专利名称：一种α－葡萄糖苷酶抑制剂及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种α-葡萄糖苷酶抑制剂技术领域和其应用的技术领域。
另外海藻含有许多不被人体吸收的多糖化合物，其单糖结构单元也不被人体吸收，因此，在降血糖研究中发现了多种生物活性。例如，Lamela等(1989)发现，从海藻中得到的多糖粗提取物经过静脉给药后8小时，能够显著降低血糖浓度，参见Lamela，M.，Anca，J.，Villar，R.，Otero，J.，1989.Hypoglycemic activity of several seaweedextracts.J.Ethnopharmacol.，27(1-2)35-43。褐藻中提取的多糖褐藻酸，也可以降低小肠对葡萄糖的吸收，参见Vaugelade，P.，Hoebler，C.，Bernard，F.，Guillon，F.，2000.Non-starch polysaccharides extracted from seaweed can modulate intestinal absorption of glucoseand insulin response in the pig.Reproduction Nutrition Development，40(1)33-47。但是多糖类化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性效价不高。
本发明所要解决的再一个技术问题是提供上述α-葡萄糖苷酶抑制剂的新的应用。
本发明解决上述首要技术问题所采用的技术方案为该种α-葡萄糖苷酶抑制剂，其特征在于为具有以下通式的低聚寡糖， 其中n＝1-10。
上述的低聚寡糖是来自于红藻琼胶的降解寡聚糖，以5个琼二糖或新琼二糖的聚合单位以下的寡糖为主，即1≤n≤5。
本发明解决再一个技术问题技术方案是将上述α-葡萄糖苷酶抑制剂作为治疗与预防II型糖尿病药物与保健食品的应用。
与现有技术相比，本发明的优点在于1、该α-葡萄糖苷酶抑制剂是明确的单体化合物寡聚体，其作用机理比较明确，在工业生产中比较容易严格地控制质量，保障人体使用的安全性；2、可以采用生化工程来生产，工艺方法比较成熟简单；3、产品安全无毒、并且抑制活性好和明显，物质明确，适合作为药物使用，可信性和科学性强；4、可以通过添加各种附剂制作成为治疗II型糖尿病的口服药物，或者作为主要的活性成分添加到各种食品、饮料中，作为预防II型糖尿病、防治肥胖的保健食品。
实施例一1.琼胶的提取制备取20g晒干的石花菜放在3000ml大烧杯中，自来水冲洗2-3次，蒸馏水洗1次，加入600-800ml蒸馏水，放在加压锅中，在0.5kg压力下加热提取1h，取出用纱布过滤，残渣再用300ml蒸馏水在同样条件下提取1次，将两次粗滤液合并，用铺有脱脂棉的布氏漏斗过滤，滤液放冷凝固、切条，将凝胶条放在搪瓷盘上在-10℃冻结，然后将凝胶取出、粉碎，加入1.5倍体积的95％乙醇，进一步脱水，挤去溶液，再用85％乙醇400ml浸洗1次，过滤，干燥，粉碎，得到琼胶粉。
2.琼胶寡糖的降解制备将琼胶样品配置成1.5％溶液，在50℃恒温水浴中加入盐酸至终浓度0.37mol/L，搅拌条件下反应4h，反应结束后以NaOH中和，加入4倍体积的乙醇，静置过夜，减压过滤，滤液减压浓缩至近干。降解产物经Sephadex G-10柱脱盐，脱盐后的产物冷冻干燥，得率为35％。
琼胶寡糖的薄层色谱分析样品溶解于50％乙醇中，在硅胶板上点样，展开剂采用正丁醇/乙醇/水(3∶1∶1)，显色剂采用百里酚-硫酸，喷雾后100℃显色5min，出现粉红色斑点，标准寡糖样品包括半乳糖、3，6-内醚半乳糖、新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖。斑点主要集中在新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖以及更高分子量的寡糖斑点。
3.α-葡萄糖苷酶抑制活性测定取120μl 0.5mol/L磷酸缓冲液(pH＝6.8)，120μl样品水溶液(空白对照为蒸馏水)，282μl蒸馏水，200μl 6mmol/L对硝基苯酚-α-葡萄糖苷溶液(底物)，在37℃恒温水浴预热5min，然后加入200μl 0.1u/ml α-葡萄糖苷酶溶液(Sigma公司，III型)，摇匀，反应开始，在37℃恒温水浴反应30min，然后加入0.4mol/L甘氨酸终止剂1.2ml终止反应，采用分光光度计测定410nm吸光度，抑制率按照下式求出α-葡萄糖苷酶抑制活性，测定3次，以平均值作为测定值。然后根据不同浓度的抑制活性作图得到IC50。
α-葡萄糖苷酶抑制活性(％)＝[(A0-A)/A0]×100％其中，A为样品组的吸光度；A0为空白对照组的吸光度。
琼胶寡糖的α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50为0.9mg/ml。
实施例二1.从食品级琼胶降解制备琼胶寡糖采用食品级市售琼胶配置成1％溶液，加入2216E固体培养基，经过琼胶降解微生物降解2d，过滤后，在降解产物中加入3倍乙醇，离心后将溶液旋转浓缩，冷冻干燥。
2.琼胶寡糖的分离制备将上述降解产物120mg，加入0.02％叠氮化钠抗菌剂，上Sephadex G-25凝胶柱(900×26mm)，室温下用恒流泵以40ml/h流速含有0.02％叠氮化钠的水溶液洗脱，以部分收集器收集流分，每次收集6ml，用硫酸苯酚法检测各试管中的糖浓度，结合薄层色谱检测，得到二糖寡聚度为1-5的组分，合并洗脱液，旋转浓缩后冷冻干燥。
3.α-葡萄糖苷酶抑制活性测定采用与实施例1相同的α-葡萄糖苷酶抑制活性检测方法同样测定，琼胶寡糖的α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50为0.6mg/ml。
作为本实施例的变更1.琼胶的来源可以是石花菜、江蓠、紫菜等红藻。按照藻类资源的不同，在提取琼胶的工艺上有所不同。
2.琼胶寡糖的制备可以采用酸水解法，也可以采用酶水解法。精制琼胶寡糖的方法可以采用Sephadex G-25凝胶色谱，也可以采用乙醇沉淀除去多糖后再脱盐制备，或者采用分子截留值为3000的膜超滤方法制备。
3.α-葡萄糖苷酶活性测定时所采用的酶可以采用市售的酶制剂(如从Sigma公司购买，或者从大鼠的小肠制备)，所采用底物可以是蔗糖或者对硝基苯酚-α-葡萄糖苷。
权利要求
1.一种α-葡萄糖苷酶抑制剂，其特征在于为具有以下通式的低聚寡糖， 其中n＝1-10。
2.根据权利要求1所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂，其特征在于所述的低聚寡糖是来自于红藻琼胶的降解寡聚糖，以5个琼二糖或新琼二糖的聚合单位以下的寡糖为主，即1≤n≤5。
3.一种根据权利要求1所述的α-葡萄糖苷酶抑制剂，其特征在于作为治疗与预防II型糖尿病药物与保健食品的应用。
全文摘要
本发明涉及一种新型的α－葡萄糖苷酶抑制剂,具有右式的低聚寡糖结构,来自于红藻琼胶的降解产物,其中为n为1至10,可以进一步开发成为作为治疗与预防II型糖尿病的新型药物及保健食品上应用。
文档编号C08B37/02GK1385436SQ0211199
公开日2002年12月18日 申请日期2002年6月6日 优先权日2002年6月6日
发明者严小军, 周成旭, 范晓 申请人:严小军