村年男, 斋藤秀次 申请人:大正制药株式会社